L苯丙氨酸質量標準和檢驗規(guī)程

1、目 的：規(guī)范檢驗操作，確保檢驗結果的準確可靠。適用范圍：適用于L-苯丙氨酸的檢驗。責 任 者：化驗員。名 稱：L-苯丙氨酸（L-Phenylalanine）化學名：L-氨基-苯丙酸（L-Amino-phenylpropionic Acid）結構式：分子式：C9H11NO2 分子量：165.19 CAS: 63-91-2一、中國藥典2005年版（CP2005）本品為L-氨基-苯丙酸。按干燥品計算，含C9H11NO2不得少于98.5%。在熱水中易溶，在水中略溶，在乙醇中不溶；在稀酸或氫氧化鈉試液中易溶。檢驗操作規(guī)程：1.性狀：本品為白色結晶或結晶性粉末；無臭，味微苦。1.1取本品適量于白色干凈紙上

2、觀察，可輕聞其味道。 2.比旋度：本品比旋度范圍為33.0°至35.0°2.1樣品溶液：取本品1g，精密稱定至0.0001g，加水溶解并稀釋成50ml的溶液（每1ml中約含20mg的溶液）。樣品溶解一定要完全，可用超聲機助溶，溶解完溶液需澄清。2.2空白溶劑：取溶解樣品用超純水適量。2.3測定：用讀數(shù)至0.001°并經過檢定的旋光計檢測。將測定管用空白溶劑沖洗數(shù)次，緩緩注入空白溶劑適量（注意勿使發(fā)生氣泡，測定管兩端的玻璃鏡片要擦拭干凈），置于旋光計內校正讀數(shù)，即空白溶劑的旋光度要為0。校正完畢以后用相同的方法檢測樣品溶液并記錄下來，用同法讀取旋光度3次，取3次的平

3、均數(shù)。2.4計算： 比旋度V×L× m× （1W）式中：V稀釋倍數(shù)；所測旋光度的均值；L測定用管的長度（dm） m稱樣量；W樣品的干燥失重量2.5以上溶液及測定的過程一定要調節(jié)溫度至20±0.53.鑒別：本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜(光譜集983圖)一致。4.酸度：本品的pH值應為5.46.0。4.1pH計校正用標準緩沖液的配置。鄰苯二甲酸氫鉀標準緩沖液（pH4.0）：精密稱取在115±5干燥23小時的鄰苯二甲酸氫鉀KHC8H4O410.21g，加水使溶解并稀釋至1000ml。 磷酸鹽標準緩沖液（pH6.8）：精密稱取在115±

4、5干燥23小時的無水磷酸氫二鈉3.55g與磷酸二氫鉀3.40g，加水使溶解并稀釋至1000ml。4.1.3硼砂標準緩沖液（pH9.2）：精密稱取硼砂Na2B4O7·10H2O3.81g（注意：避免風化），加水使溶解并稀釋至1000ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免與空氣中二氧化碳接觸。4.2pH計的校正：取鄰苯二甲酸氫鉀標準緩沖液對儀器進行校正，使儀器示值與表列數(shù)值一致。溫度鄰苯二甲酸氫鉀標準緩沖液磷酸鹽標準緩沖液（pH6.8）硼砂標準緩沖液04.016.989.6454.006.959.40104.006.929.33154.006.909.28204.006.889.23254.

5、016.869.18304.026.859.14354.026.849.10404.046.849.07454.056.839.04504.066.839.01554.086.838.99604.096.848.96儀器校正后，再用磷酸鹽標準緩沖液核對儀器示值，誤差應不大于±0.02pH單位。若大于此偏差，則應小心調節(jié)斜率，使示值與磷酸鹽標準緩沖液的表列數(shù)值相符。重復上述定位與斜率調節(jié)操作，至儀器示值與標準緩沖液的規(guī)定數(shù)值相差不大于0.02pH單位，否則，須檢查儀器或更換電極后再行校正至符合要求。4.3樣品的測定：樣品液的配制：取本品0.20g，加水20ml完全溶解后，待測。測定法：

6、將已校正好的pH計電極帽輕輕取下，用純化水充分洗滌電極，然后用濾紙將水吸盡，將電極放入所測樣品溶液中，輕輕攪動10s后讓它靜止并觀察讀數(shù)的變化，待穩(wěn)定后即可記錄數(shù)據(jù)。5.透光率：在430nm的波長處測定透光率，不得低于98.0%。5.1配套吸收池的校正：將儀器調至波長430nm，開機預熱約30分鐘。用純化水潤洗吸收池35次后，裝入純化水約4/5后用擦鏡紙將吸收池兩邊的光滑面擦拭干凈，在“A”狀態(tài)下調“0”，在“T”狀態(tài)下調“100%”將另一吸收池也用純化水潤洗吸收池35次后，裝入溶劑約4/5后同樣用擦鏡紙將吸收池兩邊的光滑面擦拭干凈，在相同波長測定透光率，透光率應在99.8%100.2%之間，

7、如不在此范圍，須把吸收池用洗液浸泡5分鐘后，用水洗凈，重復以上操作符合規(guī)定后，方可進行下一步檢測。5.2樣品液的配置：取本品0.50g，加純化水25ml完全溶解后，待測。5.3樣品的測定：將儀器調至所需狀態(tài)下即“T”（測透光率）。用溶解好的樣品液潤洗第二個吸收池35次后，裝入溶劑約4/5后用擦鏡紙將吸收池兩邊的光滑面擦拭干凈然后放入槽中進行檢測，每檢測一批樣須驗證儀器是否處于正常狀態(tài)，最后讀取數(shù)據(jù)。6.干燥失重：減失重量不得過0.2%6.1扁型稱量瓶的恒重：取扁型稱量瓶，在105干燥1小時，取出置干燥器冷卻至室溫（約30分鐘），精密稱重后，再置105干燥1小時，取出置干燥器冷卻至室溫（約30分

8、鐘），精密稱重，直至連續(xù)兩次干燥后稱重的差異在0.3mg以下，方可進行以下步驟。6.2檢測法：取供試品，混合均勻。分取約1g，置于105下干燥至恒重的扁形稱瓶中（供試品干燥時，應平鋪在扁形稱瓶中，厚度不可超過5mm）精密稱定。放入烘箱進行干燥時，應將瓶蓋半開進行干燥，3個小時后取出。取出時，須將稱瓶蓋好。置烘箱內干燥的供試品，應在干燥后取出置干燥器放冷至室溫（約30分鐘），然后稱定重量。稱定扁形稱量瓶和供試品以及干燥后的恒重，均應準確至0.1mg位。6.3計算： 干燥失重%W1W2×100%W1W0式中：W0空瓶重(g); W1供試品+瓶重(g); W2干燥后供試品+瓶重(g)7.

9、熾灼殘渣：遺留殘渣不得過0.1%7.1坩堝的恒重：將坩堝在600熾灼3小時，取出置干燥器冷卻至室溫（約60分鐘），精密稱重后，再置600熾灼2小時，取出置干燥器冷卻至室溫（約60分鐘），精密稱重，直至連續(xù)兩次干燥后稱重的差異在0.3mg以下，方可進行以下步驟。7.2樣品的測定：取供試品2.0g，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，在電爐上緩緩熾灼至完全炭化，放冷至室溫；加硫酸0.51ml使?jié)駶?，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，再放入600的高溫爐中熾灼使完全灰化，3個小時后關閉高溫爐待爐溫降至300左右再移置干燥器內，放冷至室溫，精密稱定后，再在600熾灼至恒重，即得。7.3計算： 熾灼殘渣%W2W0

10、×100%W1W0式中：W0空坩堝重(g); W1供試品+坩堝重(g); W2熾灼后供試品+坩堝重(g)8.重金屬：含重金屬不得過百萬分之十。8.1試劑的配制：標準鉛溶液的制備：稱取在105干燥至恒重硝酸鉛0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸 5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當于10g的Pb）。配制與貯存用的玻璃容器均不得含鉛。氨試液：取濃氨溶液400ml，加水使成1000ml，即得醋酸鹽緩沖液：取醋酸銨25g，加水25ml溶解后，加7mol/L鹽酸溶液38ml

11、，用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準確調節(jié)pH值至3.5，用水稀釋到100ml，即得。硫代乙酰胺試液：取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保存。臨用前取混合液（由1mol/L氫氧化鈉溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml組成5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加熱20秒，冷卻，立即使用。8.2檢測法：取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，加鹽酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液（PH3.5）2ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加水稀釋成25ml；另取配制供試品溶液

12、的試劑，置瓷皿中用同法蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（PH3.5）2ml與水15ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加標準鉛溶液2.0ml，再用水稀釋成25ml；再在兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，供試品管中顯出的顏色與對照品管比較，不得更深。9.砷鹽：含砷鹽不得過百萬分之一。9.1試劑的配制：標準砷溶液：精密稱取在105干燥至恒重的三氧化二砷 0.132g，置 1000ml量瓶中，加 20%氫氧化鈉溶液5ml溶解后，用適量的稀硫酸中和，再加稀硫酸 10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液 10ml，置 1000ml量瓶中，加稀

13、硫酸 10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每 lml相當于1ug 的As）。碘化鉀試液：取碘化鉀16.5g，加水使溶解成100ml，即得。（本液應臨用新制）酸性氯化亞錫試液：取氯化亞錫20g，加鹽酸使溶解成50ml，濾過，即得。（本液配成后3個月即不適用）乙醇制溴化汞試液：取溴化汞2.5g，加乙醇50ml，微熱溶解，即得。（本液應置玻璃塞瓶內，在暗處保存）溴化汞試紙：取質地較疏松的中速定量濾紙條浸入乙醇制溴化汞試液中，1小時后取出，在暗處干燥，即得。（本試紙應置棕色磨口塞玻璃瓶中保存）醋酸鉛試液：取醋酸鉛10g，加新沸過的冷水溶解后，滴加醋酸使溶液澄清，再加新沸過的冷水使成100ml，即得。

14、醋酸鉛棉花：取脫脂棉花，浸入醋酸鉛試液與水等容混合液中，濕透后，瀝去過多的溶液，并使之疏松，在100以下干燥后，置棕色磨口塞玻璃瓶中保存。9.2檢測法。標準砷斑制備。取醋酸鉛棉花（60100mg）撕成疏松狀，每次少量，用細玻璃棒均勻地裝入導氣管中，裝管高度為6080mm。于旋塞的頂端平面上放一片溴化汞試紙（試紙大小以能覆蓋孔徑而不露出平面外為宜），蓋上旋塞蓋并旋緊。精密量取標準砷溶液2ml，置測砷儀三角瓶中，加鹽酸5ml與水 21ml，再加碘化鉀試液 5ml與酸性氯化亞錫試液 5滴，在室溫放置 10分鐘后，加鋅粒2g，立即將照上法裝妥的導氣管密塞于 三角瓶上，并置2540水浴中，反應45分鐘，

15、取出溴化汞試紙，即得。9.2.2樣品檢測取樣品2g，置測砷儀三角瓶中，照標準砷斑的制備，自“加鹽酸5ml與水 21ml”起，依法操作。將生成的砷斑與標準砷斑比較，不得更深。10.鐵鹽：含鐵量不得過百萬分之十。10.1試劑的配制：稀鹽酸（9.5%10.5%）：取鹽酸234ml，緩緩加入適量水中，邊加邊攪拌，冷卻后，加水稀釋至1000ml，搖勻，即得。硫氰酸銨試液（30%）：取硫氰酸銨30g，加水使溶解成100ml，搖勻，即得。標準鐵貯備液（100g的Fe/ml）：取硫酸鐵銨0.863g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解后，加硫酸2.5ml，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。10.2樣品的檢測：稱取

16、1g樣品于小燒杯中，加水5ml，加稀鹽酸4ml使樣品溶解，加過硫酸銨0.05g，轉移至納氏比色管中，加水至35ml。最后加硫氰酸銨試液3ml，用水稀釋至50ml，搖勻，即得樣品管。精密量取0.1ml的標準鐵貯備液于納氏比色管中，加25ml水，加稀鹽酸4ml，過硫酸銨0.05g，再加硫氰酸銨試液3ml，用水稀釋至50ml，搖勻，即得標準管。在白紙上比較兩管顏色，樣品管顏色應該淺于標準管顏色。其中兩管的操作應同時進行。11.硫酸鹽：含硫酸根量不得過萬分之二。11.1試劑的配制：稀鹽酸（9.5%10.5%）：取鹽酸234ml，緩緩加入適量水中，邊加邊攪拌，冷卻后，加水稀釋至1000ml，搖勻，即得。

17、氯化鋇試液（25%）：取氯化鋇的細粉25g，加水使溶解成100ml，搖勻，即得。標準硫酸鉀溶液（100g的SO4/ml）：取硫酸鉀0.181g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。11.2樣品的檢測：稱取0.7g樣品于小燒杯中，加水5ml，加稀鹽酸2ml使樣品溶解，轉移至納氏比色管中，加氯化鋇試液5ml，用水稀釋至50ml，搖勻，放置10min即得樣品管。精密量取1.4ml的標準硫酸鉀溶液于納氏比色管中，加25ml水，加稀鹽酸2ml，加氯化鋇試液5ml，用水稀釋至50ml，搖勻后放置10min即得標準管。在黑色背景下比較兩管顏色，樣品管顏色應該淺于標準管顏色。其中兩管

18、的操作應同時進行。12.氯化物：含氯離子量不得過萬分之二。12.1試劑的配制：稀硝酸（9.5%10.5%）：取硝酸105ml，緩緩加入適量水中，邊加邊攪拌，冷卻后，加水稀釋至1000ml，搖勻，即得。硝酸銀試液（0.1mol/L）：取硝酸銀17.5g，加水使溶解成1000ml，搖勻，即得。標準氯化鈉貯備液（100g的Cl/ml）：取氯化鈉0.165g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。12.2樣品的檢測：稱取0.3g樣品于小燒杯中，加稀硝酸10ml試樣品溶解。加水25ml后轉移至納氏比色管中，加入硝酸銀試液1ml，用水稀釋至50ml，充分搖勻，在暗處放置5min即得

19、樣品管。精密量取標準氯化鈉貯備液0.6ml于納氏比色管中，加水25ml溶解，加稀硝酸10ml，加入硝酸銀試液1ml，用水稀釋至50ml，充分搖勻，在暗處放置5min即得標準管。在黑色背景下比較兩管顏色，樣品管顏色應該淺于標準管顏色。其中兩管的操作應同時進行。 13.含量測定：按干燥品計算，含量不得少于98.5%。13.1試劑的配制：高氯酸滴定液(0.1mol/L)：取無水冰乙酸7500ml，加入高氯酸（70%72%）85ml，搖勻，在室溫下緩緩滴加醋酐230ml，邊加邊搖，加完后再振搖均勻，放冷，加無水冰乙酸適量使成10000ml,搖勻，放置24小時，即得。然后再用已經干燥至恒重的鄰苯二甲酸氫

20、鉀標定具體濃度。結晶紫指示液：取結晶紫0.5 g，加冰乙酸100ml使溶解，搖勻，即得。13.2樣品的滴定：稱取本品約0.13g，精密稱定，放入250ml三角瓶中，加無水甲酸3ml使樣品完全溶解后，再加冰醋酸50ml，加入結晶紫指示液2滴，立即用已標定的高氯酸滴定液滴定（每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當于16.52mg的C9H11NO2），溶液顏色由紫色變至藍綠色為終點。同時另取一個空瓶進行空白試驗，即加入無水甲酸3ml，冰醋酸50ml，加入結晶紫指示液2滴后滴定至終點。記錄滴定的體積和滴定時的溫度。13.3計算： 含量%C ´（VV0）´ 0.1652

21、5;100%1 + 0.0011 ´（tt0）´ m ´（1W）式中：C高氯酸滴定液的準確濃度（mol/L）；V樣品滴定時消耗的滴定液的體積； V0空白試驗中消耗的滴定液體積；t滴定時的室溫；m樣品的稱樣量；t0標定滴定液時的室溫； W樣品的干燥失重量14.銨鹽 取本品0.10g，依法檢查(附錄 K)，與標準氯化銨溶液2.0ml制成的對照液比較，不得更深(0.02%)。15.其他氨基酸 取本品，精密稱定，加水制成每1ml中含6mg的溶液，照薄層色譜法(附錄 B)試驗，吸取上述溶液5l，點于硅膠G薄層板上，以正丁醇-水-冰醋酸(5:2:1)為展開劑，展開，晾干，噴以

22、茚三酮的丙酮溶液(150)，在90加熱至顯色，立即檢視，應只顯一個紫色斑點。16.細菌內毒素 取本品，加入細菌內毒素檢查用水，并加熱至80使其溶解，依法檢查(附錄 E)，每1g苯丙氨酸中含內毒素的量應小于25EU（供注射用）?！绢悇e】氨基酸類藥。【貯藏】密封保存。二、美國食品化學法典第五版<Food-Chemicals-Codex V>（FCCV）【描 述】L-苯丙氨酸為無色或白色片狀結晶，或白色結晶性粉末，1g本品可溶解于35mL的水中，微溶于乙醇、稀酸以及堿性氫氧化物溶液中。在283°左右時熔解，1:100的水溶液其pH為5.46.0。功能 營養(yǎng)物【要 求】鑒別 在相

23、同波長下，按照相同的測試條件，樣品的紅外吸收譜圖應與標準色譜圖一致。含量 折干計算，應不小于98.5%且不大于101.5%鉛 不大于5 mg/kg干燥失重 不大于0.2%比旋度 D20°：33.2°35.2°（折干計算）；或者D25°：32.7° 34.7（折干計算）灼燒殘渣 不大于0.1%【檢 驗】含量 1.試劑的配制：1.1高氯酸滴定液(0.1mol/L)：取無水冰乙酸7500ml，加入高氯酸（70%72%）85ml，搖勻，在室溫下緩緩滴加醋酐230ml，邊加邊搖，加完后再振搖均勻，放冷，加無水冰乙酸適量使成10000ml,搖勻，放置24小

24、時，即得。然后再用已經干燥至恒重的鄰苯二甲酸氫鉀標定具體濃度。1.2結晶紫指示液：取結晶紫0.5 g，加冰乙酸100ml使溶解，搖勻，即得。2.樣品的滴定：稱取本品約0.3g，精密稱定，放入250ml三角瓶中，加無水甲酸3ml使樣品完全溶解后，再加冰醋酸50ml，加入結晶紫指示液2滴，立即用已標定的高氯酸滴定液滴定（每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當于16.52mg的C9H11NO2），溶液顏色由紫色變至藍綠色為終點。同時另取一個空瓶進行空白試驗，即加入無水甲酸3ml，冰醋酸50ml，加入結晶紫指示液2滴后滴定至終點。記錄滴定的體積和滴定時的溫度。3.計算： 含量%C ´（

25、VV0）´ 0.1652×100%1 + 0.0011 ´（tt0）´ m ´（1W）式中：C高氯酸滴定液的準確濃度（mol/L）； V樣品滴定時消耗的滴定液的體積; V0空白試驗中消耗的滴定液體積；t滴定時的室溫；m樣品的稱樣量；t0標定滴定液時的室溫；W樣品的干燥失重量鉛 依據(jù)鉛限度檢測方法，附錄IIIB，樣品溶液的制備參考有機化合物的方法，標準鉛（Pb）離子溶液控制在5ug之下。干燥失重 依據(jù)干燥失重的檢測方法，附錄IIC，將樣品放置105°烘干3小時。1.扁型稱量瓶的恒重：取扁型稱量瓶，在105干燥1小時，取出置干燥器冷卻至室

26、溫（約30分鐘），精密稱重后，再置105干燥1小時，取出置干燥器冷卻至室溫（約30分鐘），精密稱重，直至連續(xù)兩次干燥后稱重的差異在0.3mg以下，方可進行以下步驟。2.檢測法：取供試品，混合均勻。分取約1g，置于105下干燥至恒重的扁形稱瓶中（供試品干燥時，應平鋪在扁形稱瓶中，厚度不可超過5mm）精密稱定。放入烘箱進行干燥時，應將瓶蓋半開進行干燥，3個小時后取出。取出時，須將稱瓶蓋好。置烘箱內干燥的供試品，應在干燥后取出置干燥器放冷至室溫（約30分鐘），然后稱定重量。稱定扁形稱量瓶和供試品以及干燥后的恒重，均應準確至0.1mg位。3.計算： 干燥失重%W1W2×100%W1W0式中：

27、W0空瓶重(g); W1供試品+瓶重(g); W2干燥后供試品+瓶重(g)比旋度 依據(jù)比旋度的檢測方法，附錄IIB，將2 g的干燥樣品充分溶解，制成100mL的溶液，依法檢測。1.樣品溶液：取本品1g，精密稱定至0.0001g，加水溶解并稀釋成50ml的溶液（每1ml中約含20mg的溶液）。樣品溶解一定要完全，可用超聲機助溶，溶解完溶液需澄清。2.空白溶劑：取溶解樣品用超純水適量。3.測定：用讀數(shù)至0.001°并經過檢定的旋光計檢測。將測定管用空白溶劑沖洗數(shù)次，緩緩注入空白溶劑適量（注意勿使發(fā)生氣泡，測定管兩端的玻璃鏡片要擦拭干凈），置于旋光計內校正讀數(shù)，即空白溶劑的旋光度要為0。校

28、正完畢以后用相同的方法檢測樣品溶液并記錄下來，用同法讀取旋光度3次，取3次的平均數(shù)。4.計算： 比旋度V×L× m× （1W）式中：V稀釋倍數(shù)；所測旋光度的均值；L測定用管的長度（dm） m稱樣量；W樣品的干燥失重量5.以上溶液及測定的過程一定要調節(jié)溫度至20±0.5灼燒殘渣 依據(jù)灼燒殘渣的檢測方法，附錄IIC，灼燒1g的樣品。1.坩堝的恒重：將坩堝在600熾灼3小時，取出置干燥器冷卻至室溫（約60分鐘），精密稱重后，再置600熾灼2小時，取出置干燥器冷卻至室溫（約60分鐘），精密稱重，直至連續(xù)兩次干燥后稱重的差異在0.3mg以下，方可進行以下步驟。2.

29、樣品的測定：取供試品2.0g，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，在電爐上緩緩熾灼至完全炭化，放冷至室溫；加硫酸0.51ml使?jié)駶?，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，再放入600的高溫爐中熾灼使完全灰化，3個小時后關閉高溫爐待爐溫降至300左右再移置干燥器內，放冷至室溫，精密稱定后，再在600熾灼至恒重，即得。3.計算： 熾灼殘渣%W2W0×100%W1W0式中：W0空坩堝重(g)； W1供試品+坩堝重(g)； W2熾灼后供試品+坩堝重(g)包裝和存儲 密閉容器中避光保存。*備注：附錄部分可以參考CP2005相對應的詳細附錄三、美國食品化學法典第四版<Food-Chemicals-Cod

30、ex IV>（FCCIV）【描 述】L-苯丙氨酸為無色或白色片狀結晶，或白色結晶性粉末，1g本品可溶解于35mL的水中，微溶于乙醇、稀酸以及堿性氫氧化物溶液中。在283°左右時溶解，1:100的水溶液其pH為5.46.0。食品中的功能 營養(yǎng)物，食品添加物【要 求】鑒別 A、取0.1%試樣液5mL, 加水合茚三酮試液1mL，加熱，呈現(xiàn)紅紫色。 B、取1%試樣液5mL, 加幾滴重鉻酸鉀指示液，有特殊氣味產生。 C、取10mg樣品，加上500mg的硝酸鉀，以及2mL的硫酸，水浴中加熱混合物10分鐘，然后加入10ml的1N氫氧化鈉溶液，呈現(xiàn)紅紫色。含量 折干計算，應不小于98.5%且不

31、大于101.5%重金屬（以Pb計） 不大于0.002%鉛 不大于10 mg/kg干燥失重 不大于0.2%灼燒殘渣 不大于0.1%比旋度 D20°：33.2°35.2°（折干計算）；或者D25°：32.7° 34.7°（折干計算）【檢 驗】含量 準確稱取大約300mg的樣品，溶解于3mL的甲酸和50mL的乙酸中，加入2滴的結晶紫指示劑，用0.1N的高氯酸滴定至青綠色終點。(注意 應在通風櫥中操作使用高氯酸，)需滴定空白液（詳見總則），并做校正修訂。每1ml的0.1N的高氯酸相當于16.52 mg 的C9H11NO2。1.試劑的配制：1.

32、1高氯酸滴定液(0.1mol/L)：取無水冰乙酸7500ml，加入高氯酸（70%72%）85ml，搖勻，在室溫下緩緩滴加醋酐230ml，邊加邊搖，加完后再振搖均勻，放冷，加無水冰乙酸適量使成10000ml,搖勻，放置24小時，即得。然后再用已經干燥至恒重的鄰苯二甲酸氫鉀標定具體濃度。1.2結晶紫指示液：取結晶紫0.5 g，加冰乙酸100ml使溶解，搖勻，即得。2.樣品的滴定：稱取本品約0.3g，精密稱定，放入250ml三角瓶中，加無水甲酸3ml使樣品完全溶解后，再加冰醋酸50ml，加入結晶紫指示液2滴，立即用已標定的高氯酸滴定液滴定（每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當于16.52mg

33、的C9H11NO2），溶液顏色由紫色變至藍綠色為終點。同時另取一個空瓶進行空白試驗，即加入無水甲酸3ml，冰醋酸50ml，加入結晶紫指示液2滴后滴定至終點。記錄滴定的體積和滴定時的溫度。3.計算： 含量%C ´（VV0）´ 0.1652×100%1 + 0.0011 ´（tt0）´ m ´（1W）式中：C高氯酸滴定液的準確濃度（mol/L）； V樣品滴定時消耗的滴定液的體積; V0空白試驗中消耗的滴定液體積；t滴定時的室溫；m樣品的稱樣量；t0標定滴定液時的室溫；W樣品的干燥失重量重金屬 準確稱取1g樣品，按照重金屬檢測方法二，附錄I

34、IIB，標準鉛（Pb）離子溶液控制在20ug。1.試劑的配制：1.1標準鉛溶液的制備：稱取在105干燥至恒重硝酸鉛0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸 5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當于10g的Pb）。配制與貯存用的玻璃容器均不得含鉛。1.2氨試液：取濃氨溶液400ml，加水使成1000ml，即得1.3醋酸鹽緩沖液：取醋酸銨25g，加水25ml溶解后，加7mol/L鹽酸溶液38ml，用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準確調節(jié)pH值至3.5，用水稀釋到100ml，

35、即得。1.4硫代乙酰胺試液：取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保存。臨用前取混合液（由1mol/L氫氧化鈉溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml組成5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加熱20秒，冷卻，立即使用。2.檢測法：取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，加鹽酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液（PH3.5）2ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加水稀釋成25ml；另取配制供試品溶液的試劑，置瓷皿中用同法蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（PH3.5）2ml與水15ml，微熱溶解

36、后，移置納氏比色管中，加標準鉛溶液2.0ml，再用水稀釋成25ml；再在兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，供試品管中顯出的顏色與對照品管比較，不得更深。鉛 依據(jù)鉛限度檢測方法，附錄IIIB，樣品溶液的制備參考有機化合物的方法，標準鉛（Pb）離子溶液控制在10ug。干燥失重 依據(jù)干燥失重的檢測方法，附錄IIC，將樣品放置105°烘干3小時。1.扁型稱量瓶的恒重：取扁型稱量瓶，在105干燥1小時，取出置干燥器冷卻至室溫（約30分鐘），精密稱重后，再置105干燥1小時，取出置干燥器冷卻至室溫（約30分鐘），精密稱重，直至連續(xù)兩次干燥后稱重的差異

37、在0.3mg以下，方可進行以下步驟。2.檢測法：取供試品，混合均勻。分取約1g，置于105下干燥至恒重的扁形稱瓶中（供試品干燥時，應平鋪在扁形稱瓶中，厚度不可超過5mm）精密稱定。放入烘箱進行干燥時，應將瓶蓋半開進行干燥，3個小時后取出。取出時，須將稱瓶蓋好。置烘箱內干燥的供試品，應在干燥后取出置干燥器放冷至室溫（約30分鐘），然后稱定重量。稱定扁形稱量瓶和供試品以及干燥后的恒重，均應準確至0.1mg位。3.計算： 干燥失重%W1W2×100%W1W0式中：W0空瓶重(g)；W1供試品+瓶重(g)； W2干燥后供試品+瓶重(g)比旋度 依據(jù)比旋度的檢測方法，附錄IIB，將2 g的干燥

38、樣品充分溶解，制成100mL的溶液，依法檢測。1.樣品溶液：取本品1g，精密稱定至0.0001g，加水溶解并稀釋成50ml的溶液（每1ml中約含20mg的溶液）。樣品溶解一定要完全，可用超聲機助溶，溶解完溶液需澄清。2.空白溶劑：取溶解樣品用超純水適量。3.測定：用讀數(shù)至0.001°并經過檢定的旋光計檢測。將測定管用空白溶劑沖洗數(shù)次，緩緩注入空白溶劑適量（注意勿使發(fā)生氣泡，測定管兩端的玻璃鏡片要擦拭干凈），置于旋光計內校正讀數(shù)，即空白溶劑的旋光度要為0。校正完畢以后用相同的方法檢測樣品溶液并記錄下來，用同法讀取旋光度3次，取3次的平均數(shù)。4.計算： 比旋度V×L×

39、 m× （1W）式中：V稀釋倍數(shù)；所測旋光度的均值；L測定用管的長度（dm） m稱樣量； W樣品的干燥失重量5.以上溶液及測定的過程一定要調節(jié)溫度至20±0.5灼燒殘渣 依據(jù)灼燒殘渣的檢測方法，附錄IIC，灼燒1g的樣品。1.坩堝的恒重：將坩堝在600熾灼3小時，取出置干燥器冷卻至室溫（約60分鐘），精密稱重后，再置600熾灼2小時，取出置干燥器冷卻至室溫（約60分鐘），精密稱重，直至連續(xù)兩次干燥后稱重的差異在0.3mg以下，方可進行以下步驟。2.樣品的測定：取供試品2.0g，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，在電爐上緩緩熾灼至完全炭化，放冷至室溫；加硫酸0.51ml使?jié)駶?/p>

40、，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，再放入600的高溫爐中熾灼使完全灰化，3個小時后關閉高溫爐待爐溫降至300左右再移置干燥器內，放冷至室溫，精密稱定后，再在600熾灼至恒重，即得。3.計算： 熾灼殘渣%W2W0×100%W1W0式中：W0空坩堝重(g); W1供試品+坩堝重(g); W2熾灼后供試品+坩堝重(g)包裝和存儲 密閉容器中避光保存。*備注：附錄部分可以參考CP2005相對應的詳細附錄四、美國藥典第29版（USP29）含量：98.5%101.5%（C9H11NO2即L-苯丙氨酸，成品按干品計）包裝與儲存：放置在密封容器內USP對照標準品（11）：USPL-苯丙氨酸對照標準品L-酪

41、氨酸對照標準品。鑒別：紅外吸收（197K）比旋度（781S）：-32.7°-34.7°樣品溶液：20mg/ml(溶于水)PH（791）：5.46.0，按1：100溶解干燥失重（731）：于105干燥3小時，0.3%熾灼殘渣（281）：0.4%氯化物（221）：0.73g樣品所含的氯化物不能超過相當于0.50ml的0.02mol/L的鹽酸量，0.05%硫酸鹽：0.33g樣品所含的硫酸鹽不能超過0.10ml的0.02mol/L硫酸量，0.03%鐵鹽（241）：0.003%重金屬，方法（231）：0.0015%色譜純度吸附劑0.25mm厚的層析硅膠G混合物。稀釋液配制冰乙酸水溶液

42、（50：50）樣品溶液精確稱量L-苯丙氨酸用稀釋液溶解成10mg/ml，吸取5ul.標準品溶液精確稱量USP L-苯丙氨酸對照標準品用稀釋液溶解成0.05mg/ml,吸取5ul（備注：該標準品溶液的濃度相當于0.5%的樣品溶液。）相應系統(tǒng)溶液用稀釋液配制0.4mg/ml的USP L-苯丙氨酸對照標準品溶液和0.4mg/ml的USP L-酪氨酸對照標準品溶液，各吸取5ul 。噴霧顯色劑0.2g茚三酮溶于100ml正丁醇乙酸溶液中（按95：5配制）。顯影溶劑正丁醇，冰乙酸和水按60：20：20混合。操作過程：直接按照色譜法下的薄層色譜法操作。硅膠板在空氣中自然晾干，噴以噴霧顯色劑，在100105下

43、加熱15min，后在白光下觀察結果。系統(tǒng)適應性溶液得到的圖譜是兩個清晰獨立的點。由樣品溶液得到的圖譜中的任何第二個點都不得大于或更深于有標準溶液得到的圖譜中的第一個點：任何單個雜質0.5%，雜質的總和2.0%有機的揮發(fā)性雜質：符合方法（467）要求。殘留溶劑：符合方法（467）要求。含量：精確稱量160mg苯丙氨酸到125ml三角瓶，加入3ml的蟻酸和50ml的冰乙酸混合液溶解，用0.1N的高氯酸滴定，通過電位滴定法判斷終點，需做空白實驗和必要的校正。每1ml的0.1N高氯酸相當于16.52mg的C9H11NO2。*備注：附錄部分可以參考CP2005相對應的詳細附錄五、企業(yè)標準（食品）本標準所

44、采用的試劑和水，在沒有其他特殊要求時，均使用符合GB/T603-2002和GB/T6682-1992規(guī)定的分析純試劑和蒸餾水或相當純度的水。5.1感官指標取本品少許，放于無色燒杯中，在良好的自然光線下，用肉眼觀察其色澤、形態(tài)，并用鼻嗅、口嘗方法，品其滋、氣味。5.2理化指標鑒別.1試劑.1.1 水合茚三酮試液: 取水合茚三酮 (C9H4O3 H2O)200mg溶于水, 定容至100mL；.1.2 硝酸鉀；.1.3 硫酸；.1.4 溴酚藍試液: 取溴酚藍100mg, 溶于100mL50%的乙醇中, 必要時過濾；.1.5 氫氧化鉀乙醇液: 35g氫氧化鉀溶于20mL水, 加無醛乙醇試液至1000m

45、L, 然后進行標定；(0.5mol/L).1.6 鹽酸羥氨試液: 取鹽酸羥氨3.5g, 溶于95mL60%的乙醇, 加0.1%溴酚藍試液0.5mL及0.5mol/L氫氧化鉀乙醇液, 至出現(xiàn)淡綠色為止. 再用60%乙醇定容至100mL；.1.7 氫氧化鈉試液: 取氫氧化鈉4.3g, 溶于水, 定容至100mL.(本試液約為1mol/L)。.2儀器和設備.2.1 1mL刻度的具玻塞量筒：100mL；.2.2 恒溫水浴；.2.3 分析天平；.2.4 標定后的刻度滴定管（精確度0.01mL）。.3分析步驟.3.1氨基試驗取1%試樣液5mL, 加水合茚三酮試液1mL, 共熱,陽性結果是紅紫色。.3.2羧

46、基試驗取試樣10mg, 加硝酸鉀500mg和硫酸2mL, 在水浴上加熱20min, 冷卻后，加鹽酸羥氨試液2mL, 浸入冰水中10min后加氫氧化鈉試液10mL, 陽性結果是紅紫色。5.2.2 L-苯丙氨酸含量.1試劑和溶液.1.1 無水甲酸；.1.2 冰醋酸；.1.3 高氯酸標準滴定液： C (HClO4)=0.1000mol/L；.1.4 結晶紫指示液：5g/L。.2 儀器和設備.2.1 燒杯：150mL；.2.2 微量滴定管：10mL。.3 分析步驟準確稱取0.3000g本產品，放到一個150mL燒杯中，加入3mL無水甲酸，溶解后，再加50mL冰醋酸。加結晶紫指示液，立即用0.1 mol

47、/L高氯酸標準滴定液滴定到藍綠色終點，同時進行一個空白對照，做一個必要的校準。每毫升0.1 mol/L高氯酸相當于L-苯丙氨酸（C9H11NO2）16.52mg。.4分析結果的表述L-苯丙氨酸含量（以C9H11NO2計）的質量百分數(shù)X1按式（1）式計算：X1 =C(V1V2) ×0.1652×100(1)m式中：C高氯酸標準滴定溶液的濃度，單位為摩爾每升（mol/L）；V1樣品滴定中高氯酸標準滴定溶液的消耗體積，單位為毫升（mL）；V2空白試驗中高氯酸標準滴定溶液的消耗體積，單位為毫升（mL）；0.1652與1.00mL高氯酸標準滴定溶液C (HClO4)=0.1000mo

48、l/L 相當?shù)囊詆表示的本產品的質量；m本產品試樣的質量，單位為克（g）。.5校正若滴定試樣與標定高氯酸標準液時，室溫差別超過10時，則應重新標定；若未超過10時，則可根據(jù)式（2）將高氯酸標準液的濃度C1加以校正。C2=C1(2)1+0.0011 (t2 - t1)式中：1+0.0011冰乙酸的膨脹系數(shù)；t2標定高氯酸時的室溫，單位為攝氏度（）；t1滴定試樣時的室溫，單位為攝氏度（）；C1t2時高氯酸標準液的濃度，單位為摩爾每升（mol/L）。5.2.3水分按GB/T5009.3-2003中規(guī)定第二法測定。5.2.4比旋光度D20將1.000g樣品溶在水中，定容體積為100mL，用旋光儀在30

49、min內檢測樣品溶液。計算方法：xt 100a/lpd100a/lC （3）式中：a直接觀察的旋光度，單位為度；t溫度；x使用的光的波長；l旋光計管的長度，單位為分米；d液體或固體溶液在此溫度下的比重；p100g溶液中溶質的含量；C100mL溶液中溶質的濃度。注： P和C在干燥或無水基礎上被計算。5.2.5灰分的測定按GB/T5009.4-2003中規(guī)定的方法測定。5.2.6重金屬按GB/T5009.74-2003中規(guī)定的方法進行測定.5.2.7砷按GB/T5009.76-2003中規(guī)定的方法進行測定.5.2.8鉛按GB/5009.75-2003中規(guī)定的方法進行測定.六、企業(yè)標準（化工原料）本品為L-氨基-苯丙酸。按干燥品計算，含C9H11NO2不得少于98.5%且不大于101.5%。【性狀】