《酶組織化學與免疫組織化學》習題1

1、酶組織化學與免疫組織化學技術習題第一部分組織學技術和免疫組織化學技術一、選擇題 （一）A1型題(標準型) 1.C 2.B 3.A 4.C 5.A 8.B 9.C 10.D 14.A 23.D1.免疫組化技術的關鍵步驟是 A.標本處理 B.抗體的處理與保存 C.免疫染色D.設立對照試驗 E.結果判斷2.免疫組化技術的首要試劑是 A.抗原 B.抗體 C.標記物D.固定劑 E.洗滌液3.酶免疫組化技術中，關于標本處理的說法正確的是 A.充分洗后于室溫用0.3%H2O2和80%甲醇處理2030min。B.充分洗后于室溫用0.3%H2O2和80%甲醇處理4050min。C.充分洗后于室溫用0.5%H2O

2、2和90%甲醇處理2030min。D.充分洗后于4用0.3%H2O2和80%甲醇處理2030min。E.充分洗后于4用0.3%H2O2和80%甲醇處理4050min。4.PAP法是Sterberger等于哪一年建立的 A.1950B.1960C.1970D.1980E.19905.PAP復合物中的酶是 A.辣根過氧化物酶B.堿性磷酸酶C.葡萄糖氧化酶D.胃蛋白酶E.膠原酶8.PAP法中的“橋”是 A.第一抗體B. 第二抗體C. 第三抗體D.親和素E.第四抗體9.ABC技術由美籍華人Hsu于哪一年建立，已廣泛應用于免疫學檢測技術 A.1961B.1975C.1981D.1985E.199010.

3、ABC法中的“橋”是指 A.第一抗體B. 第二抗體C. 第三抗體D.親和素E.鏈霉素親和素14.免疫組化法吸收試驗是用過量已知抗原與抗體在多少度以下充分反應，離心后再行免疫組化染色 A.4B.20C.40D.37E.5023PAS反應是檢測組織內的：A.核酸 B.脂C.蛋白質D.多糖E.抗原一、填空1、免疫組織化學中最常用的標記物是_熒光素_、_酶_ 、_生物素和親和素_、_。原位雜交組織化學中常用的標記物有_和_兩大類。2、 常用的粘附劑有_、_ 、_等。3、抗原決定簇是指_分子表面的、具有活性的_。4、一般組織化學是利用化學或物理反應，在組織標本上加入一定的_，使其發(fā)生反應，形成_，能在顯

4、微鏡下觀察。常用于檢測_、_ 、_等。5、酶組織化學是利用酶對其_的催化作用 ，生成_，再與某種_反應，形成_沉淀，檢測_分布及活性的方法。常用的方法有_ 、_、_、_和_。6、最常用于顯示細胞、組織內的多糖和蛋白多糖的方法是 過碘酸-雪夫反應PAS。7.、免疫染色對特殊標本的進一步處理常用 _和_法。8、免疫組化中最常用的制片方法是_和_。9、免疫組化染色后，陽性細胞的染色分布有三種類型，分別是_、_和_。10、酶免疫組化技術中最常用的酶有_、_及_。11、免疫電鏡標本的制備主要有_、_和_三種。 12、組織塊包埋前需先經_，常用的包埋劑是_、_和_。13、光學顯微鏡下觀察的固定標本除組織切

5、片外，還有_、_和_。14、免疫細胞化學術中常用的標記物有_、_、_和_。填空 1、熒光素、酶、生物素和親和素、鐵蛋白和膠體金。放射性同位素、非同位素標記物（非放射性同位素）。2、蛋白甘油、甲醛明膠、多聚賴氨酸。3、抗原、特異性化學集團。4、化學試劑，有色沉淀物，糖類、脂類、核酸、酶。5、底物，初反應產物，捕捉劑，有色終反應物沉淀，酶。金屬沉淀法、偶氮偶聯法、四唑鹽法、靛藍法、DAB法（聯苯胺法）。6、PAS反應（過碘酸希夫反應）。 7、蛋白酶消化法，非特異吸附法8、冰凍切片，石蠟切片 9、胞質型 細胞核型，細胞膜表面型 10辣根過氧化物酶，堿性磷酸酶 葡萄糖氧化酶 11、非包埋法免疫染色，包

6、埋前免疫染色，包埋后免疫染色12、固定，石蠟，火棉膠，樹脂13、涂片，鋪片，磨片14、熒光素，酶，鐵蛋白，膠體金二、名詞解釋1.HE染色法2、固定：在保持組織形態(tài)完好和被檢測抗原的前提下，應采用濃度最低的固定劑和最短的固定時間，固定時間一般為1-12小時，常用的的固定液有醛類固定劑、丙酮及醇類固定劑以及其他固定劑。2.銀染法3.冷凍切片4.組織化學和細胞化學術5.免疫細胞化學術6.原位雜交7.膠體金8.簡述石蠟切片的制備過程。9、背景著色 10、一抗和二抗11、探針12、免疫組織化學技術1、HE染色法是一種最基本的組織切片染色方法，廣泛應用于教學和科研中。染色液是由蘇木精（hematoxyli

7、n，堿性染料）和伊紅（eosin，酸性染料）配制而成，蘇木精使細胞核和細胞質內的嗜堿性物質著紫藍色，伊紅使細胞質基質和間質內的膠原纖維等著紅色，染色鮮艷，觀察方便。2、銀染法是用硝酸銀配制的溶液浸染組織切片或細胞的染色方法。有些結構可直接使硝酸銀還原，銀粒附著在結構上而顯色，稱此為親銀性；有些結構無直接還原作用，需加入還原劑才能使銀粒附著在結構上，稱此為嗜銀性。有些結構和細胞可以這種銀染法而顯示，如網狀纖維（又稱嗜銀纖維），神經細胞內的神經原纖維、神經膠質細胞內的某些成分，以及一些神經內分泌細胞內的分泌顆粒等。用銀染法顯示的細胞，有的可稱為嗜銀細胞。3.冷凍切片是新鮮組織或固定組織在低溫下快速

8、冷凍后制備組織切片的方法。一般是將組織塊置入干冰或液氮內使其快速凍結，然后在恒冷箱切片機內制冷凍切片。這種方法制片快速，常用于外科手術切除標本的快速病理診斷。由于這種制片方法可免去組織塊包埋等程序，細胞和組織內的一些成分如糖原、酶等保存較好，故較適用于組織化學和細胞化學染色研究。4.組織化學和細胞化學術是應用化學或物理反應原理顯示組織切片或細胞內某種化學成分，進行定位、定量及其與功能相關研究的方法。方法種類甚多，顯色反應的原理也各不相同，分別用于顯示組織或細胞內的多糖類、脂類、各種酶及核酸等成分。一些經典的染色方法如PAS反應顯示組織內的多糖和蛋白多糖等，Feulgen反應顯示細胞核內的DNA

9、，用Sudan等染料顯示脂肪細胞，以及顯示細胞內酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、ATP酶、琥珀酸脫氫酶、過氧化物酶等的方法。 5.免疫細胞化學術是應用免疫學原理，通過特異性標記抗體與抗原（某種蛋白質、多肽等）的結合來顯示細胞內某種抗原，并進行定位和定量的研究方法。這種方法特異性強，敏感性高，進展迅速，應用廣泛，已成為當今生命科學諸多學科及臨床醫(yī)學檢驗普遍應用的重要手段。機體組織內的蛋白質種類繁多，多種蛋白質和多肽已被提純并制成其抗體，目前有多種標記二抗（酶標記、熒光素標記、膠體金標記等）商品供應，使免疫細胞化學的操作更簡便，應用更普遍。6.原位雜交術是在免疫細胞化學的基礎上發(fā)展起來的一種核酸分子雜交技

10、術，用來檢測細胞內某種蛋白質的基因（DNA片段或mRNA片段）表達和定位與定量研究，目前已成為細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。其基本原理是應用已知的并被標記的核酸片段（同位素或熒光素、酶等標記的探針）與細胞內待測核酸（RNA或DNA片段）進行雜交，在光鏡和電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位。 7.膠體金.膠體金是氯金酸在還原劑如白磷、維生素C枸櫞酸納和鞣酸等作用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱為膠體金。8.石蠟切片制備程序：取材與固定；脫水、透明與包埋；切片與染色；封固。1、背景著色 2、一抗和二抗 3、探針 4、免疫組織化學技術 答案： 名

11、詞解釋：1、是指免疫組化過程中產生的非檢測抗原（或抗體）的著色，又稱非特異性著色，往往造成假陽性?？筛蓴_顯色結果的判斷，因此染色時，應盡量減小或消除背景著色。 2、第一抗體，簡稱一抗（Ab1）：是針對待測抗原的抗體。第二抗體，簡稱二抗(Ab2)：是用一抗作為抗原免疫另一種動物制備的抗體3、探針是指已知堿基序列的、用標記物標記了的一段核苷酸片斷，用來檢測組織或細胞內的某一特定DNA片段或RNA片段。 4、是應用抗原、抗體間特異性免疫反應的原理,用標記物標記的已知抗體（或抗原）檢測組織細胞內的蛋白質、多肽等相應的抗原（或抗體）的方法。三、簡答題1.免疫組織化學的全過程包括哪些步驟？答： 1）抗原的

12、提取與純化 2）免疫動物或細胞融合，制備特異性抗體及純化 3）標記物與抗體結合形成標記抗體 4）標本的處理 5）抗原抗體反應和呈色反應 6）顯微鏡下觀察結果2.免疫組化標本固定時，好的固定劑應滿足哪些要求？答：1）能快速固定抗原 2）防止抗原物質擴散3）固定后的抗原能被抗體識別，不影響抗原抗體反應。3.簡述熒光免疫組化技術直接法的原理。答：將熒光素標記的已知抗體（或抗原）與切片（印片）中相應抗原（或抗體）直接發(fā)生反應，以檢測組織與細胞標本中的靶抗原（或抗體）。4.何謂免疫電鏡技術？答：免疫電鏡技術是將抗原抗體反應的特異性與電子顯微鏡的高分辨力相結合的在亞細胞和超微結構水平上對抗原進行定位分析的

13、一種高度精確、靈敏的技術。四、論述題1.試述酶免疫組化技術的原理及其應用。2. 試述任意3種酶組織化學技術的反應原理。3. 試述免疫熒光雙標記技術（間接法）的原理和當兩種一抗及兩種二抗分別混合使用時應注意的問題。 4. 試述免疫組織化學ABC技術中，組織抗原、一抗、二抗和ABC如何依次相互結合的。 1、酶免疫組化技術的原理： 酶免疫組化技術是利用酶標記已知抗體（或抗原），然后與組織標本中相應抗原（或抗、1體）在一定條件下相互結合形成帶酶分子的復合物，酶遇到底物時，能催化底物水解，或氧化或還原，產生有色的不溶性產物，出現顯色反應，在顯微鏡下進行細胞與組織表面或內部某種抗原成分的定位觀察分析。 酶

14、免疫組化技術的特點：敏感性較免疫熒光技術更高，可用普通光學顯微鏡和電子顯微鏡觀察結果，便于對組織細胞微細結構的分辯，染色標本可長期保存。 應用：惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷；確定轉移性惡性腫瘤的原發(fā)部位；對某類腫瘤進行進一步的病理分型；軟組織腫瘤的治療一般需根據正確的組織學分類，因其種類多、組織形態(tài)相像，有時難以區(qū)分其組織來源，應用多種標志進行免疫組化研究對軟組織腫瘤的診斷是不可缺少的；發(fā)現微小轉移灶，有助于臨床治療方案的確定，包括手術范圍的確定。為臨床提供治療方案的選擇。2、酸性磷酸酶反應原理：鉛法和重氮偶聯法 1.鉛法：在PH為5.0的條件下，酸性磷酸酶（ACP）水解其底物：-甘油酸鈉，產生P

15、O43-,后者被捕獲劑Pb(NO3)2的Pb2+直接捕獲形成無色的Pb3 (PO4)2沉淀，后者又與(NH4)2S發(fā)生置換反應，最終形成棕黑色沉淀。 2.重氮偶聯法：-苯酚磷酸鈉或萘酚AS-BI磷酸被酶水解放出萘酚，后者立即被重氮鹽捕獲偶聯而生成有色偶氮色素沉淀（紅色）。 乙酰膽堿酯酶反應原理： 亞鐵氰化銅法：乙酰膽堿酯酶（AChE）能將乙酰膽堿鹽水解產生硫膽堿，使鐵氰化物還原為亞鐵氰化物，后者與銅離子結合成亞鐵氰化銅而呈現有色沉淀(棕色)。 NO合酶反應原理： NADPH-d法：一氧化氮合酶可催化前體物質L-精氨酸轉變成為L-瓜氨酸和NO，由于NOS和NADPH-d可能為同一種酶，并且都可以

16、還原輔酶（NADPH）為輔助因子，介導NOS催化L-精氨酸轉變成為L-瓜氨酸和NO，并釋放電子，后者又被NADPH傳遞給硝基四唑蘭（N-BT）, N-BT可被還原為有色沉淀（藍色）。3、基本原理：將兩種抗體分別用不同的熒光色素加以標記，用來定位同一細胞內存在兩種不同成分，以便根據兩種成分的定位試圖說明該細胞的生物功能。 注意的問題：抗兩種一抗同時加入，二抗甲先加入，二抗乙后加入。1、整個程序均在室溫下，濕盒內進行。 2、一抗和二抗均用PBS稀釋，一抗的濃度要比PAP法中高得多，越位后者的5倍 。3、甘油封片后須立即鏡檢或置于4冰箱中待檢 。4、實驗中若想兩步完成四步實驗程序，應注意：a.抗甲抗原抗體和抗乙抗原抗體非同種抗體（如鼠抗和兔抗），且不能相互競爭受體。b.兩種二抗必須與一抗相對應（如鼠抗對應兔抗）。4、ABC法是在LAB法和BAB法的基礎上發(fā)展起來的，此法需要兩種抗體，即第一抗體和第二抗