HPLC法測(cè)定撲感片中馬來(lái)酸氯苯那敏的含量及含量均勻度

1、HPLC法測(cè)定撲感片中馬來(lái)酸氯苯那敏的含量及含量均勻度                        【摘要】  目的 建立用HPLC法測(cè)定撲感片中馬來(lái)酸氯苯那敏含量及含量均勻度的方法。方法 采用DIKMA Diamonsil C18柱，以乙腈水三乙胺（體積比15085015）（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.8±0.1）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為265

2、 nm。結(jié)果 馬來(lái)酸氯苯那敏在2.814.0 g·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r=0.9999，n8），平均加樣回收率為100.39，RSD1.45。結(jié)論 本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，為撲感片的質(zhì)量控制提高了標(biāo)準(zhǔn)。 【關(guān)鍵詞】  撲感片；馬來(lái)酸氯苯那敏；含量均勻度撲感片是由地膽草、蒼耳草、山葡萄、紫蘇油、對(duì)乙酰氨基酚及馬來(lái)酸氯苯那敏制成的抗感冒復(fù)方制劑。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)収載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第20冊(cè)，該標(biāo)準(zhǔn)采用滴定法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚含量及薄層掃描法測(cè)定馬來(lái)酸氯苯那敏含量，兩種方法的供試品溶液的前處理繁瑣且易產(chǎn)生誤差。為了更好地保證藥品質(zhì)量且控制片劑間的含量變異程度，本文采用HPL

3、C法對(duì)該制劑中的馬來(lái)酸氯苯那敏的含量及含量均勻度進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明本文方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。1  儀器與試藥     安捷倫1100全自動(dòng)高效液相色譜儀；UV2201島津可見紫外分光光度計(jì)；超聲波清洗器（KUDOS）。馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：99.3%，批號(hào)：100047-200305）；對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用，批號(hào)：100018-200408）；撲感片及缺馬來(lái)酸氯苯那敏、對(duì)乙酰氨基酚的陰性對(duì)照樣品（廣東萬(wàn)年青制藥有限公司）；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純。2  色譜條件與系

4、統(tǒng)適用性試驗(yàn)     色譜柱：DIKMA  Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm,5 m）；流動(dòng)相：乙腈水三乙胺（體積比15085015），用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.8±0.1；檢測(cè)波長(zhǎng)：265 nm；柱溫：35  ；流速：1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量：20 L。理論塔板數(shù)按馬來(lái)酸氯苯那敏峰計(jì)算為11 640，分離度為28.04，見圖1。圖1  高效液相色譜（略）Fig.1  HPLC chromatogram3  方法與結(jié)果3.1  對(duì)照品溶液的

5、制備     精密稱取105 干燥3 h的馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品約17.5 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液（1）；精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品400 mg，置100 mL量瓶中，精密加入上述對(duì)照品溶液（1）20 mL，加流動(dòng)相適量使溶解，并用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液10.0 mL置100 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。3.2  供試品溶液的制備     取本品10片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取適量(約相當(dāng)于本品1片

6、)，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相約80 mL，超聲處理（功率300 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過(guò)，0.45 m微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。3.3  陰性對(duì)照溶液的制備     按處方比例及制備方法，制備缺馬來(lái)酸氯苯那敏和對(duì)乙酰氨基酚的陰性樣品溶液。按上述色譜條件進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果在對(duì)照品出峰位置未見其它雜質(zhì)干擾峰（見圖1），說(shuō)明處方中其它成分對(duì)對(duì)乙酰氨基酚和馬來(lái)酸氯苯那敏的測(cè)定無(wú)干擾。3.4  線性范圍的考察      精密吸取上述對(duì)照品

7、貯備液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，10.0 mL，分別置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，依次進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。對(duì)照品濃度作為橫坐標(biāo)，峰面積作為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程：Y=-2.124 821.712 9X，r=0.9999。表明馬來(lái)酸氯苯那敏在2.814.0 g· mL-1范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。                    

8、         3.5  精密度試驗(yàn)     取同一份供試品溶液（批號(hào)為050801），重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值，得RSD%為0.53%，表明精密度良好。3.6  穩(wěn)定性試驗(yàn)     取同一份供試品溶液（批號(hào)為050801），分別于配制后0，1，2，3，4，6，8，12，16，24 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，得RSD%為0.34%（n=10），表明供試品溶液在24  h內(nèi)穩(wěn)定。3.7  重

9、復(fù)性試驗(yàn)     取同一批號(hào)供試品（批號(hào)為050801），分別平行稱取6份，照樣品含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定，測(cè)得馬來(lái)酸氯苯那敏標(biāo)示量為115.50，RSD為1.15，表明重復(fù)性良好。3.8  回收率試驗(yàn)     采用加樣回收法，精密稱取同一批已知含量的樣品（批號(hào)為050801）15份，每份約相當(dāng)于0.13 g，每5份1組，分別于各組分中精密加入馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品貯備液4.0，5.0，6.0 mL，即80%，100%，120%的馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品溶液（0.0695 mg·mL-1），按上述色譜條件測(cè)定

10、，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為100.39%，RSD為1.45%?？梢姳痉ň哂辛己玫幕厥章?，見表1。表1  馬來(lái)酸氯苯那敏加樣回收率試驗(yàn)（略）Tab.1  Recovery test of chlophenamine maleate3.9  樣品測(cè)定     按上述測(cè)定方法對(duì)5批樣品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量，5批樣品測(cè)定結(jié)果見表2。3.10  樣品含量均勻度測(cè)定     取本品1片，除去糖衣，研細(xì)，置100 mL量瓶中，其余步驟同供試品溶液制備項(xiàng)，以上述色譜條件按中國(guó)藥典2005年

11、版二部附錄X E含量均勻度檢查法測(cè)定，結(jié)果見表3。  表2  樣品中馬來(lái)酸氯苯那敏含量及含量均勻度測(cè)定結(jié)果（略）  Tab.2  Content and uniformity of samples4  討論4.1  檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇     經(jīng)過(guò)對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏、對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品溶液的紫外吸收光譜測(cè)定及參考有關(guān)文獻(xiàn)1，考慮到撲感片處方中對(duì)乙酰氨基酚和馬來(lái)酸氯苯那敏（0.7 mg ·片1）的含量相差懸殊，為提高馬來(lái)酸氯苯那敏定量的準(zhǔn)確性，故把檢測(cè)波長(zhǎng)定為265 nm。在此波長(zhǎng)下，馬來(lái)酸氯

12、苯那敏有較大的響應(yīng)值，重現(xiàn)性好。4.2  流動(dòng)相pH值的選擇     pH值對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏的出峰時(shí)間及峰形影響較大。當(dāng)pH值為3.03.5時(shí)，撲感片中的馬來(lái)酸氯苯那敏和對(duì)乙酰氨基酚兩個(gè)主成分色譜峰與陰性樣品峰不能很好分離，且馬來(lái)酸氯苯那敏的峰變寬，保留時(shí)間變長(zhǎng)。當(dāng)pH值為2.8±0.1，色譜峰得到較好的分離，峰形比較理想，馬來(lái)酸氯苯那敏與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.52附錄VD。流動(dòng)相中使用三乙胺可有效改善前沿峰現(xiàn)象，經(jīng)反復(fù)摸索，最終以乙腈水三乙胺（體積比15085015）（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.8±0.1）為本法的流動(dòng)

13、相。4.3  實(shí)驗(yàn)中分別對(duì)提取溶劑、提取時(shí)間進(jìn)行考察：以無(wú)水乙醇、甲醇、流動(dòng)相、水為提取溶劑，均超聲30 min，經(jīng)比較，以流動(dòng)相作為提取溶劑為佳；再以流動(dòng)相為提取溶劑，對(duì)同一批號(hào)樣品的超聲時(shí)間進(jìn)行考察，選擇超聲15、30、45、60 min后處理的樣品溶液分別進(jìn)行分析，結(jié)果各樣品含量基本接近，故選擇超聲時(shí)間30 min處理樣品。4.4  實(shí)驗(yàn)考察了5批撲感片中馬來(lái)酸氯苯那敏的含量及含量均勻度，結(jié)果1批樣品的A+1.80S大于15.0，A+S亦大于15.0。根據(jù)中國(guó)藥典含量均勻度檢查法規(guī)定2附錄XE，可直接判該批樣品不符合規(guī)定。分析其原因可能是撲感片為中西藥復(fù)方制劑，其中藥浸膏與化學(xué)藥的質(zhì)量比約為51，而化學(xué)藥馬來(lái)酸氯苯那敏（0.7 mg ·片1）和對(duì)乙酰氨基酚的質(zhì)量比約為157倍，再加上中藥浸膏粘度較大，使馬來(lái)酸氯苯那敏不易混勻。因此，建議廠家在生產(chǎn)此類中西藥