尿巨細(xì)胞病毒檢測(cè)在嬰兒巨細(xì)胞病毒感染診治中的臨床意義

1、中國(guó)血液流變學(xué)雜志.2012;22(2301收稿日期:2012-02-07 作者簡(jiǎn)介:杜正強(qiáng)(1968-,男,江蘇宜興人,學(xué)士學(xué)位,副主任醫(yī)師,研究方向:小兒神經(jīng)內(nèi)科、小兒感染免疫。doi:10.3969/j.issn.1009-881X.2012.02.043尿巨細(xì)胞病毒檢測(cè)在嬰兒巨細(xì)胞病毒感染診治中的臨床意義杜正強(qiáng)(江蘇省宜興市第二人民醫(yī)院兒科,江蘇宜興 214221摘要:目的 通過(guò)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR 檢測(cè)尿人巨細(xì)胞病毒(HCMV ,來(lái)分析其在嬰兒巨細(xì)胞病毒感染診斷和治療中的應(yīng)用價(jià)值。方法 用FQ-PCR 法定量測(cè)定嬰兒尿巨細(xì)胞病毒含量和用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA 測(cè)定

2、血清巨細(xì)胞病毒IgM 抗體,根據(jù)兩種方法陽(yáng)性檢出率及治療前后病毒含量的變化進(jìn)行分析。結(jié)果 在126例嬰兒中FQ-PCR 法測(cè)定尿液CMV-DNA 陽(yáng)性者32例(25.40%,ELISA 法測(cè)定血清CMV-IgM 抗體陽(yáng)性者12例(9.52%,FQ-PCR 法測(cè)定尿CMV-DNA 陽(yáng)性檢出率明顯高于ELISA 測(cè)定血清CMV-IgM 抗體陽(yáng)性檢出率,兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.01。治療后尿CMV-DNA 拷貝數(shù)明顯低于治療前(P <0.01。結(jié)論 FQ-PCR 法定量測(cè)定嬰兒尿巨細(xì)胞病毒在嬰兒巨細(xì)胞病毒感染診斷和評(píng)價(jià)治療效果中有一定臨床意義。關(guān)鍵詞:人巨細(xì)胞病毒;巨細(xì)胞病毒感染;嬰

3、兒;聚合酶鏈反應(yīng)中圖法分類號(hào):R722.13 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1009-881X(201202-0301-02人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus ,HCMV在人群中感染率較高,尤以孕婦、嬰兒為明顯,感染可造成嬰兒多器官、多系統(tǒng)受累,可造成嚴(yán)重危害,因此,選擇靈敏度高、特異性強(qiáng)的檢測(cè)方法對(duì)巨細(xì)胞病毒感染的準(zhǔn)確診斷、治療指導(dǎo)、預(yù)后判斷就顯得尤為重要。本文對(duì)126例嬰兒分別采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR 定量測(cè)定患兒尿CMV-DNA 和用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA 法測(cè)定患兒血清CMV-IgM 抗體,對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較、分析,以探討其臨床價(jià)值,現(xiàn)報(bào)告如下。1 資

4、料與方法1.1 對(duì)象 2009年8月2011年7月,以黃疸、低體重、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常等癥狀就診我院的患兒126例,年齡1d 6月,其中男66例,女60例。診斷標(biāo)準(zhǔn)參考CMV 感染診斷方案1。1.2 方法1.2.1 尿液中CMV-DNA 檢測(cè):分別于治療前、后留取嬰兒清潔中段尿35mL ,置于無(wú)菌試管中,按要求送檢南京迪安醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所,采用FQ-PCR 法定量測(cè)定CMV-DNA 。1.2.2 血CMV-IgM 檢測(cè):在接受治療前抽取患兒靜脈血2mL ,離心后提取血清,采用ELISA 法,使用酶標(biāo)儀按要求操作,測(cè)定血清CMV-IgM 抗體。1.2.3 治療方法:對(duì)診斷為巨細(xì)胞病毒感染的32例患兒均給

5、予更昔洛韋抗病毒治療,誘導(dǎo)治療更昔洛韋10mg/kg/d ,分2次,靜脈滴注,連續(xù)使用10d 。療程結(jié)束后改為口服維持治療,5mg/kg/d ,每天一次,每周用5d ,用4周后復(fù)查尿CMV-DNA 等檢查。1.2.4 數(shù)據(jù)處理:尿液中CMV-DNA 拷貝數(shù)(Xcopy/mL 以log 10X 表示。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x ±s 表示,治療前后尿CMV-DNA 比較使用Paired samples test ,治療前尿CMV-DNA 和血CMV-IgM 比較使用Chi-square tests 。P <0

6、.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 兩種檢測(cè)方法結(jié)果比較 126例嬰兒治療前尿CMV-DNA 陽(yáng)性32例,陽(yáng)性率為25.40%,血清CMV-IgM 陽(yáng)性12例,陽(yáng)性率為9.52%。12例血清CMV-IgM 陽(yáng)性者其尿CMV-DNA 均為陽(yáng)性。兩種檢測(cè)陽(yáng)性率比較其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.01。2.2 治療前后病毒數(shù)量的比較 治療后尿的CMV 拷貝數(shù)較治療前明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.92±1.52 vs 4.85±0.53,P <0.01。3 討論HCMV 屬于皰疹病毒科乙組皰疹科,是皰疹病毒中最大的一種雙鏈DNA 病毒。HCMV 呈世界性分布,在人群中

7、廣泛傳播,HCMV 是引起先天性及圍生期感染的重要病原微生物之一,可通過(guò)母嬰垂直傳播導(dǎo)致新生兒感染,嬰兒也因其免疫功能低下而容易感染。感染后幾乎能侵犯機(jī)體的所有器官。其臨床多表現(xiàn)有多樣性;可為無(wú)癥狀性感染,有癥狀者呈多樣性,常見(jiàn)為生長(zhǎng)發(fā)育遲緩,小頭畸形、智力低下、黃疸、肝脾腫大、聽力或視力喪失等多臟器、多系統(tǒng)不可逆性損害等。HCMV 可長(zhǎng)期間隙地從唾Chin J Hemorh.2012;22(2 302液、尿液、乳汁中排出,通過(guò)多途徑傳播,當(dāng)免疫功能低下時(shí)病毒感染激活而發(fā)生顯性感染。我國(guó)每年因HCMV感染造成先天性畸形的患兒約為4萬(wàn)人,給家庭與社會(huì)造成了沉重的壓力和巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),因此,對(duì)新生

8、兒、嬰兒HCMV感染的診斷尤為重要。但HCMV感染所致疾病的臨床癥狀和體征無(wú)特異性,且大多數(shù)呈潛伏性感染,故確診HCMV感染主要依靠實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),所以選擇合適的檢查方法就十分重要2。HCMV感染可刺激人體產(chǎn)生特異性抗體IgM和IgG,通過(guò)檢測(cè)血清中HCMV-IgM、HCMV-IgG可間接證實(shí)體內(nèi)HCMV的存在。血清IgM抗體陽(yáng)性被認(rèn)為是近期感染的指標(biāo),血清IgG抗體陽(yáng)性是既往感染的指標(biāo)。IgG因能通過(guò)胎盤進(jìn)入嬰兒體內(nèi)而影響其診斷價(jià)值。血清IgM特異性抗體一般在HCMV感染后1014d可檢出,68周達(dá)高峰,1216周消失。血清中特異性IgM抗體陽(yáng)性提示近期有HCMV活動(dòng)性感染或潛伏的病毒被激活,可

9、作為HCMV活動(dòng)性感染的判斷指標(biāo)。IgM檢測(cè)雖快速、方便、費(fèi)用低,為目前臨床常用的檢測(cè)手段,但I(xiàn)gM抗體產(chǎn)生本身具有滯后性,即HCMV 感染約2周后IgM抗體才能達(dá)到被檢測(cè)水平,且IgM檢測(cè)結(jié)果受檢測(cè)時(shí)間窗、機(jī)體免疫狀態(tài)等多種因素的影響,尤其是嬰幼兒免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善,不能產(chǎn)生被測(cè)數(shù)量的特異性IgM抗體,易造成假陰性結(jié)果3。本文126例嬰兒治療前FQ-PCR法測(cè)定尿液HCMV-DNA的陽(yáng)性率為25.40%,ELISA測(cè)定血清HCMV-IgM抗體陽(yáng)性率僅為9.52%。也提示IgM抗體陽(yáng)性率較實(shí)際為低,因此,不能單獨(dú)依靠血清IgM抗體檢測(cè)來(lái)判斷是否存在HCMV活動(dòng)性感染。對(duì)于母親IgM抗體陽(yáng)性者,

10、即使其新生兒HCMV-IgM抗體檢測(cè)結(jié)果為陰性也不能完全排除先天性HCMV感染4。PCR技術(shù)具有簡(jiǎn)便、快速、敏感度高等特點(diǎn),因此在HCMV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷中發(fā)揮著重要作用。FQ-PCR檢測(cè)技術(shù)是在常規(guī)PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型HCMV-DNA定量檢測(cè)法,融匯了PCR高靈敏性、DNA雜交的高特異性和光譜技術(shù)的精確定量的優(yōu)點(diǎn)5。本文FQ-PCR法測(cè)定尿CMV-DNA陽(yáng)性檢出率明顯高于ELISA測(cè)定血清CMV-IgM 抗體陽(yáng)性檢出率,兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01。且12例血CMV-IgM陽(yáng)性病例其尿CMV-DNA均陽(yáng)性。其原因一方面由于感染早期,體內(nèi)僅有少量病毒,血清中特異性抗體尚未

11、出現(xiàn)。同時(shí)嬰兒產(chǎn)生IgM能力較差,產(chǎn)生需要一定時(shí)間,可產(chǎn)生假陰性結(jié)果。另一方面CMV易侵襲腎小管上皮細(xì)胞6,尿中CMV濃度較高,如存在CMV病毒,2472h即可檢測(cè)出3,加之FQ-PCR法檢測(cè)特點(diǎn),因而能更早檢測(cè)到尿中CMV,而且其檢出率更高。采用尿液PCR法查CMV陽(yáng)性率較高,特異性好,檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定,且對(duì)病毒能進(jìn)行定量檢測(cè),明顯優(yōu)于血CMV-IgM檢測(cè)。本文通過(guò)對(duì)32例巨細(xì)胞病毒感染患者抗病毒治療的觀察,治療后患者尿CMV-DNA拷貝數(shù)明顯低于治療前,兩者差異顯著(P<0.01。DNA拷貝數(shù)反映了病毒存在的數(shù)量和病毒復(fù)制的活躍程度,FQ-PCR能夠做到早期檢測(cè)和量化,患者癥狀減輕、病情

12、好轉(zhuǎn)時(shí),可檢測(cè)到病毒含量明顯下降,有較好的一致性。因此,尿FQ-PCR法測(cè)定尿CMV-DNA可以用于判斷病毒的數(shù)量變化和活動(dòng)性,對(duì)抗病毒效果的評(píng)價(jià)有著重要的意義。可作為判斷療效和預(yù)后的重要指標(biāo)之一。在臨床上,FQ-PCR法查尿CMV-DNA,敏感性、特異性較好,既能定性又能定量,重復(fù)性好,取材檢查方便。不僅可以作為CMV感染的依據(jù),同時(shí)也可以作為療效判定的參考方法之一。目前診斷HCMV感染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法較多,已從病原學(xué)的病毒分離和免疫學(xué)檢測(cè)抗原或抗體,進(jìn)入到對(duì)該疾病病毒基因組進(jìn)行診斷的分子生物學(xué)階段。在HCMV-DNA 熒光定量PCR檢測(cè)及HCMV基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA檢測(cè)方面已取得很大進(jìn)展,

13、但應(yīng)注意到熒光定量PCR法判定HCMV感染的HCMV-DNA臨界拷貝數(shù)目前尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。確定HCMV-DNA臨界拷貝數(shù)與HCMV感染的診斷、臨床癥狀、疾病的發(fā)展及預(yù)后的相關(guān)性研究仍是我們今后的探索方向2。參考文獻(xiàn)1 陳吉慶,吳升華,主編.實(shí)用兒科診療規(guī)范M.第1版.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社,2002.5759.2 金艷,鄧松華,王明麗.人巨細(xì)胞病毒先天性感染實(shí)驗(yàn)室診斷的研究進(jìn)展J.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,46(3: 282285.3 桂永浩,主編.小兒內(nèi)科學(xué)高級(jí)教程M.第1版.北京:人民軍醫(yī)出版社,2011.93.4 Novak Z,Ross SA,Patro RK,et al.Enzym

14、e-linked immuno-sorbent assay method for detection of cytomegalovirus strainspeci c antibody responsesJ.Clin Vaccine Immunol, 2009,16(2:288290.5 Revello MG,Gorini G,Gerna G.Clinical evaluation of achemiluminescence immunoassay for determination of immunoglobulin g avidity to human cytomegalovirusJ.Clin Diagn L