血脂及血漿脂蛋白檢驗(yàn)

1、第十章第十章 血脂及血漿脂蛋白檢驗(yàn)血脂及血漿脂蛋白檢驗(yàn)第一節(jié)概述第一節(jié)概述第二節(jié)血脂、脂蛋白及載脂蛋白測(cè)定第二節(jié)血脂、脂蛋白及載脂蛋白測(cè)定n本章內(nèi)容概要本章內(nèi)容概要n教學(xué)目標(biāo)和要求教學(xué)目標(biāo)和要求1 1、掌握掌握脂蛋白的分類(lèi)及其主要功能；高脂血癥的分型及血液脂蛋白的分類(lèi)及其主要功能；高脂血癥的分型及血液生化特點(diǎn)；血脂、脂蛋白和載脂蛋白測(cè)定的原理和方法。生化特點(diǎn)；血脂、脂蛋白和載脂蛋白測(cè)定的原理和方法。2 2、熟悉熟悉各種脂蛋白的組成與結(jié)構(gòu)要點(diǎn)；異常脂蛋白血癥的原各種脂蛋白的組成與結(jié)構(gòu)要點(diǎn)；異常脂蛋白血癥的原因；血脂檢查前應(yīng)注意的問(wèn)題。因；血脂檢查前應(yīng)注意的問(wèn)題。3 3、了解了解載脂蛋白的種類(lèi)與生

2、理功能；各個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目的臨床意載脂蛋白的種類(lèi)與生理功能；各個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目的臨床意義和應(yīng)用。義和應(yīng)用。動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS) (atherosclerosis, AS) 冠心病急性事件冠心病急性事件（不穩(wěn)定型心絞痛、急性心肌梗死和冠脈猝死）（不穩(wěn)定型心絞痛、急性心肌梗死和冠脈猝死） n血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白檢驗(yàn)的重要性血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白檢驗(yàn)的重要性 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述n血脂及血漿脂蛋白血脂及血漿脂蛋白n脂蛋白代謝紊亂脂蛋白代謝紊亂一、血脂及血漿脂蛋白一、血脂及血漿脂蛋白 血脂：是血漿中的中性脂肪（血脂：是血漿中的中性脂肪（甘油三酯和膽甘油三酯

3、和膽固醇固醇）和類(lèi)脂（磷脂、糖脂、固醇、類(lèi)固醇）的）和類(lèi)脂（磷脂、糖脂、固醇、類(lèi)固醇）的總稱(chēng)總稱(chēng) n定義：定義： 脂蛋白：脂類(lèi)難溶于水，正常血漿脂類(lèi)物質(zhì)脂蛋白：脂類(lèi)難溶于水，正常血漿脂類(lèi)物質(zhì)與蛋白質(zhì)結(jié)合成脂蛋白的形式存在。與蛋白質(zhì)結(jié)合成脂蛋白的形式存在。 （一）血漿脂蛋白的分類(lèi)（一）血漿脂蛋白的分類(lèi)超速離心法：超速離心法：根據(jù)脂蛋白在一定密度的介質(zhì)中漂浮速率不根據(jù)脂蛋白在一定密度的介質(zhì)中漂浮速率不同而進(jìn)行分離的方法。同而進(jìn)行分離的方法。 電泳法：電泳法：根據(jù)不同密度的脂蛋白所含蛋白質(zhì)的表面電荷不同，根據(jù)不同密度的脂蛋白所含蛋白質(zhì)的表面電荷不同，利用電泳將其分離，并與血漿蛋白質(zhì)的遷移率比較以判斷

4、其部位利用電泳將其分離，并與血漿蛋白質(zhì)的遷移率比較以判斷其部位。 分離方法分離方法u超速離心法：超速離心法：乳糜微粒乳糜微粒（chylomicron,CMchylomicron,CM）極低密度脂蛋白極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein,VLDLvery low density lipoprotein,VLDL）中間密度脂蛋白（中間密度脂蛋白（intermediate density lipoprotein,IDLintermediate density lipoprotein,IDL）低密度脂蛋白低密度脂蛋白（low density lipoproteinl

5、ow density lipoprotein，LDLLDL）高密度脂蛋白高密度脂蛋白（high density lipoproteinhigh density lipoprotein，HDLHDL脂蛋白（脂蛋白（a a）lipoprotein (a),Lp(alipoprotein (a),Lp(a) ) 乳糜微粒、前乳糜微粒、前- - 、 和和 四條脂蛋白區(qū)帶四條脂蛋白區(qū)帶 u電泳法電泳法 （二）血漿脂蛋白的組成與結(jié)構(gòu)（二）血漿脂蛋白的組成與結(jié)構(gòu)u組成：組成： 蛋白質(zhì)、甘油三酯、磷脂（蛋白質(zhì)、甘油三酯、磷脂（phospholipidphospholipid，PLPL）、游離膽固醇（）、游離膽

6、固醇（free free cholesterol cholesterol ，F(xiàn)CFC）及膽固醇酯（）及膽固醇酯（cholesterol estercholesterol ester，CECE）等成分組成。）等成分組成。u結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)： 大致為球形顆粒，由兩大部分組成，即疏水性的內(nèi)核和親水性的大致為球形顆粒，由兩大部分組成，即疏水性的內(nèi)核和親水性的外殼（圖外殼（圖10-110-1）。內(nèi)核由不同量的）。內(nèi)核由不同量的CECE與與TGTG組成，表層由載脂蛋白、組成，表層由載脂蛋白、PLPL及及FCFC組成，組成，F(xiàn)CFC及及PLPL的極性基團(tuán)向外露在血漿中，載脂蛋白是兼性化合的極性基團(tuán)向外露在血漿中，

7、載脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而親水部分突出于脂蛋白顆粒的物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而親水部分突出于脂蛋白顆粒的表面。表面。 （三）載脂蛋白（三）載脂蛋白脂蛋白的蛋白部分稱(chēng)為載脂蛋白脂蛋白的蛋白部分稱(chēng)為載脂蛋白(apolipoprotein(apolipoprotein，ApoApo) ) u定義：定義：u種類(lèi)：種類(lèi)： 按按19721972年年AlaupovicAlaupovic建議的命名方法，用英文字母建議的命名方法，用英文字母順序編碼，分為順序編碼，分為ApoAApoA、B B、C C、D D、E E、F F、G G、H H、J J等。由等。由于氨基酸組成的差異，

8、每一型又可分若干亞型。于氨基酸組成的差異，每一型又可分若干亞型。 u功能：功能： 與脂質(zhì)的親和作用而使脂質(zhì)溶于水性介質(zhì)中。與脂質(zhì)的親和作用而使脂質(zhì)溶于水性介質(zhì)中。運(yùn)轉(zhuǎn)膽固醇和甘油三酯。運(yùn)轉(zhuǎn)膽固醇和甘油三酯。作為脂蛋白外殼的結(jié)構(gòu)成分，與脂蛋白外生物信息相聯(lián)系。作為脂蛋白外殼的結(jié)構(gòu)成分，與脂蛋白外生物信息相聯(lián)系。以配體的形式作為脂蛋白與特異受體的連接物。以配體的形式作為脂蛋白與特異受體的連接物。激活某些與血漿脂蛋白代謝有關(guān)的酶類(lèi)激活某些與血漿脂蛋白代謝有關(guān)的酶類(lèi) u分布及特點(diǎn)：略分布及特點(diǎn)：略 （四）脂蛋白受體（四）脂蛋白受體u定義：定義： 脂蛋白受體是一類(lèi)位于細(xì)胞膜上的糖蛋白。它能以高脂蛋白受體

9、是一類(lèi)位于細(xì)胞膜上的糖蛋白。它能以高度的親和方式與相應(yīng)的脂蛋白配體作用，從而介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)度的親和方式與相應(yīng)的脂蛋白配體作用，從而介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)脂蛋白的攝取與代謝，進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞外脂蛋白的水平。脂蛋白的攝取與代謝，進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞外脂蛋白的水平。 u脂蛋白與脂蛋白受體的作用：脂蛋白與脂蛋白受體的作用： 不僅是運(yùn)送脂蛋白至細(xì)胞所必需，也是從血和外周組織中有不僅是運(yùn)送脂蛋白至細(xì)胞所必需，也是從血和外周組織中有效清除具有潛在致動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白所必需的。效清除具有潛在致動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白所必需的。 u種類(lèi)：種類(lèi)： 已有很多種，主要有已有很多種，主要有LDLLDL受體、殘粒受體（受體、殘粒受體（remnan

10、t receptorremnant receptor）及）及清道夫受體清道夫受體（scavenger receptorscavenger receptor）。）。LDLLDL受體：受體： 不僅能識(shí)別不僅能識(shí)別ApoB100ApoB100，也可識(shí)別，也可識(shí)別ApoEApoE，在細(xì)胞結(jié)合、攝取和，在細(xì)胞結(jié)合、攝取和降解降解LDLLDL及其它含及其它含ApoB100ApoB100的脂蛋白過(guò)程中起中介作用，對(duì)維持的脂蛋白過(guò)程中起中介作用，對(duì)維持細(xì)胞和全身膽固醇平衡起重要作用。細(xì)胞和全身膽固醇平衡起重要作用。 u各種脂蛋白受體功能各種脂蛋白受體功能殘粒受體：殘粒受體： 能識(shí)別能識(shí)別ApoEApoE，是清

11、除血液循環(huán)中，是清除血液循環(huán)中CMCM殘粒和殘粒和-VLDL-VLDL殘粒的主殘粒的主要受體，它也能結(jié)合含要受體，它也能結(jié)合含ApoEApoE的的HDLHDL。 清道夫受體：清道夫受體： 主要存在于巨噬細(xì)胞表面主要存在于巨噬細(xì)胞表面, ,介導(dǎo)修飾介導(dǎo)修飾LDL(LDL(包括氧化包括氧化LDLLDL和和 - -VLDL)VLDL)從血液循環(huán)中清除。從血液循環(huán)中清除。 （五）膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（五）膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白u(yù)定義：定義： 血漿中脂蛋白部分含有一種特殊的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，能促進(jìn)血漿各脂蛋白血漿中脂蛋白部分含有一種特殊的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，能促進(jìn)血漿各脂蛋白間膽固醇酯、甘油三酯和磷脂的單向或雙向轉(zhuǎn)運(yùn)和交換，這類(lèi)特

12、殊轉(zhuǎn)運(yùn)間膽固醇酯、甘油三酯和磷脂的單向或雙向轉(zhuǎn)運(yùn)和交換，這類(lèi)特殊轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白稱(chēng)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（蛋白稱(chēng)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（lipid transfer protein,LTPlipid transfer protein,LTP）。）。 u組成：組成：膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（cholesterol ester transfer protein,CETPcholesterol ester transfer protein,CETP）磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（phospholipid transfer protein,PTPphospholipid transfer protein,PTP）甘油三酯

13、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（triglyceride transfer protein,TTPtriglyceride transfer protein,TTP）( (六六) )血漿脂蛋白代謝血漿脂蛋白代謝u分類(lèi)：分類(lèi)：外源性代謝途徑：外源性代謝途徑：指食物中攝入的膽固醇和甘油三酯在指食物中攝入的膽固醇和甘油三酯在小腸中合成小腸中合成CMCM及及CMCM代謝的過(guò)程代謝的過(guò)程 。內(nèi)源性代謝途徑：內(nèi)源性代謝途徑：指指肝臟合成肝臟合成VLDLVLDL，然后轉(zhuǎn)變?yōu)?，然后轉(zhuǎn)變?yōu)镮DLIDL和和LDLLDL，并被肝臟或其它器官代謝的過(guò)程，并被肝臟或其它器官代謝的過(guò)程 膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)：膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)：H

14、DLHDL參與將膽固醇從外周組織運(yùn)輸?shù)礁闻K的過(guò)程。參與將膽固醇從外周組織運(yùn)輸?shù)礁闻K的過(guò)程。 二、脂蛋白代謝紊亂二、脂蛋白代謝紊亂（一）高脂蛋白血癥（一）高脂蛋白血癥u定義：定義： 高脂血癥（高脂血癥（hyperlipidemiahyperlipidemia）是指血漿中膽固醇或）是指血漿中膽固醇或/ / 和甘油三和甘油三酯水平升高。血漿脂類(lèi)以血漿脂蛋白形式存在，因此，高脂血癥一酯水平升高。血漿脂類(lèi)以血漿脂蛋白形式存在，因此，高脂血癥一定時(shí)高脂蛋白血癥（定時(shí)高脂蛋白血癥（hyperlipoproteinemiahyperlipoproteinemia）。）。 近年來(lái)，已逐漸認(rèn)識(shí)到血漿中近年來(lái)，已逐

15、漸認(rèn)識(shí)到血漿中HDLHDL降低也是一種脂代謝紊亂。降低也是一種脂代謝紊亂。 u分類(lèi)：分類(lèi)： 1 1表型分型法表型分型法 主要是基于各種血漿脂蛋白升高的程度不同而進(jìn)行分型。主要是基于各種血漿脂蛋白升高的程度不同而進(jìn)行分型。該分類(lèi)法不包括病因?qū)W，故稱(chēng)表型分類(lèi)。該分類(lèi)法不包括病因?qū)W，故稱(chēng)表型分類(lèi)。 （1 1）型高脂蛋白血癥：又稱(chēng)家族性高乳糜微粒血癥型高脂蛋白血癥：又稱(chēng)家族性高乳糜微粒血癥 （2 2）aa型高脂白血癥型高脂白血癥 （3 3）bb型高脂蛋白血癥：型高脂蛋白血癥： （4 4）型高脂蛋白血癥型高脂蛋白血癥 （5 5）型高脂蛋白血癥型高脂蛋白血癥 （6 6）型高脂蛋白血癥型高脂蛋白血癥 2 2

16、按是否繼發(fā)于全身性疾病分類(lèi)按是否繼發(fā)于全身性疾病分類(lèi) 繼發(fā)性高脂血癥：繼發(fā)性高脂血癥： 原發(fā)性：原發(fā)性： 繼發(fā)性者由一些全身性疾病引起血脂異常，如糖尿病、腎病綜合征、繼發(fā)性者由一些全身性疾病引起血脂異常，如糖尿病、腎病綜合征、腎功能衰竭、甲狀腺功能減退癥、肝膽疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、肥胖癥、腎功能衰竭、甲狀腺功能減退癥、肝膽疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、肥胖癥、飲酒等。此外，某些藥物如飲酒等。此外，某些藥物如-受體阻斷劑、降壓藥等也可引起血脂異受體阻斷劑、降壓藥等也可引起血脂異常。常。 在排除繼發(fā)性高脂血癥后，可診斷為原發(fā)性。已知部分原發(fā)性高在排除繼發(fā)性高脂血癥后，可診斷為原發(fā)性。已知部分原發(fā)性高脂血癥

17、由先天性基因缺陷所致脂血癥由先天性基因缺陷所致 3 3高脂血癥的基因分型法高脂血癥的基因分型法 表表10-5 10-5 家族性高脂血癥的臨床特征家族性高脂血癥的臨床特征常常 用用 名名基因缺陷基因缺陷臨床特征臨床特征表型分類(lèi)表型分類(lèi)家族性高膽固醇血癥家族性高膽固醇血癥L LDLL LDL受體缺陷受體缺陷以膽固醇升高為主，可伴輕度甘油三酯升以膽固醇升高為主，可伴輕度甘油三酯升高，高，LDLLDL明顯增加，可有肌腱黃色瘤，多有明顯增加，可有肌腱黃色瘤，多有冠心病和高脂血癥家族史。冠心病和高脂血癥家族史。aabb家族性家族性ApoApo B B100100缺陷癥缺陷癥 ApoBApoB100100缺

18、陷缺陷同上同上同上同上家族性混合型高脂血癥家族性混合型高脂血癥不清楚不清楚膽固醇和甘油三酯均升高，膽固醇和甘油三酯均升高，VLDLVLDL和和LDLLDL都都增加，無(wú)黃色瘤，家族成員中有不同型高增加，無(wú)黃色瘤，家族成員中有不同型高脂蛋白血癥，有冠心病家族史。脂蛋白血癥，有冠心病家族史。bb家族性異常家族性異常脂蛋白血脂蛋白血癥癥ApoEApoE異常異常膽固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和膽固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和VLDLVLDL殘粒以及殘粒以及IDLIDL明顯增加，可有掌皺黃明顯增加，可有掌皺黃色瘤，多為色瘤，多為ApoApo E2 E2（2/22/2）表型。）表型。家族性高甘油三酯血癥

19、家族性高甘油三酯血癥不清楚不清楚以甘油三酯升高為主，可有輕度膽固醇升以甘油三酯升高為主，可有輕度膽固醇升高，高，VLDLVLDL明顯增加。明顯增加。 (二二)低脂蛋白血癥低脂蛋白血癥1 1家族性低家族性低-脂蛋白血癥脂蛋白血癥2 2-脂蛋白缺乏血癥脂蛋白缺乏血癥3 3家族性低家族性低-脂蛋白血癥脂蛋白血癥4 4 TangierTangier病病第二節(jié)第二節(jié) 血脂、脂蛋白及載脂蛋白測(cè)定血脂、脂蛋白及載脂蛋白測(cè)定 目前臨床上開(kāi)展的血脂測(cè)定項(xiàng)目包括目前臨床上開(kāi)展的血脂測(cè)定項(xiàng)目包括TCTC、TGTG、HDLHDL及其及其亞類(lèi)膽固醇、亞類(lèi)膽固醇、LDL-CLDL-C、LpLp（a a）以及部分載脂蛋白如

20、）以及部分載脂蛋白如ApoAIApoAI、ApoBApoB等。其中等。其中TCTC、TGTG、HDL-CHDL-C、LDL-CLDL-C測(cè)定是血脂測(cè)定的四個(gè)測(cè)定是血脂測(cè)定的四個(gè)基本指標(biāo)。血漿基本指標(biāo)。血漿44冰箱中過(guò)夜觀察其分層現(xiàn)象及清澈度可冰箱中過(guò)夜觀察其分層現(xiàn)象及清澈度可初步估計(jì)各種脂蛋白的變化狀況。血漿脂蛋白電泳結(jié)合初步估計(jì)各種脂蛋白的變化狀況。血漿脂蛋白電泳結(jié)合TCTC、TGTG水平有助于高脂血癥分型。水平有助于高脂血癥分型。n概況：概況：n血脂測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化：血脂測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化：血脂分析前變異來(lái)源于：血脂分析前變異來(lái)源于：生物因素，如年齡、性別、種族等因素的個(gè)體差異。生物因素，如年齡、性別、

21、種族等因素的個(gè)體差異。生活方式，包括飲食習(xí)慣、吸煙、運(yùn)動(dòng)及應(yīng)激等。生活方式，包括飲食習(xí)慣、吸煙、運(yùn)動(dòng)及應(yīng)激等。臨床方面包括疾病或藥物引起的脂代謝改變。臨床方面包括疾病或藥物引起的脂代謝改變。血標(biāo)本采集與處理方面血標(biāo)本采集與處理方面 準(zhǔn)確測(cè)定應(yīng)從分析前的準(zhǔn)備開(kāi)始，包括受試者的準(zhǔn)備，標(biāo)本準(zhǔn)確測(cè)定應(yīng)從分析前的準(zhǔn)備開(kāi)始，包括受試者的準(zhǔn)備，標(biāo)本采集，合格的試劑、校準(zhǔn)物的選用，檢測(cè)方法選擇。采集，合格的試劑、校準(zhǔn)物的選用，檢測(cè)方法選擇。 方法學(xué)上應(yīng)該采用美國(guó)疾病控制中心（方法學(xué)上應(yīng)該采用美國(guó)疾病控制中心（CDCCDC）或中華醫(yī)學(xué)會(huì)）或中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)推薦的操作方法。檢驗(yàn)分會(huì)推薦的操作方法。 一、血清（漿

22、）靜置試驗(yàn)一、血清（漿）靜置試驗(yàn) 將患者空腹將患者空腹12h12h后采集靜脈血分離出血清置后采集靜脈血分離出血清置44冰箱中冰箱中過(guò)夜，然后觀察其分層現(xiàn)象及清澈度。過(guò)夜，然后觀察其分層現(xiàn)象及清澈度。 空腹血清混濁，表示空腹血清混濁，表示TGTG升高，可放在升高，可放在44冰箱過(guò)夜后進(jìn)一步觀察，如果冰箱過(guò)夜后進(jìn)一步觀察，如果上層出現(xiàn)奶油樣且下層清澈，表明上層出現(xiàn)奶油樣且下層清澈，表明CMCM升高，升高，VLDLVLDL正常，可能為正常，可能為I I型高脂血型高脂血癥。如果上層出現(xiàn)奶油樣且下層混濁，表明癥。如果上層出現(xiàn)奶油樣且下層混濁，表明CMCM及及VLDLVLDL均升高，可能是均升高，可能是V

23、 V型。型?？崭寡寤鞚幔崭寡寤鞚?，44冰箱中過(guò)夜后仍為均勻混濁，表明冰箱中過(guò)夜后仍為均勻混濁，表明VLDLVLDL升高，此時(shí)應(yīng)升高，此時(shí)應(yīng)進(jìn)一步測(cè)定進(jìn)一步測(cè)定TCTC， TCTC升高者可能是升高者可能是IIIIII或或IIbIIb型而型而TCTC正常者則可能為正常者則可能為型。型。IIaIIa型高脂血癥血清也清澈透明。型高脂血癥血清也清澈透明。 正常空腹血清應(yīng)清澈透明。正常空腹血清應(yīng)清澈透明。 二、血清（漿）總膽固醇測(cè)定二、血清（漿）總膽固醇測(cè)定化學(xué)法化學(xué)法酶法酶法（一）化學(xué)測(cè)定法（一）化學(xué)測(cè)定法 化學(xué)測(cè)定法通常需化學(xué)測(cè)定法通常需抽提純化抽提純化。顯色劑主要有兩類(lèi)：。顯色劑主要有兩類(lèi)：醋

24、酸醋酸- -醋酐醋酐- -硫酸硫酸高鐵硫酸。高鐵硫酸。 這些顯色反應(yīng)須用強(qiáng)酸試劑，干擾因素多，準(zhǔn)確這些顯色反應(yīng)須用強(qiáng)酸試劑，干擾因素多，準(zhǔn)確測(cè)定有賴(lài)于從標(biāo)本中抽提、皂化、純化過(guò)程，因而操測(cè)定有賴(lài)于從標(biāo)本中抽提、皂化、純化過(guò)程，因而操作較繁，不適于分析大批量標(biāo)本，且不適于自動(dòng)分析。作較繁，不適于分析大批量標(biāo)本，且不適于自動(dòng)分析。 n特點(diǎn)：特點(diǎn)： 1 1Liberman-BurchardLiberman-Burchard反應(yīng)反應(yīng) 18851885年年LibermanLiberman發(fā)現(xiàn)膽固醇在硫酸、醋酐溶液中顯色，發(fā)現(xiàn)膽固醇在硫酸、醋酐溶液中顯色，18901890年年BurchardBurchar

25、d用此反應(yīng)測(cè)定膽固醇稱(chēng)為用此反應(yīng)測(cè)定膽固醇稱(chēng)為L(zhǎng)-BL-B反應(yīng)。反應(yīng)。 1953 1953年年ZakZak提出用硫酸、醋酸和提出用硫酸、醋酸和Fe3+Fe3+等與膽固醇作用生等與膽固醇作用生成紫紅色化合物來(lái)測(cè)定膽固醇，稱(chēng)為成紫紅色化合物來(lái)測(cè)定膽固醇，稱(chēng)為ZakZak反應(yīng)。反應(yīng)。 2 2ZakZak反應(yīng)反應(yīng)( (二二) )酶測(cè)定法酶測(cè)定法n特點(diǎn)：特點(diǎn)： 常規(guī)測(cè)定中現(xiàn)已廣泛應(yīng)用酶法，酶法具有特異性好，精密常規(guī)測(cè)定中現(xiàn)已廣泛應(yīng)用酶法，酶法具有特異性好，精密度和靈敏度都能很好地滿(mǎn)足臨床實(shí)驗(yàn)室的要求，既可以手工操度和靈敏度都能很好地滿(mǎn)足臨床實(shí)驗(yàn)室的要求，既可以手工操作，也適合自動(dòng)分析，但酶法測(cè)定中出現(xiàn)了

26、不同程度的作，也適合自動(dòng)分析，但酶法測(cè)定中出現(xiàn)了不同程度的基質(zhì)效基質(zhì)效應(yīng)。應(yīng)。 采用酶反應(yīng)原理的干化學(xué)法頗為實(shí)用，其缺點(diǎn)是價(jià)格高，采用酶反應(yīng)原理的干化學(xué)法頗為實(shí)用，其缺點(diǎn)是價(jià)格高，精密度差。膽固醇的酶測(cè)定法始于精密度差。膽固醇的酶測(cè)定法始于7070年代。由于操作簡(jiǎn)便，試年代。由于操作簡(jiǎn)便，試劑無(wú)腐蝕性，特別適用于自動(dòng)生化分析，劑無(wú)腐蝕性，特別適用于自動(dòng)生化分析，目前已成為測(cè)定膽固目前已成為測(cè)定膽固醇的主要方法。醇的主要方法。 CEH-COD-PAPCEH-COD-PAP法法 n原理：原理： CECEH H2 2O FCO FCFFAFFA FC FCO O2 2 4-4-膽甾烯酮膽甾烯酮H H

27、2 2O O2 2 H H2 2O O2 24-AAP4-AAP酚酚 醌亞胺醌亞胺H H2 2O O CEH COD POD 膽固醇酶測(cè)定法的試劑中，除了上述三種酶、酚和膽固醇酶測(cè)定法的試劑中，除了上述三種酶、酚和4-4-氨基安替比氨基安替比林外，還有維持林外，還有維持pHpH恒定的緩沖液、膽酸鈉、表面活性劑以及穩(wěn)定劑等。恒定的緩沖液、膽酸鈉、表面活性劑以及穩(wěn)定劑等。膽酸鈉是為了提高膽固醇酯酶的活性，表面活性劑的作用是促進(jìn)膽固膽酸鈉是為了提高膽固醇酯酶的活性，表面活性劑的作用是促進(jìn)膽固醇從脂蛋白中釋放出來(lái)醇從脂蛋白中釋放出來(lái) n評(píng)價(jià)：評(píng)價(jià)：主要缺點(diǎn)是：主要缺點(diǎn)是：優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：本法靈敏度高、準(zhǔn)確度

28、高、精密度好，線性范圍寬。：本法靈敏度高、準(zhǔn)確度高、精密度好，線性范圍寬。某些膽固醇酯酶對(duì)膽固醇酯的水解不完全，不能用純膽固醇結(jié)晶以有機(jī)某些膽固醇酯酶對(duì)膽固醇酯的水解不完全，不能用純膽固醇結(jié)晶以有機(jī)溶劑配制的溶液作為溶劑配制的溶液作為T(mén)CTC分析的校準(zhǔn)液，而應(yīng)以準(zhǔn)確定值的血清作為標(biāo)準(zhǔn)，分析的校準(zhǔn)液，而應(yīng)以準(zhǔn)確定值的血清作為標(biāo)準(zhǔn)，此校準(zhǔn)液（品）相當(dāng)于三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。此校準(zhǔn)液（品）相當(dāng)于三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。 表面活性劑，如吐溫表面活性劑，如吐溫-40-40可以干擾膽固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇可以干擾膽固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇60006000可使結(jié)果提高可使結(jié)果提高1 12 2； 本法具有氧化酶反應(yīng)途徑的共同缺陷

29、，易受到一些還原性物質(zhì)如尿酸、本法具有氧化酶反應(yīng)途徑的共同缺陷，易受到一些還原性物質(zhì)如尿酸、膽紅素、維生素膽紅素、維生素C C和谷胱甘肽等的干擾。和谷胱甘肽等的干擾。 【參考值【參考值】 血清總膽固醇合適范圍：血清總膽固醇合適范圍：5.20mmol/L (200mg/dl)5.20mmol/L (200mg/dl)，邊緣升高：邊緣升高：5.235.235.69mmol/L(2015.69mmol/L(201219mg/dl)219mg/dl)，升高：升高：5.72mmol/L (220mg/dl)5.72mmol/L (220mg/dl)。u影響影響TC水平的因素水平的因素 年齡與性別；年齡與

30、性別；長(zhǎng)期的高膽固醇、高飽和脂肪酸和高熱量飲食可使長(zhǎng)期的高膽固醇、高飽和脂肪酸和高熱量飲食可使TCTC增高；增高；遺傳因素；遺傳因素； 其它：如缺少運(yùn)動(dòng)、腦力勞動(dòng)、精神緊張等可能使其它：如缺少運(yùn)動(dòng)、腦力勞動(dòng)、精神緊張等可能使TCTC升高。升高。 TC TC除了作為高膽固醇血癥的診斷指標(biāo)之外，不能作為其它任何疾病的診除了作為高膽固醇血癥的診斷指標(biāo)之外，不能作為其它任何疾病的診斷指標(biāo)，對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病而言，斷指標(biāo)，對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病而言，TCTC是一個(gè)明確的危險(xiǎn)因子，與冠是一個(gè)明確的危險(xiǎn)因子，與冠心病的發(fā)病率呈正相關(guān)。心病的發(fā)病率呈正相關(guān)?！九R床意義【臨床意義】u高高TCTC血癥：血

31、癥：原發(fā)和繼發(fā)原發(fā)和繼發(fā) u低低TCTC血癥：血癥：原發(fā)和繼發(fā)原發(fā)和繼發(fā) 三、血清（漿）甘油三酯測(cè)定三、血清（漿）甘油三酯測(cè)定化學(xué)法化學(xué)法酶法酶法n基本操作：基本操作：（一）化學(xué)測(cè)定法（一）化學(xué)測(cè)定法1 1、抽提抽提：關(guān)鍵是選用合適的抽提劑，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷關(guān)鍵是選用合適的抽提劑，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷脂、游離甘油和葡萄糖等干擾物質(zhì)的影響。脂、游離甘油和葡萄糖等干擾物質(zhì)的影響。 2 2、皂化皂化：甘油三酯水解生成甘油，這一步大都采用甘油三酯水解生成甘油，這一步大都采用KOHKOH作皂化劑作皂化劑 3 3、氧化氧化：過(guò)碘酸在酸性溶液中將甘油氧化成甲醛和甲酸過(guò)碘酸在酸

32、性溶液中將甘油氧化成甲醛和甲酸 4 4、顯色顯色：甲醛的定量主要有兩種方法：甲醛的定量主要有兩種方法：甲醛與變色酸甲醛與變色酸(4，5-二羥二羥-2，7-萘二磺酸萘二磺酸)在硫酸溶液中加熱生成紫色化合物在硫酸溶液中加熱生成紫色化合物 甲醛與乙酰丙酮在銨離子甲醛與乙酰丙酮在銨離子(NH4+)存在下生成黃色的二乙酰二氫二甲基吡啶存在下生成黃色的二乙酰二氫二甲基吡啶 ( (二二) )酶測(cè)定法酶測(cè)定法1 1、磷酸甘油氧化酶法（、磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAPGPO-PAP法）法）n 原理原理 TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+

33、 G-3-P + ADP G-3-P + O2 GPO 磷酸二羥丙酮磷酸二羥丙酮 + H2O2 2 H2O2 + Phenol + 4-Aminoantipyrine POD Chromogen + 4H2On 計(jì)算計(jì)算 TG（mmol/L）=A500nm測(cè)定測(cè)定/A500nm校準(zhǔn)校準(zhǔn) 校準(zhǔn)血清校準(zhǔn)血清TG濃度濃度（mmol/L）n去除去除FGFG干擾可用下列方法：干擾可用下列方法：1 1、外空白法：同時(shí)用不含、外空白法：同時(shí)用不含LPLLPL的酶試劑測(cè)定的酶試劑測(cè)定FG FG 作空白。作空白。2 2、內(nèi)空白法：又稱(chēng)兩步法或雙試劑法、內(nèi)空白法：又稱(chēng)兩步法或雙試劑法將將LPLLPL和和4-AAP

34、4-AAP組成試劑組成試劑2 2，其余部分為試劑，其余部分為試劑1 1。此法目。此法目前為中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)推薦方法。前為中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)推薦方法。 2 2乳酸脫氫酶法乳酸脫氫酶法 n 原理：原理： TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+ G-3-P + ADP ADP + 磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸激酶丙酮酸激酶 丙酮酸丙酮酸 + ATP丙酮酸丙酮酸+NADH LDH NAD+ + 乳酸乳酸 由于反應(yīng)消耗由于反應(yīng)消耗NADHNADH，故可利用，故可利用NADHNADH在在340nm340nm吸光度降低來(lái)吸光

35、度降低來(lái)測(cè)定甘油三脂的濃度測(cè)定甘油三脂的濃度。n評(píng)價(jià)：評(píng)價(jià)： 本法結(jié)果準(zhǔn)確，但靈敏度較低，試劑本法結(jié)果準(zhǔn)確，但靈敏度較低，試劑也不太穩(wěn)定。由于血清本身存在游離甘油也不太穩(wěn)定。由于血清本身存在游離甘油和丙酮酸等干擾物質(zhì)，所以測(cè)定時(shí)除了要和丙酮酸等干擾物質(zhì)，所以測(cè)定時(shí)除了要做試劑空白外，還要做標(biāo)本空白做試劑空白外，還要做標(biāo)本空白 3 3甘油氧化酶法甘油氧化酶法 第一步：第一步： FG + OFG + O2 2 甘油氧化酶甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+ H+ H2 2O O2 2 H H2 2O O2 2 + EMAE + EMAE PODPOD 無(wú)色物質(zhì)無(wú)色物質(zhì)消除游離甘油的影響，消除游離甘油的影響，

36、3-5min3-5min后進(jìn)行第二步反應(yīng)：后進(jìn)行第二步反應(yīng)：TG + 3HTG + 3H2 2O O LPLLPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + 3RCOOHFG + OFG + O2 2 甘油氧化酶甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+ H+ H2 2O O2 2H H2 2O O2 2 +4-AAP+ EMAE +4-AAP+ EMAE PODPOD 有色化合物有色化合物注：注：EMAEEMAE作用與酚相似，是還原劑，但靈敏度比酚高。作用與酚相似，是還原劑，但靈敏度比酚高。n原理原理：該法分兩步完成。該法分兩步完成。 血清甘油三酯一般隨年齡增加而升高，體重超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)者往血清甘

37、油三酯一般隨年齡增加而升高，體重超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)者往往偏高。往偏高。 合適范圍：合適范圍：1.70mmol/L(150mg/dl)1.70mmol/L(150mg/dl)， 升高：升高：1.70mmol/L (150mg/dl)1.70mmol/L (150mg/dl)。 【參考值【參考值】【臨床意義【臨床意義】 原發(fā)性高原發(fā)性高TGTG血癥多有遺傳因素，包括家族性高血癥多有遺傳因素，包括家族性高TGTG血癥血癥與家族性型高脂（蛋白）血癥等。繼發(fā)性高與家族性型高脂（蛋白）血癥等。繼發(fā)性高TGTG血癥見(jiàn)于糖血癥見(jiàn)于糖尿病、糖原累積病、甲狀腺機(jī)能減退、腎病綜合征、妊娠、尿病、糖原累積病、甲狀腺機(jī)能減退、腎

38、病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。大量前瞻性的研究證實(shí)，富含口服避孕藥、酗酒等。大量前瞻性的研究證實(shí)，富含TGTG的的脂蛋白是脂蛋白是CHDCHD的獨(dú)立的危險(xiǎn)因子，的獨(dú)立的危險(xiǎn)因子，TGTG增加表明患者存在代增加表明患者存在代謝綜合癥，需進(jìn)行治療。甘油三酯降低比較少見(jiàn)，甲狀腺謝綜合癥，需進(jìn)行治療。甘油三酯降低比較少見(jiàn)，甲狀腺功能亢進(jìn)、腎上腺皮質(zhì)功能減退和肝功能?chē)?yán)重?fù)p傷時(shí)可以功能亢進(jìn)、腎上腺皮質(zhì)功能減退和肝功能?chē)?yán)重?fù)p傷時(shí)可以見(jiàn)到甘油三酯降低見(jiàn)到甘油三酯降低 四、血清（漿）脂蛋白測(cè)定四、血清（漿）脂蛋白測(cè)定( (一一) )血清脂蛋白電泳血清脂蛋白電泳 脂蛋白電泳分析可分為預(yù)染法和電泳后染色法兩大

39、類(lèi)。脂蛋白電泳分析可分為預(yù)染法和電泳后染色法兩大類(lèi)。 預(yù)染法預(yù)染法的操作比較簡(jiǎn)單，分離效果直觀。其操作過(guò)程是先的操作比較簡(jiǎn)單，分離效果直觀。其操作過(guò)程是先將待測(cè)血清和蘇丹黑染料按一定比例混合進(jìn)行預(yù)染處理，離心后將待測(cè)血清和蘇丹黑染料按一定比例混合進(jìn)行預(yù)染處理，離心后取上清液進(jìn)行電泳分析。取上清液進(jìn)行電泳分析。 電泳后染色法電泳后染色法為用電泳方法先將血漿脂蛋白各成份分開(kāi)，為用電泳方法先將血漿脂蛋白各成份分開(kāi)，再用蘇丹黑或油紅再用蘇丹黑或油紅O O進(jìn)行染色。進(jìn)行染色。臨床上比較常用的是預(yù)染法電泳。臨床上比較常用的是預(yù)染法電泳。 血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳：血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳：-脂蛋白：脂蛋白

40、：0.30-0.400.30-0.40，前前-脂蛋白：脂蛋白：0.13-0.250.13-0.25，-脂蛋白：脂蛋白：0.50-0.600.50-0.60，乳糜微粒：陰性。乳糜微粒：陰性。【參考值【參考值】（二）高密度脂蛋白測(cè)定（二）高密度脂蛋白測(cè)定 常以測(cè)定常以測(cè)定HDL-CHDL-C含量代表含量代表HDLHDL水平。水平。 n參考方法參考方法: : 超速離心分離超速離心分離HDLHDL，然后用化學(xué)法（，然后用化學(xué)法（ALKBALKB法）或法）或酶法測(cè)定其膽固醇含量，此法需特殊設(shè)備，而且不易酶法測(cè)定其膽固醇含量，此法需特殊設(shè)備，而且不易常握。常握。 n常規(guī)方法常規(guī)方法: : 1磷鎢酸磷鎢酸-

41、鎂法鎂法 2HDL直接測(cè)定法直接測(cè)定法 HDLHDL直接測(cè)定法大致分三類(lèi)，分別是直接測(cè)定法大致分三類(lèi)，分別是: :聚乙二醇聚乙二醇/ /抗體包裹法抗體包裹法酶修飾法酶修飾法選擇性抑制法，又稱(chēng)掩蔽法，選擇性抑制法，又稱(chēng)掩蔽法， HDL-C合適范圍：合適范圍：1.04mmol/L (40mg/dl), 0.91mmol/L (35mg/dl)為減低。為減低?！緟⒖贾怠緟⒖贾怠俊九R床意義【臨床意義】 流行病學(xué)與臨床研究證明，流行病學(xué)與臨床研究證明，HDL-CHDL-C與冠心病發(fā)病呈負(fù)相關(guān)，與冠心病發(fā)病呈負(fù)相關(guān)，HDL-CHDL-C低于低于0.9 mmol0.9 mmol/L /L 是冠心病危險(xiǎn)因素。

42、是冠心病危險(xiǎn)因素。HDL-CHDL-C大于大于1.55mmol/L1.55mmol/L被認(rèn)為是冠心病的被認(rèn)為是冠心病的“負(fù)負(fù)”危險(xiǎn)因素。危險(xiǎn)因素。 HDL-CHDL-C下降還下降還多見(jiàn)于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高多見(jiàn)于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TGTG血癥往往血癥往往伴以低伴以低HDL-CHDL-C，肥胖者的，肥胖者的HDL-CHDL-C也多偏低。吸煙可使也多偏低。吸煙可使HDL-CHDL-C下降，下降，適量飲酒、長(zhǎng)期體力勞動(dòng)和運(yùn)動(dòng)會(huì)使適量飲酒、長(zhǎng)期體力勞動(dòng)和運(yùn)動(dòng)會(huì)使HDL-CHDL-C升高。升高。（二）低密度脂蛋白測(cè)定（二）低密度脂蛋白測(cè)定1 1FriedewaldF

43、riedewald公式法公式法 LDL-CLDL-CTCTCHDL-CHDL-CTG/5TG/5（以（以mg/dlmg/dl為單位時(shí)），或?yàn)閱挝粫r(shí)），或LDL-CLDL-CTCTCHDL-CHDL-CTG/2.2TG/2.2（以（以mmolmmol/L/L為單為單位時(shí)）。位時(shí)）。 2 2聚乙烯硫酸鹽沉淀法聚乙烯硫酸鹽沉淀法 本法并非對(duì)本法并非對(duì)LDL-CLDL-C作直接測(cè)定，而作直接測(cè)定，而是用聚乙烯硫酸（是用聚乙烯硫酸（PVSPVS）選擇性沉淀血清中）選擇性沉淀血清中LDLLDL，再以血清，再以血清TCTC減去上清液（含減去上清液（含HDLHDL與與VLDLVLDL）膽固醇即得）膽固醇即得L

44、DL-CLDL-C值。值。 3 3直接測(cè)定法直接測(cè)定法: :兩類(lèi)兩類(lèi)目前各類(lèi)方法測(cè)定的目前各類(lèi)方法測(cè)定的LDL-CLDL-C值都包括值都包括IDLIDL和和LP(aLP(a) )的的cholchol在內(nèi)在內(nèi) LDL-C LDL-C合適范圍：合適范圍：3.12mmol/L (120mg/dl)3.12mmol/L (120mg/dl)， 邊緣升高：邊緣升高：3.153.153.61mmol/L(1213.61mmol/L(121139mg/dl)139mg/dl) 升高：升高：3.64mmol/L (140mg/dl)3.64mmol/L (140mg/dl)。 【參考值【參考值】【臨床意義【臨床意義】 LDL-C LDL-C增高是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類(lèi)危險(xiǎn)因增高是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類(lèi)危險(xiǎn)因素