HPLCRID法測定氨基葡萄糖鹽酸鹽的含量_圖文

1、海峽藥學2011年第23卷第2期2.4.2精密度試驗:取同一對照品溶液。重復進樣6次,按 “2.1色譜條件”項下進樣測定,測定得峰面積,求得磺胺甲嘌 唑RSD為0.59%.甲氧芐啶RSD為0.44%.說明本方法精密 度良好。2.4.3穩(wěn)定性試驗:對同一供試品溶液(批號:091003,每隔 2h測定1次。共測定6次。測定得峰面積.求得磺胺甲嚼唑 RSD=0.55%;甲氧芐啶RSD=0.86%,說明供試品溶液中磺 胺甲嗯唑及甲氧芐啶在10h內穩(wěn)定。2.4.4重復性試驗:取同一批樣品(批號:091003。按“2.1色譜條件”項下平行測定6份,結果磺胺甲嗯唑RSD= 0.75%;甲氧芐啶RSD=0.5

2、4%。測定方法的重復性較好。 2.4.5加樣回收率試驗:按照處方比例配制樣品,其中兩種 對照品加入量分別為標示量的80%,100%,120%,按照樣品 含量測定方法測定.分別計算回收率。結果(見表1。表1加樣回收率試驗結果(n=3l2.5樣品測定 取本品3份.按上述供試品制備法制備。分 別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20肚L,注入液相色譜 儀,按“2.1色譜條件”項下測定.記錄峰面積,以外標法計算 各組分的含量.結果(見表2。表2樣品含量測定結果標示含量%.n=3J3討論.3.1檢測波長的選擇取磺胺甲嗯唑對照品和甲氧芐啶對 照品分別進行紫外掃描.結果磺胺甲嗯唑在264nm處有最大 吸收,但

3、在此波長處甲氧芐啶幾乎沒有吸收;而在240nm波 長處2者吸光度接近,故選擇240nm作為檢測波長,以提高 測定結果的準確度。3.2流動相的選擇 曾比較不同的流動相:磷酸鹽緩沖液. 乙腈(75:25;磷酸鹽緩沖液一甲醇(75:25;水一乙腈一三乙胺 (800:200:1等。考慮到分離效果和時間等因素。選用了水. 乙腈.三乙胺(800:200:1。參考文獻【l】鐘新偉.HPLC同時測定復方磺胺甲嗯唑片的兩個主藥含量J】. 中國醫(yī)藥指南.2008.10(6:86.87.【2】萬慶.程芷。王劍.RP。HPLC法測定小兒復方磺胺甲口惡唑顆粒的 含量J.安徽醫(yī)藥.2005.9(9:668.669.【3農

4、毅滑,蔣林,莫海玲.HPLC法測定復方磺胺甲口惡唑糖漿中磺胺 甲口惡唑及甲氧芐啶的含量J】.中國現(xiàn)代藥物應用.2008.4(2:1-3.HPLCRID法測定氨基葡萄糖鹽酸鹽的含量李 俊(浙江臺州市食品藥品檢驗所臺州318000摘要:目的建立高效液相色譜.示差折光檢測法測定氨基葡萄糖鹽酸鹽的含量。方法采用高效液相色譜法,色譜柱為Bondapak c。8柱(3.9×300ram,lOp.m,流動相為0.005toolL.1庚烷磺酸鈉溶液(pH4.O.乙腈(97:3,流適:2.0mLmin,柱溫25。C。示差折光檢測器池溫度40 Co結果本法精密度高,穩(wěn)定性好,氨基葡萄糖鹽酸鹽在0.998

5、7.497mgmL-1的濃度范圓內具有良好的線性關系(r=0.9999。平均加樣 回收率為99.4%。RSD=1.2%(n=9。結論 表方法簡便。準確.重現(xiàn)性好?？勺鳛樵撍幤返暮繙y定方法。關鍵t司:HPLC;示差折光檢測器;氨基葡萄糖鹽酸鹽;含量測定中圖分類號:R927.2文獻標識碼:B文章編號:1006376512011.02,004203Determination of glucosamine hydrochloride by RIDHPLCLI Jun(Taizhou institute for food and drug control,Taizhou 318000,China作者簡

6、介:李俊,男(1979.12一。職稱:主管藥師,從事藥品檢驗及藥物分析研究工作。聯(lián)系電話:057688552715。42ABSTRAOT:OBJECTIVE An RID.HPI。C method was established tO determine the content of glucosamine hy.drochloride.METHODS Using a HPI,C method with Bondapak Cls column(3.9x 300mm,lOt.tm,the mobilephase was0.005mdL-11一heptanesulfonic acid sodium

7、 salt solution(pH 4.0aeetonitrile(97:3,the flow rate was 2.Oml。min一.acolumn temperature was 25and the cell temperature of Refractive Index Detector was 40.RESULTS Precision and stability of the method were fine.The standard curve was linear in the range of 0.9987.497mgmI。1(r=0.9999,and the average r

8、ecovery was 99.4%with RSD of 1.2%.CONCLUSION The method was simple,accurate and reproducible,and can be used for the method of determination.KEY WORDS:HPLC;Refractive Index Detector;91ucosamiae hydrochloride;determination基質中合成蛋白聚糖所必需的重要成分,參與構造人體組織和細胞膜,是蛋白多糖大分子合成的中間物質【1J。它具有特殊的生理活性,可直接抗炎.緩解骨性關節(jié)炎的疼痛癥狀

9、,改善關節(jié)功能,在北美和歐洲被用于食品添加劑和藥品【2.3】,因此近年來越來越受到重視,相關的研究也日益增多。本文首次建立了HPLC-RID法測定氨基葡萄糖鹽酸鹽 的含量,該方法簡便.結果準確可靠,可用于氨基葡萄糖鹽酸 鹽的質量控制。1儀器及材料1.1實驗儀器Waters 2695Alliance高效液相色譜儀,包括 柱溫箱、在線真空脫氣機、2414示差折光檢測器以及Empow. er色譜工作站(美國Waters公司,BP221S型電子天平(德國 Satorius公司,萬分之一。1.2藥品與試劑氨基葡萄糖鹽酸鹽(浙江澳興生物科技有 限公司,批號20080417、20080418、2008041

10、9;氨基葡萄糖鹽 酸鹽對照品(Sigma公司,批號047K0129,N一乙酰氨基葡萄 糖對照品(FLUKA公司,批號1323294;乙腈、庚烷磺酸鈉、 冰乙酸均為色譜純。乙酸鈉為分析純,水為重蒸餾水。2方法與結果2.1色譜條件 色譜柱:Bondapak C18柱(3.9X 300mm, lOum;以0.005molL1庚烷磺酸鈉溶液(稱取庚烷磺酸鈉 和乙酸鈉適量加水配制成濃度分別為0.005molL-1和0.01 molL-1的溶液,用冰醋酸調pH至4.0±0.05一乙腈(97:3 為流動相;流速:2.0mLmin_1;柱溫25。C,檢測器池溫度40。 C。進樣量lOlL。2.2測定

11、方法 精密稱取氨基葡萄糖鹽酸鹽約250nag,置 50mL量瓶中。加3%的乙腈溶液30mL,超聲2min使完全溶 解,放置至室溫,稀釋至刻度搖勻。精密世取IO#L照2.1項 下的色譜條件進樣到液相色譜儀中,記錄色譜圖;另取氨基葡 萄糖鹽酸鹽對照品約250mg同法配制成對照品溶液。同法測 定。按外標法以峰面積計算含量。2.4系統(tǒng)適用性在上述色譜條件下。D氨基葡萄糖鹽酸鹽 峰的理論板數(shù)為3639.與相鄰的峰(系統(tǒng)峰的分離度為 6.82;空白及N.乙酰氨基葡萄糖峰均不干擾n氨基葡萄糖鹽 酸鹽峰(見圖1-4。取對照品溶液連續(xù)進樣6針.記錄色譜圖,計算峰面積的 相對標準偏差為0.5%。說明方法的系統(tǒng)適用

12、性較好。圈1空白溶液色譜圖囝2對照品溶液色譜圖圖4供試品溶液色譜圖2.5檢出限與定量限取對照品溶液逐級稀釋當色譜峰的 S/N約等于3h.對照品溶液的檢測限濃度為0.02mgmL一1最低檢出量0.2旭。同法取對照品溶液逐級稀釋當色譜峰的S/N約10時. 對照品溶液的定量限濃度為0.08ragmL一1取該濃度溶液進 樣6次.相對標準偏差為1.8%。2.6線性范圍 精密稱取n氨基葡萄糖鹽酸鹽對照品 43海峽藥學2011年第23卷第2期49.9、125.2、201.1、249.4、301.0、374.8mg分別置50mL量 瓶中,加3%的乙腈溶液30mL。超聲2min使完全溶解,放置 至室溫,稀釋至刻

13、度搖勻,得到6個濃度的溶液,按2.1的色 譜條件分別進樣10vL,記錄色譜圖,以峰面積A對濃度C(mg mL_1作線性回歸,結果:在0.9987.497mgmL。1的濃度 范圍內,測定的峰面積與D氨基葡萄糖鹽酸的濃度呈良好的 線性關系。線性方程為:A=21969.329C+155.313,r= 0.9999。2.7回收率試驗精密稱取適量的D氨基葡萄糖鹽酸鹽供 試品(批號200804179份。各約125mg,置50mL量瓶中。分 別加入D.氨基葡萄糖鹽酸鹽對照品約25、125、225mg各3份,按2.2項下的方法配制得到9份回收率測試溶液,按上述 方法進樣測定,計算氨基葡萄糖鹽酸的回收率,結果平

14、均回收 率為99.4%.相對標準偏差為1.2%。2.8精密度試驗 取n氨基葡萄糖鹽酸供試品(批號 20080417按2.2項下的方法分別配制6份供試品溶液。然后 分別進樣測定,以外標法計算:D氨基葡萄糖鹽酸含量為 99.16%、99.69%、99.70%、98.38%、99.65%、99.75%.相對 標準偏差為O.5%。2.9穩(wěn)定性試驗 取D一氨基葡萄糖鹽酸鹽供試品(批號 20080417按2.2項下的方法配制1份供試品溶液,分別間隔 O、l、2、4.6、8、10、12h后進樣測定。計算氨基葡萄糖鹽酸鹽峰 面積的相對標準偏差.結果分別為O.7%。表1樣品含量測定結果2.10樣品測定取D氨基葡

15、萄糖鹽酸鹽供試品3批,按按 2.2項下的方法各配制兩份,在上述色譜條件下進樣測定。計 算氨基葡萄糖鹽酸鹽的含量,結果(見表1。3討論由于氨基葡萄糖鹽酸鹽的極性比較強,在C18柱上不易 保留,本實驗采用反相離子對色譜法,在流動相中加人了離子 對試劑庚烷磺酸鈉,使氮基葡萄糖鹽酸鹽的保留時問延長。 與紫外可見吸收檢測器(UVD相比,示差折光檢測器(RID 的靈敏度較低,但氨基葡萄糖鹽酸鹽無發(fā)色團,在紫外區(qū)內無 特征吸收峰。因此選擇了示差折光檢測器檢測氨基葡萄糖鹽 酸鹽。氨基葡萄糖常用的測定方法有比色法(45和I-IPLC 法(6-8?，F(xiàn)行國家標準均采用的比色法,專屬性和重現(xiàn)性均 較差,而美國藥典采用

16、的HPLC-UVD法的可靠性和重現(xiàn)性值 得懷疑【9J。在不苛求靈敏度的情況下,本方法作為氨基葡萄 糖鹽酸鹽的含量測定法,具有方法簡便、不需要衍生化,結果 準確可靠的優(yōu)點,可作為該藥品的質量控制方法。參考文獻【1Anderson JW。Nicolosi RJ。Borzelleca JF.Glucosamine effects in hu. malls:a review of effects Oil glucose metabolism.side effects.safety considerations and efficacyU.Food and Chemical Toxicology,200

17、5. 43:187-201.【2陳王歇.關于一種重要保健葡萄糖衍生物的探討J.淀粉與淀粉 糖,2006.4:33.3治療骨關節(jié)炎新藥硫酸氨基葡萄糖(J.中國醫(yī)藥技術與市場, 2005,5(3:60.4國家藥典委員會編.<國家藥品標準S.標準編號:WSl.XG. 028.2001.5國家藥典委員會編.(國家藥品標準S.標準編號:WSI.(X. 090一2005Z.(6楊瀾,李銅鈴,黃婷,等.RP.HPLC測定鹽酸氨基葡萄塘片的含量 J】.華西藥學雜志,2005,20(3:259.260.(7USP29.NF24S.2341.2343.【8王英瑛,李俊.曾蘇.反相高效液相色譜衍生化法測定氨基葡萄糖 原料及其制荊的含量J.醫(yī)藥導報。2008,27(7:851.852.【9曾茂法.李俊,王英瑛,等.D-氨基葡萄糖硫酸鉀鹽含量測定方法 探討J.中國現(xiàn)代應用藥學,2008.25(3:251.254.HPLC法測定蔬菜中2,4一二氯苯氧乙酸方袁媛(浙江省杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院杭州311201摘要:gl的建立應用高效液相色譜洲定蔬菜中的2.4.二氯苯氧乙酸的方法。方法蔬菜樣品經過搗碎,調pH,液液革取.旋轉蒸發(fā)濃縮后. 以甲醇-水(8:2,V/V為流動相.在ODS-C18柱上進行分離,紫外檢測器282nm下檢測。結