HPLC測定不同產(chǎn)地黃芩中黃酮化合物的含量

1、第31卷第7期2006年4月April,2006ChinaJournalofChineseMateriaMedica中國中藥雜志Vol131,Issue7HPLC測定不同產(chǎn)地黃芩中黃酮化合物的含量宋雙紅,張媛,王之3(陜西師范大學(xué)教育部藥用植物資源與天然藥物化學(xué)重點實驗室,陜西西安710062)黃芩為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根,具有清熱燥濕,瀉火解毒,止血安胎等作用1。黃芩中含有多種黃酮類化合物,其中含量較高的成分有黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素等。2005年版藥典一部只對黃芩中黃芩苷進(jìn)行含量測定,量上的差異,并用HPLC2、黃芩,以為有

2、效控制生藥質(zhì)量及合理利用該藥用植物資源提供參考。1儀器與試藥圖1黃芩樣品HPLC圖譜A,B1對照品;C,D1陜西商洛黃芩樣品;11黃芩苷;21黃芩素;31漢黃芩素水,其他試劑為分析純。黃芩藥材分別從陜西、甘肅、河北、吉林、山西、山東和遼寧等地采集或收集,經(jīng)陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院田先華副教授鑒定為唇形科植物黃芩S1baicalensis的干燥根。2方法與結(jié)果211色譜條件色譜柱ShimadzuC18(416mm×150mm,5m);測定黃芩中苷類流動相用甲醇2水2冰醋酸(4753012),檢測波長280nm,流速110mL,柱溫25;測定苷元類用甲醇2乙腈2014%的冰醋酸水溶液(3

3、02050),檢測波長275nm;流速min110mLmin-1-1作為對照品溶液。213供試品溶液的制備苷類供試品溶液的制備:精密稱取60干燥至恒重的黃芩樣品0130g(過40目篩),加70%乙醇40mL,加熱回流提取3h,過濾,濾液置100mL量瓶中,用少量70%乙醇分次洗滌量瓶和殘渣,洗液濾入同一量瓶中并定容至刻度,搖勻。精密量取1mL,置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,0122m濾膜過濾后作為苷供試品溶液。苷元類供試品溶液的制備:精密稱取上述黃芩樣品0130g,加氯仿80mL,置索式提取器中提取3h,提取液蒸干,殘渣用甲醇分次溶解,轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中并定容至刻度,搖勻,0122m

4、濾膜過濾后作為苷元供試品溶液。214線性關(guān)系考察分別精密吸取黃芩苷、黃芩,柱溫40。對照品及樣品色譜圖見圖1。212對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素對照品適量,分別加甲醇配制成0106,011,011mgmL-1的溶液,搖勻,0122m濾膜過濾后收稿日期2005205224素、漢黃芩素對照品溶液1,3,5,7,9,11L,在上述色譜條件依次進(jìn)樣,以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),計算回歸方程。黃芩苷Y=51307×106X-21192×104,r=0199997,線性范圍01180166g;黃芩素Y=51685×106X-81162×10

5、3,r=019999,線性范圍011111107X+g;漢黃芩素Y=11489×51657×104,r=0199999,線性范圍011111g。215精密度試驗取3種對照品溶液,按上述色譜598第31卷第7期2006年4月April,2006ChinaJournalofChineseMateriaMedica表2不同產(chǎn)地黃芩樣品含量(n=3)樣品編號中國中藥雜志Vol131,Issue7條件連續(xù)進(jìn)樣5次,每次5L,求得黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素峰面積積分值的RSD分別為012%,016%和017%,表明儀器的精密度良好。216重復(fù)性試驗取陜西商洛黃芩樣品,按供試品溶液的制備方

6、法分別處理成5份,依次進(jìn)樣,每次10L,測得黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素含量的RSD分別為117%,219%和318%,表明重復(fù)性較好。217穩(wěn)定性試驗取陜西商洛黃芩樣品按213項方法制備供試品溶液,分別在0,4,8,16,24,48h進(jìn)樣10L,記錄峰面積,計算黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素峰面積的RSD分別為018%,113%,210%,表明供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。218回收率試驗來源陜西商洛陜西柞水陜西合陽陜西潼關(guān)陜西岐山陜西韓城陜西澄城陜西白水陜西蒲城山東棲霞山西平順1)山西平順山西陵川山西大同河北石家莊黃芩苷/%黃芩素/%漢黃芩素/%黃芩樣品0130g,依2法處理成3份,計算平均回收率,結(jié)果

7、見表1。表1黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素加樣回收率成分黃芩苷樣品中含量/mg注:河北石家莊和山西大同為商品黃芩,山東棲霞和山西平順1)為野生品,其余均為栽培黃芩測得量回收率平均值312中國藥典2005年版規(guī)定,按干燥品計算,原注:加入量黃芩苷均為613mg,黃芩素均為0.35mg,漢黃芩素均為01095mg219樣品測定取不同產(chǎn)地的黃芩樣品,按213項方法操作,每個樣品提取3份,得各供試品溶液。進(jìn)L,測定峰面積,帶入回歸方程計算樣體積設(shè)為10含量,取3次測定結(jié)果的平均值,結(jié)果見表2。3討論311植物中常含有水解苷類的酶,在提取此類化合物時一定要使酶失活5。本研究做了索式提取和熱回流提取2種方法的比

8、較及70%乙醇、甲醇、氯仿不同溶劑對苷元類分離的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)索式提取并以氯仿為溶媒提取效率最高,以甲醇2乙腈2014%的冰醋酸水溶液(302050)作為流動相可使苷元得到良好的分離。藥材含黃芩苷不得少于910%,炮制品中不得少于810%,由上述測定結(jié)果可知,本實驗所用樣品均達(dá)到藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。但是不同商品黃芩中有效成分含量差異顯著,除地域差異外,可能與加工方法關(guān)系亦較大,所以加強(qiáng)藥材加工炮制管理對藥材質(zhì)量控制是很有必要的。實驗還發(fā)現(xiàn),栽培黃芩和野生品在有效成分含量上差異并不顯著,其中柞水和蒲城栽培黃芩中黃芩苷含量高達(dá)13%以上,因此在保護(hù)野生資源,保存黃芩種質(zhì)資源多樣性的基礎(chǔ)上,推廣人工栽培,

9、建立黃芩規(guī)范化種植基地,生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)無公害的藥材以滿足市場需要也是非常必要的。313雖然中國藥典2005年版僅以黃芩苷作為藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),但現(xiàn)代藥理學(xué)證明黃芩體內(nèi)各種成分大多以協(xié)同作用來提高機(jī)體的抗病性6,因此以多種成分為指標(biāo)并結(jié)合藥材的外觀性狀、產(chǎn)量及當(dāng)?shù)刈匀画h(huán)境條件建立藥材的質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)才更具科學(xué)性。該研究結(jié)果為進(jìn)一步了解不同產(chǎn)地黃芩有效成分含量的差異奠定一定的基礎(chǔ)。參考文獻(xiàn)1中國藥典.一部.2005.211.recognitionofmainchemicalconstituentsinRadixScutellariaeofdif2ferentresource.ChinJPharmAnal

10、,2003,1(23):34.599第31卷第7期2006年4月April,2006ChinaJournalofChineseMateriaMedicaChromSuppl,2004,60:84.中國中藥雜志Vol131,Issue7speciesofRadixScutellariaebyRT2HPLC.ChinJPharmAnal,2002,22(2):100.flavonoidsinhairy2rootculturesofScutellariabaicalensisGeorgi.Univ,2003,8(6):10.責(zé)任編輯張寧寧秦艽人工馴化技術(shù)研究趙瑋3,漆燕玲,(甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院秦艽Ge

11、ntiana物,1藏、甘肅、。一般生長在海拔20003000;特別適宜生存在氣候冷涼、雨水較多、日照充足、土層深厚、土壤肥沃、富含腐殖質(zhì)的山坡叢中。近年來,由于藥用量日益增加,導(dǎo)致過度采挖,致使秦艽野生資源日趨減少。而秦艽育種、栽培等資源保護(hù)方面的研究則幾乎空白2。為了保護(hù)中藥種質(zhì)資源,近3年來作者開展了秦艽的人工種植技術(shù)試驗研究,現(xiàn)將人工種植試驗結(jié)果總結(jié)如下。1材料與方法111試驗地概況試驗設(shè)在甘肅省農(nóng)科院榆中園藝場,該地海拔1995m,屬溫帶干旱、半干旱大陸性氣候,年均氣溫616,年均降雨量450mm,無霜期138d,作物生長期199d。其土壤為山地黃壤土,肥力中等,前茬為玉米。試驗用赤霉

12、素采用赤霉素乳油(濃度4%)。112秦艽種子育苗不同覆蓋方式試驗采用小畦播種后經(jīng)常灑水以使畦面保持一定濕度,幼苗展葉后停止灑水,并及時鋤草加強(qiáng)田間管理,提高成活率。113秦艽種子育苗不同處理方式試驗采用小畦育苗方式,小畦大小為115m×510m,畦距50cm。試驗設(shè)秦艽種子用赤霉素(015mgg-1)浸泡24h、)浸泡24h、)浸泡24h以及秦溫水(20冷水(4艽種子不浸泡4個處理,秦艽種子不浸泡為對照,3次重復(fù),隨機(jī)區(qū)組排列,各個處理均用遮陽網(wǎng)覆蓋。播種量為2710kgkm-2,拌沙土均勻撒播,田間管理同上。114秦艽種苗不同移栽方式試驗2003年春季將準(zhǔn)備移栽的一年生秦艽苗挖出浸

13、泡于生根粉中(或用生根粉進(jìn)行蘸苗)待用。試驗設(shè)開溝移栽、起壟移栽和平地移栽3個處理。其中,開溝移栽是按1520cm的行距進(jìn)行單面翻土開溝,溝深1015cm,將秦艽苗按株距10cm排列擺放在光滑一側(cè)的溝面上,蓋土踩實;起壟移栽要求將試驗地整成30cm寬、10cm高的小壟,壟間距10cm,將秦艽苗按株距10cm進(jìn)行穴栽;而平地移栽是在平整的地面上按行距1520cm,株距10cm直接進(jìn)行穴栽。移栽后,及時灌水,以保全苗。小區(qū)面積80m2,每一處理栽植33行,不設(shè)重復(fù)。1年后對3個處理分別隨機(jī)選取10株為一組,重復(fù)5次,進(jìn)行根長和鮮重的比較。2結(jié)果與討論211不同覆蓋方式對秦艽出苗率的影響表1結(jié)育苗方式,小畦大小為115m×510m,畦距50cm。種子于2002年9月份采自甘肅會川,第2年4月份進(jìn)行試驗。種子用015mgg