液相色譜測甲醇含量

1、實(shí)驗(yàn)二：液相色譜儀的硬件與軟件操作一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)及儀器掌握分離分析的基本原理；2.學(xué)習(xí)掌握液相色譜儀的硬件操作及軟件操作。2、 實(shí)驗(yàn)原理 高效液相色譜儀為島津液相色譜儀由SPD-20A檢測器、LC-20AT泵（A、B泵）、微量進(jìn)樣器（50L）、Atlantis C18色譜柱、CBM系統(tǒng)控制器等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程。各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)

2、流出，通過檢測器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到CBM系統(tǒng)控制器，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。 3、 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑儀器：島津液相色譜儀LC-20AT，SPD-20A檢測器，LC-20AT泵，微量進(jìn)樣器（50 L），Atlantis C18色譜柱試劑：甲苯標(biāo)準(zhǔn)液（1000 ppm）、甲醇（AR），超純水四、實(shí)驗(yàn)步驟：1. 準(zhǔn)備 每次進(jìn)樣之前都應(yīng)該用甲醇洗針1520次1.1流動(dòng)相前處理準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用合適的0.45 m濾膜過濾，超聲脫氣20 min（這里用的是流動(dòng)相是甲醇（AR）(B)和超純水(A)，分別用有機(jī)相系和水相系的0.45 µm濾膜過濾）。1.2樣品的配置 配制樣品濃度為10

3、00 ppm（也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制）。甲苯標(biāo)準(zhǔn)液（1000 ppm）的配置：用移液管分別量取1 mL的甲苯用甲醇(AR)定容在10 mL的容量瓶中得到甲苯標(biāo)準(zhǔn)液（105 ppm）。然后用移液管量取1 mL剛定容的甲苯標(biāo)液（105 ppm）再用甲醇（AR）定容在10 mL的容量瓶中得到甲苯標(biāo)準(zhǔn)液（104 ppm）。并用移液管量取1 mL剛定容的甲苯標(biāo)準(zhǔn)液（104 ppm）再用甲醇（AR）稀釋定容在10 mL的容量瓶中，這樣就配制成甲苯標(biāo)準(zhǔn)液（1000 ppm）。1.3根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱和定量環(huán)。（如圖，注意箭頭方向向上，切勿裝反了柱子，損壞色譜柱。）1.4 檢查儀器各部件的電源線

4、、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。2. 高效液相色譜操作流程2.1開機(jī) 接通電源，依次開啟不間斷電源、B泵、A泵、檢測器。待泵和檢測器自檢結(jié)束后，打開打印機(jī)、電腦顯示器、主機(jī)，最后打開色譜工作站（即電腦桌面上的CS-Light Real Time Analysis）。2.2參數(shù)設(shè)定2.2.1波長設(shè)定：在檢測器顯示初始屏幕時(shí)，按func鍵接著按Enter鍵，用數(shù)字鍵輸入所需波長值254 nm，按Enter鍵確認(rèn)。按CE鍵退出到初始屏幕。 , w42.2.2流速設(shè)定：在A泵顯示初始屏幕時(shí)，按func鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的流速（柱在線流速一般不超過1 ml/min，流速設(shè)置過大，柱壓加大，影響柱效）。

5、按Enter鍵確認(rèn)。按CE鍵退出。2.2.3流動(dòng)相比例設(shè)定： 在A泵顯示初始屏幕時(shí)，按conc鍵，用數(shù)字鍵輸入流動(dòng)相B的濃度百分?jǐn)?shù)。本次實(shí)驗(yàn)設(shè)置流動(dòng)相比例：水（A）20%、甲醇（B）80%。按Enter鍵確認(rèn)。按CE鍵退出。3. 更換流動(dòng)相并排氣泡將A/B管路的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動(dòng)相的儲液瓶中，兩個(gè)泵上部中間的黑色旋鈕(排液閥)逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)90180度，分別按A、B泵的purge鍵對泵進(jìn)行沖泵，脫去流動(dòng)相中的氣泡。屏幕顯示為“Purgeing line”,當(dāng)沖泵完成后則恢復(fù)初始屏幕，各泵各沖2次；將排液閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥.4. 平衡系統(tǒng)按N2000色譜數(shù)據(jù)工作站操作規(guī)程打開&qu

6、ot;在線色譜工作站"軟件，輸入實(shí)驗(yàn)信息并設(shè)定各項(xiàng)方法參數(shù)后，按下"數(shù)據(jù)收集"頁的 查看基線 按鈕。4.1等度洗脫方式 ; 按A泵的pump鍵，A、B泵將同時(shí)啟動(dòng)，pump指示燈亮。用檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)，一般最少需6倍柱體積的流動(dòng)相。檢查各管路連接處是否漏液（可用濾紙擦拭檢查），如漏液(壓力值迅速下降)應(yīng)予以排除。觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動(dòng)應(yīng)不超過1MPa。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，則從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設(shè)流速為5ml/min，按pump鍵，沖洗3min后再按pump鍵停泵，重新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。觀察基線變化

7、。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，噪聲為<0.001mV時(shí)，可認(rèn)為系統(tǒng)已達(dá)到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。5. 進(jìn)樣5.1在桌面上找到CS-Light Real Time Analysis，雙擊圖標(biāo)。輸入用戶名Admin，點(diǎn)擊確定。5.2進(jìn)樣前在CS-Light Real Time Analysis中:點(diǎn)擊“單次分析”，接著點(diǎn)擊“樣品記錄”，在樣品記錄名稱中輸入所要檢測得樣品名稱，然后點(diǎn)擊“數(shù)據(jù)文件”選擇該樣品儲存在哪里，最后在“數(shù)據(jù)儲存的文件夾”后面輸入該樣品名稱，點(diǎn)擊確定。在信號采集菜單中設(shè)定停止時(shí)間（8 min）和延遲時(shí)間（5 min）。 5.3用甲醇清洗進(jìn)樣器后，并抽取試樣

8、液排除氣泡至20 mL。接著按下右上方的CBM調(diào)零鍵以及檢測器中的Zero鍵，同時(shí)迅速按下開始按鈕，緊接著進(jìn)樣。 五、數(shù)據(jù)軟件處理1. 單次數(shù)據(jù)分析1.1 在桌面雙擊“CS-Light Postrum Analysis”，點(diǎn)擊確定按鈕后，在“文件夾目錄中”選中該樣品記錄雙擊鼠標(biāo)，先打開保存的路徑，找到樣品記錄甲苯的色譜峰。使用放大縮小按鈕，調(diào)試圖譜中的色譜峰全部完整顯示在方框內(nèi) 1.2 在譜圖上單擊鼠標(biāo)右鍵的“顯示設(shè)置”，在“顯示設(shè)置”中選擇“展開色譜”根據(jù)實(shí)際需要填寫的“時(shí)間”和“強(qiáng)度”后點(diǎn)擊確定。用鼠標(biāo)點(diǎn)擊“編輯”可根據(jù)需要選擇改變“積分”中的“最小峰面積/高”、“斜率”等參數(shù)設(shè)置（通常改

9、變一項(xiàng)參數(shù)，就能達(dá)到去除雜質(zhì)峰的效果）。通常改變“最小峰面積”值比較快捷方便。然后又點(diǎn)擊“定量”在“定量方法”中選擇“面積歸一法”，然后點(diǎn)擊查看。復(fù)制譜圖到Word文檔，在譜圖中點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵選擇“復(fù)制”；復(fù)制數(shù)據(jù)，單擊鼠標(biāo)左鍵全選，然后鼠標(biāo)右鍵“復(fù)制表格到剪貼板”。在Word文檔中全選中表格內(nèi)容，單擊“插入”“表格”“插入表格”。將處理后的譜圖復(fù)制到Word文檔，打印出來，觀察記錄的各峰保留時(shí)間，確定各個(gè)峰的歸屬，從而達(dá)到定性分離的目的。保存Word文檔。2. 多組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較2.1同樣方式，在桌面雙擊“CS-Light Postrum Analysis”，點(diǎn)擊確定按鈕后。先找到所需要對比的多組數(shù)據(jù)保存路徑，選定打開。 2.2可以選中想要平移的譜線根據(jù)需要選擇右上方的五組箭頭按鈕以及數(shù)字按鈕，進(jìn)行上下平移，可以使兩組數(shù)據(jù)對比更顯著。復(fù)制譜圖到Word文檔，在譜圖中點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵選擇“復(fù)制”復(fù)制數(shù)據(jù)，單擊鼠標(biāo)左鍵全選，然后鼠標(biāo)右鍵“復(fù)制表格到剪板”。 在Word文檔全選中表格內(nèi)容，單擊“插入”“表格”“插入表格”。將處理后的譜圖復(fù)制到Word文檔，打印出來，觀察記錄的各