驗(yàn)證23-01-滅菌設(shè)備的驗(yàn)證

1、 滅菌設(shè)備的驗(yàn)證 徐志敏 目 錄1、滅菌的概念2、滅菌的方法3、滅菌的驗(yàn)證4、生物指示劑5、消毒與滅菌一 滅菌的概念滅菌是用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。無(wú)菌物品是指物品中不含任何活的微生物。對(duì)任一批產(chǎn)品來(lái)說(shuō)，絕對(duì)的無(wú)菌既無(wú)法保證也無(wú)法用實(shí)驗(yàn)來(lái)證實(shí)。實(shí)際生成過(guò)程中，滅菌是指將物品中污染的微生物殘存概率下降至一定水平，以無(wú)菌保證水平SAL表示。最終滅菌的產(chǎn)品微生物存活概率不得高于10-6。二 滅菌的方法常用的滅菌方法有：濕熱滅菌法干熱滅菌法輻射滅菌法氣體滅菌法和過(guò)濾除菌法。 只要產(chǎn)品允許盡量采取最終滅菌的方法。 1、濕熱滅菌是用高壓飽和蒸汽、過(guò)熱水噴淋等手段使微生物菌體

2、中蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。滅菌能力強(qiáng)，是熱力滅菌中最有效，應(yīng)用最廣泛的滅菌方法。適用范圍：遇高溫和潮濕不發(fā)生變化和損壞的物品。如容器、培養(yǎng)基、膠塞、無(wú)菌衣等。熱壓滅菌用的滅菌器種類很多，但其基本結(jié)構(gòu)大同小異。注意：被滅菌物應(yīng)有適當(dāng)?shù)难b載方式，不能排列過(guò)密。以保證滅菌的有效性及均一性。必須將滅菌器內(nèi)的空氣排出。如果滅菌器內(nèi)的空氣存在，則壓力表上所表示的壓力是器內(nèi)蒸氣和空氣二者的總壓而非單純的蒸氣壓力。1、濕熱滅菌2 干熱滅菌法系指物品于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中、利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品的滅菌，如玻璃器具、金屬制

3、容器、纖維制品、固體試藥、液狀石蠟等均可采用本法滅菌。干熱滅菌條件：一般為160170120min以上、17018060min以上或25045min以上，也可采用其它溫度和時(shí)間參數(shù)?？傊?，應(yīng)保證滅菌后的產(chǎn)品其SAL（無(wú)菌保證水平）10-6注意： 被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)陌b和裝載方式，保證滅菌的有效性和均一性2 干熱滅菌法干熱滅菌法驗(yàn)證與濕熱滅菌法相同，應(yīng)進(jìn)行熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)、生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)或細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)。以確認(rèn)滅菌柜中的溫度分布符合設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)、確定最冷點(diǎn)位置等。常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)是證明除熱原過(guò)程有效性的試驗(yàn)。一般將不小于1000單位的細(xì)

4、菌內(nèi)毒素加入待去熱原的物品中，證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素至少下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)所用的細(xì)菌內(nèi)毒素一般為大腸埃希菌內(nèi)毒素。驗(yàn)證時(shí)，一般采用最大裝載方式。2 干熱滅菌法系指將滅菌產(chǎn)品置于適宜放射源輻射的射線或適宜的電子加速器發(fā)生的電子束中進(jìn)行電離輻射而達(dá)到殺滅微生物的方法。本法最常用的為60Co-射線輻射滅菌。醫(yī)療器械、容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。3 輻射滅菌法輻射滅菌所控的參數(shù)主要是輻射劑量（指滅菌物品的吸收劑量）。該劑量的制定應(yīng)考慮滅菌物品的適應(yīng)性及可能污染的微生物最大數(shù)量及最強(qiáng)抗輻射力，所使用的劑量事先應(yīng)驗(yàn)證其有效性及安全性。常用的輻射

5、滅菌吸收劑量為25kGy.對(duì)最終產(chǎn)品、原料藥、某些醫(yī)療器材應(yīng)盡可能采用低輻射劑量滅菌。滅菌時(shí)，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)或物理方法對(duì)滅菌物品吸收的輻射劑量進(jìn)行監(jiān)控，以充分證實(shí)滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。3 輻射滅菌法系指用化學(xué)消毒劑形成的氣體殺滅微生物的方法。常用的化學(xué)消毒劑有環(huán)氧乙烷、氣態(tài)過(guò)氧化氫、甲醛、臭氧（O3）等，本法適用于在氣體中穩(wěn)定的物品滅菌。采用氣體滅菌法時(shí)，應(yīng)注意滅菌氣體的可燃可爆性、致畸性和殘留毒性。本法中最常用的氣體是環(huán)氧乙烷，一般與8090的惰性氣體混合使用。該法可用于醫(yī)療器械，塑料制品等不能采用高溫滅菌的物品滅菌。含氯的物品及能吸附環(huán)氧乙烷的物品則不宜使用。另外，使用氣態(tài)

6、過(guò)氧化氫和臭氧（O3）滅菌，因其無(wú)危害性殘留物，不會(huì)對(duì)操作人員和環(huán)境造成危害，適合于空間和物品表面的滅菌。4 氣體滅菌法臭氧滅菌：臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣和單個(gè)氧原子；后者具有很強(qiáng)的活性，對(duì)細(xì)菌有極強(qiáng)的氧化作用，將其殺死，多余的氧原子則會(huì)自行重新結(jié)合成為普通氧原子，不存在任何有毒殘留物，故稱無(wú)污染消毒劑，它不但對(duì)各種細(xì)菌（包括肝炎病毒，大腸桿菌，綠濃桿菌及雜菌等）有極強(qiáng)的殺滅能力，而且對(duì)殺死霉素也很有效。 4 氣體滅菌法1、臭氧的滅菌機(jī)制及過(guò)程類屬于生物化學(xué)過(guò)程， 氧化分解了細(xì)菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的葡萄糖氧化酶。 2、直接與細(xì)菌、病毒發(fā)生作用，破壞其細(xì)胞器和核糖核

7、酸，分解DNA、RNA，蛋白質(zhì)、脂質(zhì)類和多糖等大分子聚合物，使細(xì)菌的物質(zhì)代謝生產(chǎn)和繁殖過(guò)程到破壞。 3、滲透胞膜組織，侵入細(xì)胞膜內(nèi)作用于外膜脂蛋白和內(nèi)部的脂多糖，使細(xì)胞發(fā)生通透畸變，導(dǎo)致細(xì)胞溶解死亡。 4 氣體滅菌法系利用細(xì)菌不能通過(guò)致密具孔濾材的原理以除去氣體或液體中微生物的方法。適用于熱不穩(wěn)定的藥品溶液或原料的除菌。除菌過(guò)濾器微孔濾膜分親水性和疏水性兩種。對(duì)除菌過(guò)濾器的要求：除菌過(guò)濾器必須選擇具有截留實(shí)驗(yàn)證明的除菌級(jí)過(guò)濾器。藥品生產(chǎn)中采用的除菌濾膜孔徑一般不超過(guò)0.22m.過(guò)濾器不得對(duì)被濾過(guò)成分有吸附作用，也不能釋放物質(zhì)，不得有纖維脫落，禁用含石棉的過(guò)濾器。濾器和濾膜在使用前應(yīng)進(jìn)行潔凈處理

8、，并用高壓蒸汽進(jìn)行滅菌或作在線滅菌。更換品種和批次應(yīng)先清洗濾器，再更換濾膜。5 除菌過(guò)濾法過(guò)濾過(guò)程中無(wú)菌保證與過(guò)濾液體的初始生物負(fù)荷及過(guò)濾器的對(duì)數(shù)下降值LRV（Log Reduction Value）有關(guān)。LRV系指規(guī)定條件下，被過(guò)濾液體過(guò)濾前的微生物數(shù)量與過(guò)濾后的微生物數(shù)量比的常用對(duì)數(shù)值。即：LRV=lgN0-LgN式中N0為產(chǎn)品除菌前的微生物數(shù)量。N為產(chǎn)品除菌后的微生物數(shù)量。5 除菌過(guò)濾法在過(guò)濾除菌中，一般無(wú)法對(duì)全過(guò)程中過(guò)濾器的關(guān)鍵參數(shù)（濾膜孔徑的大小及分布，濾膜的完整性及LRV）進(jìn)行監(jiān)控。因此，在每一次過(guò)濾除菌前后均應(yīng)作濾器的完整性試驗(yàn)，即氣泡點(diǎn)試驗(yàn)或壓力維持試驗(yàn)或氣體擴(kuò)散流量試驗(yàn)。確認(rèn)

9、濾膜在除菌過(guò)濾過(guò)程中的有效性和完整性。除菌過(guò)濾器的使用時(shí)間不應(yīng)超過(guò)一個(gè)工作日，否則應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。5 除菌過(guò)濾法SAL：（Sterility Assurance Level）無(wú)菌保證水平，一批物品的無(wú)菌特性一般以物品滅菌后微生物存活的概率來(lái)表示。最終滅菌產(chǎn)品微生物存活的概率不得高于10-6已滅菌產(chǎn)品達(dá)到的無(wú)菌保證水平可通過(guò)驗(yàn)證確定。F0值：為標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間，系滅菌過(guò)程賦予被滅菌物品121 下的滅菌時(shí)間。D值：微生物的耐熱參數(shù)，系指一定溫度下， 將微生物殺滅90%所需的時(shí)間，以分鐘表示。1、滅菌程序的驗(yàn)證滅菌程序的驗(yàn)證是無(wú)菌保證的必要條件。滅菌程序經(jīng)驗(yàn)證后，方可交付正式使用。驗(yàn)證內(nèi)容包括：撰寫(xiě)驗(yàn)證方案

10、及制定評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。確認(rèn)滅菌設(shè)備技術(shù)資料齊全、安裝正確，并能處于正常運(yùn)行（安裝確認(rèn)）。確認(rèn)關(guān)鍵控制設(shè)備和儀表能在規(guī)定的參數(shù)范圍內(nèi)正常運(yùn)行（運(yùn)行確認(rèn)）。采用滅菌物品或模擬物品進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，確認(rèn)滅菌效果符合規(guī)定（性能確認(rèn)）。匯總并完善各種文件和記錄，撰寫(xiě)驗(yàn)證報(bào)告。二 滅菌的驗(yàn)證2 滅菌效果的驗(yàn)證（1） 濕熱滅菌效果驗(yàn)證：濕熱滅菌效果驗(yàn)證：應(yīng)進(jìn)行熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)和生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)。以確定滅菌柜空載及不同裝載時(shí)腔室中的熱分布狀況及可能存在的冷點(diǎn)；在空載條件下，確認(rèn)121時(shí)腔室的各點(diǎn)的溫度差值應(yīng)1；使用插入實(shí)際物品或模擬物品內(nèi)的溫度探頭，確認(rèn)滅菌柜在不同裝載時(shí)，最冷點(diǎn)物品的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間（F0）達(dá)到設(shè)

11、定的標(biāo)準(zhǔn)；用生物指示劑進(jìn)一步確認(rèn)在不同裝載時(shí)冷點(diǎn)處的滅菌物品達(dá)到無(wú)菌保證水平。本法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子。 具體方法: 將生物指示劑和被滅菌物品儀一起放入滅菌容器內(nèi)，二層設(shè)3個(gè)點(diǎn)，上層中央1點(diǎn)，下層前后部位各1點(diǎn)；三層設(shè)3個(gè)點(diǎn)，上層與中央部位各1個(gè)點(diǎn)，下層前中后各1個(gè)點(diǎn)。滅菌后取出，5660培養(yǎng)2448h，并取另一支未經(jīng)滅菌的生物指示劑一起培養(yǎng)，作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判斷：顏色的變化。 培養(yǎng)后保持紫色培養(yǎng)后保持紫色 Pass培養(yǎng)后紫色 黃色 Fail陽(yáng)性對(duì)照培養(yǎng)后紫色 黃色 Pass2 滅菌效果的驗(yàn)證（2） 干熱滅菌法驗(yàn)證：干熱滅菌法驗(yàn)證：應(yīng)進(jìn)行熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)、生物指示劑驗(yàn)

12、證試驗(yàn)或細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)。以確認(rèn)滅菌柜中的溫度分布符合設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)、常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)是證明除熱原過(guò)程有效性的試驗(yàn)。一般將不小于1000單位的細(xì)菌內(nèi)毒素加入待去熱原的物品中，證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素至少下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)所用的細(xì)菌內(nèi)毒素一般為大腸桿菌內(nèi)毒素。驗(yàn)證時(shí)，一般采用最大裝載方式。2 滅菌效果的驗(yàn)證（3）氣體滅菌法驗(yàn)證氣體滅菌法驗(yàn)證：采用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，滅菌柜內(nèi)的溫度、濕度、滅菌氣體濃度、滅菌時(shí)間是影響滅菌效果的重要因數(shù)?？刹捎孟铝袦缇鷹l件：溫度（5410）相對(duì)濕度（6010）% 滅菌壓力8105Pa滅菌時(shí)間90min2

13、 滅菌效果的驗(yàn)證滅菌條件應(yīng)予驗(yàn)證方法：滅菌時(shí)，先將滅菌腔室先抽成真空，然后通入蒸汽使腔室內(nèi)達(dá)到設(shè)定的溫濕度平衡的額定值，再通入經(jīng)過(guò)濾和預(yù)熱的環(huán)氧乙烷氣體。滅菌過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控腔室的溫度、濕度、壓力、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時(shí)間。必要時(shí)使用生物指示劑監(jiān)控滅菌效果。本法滅菌程序的控制具有一定難度，整個(gè)滅菌過(guò)程應(yīng)在技術(shù)熟練人員的監(jiān)督下進(jìn)行。滅菌后，應(yīng)采取新鮮空氣置換，使殘留環(huán)氧乙烷和其他易揮發(fā)性殘?jiān)ⅰ２?duì)環(huán)氧乙烷殘留物和反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)控，以證明其不超過(guò)規(guī)定濃度，避免產(chǎn)生毒性。環(huán)氧乙烷滅菌法驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)進(jìn)行如下試驗(yàn)：泄漏試驗(yàn)，以確認(rèn)滅菌腔室的密閉性。（4）輻射滅菌法驗(yàn)證：輻射滅菌法驗(yàn)證：采用輻射滅菌法滅

14、菌的無(wú)菌產(chǎn)品其SAL應(yīng)10-6.射線輻射滅菌所控的參數(shù)主要是輻射劑量（指滅菌物品的吸收劑量）。該劑量的制定應(yīng)考慮滅菌物品的適應(yīng)性及可能污染的微生物最大數(shù)量及最強(qiáng)抗輻射力，所使用的劑量事先應(yīng)驗(yàn)證其有效性及安全性。常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy。對(duì)最終產(chǎn)品、原料藥、某些醫(yī)療器材應(yīng)盡可能采用低輻射劑量滅菌。滅菌前，應(yīng)對(duì)被滅菌物品微生物污染的數(shù)量和抗輻射強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定，以評(píng)價(jià)滅菌過(guò)程賦予該滅菌物品的無(wú)菌保證水平。2 滅菌效果的驗(yàn)證滅菌時(shí)，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)或物理方法對(duì)滅菌物品吸收的輻射劑量進(jìn)行監(jiān)控，以充分證實(shí)滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。如采用與滅菌物品一起被輻射的放射性劑量計(jì)，劑量計(jì)要置于規(guī)定

15、的部位。60Co-射線輻射滅菌法驗(yàn)證時(shí)，除進(jìn)行生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)外，還應(yīng)確認(rèn)空載和裝載時(shí)滅菌腔內(nèi)的輻射劑量的分布圖、滅菌物品的吸收劑量及最大和最小吸收劑量的分布、滅菌物品的均一性、滅菌腔內(nèi)物品的裝載方式等。常用的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子。2 滅菌效果的驗(yàn)證三 、生物指示劑生物指示劑是一類特殊的活微生物制品，可用于確認(rèn)滅菌設(shè)備的性能，滅菌程序的驗(yàn)證、生產(chǎn)過(guò)程滅菌效果的監(jiān)控等。可用于滅菌驗(yàn)證中的生物指示劑一般是細(xì)菌的孢子。 1、生物指示劑用微生物的基本要求： （1）菌種的耐受性 應(yīng)大于需要滅菌物品 中所有可能污染菌的耐受性。 （2）菌種應(yīng)無(wú)致病性。 （3）菌株應(yīng)穩(wěn)定。存活期長(zhǎng)，易于保存。 （4

16、）易于培養(yǎng)。若使用休眠孢子，生物 指示劑中休眠孢子含量要90%。2、常用的生物指示劑 （1）濕熱滅菌法：嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子 （2）干熱滅菌法：枯草芽孢桿菌孢子 （3）輻射滅菌法：短小芽孢桿菌孢子 （4）氣體滅菌法：枯草芽孢桿菌孢子 （5）過(guò)濾除菌法：缺陷假單孢菌 滅菌條件應(yīng)予驗(yàn)證。滅菌時(shí)，先將滅菌腔室先抽成真空，然后通入蒸汽使腔室內(nèi)達(dá)到設(shè)定的溫濕度平衡的額定值，再通入經(jīng)過(guò)濾和預(yù)熱的環(huán)氧乙烷氣體。滅菌過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控腔室的溫度、濕度、壓力、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時(shí)間。必要時(shí)使用生物指示劑監(jiān)控滅菌效果。本法滅菌程序的控制具有一定難度，整個(gè)滅菌過(guò)程應(yīng)在技術(shù)熟練人員的監(jiān)督下進(jìn)行。滅菌后，應(yīng)采取新鮮空氣

17、置換，使殘留環(huán)氧乙烷和其他易揮發(fā)性殘?jiān)?。并?duì)環(huán)氧乙烷殘留物和反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)控，以證明其不超過(guò)規(guī)定濃度，避免產(chǎn)生毒性。具體驗(yàn)證方法1 濕熱滅菌常用的生物指示劑：嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子。將生物指示劑和被滅菌物品儀一起放入滅菌容器內(nèi)，二層設(shè)3個(gè)點(diǎn)，上層中央1點(diǎn)，下層前后部位各1點(diǎn)；三層設(shè)3個(gè)點(diǎn)，上層與中央部位各1個(gè)點(diǎn)，下層前中后各1個(gè)點(diǎn)。滅菌后取出，5660培養(yǎng)2448h，并取另一支未經(jīng)滅菌的生物指示劑一起培養(yǎng)，作為陽(yáng)性對(duì)照。2 干熱滅菌、氣體滅菌均可用枯草黑色變種芽孢作為生物指示劑驗(yàn)證其效果 。 具體操作方法可參照生物指示劑說(shuō)明書(shū)。 五 消毒與滅菌消毒：用化學(xué)的或物理的方法殺滅或清除傳播媒介上的

18、病原微生物，使其達(dá)到無(wú)傳播感染水平上的處理過(guò)程。滅菌：用化學(xué)的或物理的方法殺滅或清除傳播媒介上的一切微生物，使其達(dá)到無(wú)活微生物存在的處理過(guò)程。滅菌是最徹底的消毒。1、消毒的方法物理方法：用物理因素殺滅或清除病原及其它有害微生物。干熱法濕熱法 微波法紅外線法過(guò)濾吸附法化學(xué)方法：利用化學(xué)藥物殺滅病原微生物的方法。 用于消毒的化學(xué)藥物稱為化學(xué)消毒劑?；瘜W(xué)消毒的主要特點(diǎn)：使用方便，無(wú)需特殊設(shè)備；適用范圍廣，各種物品、空氣、水、人體和環(huán)境等均可使用； 節(jié)約，一次性投資少；使用方法多樣，可浸泡、擦拭、噴霧、熏蒸以及與物理因子協(xié)同等；存在毒性、腐蝕性、有污染環(huán)境的可能性。1、消毒的方法高水平（高效）消毒劑：可殺滅一切微生物，包括細(xì)菌繁殖體、細(xì)菌芽孢、真菌、結(jié)核桿菌、親水病毒、親脂病毒（戊二醛、二氧化氯、過(guò)氧乙酸、環(huán)氧乙烷等）；中水平（中效）消毒劑：除不能殺滅細(xì)菌芽孢外，可殺滅其他各種微生物（醇類消毒劑、酚類消毒劑、含碘消毒劑等）