標(biāo)準(zhǔn)菌株使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程完整

1、標(biāo)準(zhǔn)菌株使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1 檢驗(yàn)?zāi)康膶?duì)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行合理的保存，并規(guī)合理的使用流程，保證菌株的性能穩(wěn)定可靠。2 圍微生物實(shí)驗(yàn)室保存的標(biāo)準(zhǔn)菌株。3 職責(zé)微生物組工作人員正確執(zhí)行本操作規(guī)程。4 術(shù)語(yǔ)和定義4.1標(biāo)準(zhǔn)菌株其特征進(jìn)行了分類(lèi)和描述，有明確的來(lái)源。ATCC（American Type Culture Collection）美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌株收藏中心。4.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過(guò)一代轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。4.3 工作菌株標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳代后得到的同種菌株。4.4 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株、工作菌株的統(tǒng)稱(chēng)。4.5質(zhì)控菌株ATCC最佳，但當(dāng)無(wú)法獲得時(shí)可以使用ATCC演化的菌株或我國(guó)國(guó)家菌

2、種庫(kù)儲(chǔ)存的標(biāo)準(zhǔn)菌株。特殊情況，例如定性試驗(yàn)可用已知的菌種作為質(zhì)控菌株。室間質(zhì)評(píng)的菌株即可。5 保存程序5.1標(biāo)準(zhǔn)菌株5.1.1商業(yè)購(gòu)買(mǎi)的ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株干粉，-80低溫保存，可以2年以上。安瓿真空包裝的，-80可長(zhǎng)期穩(wěn)定保存。將標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行編號(hào)和登記。5.1.2復(fù)用1ml無(wú)菌的小牛血清或營(yíng)養(yǎng)肉湯溶解。根據(jù)菌種的生長(zhǎng)特點(diǎn)，接種到新鮮培養(yǎng)基上選擇適宜的培養(yǎng)條件培養(yǎng)18-24h。酵母菌要求3天，形成孢子的微生物宜保存孢子。5.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株5.2.1由復(fù)后的ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株制備。復(fù)后的標(biāo)準(zhǔn)菌株要檢查其純度，必要時(shí)進(jìn)行生化試驗(yàn)檢查。刮取培養(yǎng)物上的菌體，用足量的菌懸浮于防凍培養(yǎng)基中。防凍液可以是無(wú)菌脫纖

3、維羊血、10%甘油肉湯。儲(chǔ)存足夠量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株，可用1-2年。一年52周需要52支以上。5.2.2甘油肉湯保存法成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化鈉、甘油、純化木。相當(dāng)于20%的甘油。挑取5環(huán)菌落加入到1ml甘油肉湯中混勻?？琉B(yǎng)菌可以適當(dāng)增加菌量。-80保存。除鏈球菌和嗜血桿菌以外細(xì)菌均可使用。保存期限1-5年。5.2.3全血保存法成分為脫纖維羊血。挑取5環(huán)菌落加入到1ml甘油肉湯中混勻?？琉B(yǎng)菌可以適當(dāng)增加菌量。-80保存。主要用于保存鏈球菌、嗜血桿菌與厭氧菌。保存期限1-5年。5.2.4標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株進(jìn)行編號(hào)和登記。5.3工作標(biāo)準(zhǔn)菌株由標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳代得到的菌株。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株對(duì)多向下傳三代。過(guò)多

4、的傳種會(huì)增加變異的機(jī)會(huì)。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株根據(jù)菌種特點(diǎn)選擇適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)18-24h即工作標(biāo)準(zhǔn)菌株。儲(chǔ)存在2-8，可放四周。個(gè)別營(yíng)養(yǎng)要求高的為2周，例如肺炎鏈球菌和嗜血桿菌。使用時(shí)應(yīng)編號(hào)并登記。5.4編號(hào)方法每個(gè)菌的保存管都要有唯一的編號(hào)，簽字筆標(biāo)注，便于查找和管理。來(lái)源數(shù)字意義購(gòu)買(mǎi)的標(biāo)準(zhǔn)菌株1501ATCC2592215年第1株ATCC25922儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)菌株1501ATCC25922-3由1501ATCC25922傳代而來(lái)的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株5.5記錄管理5.5.1菌種應(yīng)有嚴(yán)格的登記。每個(gè)編號(hào)都要有詳細(xì)的記錄包括來(lái)源、傳代、保存方法、使用記錄、使用原因、高壓滅菌記錄等。附表標(biāo)準(zhǔn)菌株記

5、錄表標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株記錄表5.5.2菌種保管應(yīng)有專(zhuān)人負(fù)責(zé)，保存于專(zhuān)用冰箱中，雙人雙鎖，確保菌種安全。保管人員變動(dòng)時(shí)，必須嚴(yán)格交接手續(xù)。5.5.3各種菌種應(yīng)按規(guī)定時(shí)間接種，注意菌種有無(wú)污染與變異，如發(fā)現(xiàn)變異時(shí)，應(yīng)與時(shí)更換5.5.4一個(gè)使用周期結(jié)束后，標(biāo)準(zhǔn)菌株、儲(chǔ)備菌株、工作菌株都要進(jìn)行高壓滅菌處理，并做好記錄。6 使用流程購(gòu)買(mǎi)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，編號(hào)，-80保存用完第二天高壓滅菌標(biāo)準(zhǔn)菌株性能驗(yàn)證復(fù)蘇接種合適的培養(yǎng)基，孵育出菌落挑取典型的菌落到合適的穩(wěn)定劑中，編號(hào)，-80保存，準(zhǔn)備n支標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株月質(zhì)控周質(zhì)控日質(zhì)控每月取出一支標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳種合適的培養(yǎng)基，適宜條件孵育出菌落每周取出一支標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳種合適的培

6、養(yǎng)基，適宜條件孵育出菌落傳代培養(yǎng)物每周取出一支標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳種合適的培養(yǎng)基，適宜條件孵育出菌落儲(chǔ)備菌株管用完第二天高壓滅菌直接作為工作菌株使用，第二天高壓滅菌傳代培養(yǎng)物可以作為第一天的工作菌株使用。4保存。以后6天用。也可以用最后一天的的工作菌株作為傳代培養(yǎng)物繼續(xù)使用一周。以后的6天每天都用傳代培養(yǎng)物傳一個(gè)新的菌株，作為工作菌株使用。工作菌株使用后第二天高壓滅菌7天后傳代培養(yǎng)物作廢，進(jìn)行高壓滅菌重新取一直標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株傳種，進(jìn)入下一輪周期，程序如上面幾個(gè)步驟購(gòu)買(mǎi)的標(biāo)準(zhǔn)菌株（可追溯來(lái)源，衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)菌株可作為質(zhì)控菌株使用，按照標(biāo)準(zhǔn)菌株管理） 0代 接種傳代培養(yǎng)一次，并進(jìn)行純度和生化鑒定 1代作為

7、“儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)菌株”進(jìn)行多個(gè)分裝保存，按照特定條件儲(chǔ)存和推薦的儲(chǔ)存時(shí)間每天傳代平板作為第二天的工作標(biāo)準(zhǔn)菌株，進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，用完立刻高壓處理2代進(jìn)行純度檢查和生化鑒定。作為傳代物或者第一支“工作菌株”特定的儲(chǔ)存條件和推薦儲(chǔ)存時(shí)間可以再重復(fù)一周，規(guī)則同上。但一般來(lái)說(shuō)工作菌株不能超過(guò)3代室內(nèi)質(zhì)控7 質(zhì)量控制7.1 觀察菌落的典型形態(tài)是否符合菌種。有沒(méi)有雜菌生長(zhǎng)。7.2用氧化酶、觸酶、上機(jī)等生化試驗(yàn)，鑒定菌種有沒(méi)有變化。7.3如果有污染或懷疑有問(wèn)題時(shí)，應(yīng)準(zhǔn)備新的首次傳代物或者獲取新的標(biāo)準(zhǔn)菌株。8 參考文獻(xiàn)序號(hào)唯一性編號(hào)文獻(xiàn)名稱(chēng)9.1ISBN978-7-117-19862-2/R19863全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第四版9.2ISBN978-7-5478-1226-6/R