NT-proBNP生物學基礎和化驗室指標的應用ppt課件

1、1NT-proBNP生物學根底生物學根底和化驗室目的的運用和化驗室目的的運用潘柏申教授潘柏申教授2內容概要內容概要 NT-proBNPNT-proBNP生物學根底生物學根底 利鈉肽家族利鈉肽家族 腦鈉肽腦鈉肽BNPBNP的生理功能的生理功能 腦鈉肽腦鈉肽BNPBNP的分泌和釋放的分泌和釋放 BNPBNP和和NT-proBNPNT-proBNP的去除的去除 NT-proBNPNT-proBNP化驗室目的的運用化驗室目的的運用 影響影響NT-proBNPNT-proBNP的檢驗前要素的檢驗前要素 影響影響NT-proBNPNT-proBNP的檢驗要素的檢驗要素 影響影響NT-proBNPNT-pr

2、oBNP的分析要素的分析要素3利鈉肽家族利鈉肽家族6種心血管型肽種心血管型肽 ANP心房利鈉肽，28肽 ANP存在于成人的心房，胚胎和新生兒的心室組織和肥大的心室。在慢性心力衰竭等情況下，心房壓添加時，心房對其延展作出反響而分泌ANP。BNP B型利鈉肽，32肽 主要存在于心臟中；心房、更主要的心室肌細胞是BNP的主要來源。最近發(fā)現(xiàn)心臟成纖維細胞等也可以產(chǎn)生BNP。CNP C型利鈉肽，22或53肽 CNP主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和血管組織合成。不同于ANP和BNP，心臟組織中幾乎沒有CNP。 UrodilatinU型利鈉肽，32肽 由腎臟以旁分泌的方式分泌，具有利鈉利尿作用。DNPVNP4利鈉肽家族

3、利鈉肽家族3種種NP受體受體 NP受體A：作為鳥苷酰環(huán)化酶配對受體起生物學效應 NP受體B ：作為鳥苷酰環(huán)化酶配對受體起生物學效應 NP受體C ：作為短的細胞質主受體起去除肽分子和能夠的調理細胞增生作用 5利鈉肽家族在種群中的分布非常保守利鈉肽家族在種群中的分布非常保守 硬骨魚，兩棲動物，爬行動物，鳥類 ：內分泌和旁分泌都能在心和腦中被發(fā)現(xiàn) 哺乳動物人類，貓，牛，狗，家鼠，大鼠，羊和豬 ：內分泌和旁分泌都能在心和腦中被發(fā)現(xiàn) 軟骨魚軟骨魚綱 ：只發(fā)現(xiàn)了CNP 一些硬骨魚 ： ANP，CNP，VNP 鯊魚和盲鰻：CNP 6NPsNPs功能的進化功能的進化調理浸透壓 容量調理 排鈉激素 水鈉排泄的減

4、容激素 魚類哺乳動物7人類人類BNPBNP的基因表達的基因表達 BNP基因位于人類1號染色體，與ANP基因居于BNP上游約約8千個堿基呈前后串聯(lián)關系 5端上游非翻譯區(qū)序列有3個外顯子和2個內含子。 BNP基因的外顯子1編碼了5端非翻譯區(qū)和部分pre-proBNP26個-氨基酸信號肽和最初的18個BNP前體氨基酸。 外顯子2編碼了氨基酸45-129 外顯子3編碼了5末端氨基酸130-134氨基酸和3側端富含ATTTA非穩(wěn)定基序的非翻譯區(qū) 8利鈉肽的加工和分泌利鈉肽的加工和分泌5A figure 5A figure 1 1J Am Coll Cardiol 2019;49:119312029B B

5、型利鈉肽型利鈉肽BNPBNP基因的重要調理因子基因的重要調理因子5A 5A table1table1 刺激物刺激物潛在效應器潛在效應器cis元素元素腎上腺素能激動劑腎上腺素能激動劑cAMP, Src, Rac, GSK3, CaMK, PI3KGATA (-85), MCAT (-97 和和 -124)白介素白介素-1Ras, Rac, p38 MAPK, PKCMCAT (-97)內皮素內皮素-1Rac, SrcGATA; -1818至至-408之間區(qū)之間區(qū)域域; TRE 在在 -1000應激應激MKK6 and p38 MAPK激動激動劑劑類類AP-1位點在位點在 -111缺血損傷缺血損傷

6、未知未知-408至至+100之間區(qū)域之間區(qū)域苯腎上腺素苯腎上腺素神經(jīng)鈣蛋白神經(jīng)鈣蛋白NF-AT 在在 -927甲狀腺素（甲狀腺素（T3）甲狀腺受體甲狀腺受體TRE 在在 -1000機械拉伸機械拉伸p38 MAPKSSREs (-652至至-633和和-162)AP-1活化蛋白-1；cAMP環(huán)磷腺苷；CaMK鈣/鈣調理蛋白依賴蛋白激酶-；GSK3糖原合成酶激酶-3；MAPK絲裂原激活蛋白激酶；MCAT肌-CAT結合點；MKK6絲裂原激活蛋白激酶激酶6；NF-AT活化T細胞的核因子；PI3K磷脂酰肌醇3-激酶；PKC蛋白激酶C；SSREs剪切壓力反響元素；TRETPA-反響元素 Hypertens

7、ion 2019;27:715722.Peptides 2019;26:944 956.10 血漿浸透壓血漿浸透壓 添加血容量添加血容量ANP / BNPANP / BNP腎素腎素血管緊張素血管緊張素 II II醛固酮醛固酮鈉的流失鈉的流失水的排泄水的排泄鈉的排泄鈉的排泄腎小球腎小球濾過率濾過率 外周血管阻力外周血管阻力+ + + +- - - - - -+ + + +- -后葉加壓素后葉加壓素( (抗利尿激素抗利尿激素) ) 心肌擴張心肌擴張利鈉肽的生物功能利鈉肽的生物功能111利鈉肽的生物作用利鈉肽的生物作用2 對心血管的作用對心血管的作用 促進血管內液體轉移至血管外，靜脈擴張；促進血管內

8、液體轉移至血管外，靜脈擴張； 添加尿鈉排泄和降低心臟前負荷；添加尿鈉排泄和降低心臟前負荷； 抑制腦和外周交感神經(jīng)系統(tǒng)，抑制自主神經(jīng)釋放兒茶酚胺，降低中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制腦和外周交感神經(jīng)系統(tǒng)，抑制自主神經(jīng)釋放兒茶酚胺，降低中樞神經(jīng)系統(tǒng)交感輸出信號，防止血壓升高；交感輸出信號，防止血壓升高； 降低迷走神經(jīng)輸入閾值，促進副交感興奮性，抑制通常伴隨前負荷下降而出現(xiàn)降低迷走神經(jīng)輸入閾值，促進副交感興奮性，抑制通常伴隨前負荷下降而出現(xiàn)的心動過速反射和血管收縮的心動過速反射和血管收縮 ；12 正常心臟正常心臟 心衰心衰BNPNT-proBNP腦鈉肽的合成與釋放腦鈉肽的合成與釋放ANPNT-proANPANPNT

9、-proANPBNPNT-proBNP心室肥大13Pre-Pro-BNP1-134前腦利鈉肽前腦利鈉肽26-氨基信號序列NT-proBNP1-76BNP77-108Pro-BNP1-108腦利鈉肽原腦利鈉肽原t1/2 = 18 分鐘 室壁張力添加室壁張力添加t1/2 = 60-120 分鐘腦鈉肽的演化腦鈉肽的演化14B B型利鈉肽和型利鈉肽和NT-proBNPNT-proBNP的去除的去除 BNP的去除 BNP經(jīng)過受體介導與NP受體C結合被去除 BNP能經(jīng)過血流中中性肽鏈內切酶的活性所去除 BNP能被包括腎臟在內的高血流量器官經(jīng)過被動排泄或部分區(qū)域內由中性內切酶降解所去除 NT-proBNP的

10、去除 缺乏自動去除機制 在高血流量的器官床內被去除肌肉，肝臟，腎臟等 機制研討顯示腎臟對NT-proBNP和BNP的去除才干相等15NPsNPs生物學的小結生物學的小結 NP系統(tǒng)在物種間高度保守并有著復雜的基因調理機制。proBNP1-108和NT-proBNP1-76沒有或幾乎沒有生物學活性，BNP3-32的生物學活性較BNP1-32弱。BNP經(jīng)過多種機制被去除，包括受體去除，中性內切酶降解和由多種器官被動去除。有多種器官能夠以被動方式去除NT-proBNP。機制研討顯示腎臟對NT-proBNP和BNP的去除才干相等 16NT-proBNP化驗室目的的運用影響影響NT-proBNPNT-pr

11、oBNP的檢驗前要素的檢驗前要素 影響影響NT-proBNPNT-proBNP的檢驗要素的檢驗要素 影響影響NT-proBNPNT-proBNP的分析要素的分析要素17影響影響NT-proBNPNT-proBNP的檢驗前要素的檢驗前要素18影響影響B(tài)NPBNP和和NT-proBNPNT-proBNP的檢驗前要素的檢驗前要素 NT-proBNP的檢測可以在各種不同的標本中進展 ，包括EDTA化血漿、血清和肝素化血漿 。但EDTA化血漿中測得的NT-proBNP較在血清或肝素化血漿中低根據(jù)方法的不同能夠低10%-13% BNP檢測只能用硅化玻璃管采樣，NT-proBNP分析的血樣可以抽進玻璃或塑料

12、管中而不會改動其穩(wěn)定性 檢測前的非規(guī)律運動對BNP和NT-proBNP的影響尚未有報導 姿態(tài)對于NT-proBNP值并沒有太大的影響 沒有發(fā)現(xiàn)NT-proBNP有繼續(xù)的晝夜節(jié)律變化。但在心衰患者中有報道發(fā)現(xiàn)BNP的一個較小但重要的晝夜節(jié)律變化。 在不同的儲存條件下血清或血漿NT-proBNP的濃度都較穩(wěn)定，如室溫下保管7天，4 保管10天 ，-20 或更低溫度下保管假設干個月。BNP在室溫條件下甚至在冷凍情況下都不穩(wěn)定 19室溫下在室溫下在EDTAEDTA化血漿中化血漿中NT-proBNPNT-proBNP的短期和長期穩(wěn)的短期和長期穩(wěn)定性優(yōu)于定性優(yōu)于BNPBNP11A figure1)11A

13、figure1)Clin Chim Acta 2019;338:107115.202-80C2-80C在在EDTAEDTA化血漿中化血漿中NT-proBNPNT-proBNP的短期和長期穩(wěn)的短期和長期穩(wěn)定性優(yōu)于定性優(yōu)于BNP BNP 11A figure1)11A figure1)Clin Chim Acta 2019;338:107115.21-200C-200C在在EDTAEDTA化血漿中化血漿中NT-proBNPNT-proBNP的短期和長期穩(wěn)的短期和長期穩(wěn)定性優(yōu)于定性優(yōu)于BNP BNP 11A figure1)11A figure1)Clin Chim Acta 2019;338:10

14、7115.22影響影響NT-proBNPNT-proBNP的檢驗要素的檢驗要素23現(xiàn)有現(xiàn)有NT-proBNPNT-proBNP檢測的方法間的最大偏倚只需檢測的方法間的最大偏倚只需2020，偏倚主要是由于不同檢驗者采用的不同方法，偏倚主要是由于不同檢驗者采用的不同方法 ，較容易校正較容易校正13A figure2A13A figure2AClin Chem Lab Med 2019;43:12631273.24BNPBNP檢測方法均基于不同的認證規(guī)范，運用針對原始檢測方法均基于不同的認證規(guī)范，運用針對原始BNPBNP分子分子不同部分的抗體，且定標器也不同，同一樣本經(jīng)過不同的方不同部分的抗體，且定

15、標器也不同，同一樣本經(jīng)過不同的方法檢測法檢測BNPBNP結果的差別能夠結果的差別能夠4040。 13A figure2B13A figure2BAm J Clin Pathol 2019;123:43944525影響影響NT-proBNPNT-proBNP的分析后要素的分析后要素26年齡和性別是影響正常人群年齡和性別是影響正常人群NT-proBNPNT-proBNP數(shù)值的要素數(shù)值的要素14A figure114A figure1Clin Biochem 2019;37:210216Eur Heart J2019;26:2269 2276.27BNPBNP和和NT-proBNPNT-proBNP的生物學變異的生物學變異 對延續(xù)檢測中的差別能否有顯著意義進展解釋時，需求思索到整體的生物學變異 一組得到良好控制的HF患者中， NT-proBNP 的1周參考變異值為23 一組得到良好控制的HF患者中， BNP 的1周參考變異值為43 NT-proBNP濃度的最低生物學變異出如今NT-proBNP1300ng/L時。28NT-proBNP化驗室目的運用的小結NT-proBNP在臨床實驗室檢測非常方便，在各種溫度下都穩(wěn)定