Agilent-1260中文版1

1、Agilent 1260 LC（中文版 B01.01）現(xiàn)場培訓(xùn)教材安捷倫科技有限公司生命科學(xué)與化學(xué)分析儀器部一、 培訓(xùn)目的： 基本了解1200LC硬件操作。 掌握化學(xué)工作站的開機(jī)，關(guān)機(jī)，參數(shù)設(shè)定,學(xué)會(huì)數(shù)據(jù)采集,數(shù)據(jù)分析的基本操作。二、 培訓(xùn)準(zhǔn)備：1、儀器設(shè)備： Agilent 1200LC G1310A :(單元泵)；G1312A(二元泵)；G1311A(四元泵)。 G1313A（標(biāo)準(zhǔn)型自動(dòng)進(jìn)樣器）。 G1316A（柱溫箱）。 G1314A（VWD檢測器）。 G1362A（示差檢測器）。 色譜柱: Eclipse XDB-C18 150 x 4.6 mm, 5um column P/N 993

2、967-9022、溶劑準(zhǔn)備： 色譜級(jí)純或優(yōu)級(jí)純乙腈或甲醇。 二次蒸餾水基本操作步驟:(一)、開機(jī)：1、打開計(jì)算機(jī),進(jìn)入中文Windows XP畫面,并運(yùn)行CAG Bootp Server程序。2、打開 1200 LC 各模塊電源。3、待各模塊自檢完成后，雙擊“Instrument 1 Online”圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與1200LC通訊，進(jìn)入的工作站畫面如下所示。4、從“視圖”菜單中選擇“方法和運(yùn)行控制”畫面, 點(diǎn)擊“視圖”菜單中的“顯示頂部工具欄”，“ 顯示狀態(tài)工具欄”，“系統(tǒng)視圖”,“樣品視圖”，使其命令前有“”標(biāo)志，來調(diào)用所需的界面。5、把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。6、打開沖洗閥。7、點(diǎn)擊“泵

3、”圖標(biāo)，點(diǎn)擊“設(shè)置泵”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面。8 、設(shè)流速：5ml/min，點(diǎn)擊“確定”。9、點(diǎn)擊“泵” 圖標(biāo)，點(diǎn)擊“控制”選項(xiàng)，選中“啟動(dòng)”，點(diǎn)擊“確定” ，則系統(tǒng)開始沖洗，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止,切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無氣泡為止。10、點(diǎn)擊“泵” 圖標(biāo)，點(diǎn)擊“控制”選項(xiàng)，選中“關(guān)閉”，點(diǎn)擊“確定”關(guān)泵， 關(guān)閉沖洗閥。11、點(diǎn)擊“泵”圖標(biāo)，點(diǎn)擊“設(shè)置泵選項(xiàng)”，設(shè)流速：1.0ml/min。12、點(diǎn)擊泵下面的瓶圖標(biāo)，如下圖所示（以單元泵為例），輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積，點(diǎn)擊“確定”。（二）數(shù)據(jù)采集方法編輯：1、開始編輯完整方法： 從“方法”菜單

4、中選擇“編輯完整方法” 項(xiàng)，如下圖所示選中除“數(shù)據(jù)分析 ”外的三項(xiàng)，點(diǎn)擊“確定”，進(jìn)入下一畫面。2、方法信息： 在“方法注釋”中加入方法的信息（如：測試方法）。 點(diǎn)擊 “確定”， 進(jìn)入下一畫面。3、泵參數(shù)設(shè)定：（以四元泵為例） 在“流速”處輸入流量,如1ml/min，在“溶劑 B”處輸入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入 ”一行“時(shí)間表” ,編輯梯度。在“壓力限”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。 點(diǎn)擊“確定”，進(jìn)入下一畫面。4、自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定:（以標(biāo)準(zhǔn)G1313為例） 選擇合適的進(jìn)樣方式, 如圖所示，進(jìn)樣體積 5.0ul ,洗瓶位置為6號(hào)。“標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣”-只能輸入進(jìn)樣體積

5、，此方式無洗針功能?！跋瘁樳M(jìn)樣”-可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會(huì)在洗瓶中洗針。“使用進(jìn)樣器程序”-可以點(diǎn)擊“編輯” 按鈕進(jìn)行進(jìn)樣程序編輯。 點(diǎn)擊進(jìn)“確定”，進(jìn)入下一畫面。5、柱溫箱參數(shù)設(shè)定: 在“溫度”下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度,如：40度。并選中它,點(diǎn)擊“更多>>” 鍵,如圖所示,選中“與左側(cè)相同”，使柱溫箱的溫度左右一致。 點(diǎn)擊“確定”，進(jìn)入下一畫面。6、VWD檢測器參數(shù)設(shè)定: 在“波長”下方的空白處輸入所需的檢測波長,如254nm, 在“峰寬 (響應(yīng)時(shí)間)”下方點(diǎn)擊下拉式箭頭,選擇合適的響應(yīng)時(shí)間, 如>0.1min (2s)。 在“時(shí)間表”

6、 中可以“插入”一行，輸入隨時(shí)間切換的波長，如1min ，波長=300nm。點(diǎn)擊“確定”，進(jìn)入下一畫面。7、 RID檢測器參數(shù)設(shè)定: 色譜條件:進(jìn)樣體積: 20ul 。 光學(xué)單元溫度: “關(guān)閉” 。極性: “正極性” 。 峰寬(響應(yīng)時(shí)間) : 4s 。 如圖所示: “光學(xué)部件溫度”-若環(huán)境溫度控制在±2,設(shè)定為“關(guān)閉”, 若環(huán)境溫度不穩(wěn)定,則設(shè)定光學(xué)單元溫度為高于環(huán)境溫度5度,以防樣品在池中沉淀?！胺鍖?(響應(yīng)時(shí)間)”-大多數(shù)分析設(shè)為“ 4s” ，只有在高速分析下設(shè)為更短?！胺治龊笞詣?dòng)循環(huán)”-在不進(jìn)行分析時(shí)可以讓流動(dòng)相循環(huán)，節(jié)省流動(dòng)相，檢測器連續(xù)運(yùn)行，可隨時(shí)投入使用。 * 點(diǎn)擊RID

7、圖標(biāo)，選擇RID Control ：Heater 設(shè)為On，若要循環(huán)流動(dòng)相，必須將“Recycling Valve”設(shè)為ON。手動(dòng)purge 參比池，將其設(shè)為On，并輸入Purge 時(shí)間。8、 在“ 運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表 ”中選中“ 數(shù)據(jù)采集”，點(diǎn)擊“確定”。9、 點(diǎn)擊“方法”菜單，選中“方法另存為”，輸入一方法名，如“測試”，點(diǎn)擊“確定”。10、 從菜單 “視圖”中選中“在線信號(hào)”,選中“信號(hào)窗口1”,然后點(diǎn)擊“改變” 鈕,將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)擊“確定”。(如同時(shí)檢測二個(gè)信號(hào),則重復(fù)10,選中“信號(hào)窗口2”。單擊“改變”鍵，即可彈出右側(cè)的“編輯信號(hào)圖譜”窗口，進(jìn)而選擇所需的譜圖信號(hào)。1

8、1、 從“運(yùn)行控制”菜單中選擇“樣品信息”選項(xiàng)，如下圖所示，輸入操作者名稱，如“安裝工程師”；在“數(shù)據(jù)文件 ”中選擇“手動(dòng)”或“前綴/計(jì)數(shù)器”。區(qū)別: 手動(dòng)-每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會(huì)將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。 Pr在前綴/計(jì)數(shù)器-“前綴”框中輸入前綴，在“計(jì)數(shù)器”框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位，儀器會(huì)自動(dòng)命名，如vwd數(shù)據(jù)0001，vwd數(shù)據(jù)0002。12、 點(diǎn)擊“確定” ,從“儀器” 菜單選擇“系統(tǒng)開啟”。13、 等儀器準(zhǔn)備好，基線平穩(wěn)，從“運(yùn)行控制”菜單中選擇“運(yùn)行方法”，進(jìn)樣。(若無自動(dòng)進(jìn)樣器，則基線平穩(wěn)后，進(jìn)樣并搬動(dòng)手動(dòng)進(jìn)樣閥，啟動(dòng)運(yùn)行。)（DAD, VWD色譜圖如下所示：）（三）、數(shù)

9、據(jù)分析方法編輯:1、 從“視圖”菜單中，點(diǎn)擊“數(shù)據(jù)分析”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。2、 從“文件”菜單選擇“調(diào)用信號(hào)”，選中您的數(shù)據(jù)文件名，如下圖所示。點(diǎn)擊“ 確定”，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。3、 做譜圖優(yōu)化：從“圖形”菜單中選擇“信號(hào)選項(xiàng)”，如下圖所示。從“范圍” 中選擇“滿量程” 或“自動(dòng)量程” 及合適的時(shí)間范圍或選擇“自定義量程” 調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。點(diǎn)擊“ 確定”。4、積分: 從“積分”菜單中選擇“積分事件”選項(xiàng)，如下圖所示。選擇合適的“斜率靈敏度”，“峰寬”，“最小峰面積”，“最小峰高”。 從“積分”菜單中選擇“積分”選項(xiàng)， 則數(shù)據(jù)被積分。 如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直

10、到滿意為止。 點(diǎn)擊左邊“”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。5、打印報(bào)告: 從“報(bào)告”菜單中選擇“設(shè)定報(bào)告”選項(xiàng)，進(jìn)入如下圖所示畫面。 點(diǎn)擊“定量結(jié)果”框中“計(jì)算”右側(cè)的黑三角，選中“面積百分比”，其它選項(xiàng)不變。 點(diǎn)擊“ 確定”。 從“報(bào)告”菜單中選擇“打印報(bào)告”，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則點(diǎn)擊“報(bào)告” 底部的“打印”鈕。(四)、關(guān)機(jī): 關(guān)機(jī)前，先關(guān)燈，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。 退出化學(xué)工作站，依提示關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。 關(guān)閉Agilent 1200各模塊電源開關(guān)。(五)、Agilent 1200 LC維護(hù)保養(yǎng)：1、 色譜柱長時(shí)間不用，存放時(shí)，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死

11、（如乙腈/甲醇適于反相色譜柱，正相色譜柱用相應(yīng)的有機(jī)相）。2、 手動(dòng)進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖溶液時(shí)，要用水沖洗進(jìn)樣口。3、流動(dòng)相使用前必須過濾，不要使用多日存放的蒸餾水（易長菌）。4、帶seal-wash的 1200，要配制90%水+10%異丙醇，開啟seal-wash清洗泵，溶劑不能干涸。5、注意事項(xiàng)見說明書，或由現(xiàn)場工程師介紹。*注意：1、 本教材僅適用于現(xiàn)場工程師培訓(xùn)講解參考之用，內(nèi)容為工作站現(xiàn)場培訓(xùn)的一般要求，請(qǐng)根據(jù)用戶的儀器配置及現(xiàn)場用戶的需求進(jìn)行相應(yīng)的培訓(xùn)內(nèi)容增刪。2、 安捷倫公司對(duì)本教材可能存在的錯(cuò)誤及其后果不承擔(dān)任何法律責(zé)任，我們適時(shí)推出新版本的培訓(xùn)教材，恕不另行通知。維護(hù)知識(shí)問答1

12、、 為什么溶劑和樣品要過濾?溶劑和樣品過濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、儀器起到保護(hù)作用，消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。色譜柱：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。儀器：溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時(shí)也會(huì)增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損。2、 為什么HPLC用緩沖鹽時(shí)要加在線Seal-wash選項(xiàng)？HPLC用緩沖鹽時(shí),由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細(xì)小鹽粒非常堅(jiān)硬,它附著在藍(lán)寶石活塞桿上,隨著藍(lán)寶石活塞桿的往復(fù)運(yùn)動(dòng),容易產(chǎn)生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。在線Seal-wash選項(xiàng)能有效的帶走可能存在的

13、緩沖鹽結(jié)晶。緩沖鹽的濃度在0.1mol或大于0.1mol時(shí),必須使用該在線沖洗選項(xiàng).清洗液配制: 90%水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類生長和減小水的表面張力，不能干涸。3、 為什么Agilent 1200LC的流動(dòng)相管路非常細(xì)?在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小45個(gè)數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管、檢測器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會(huì)引起色譜峰的展寬，而使柱效降低 。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果，Agilent 1

14、200LC 使用加工工藝難度高的毛細(xì)管線作為流動(dòng)相管路。毛細(xì)管線分類：0.17mm內(nèi)徑 -綠色 ;0.12mm內(nèi)徑-紅色。PEEK 管線：內(nèi)徑 -0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。毛細(xì)管線優(yōu)點(diǎn): 柔韌性好.*Agilent 公司同時(shí)備有1/16in 的粗外徑毛細(xì)管線,適用于不同習(xí)慣的用戶 ,優(yōu)點(diǎn)是剛性好,但柔韌性差一些。4、 流動(dòng)相使用前為什么要脫氣？流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行脫氣處理 ，以除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢測器時(shí)，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會(huì)增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，

15、柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FLD，可能會(huì)造成熒光猝滅。常用的脫氣方法比較：氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。超聲脫氣法：流動(dòng)相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10- 15min，此法效果最差。在線真空脫氣法：Agilent1200LC真空脫機(jī)利用膜滲透技術(shù)， 在線脫氣，智能控制，無需額外操作，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。5、如何防止溶劑瓶內(nèi)溶劑過濾器的堵塞，以及堵塞后的處理？溶劑的質(zhì)量或污染以及藻類的生長會(huì)堵塞溶劑過濾器，從而

16、影響泵的運(yùn)行，尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液（PH=47）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶內(nèi)溶劑過濾器的堵塞。A：請(qǐng)嚴(yán)格執(zhí)行溶劑過濾。B：請(qǐng)勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液C：如果應(yīng)用許可，可在溶劑中加入0.0001-0.001M的疊氮化鈉.D:在溶劑瓶內(nèi)溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣,以隔絕空氣。E：避免使溶劑瓶暴露在直射陽光下，盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液。6、 Agilent 1200LC泵如何維護(hù)？Agilent 1200LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無脈動(dòng)、流量準(zhǔn)確的流動(dòng)相，及時(shí)合理的維護(hù)非常重要。A：流動(dòng)相使用前請(qǐng)必須脫氣、過濾。B：使用緩沖鹽時(shí)，要加在線Seal-wash選

17、項(xiàng)。C：關(guān)機(jī)前，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。D：及時(shí)更換Purge Valve內(nèi)的過濾芯。（當(dāng)打開Purge Valve時(shí)，壓力高于10bar，表明過濾芯已堵）。E：使用合適的密封圈。7、 如何選擇合適的泵頭活塞密封圈？泵頭活塞的標(biāo)準(zhǔn)密封圈能適合于大多數(shù)應(yīng)用，但使用正相溶劑（如正己烷），不適合使用標(biāo)準(zhǔn)活塞密封圈，特別是長時(shí)間使用時(shí)，需更換另一種不同的密封圈，我們建議使用聚四氟乙烯密封圈。（p/n0905-1420 2/pk）*注意：聚四氟乙烯密封圈的壓力范圍為：0200bar；建議在泵的壓力限制中，將最大壓力設(shè)為200bar。8、 使用梯度比例發(fā)時(shí)要注意那些事項(xiàng)？當(dāng)鹽溶液與有機(jī)溶劑溶液混合時(shí)，鹽溶液能與有機(jī)溶劑溶液完全混溶，而不會(huì)出現(xiàn)沉淀。但是在比例閥的混合點(diǎn)，重力作用使鹽顆粒沉淀下來，通常，閥A接水相/鹽溶液，D接有機(jī)溶劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并被溶解。若顛倒過來，鹽可能落在有機(jī)溶劑中，出現(xiàn)問題。強(qiáng)烈建議：當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)，推薦將緩沖鹽通道接在A通道上，有機(jī)溶劑通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水沖洗所有的通道，以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。9、 更換色譜柱時(shí)要注意什么事項(xiàng)?在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小45個(gè)數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，樣