離體蛙心灌流

1、離體蛙心灌流實(shí)驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)離體蛙心灌流的方法；觀察鈉、鉀、鈣三種離子對心臟活動的影響。觀察腎上腺素、乙酰膽堿等因素對心臟活動的影響。實(shí)驗器材動物：蟾蜍器材：斯氏蛙心套管、套管夾、常用手術(shù)器械、任氏液、張力換能器、蛙心夾、0.65%NaCl溶液、 5%NaCl溶液、 2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:5000腎上腺素溶液、1:10000乙酰膽堿溶液、300u/ml肝素溶液實(shí)驗方法與步驟1、離體蛙心的制備：雙毀髓左主動脈結(jié)扎左右兩主動脈下方活結(jié)備用剪口，插管（管內(nèi)盛任氏液與肝素）結(jié)扎備用線（套管左右主動脈）剪斷動脈結(jié)扎并剪斷靜脈。2、固定套管并用任氏液換洗血液；進(jìn)入RM6240系統(tǒng)。3、觀察并

2、記錄正常心搏曲線；4、向套管內(nèi)分別加入以下溶液（0.65%NaCl溶液2d 、 5%NaCl溶液2d 、1%KCl溶液 1-2d 、2%CaCl2溶液1d 、1:5000腎上腺素溶液1-2d 、1:10000乙酰膽堿溶液1-2d ） ，觀察并記錄曲線變化。實(shí)驗結(jié)果此圖為蛙心正常心搏曲線 此圖為換入0.65% Nacl溶液后蛙心收縮曲線的變化由波形圖可知，Nacl可使心肌收縮能力減弱，心率減慢，導(dǎo)致心率曲線幅度減小。此圖為加入5%Nacl溶液后蛙心收縮曲線的變化有波形圖可知，向任氏液中加入5%Nacl之后心搏曲線的幅度大大降低。此圖為加入Kcl溶液后蛙心收縮曲線的變化KCl導(dǎo)致心臟肌細(xì)胞收縮能力

3、減弱，心率減慢。此圖為加入Cacl2溶液后蛙心收縮曲線的變化由上圖可知，CaCl2可使心肌收縮能力增強(qiáng)，心率加快，導(dǎo)致心率曲線幅度增加。此圖為加入腎上腺素后蛙心收縮曲線的變化由波形圖可知，腎上腺素可使心肌收縮力增強(qiáng)，心率加快。此圖為加入乙酰膽堿后蛙心收縮曲線的變化由上圖可知，乙酰膽堿可使心肌收縮能力減弱，心率減慢，導(dǎo)致心率曲線幅度降低。實(shí)驗結(jié)果分析離體蛙心仍可具有揭露性收縮，是因為作為蛙心正常起搏點(diǎn)的經(jīng)脈都（其 功能相當(dāng)于 人體心臟的竇房結(jié)）能產(chǎn)生自動節(jié)律，通過傳導(dǎo)系統(tǒng)維持心臟的波動，心臟正常德節(jié)律性興奮和收縮活動必須在適宜 的禮花環(huán)境才能維持，一旦適宜的環(huán)境被干擾或破壞，心臟后東就會受到影響

4、。Na離子對心搏曲線的影響：0.65%NaCl對蟾蜍來說是等滲溶液,完全置換任氏液后,細(xì)胞外的Ca2+濃度,因此心肌細(xì)胞動作電位期間Ca2+內(nèi)流減少，故心肌細(xì)胞漿Ca2+濃度降低，因此心肌收縮力降低。另外，細(xì)胞外K+濃度大大降低,使心肌的收縮能力減弱,心率減慢。同樣5%Nacl溶液可以使細(xì)胞外的Ca2+濃度大大降低，使得心肌細(xì)胞動作電位期間Ca2+內(nèi)流減少，故心肌故心肌細(xì)胞漿Ca2+濃度降低，從而心肌收縮力大大降低，加之細(xì)胞外K+濃度大大降低,使心肌的收縮能力減弱,心率減慢。K離子對心搏曲線的影響：細(xì)胞外K+時,對興奮性的影響與其濃度升高的程度有關(guān).當(dāng)K+輕度或中度升高時,細(xì)胞內(nèi)外K+梯度減小

5、,K+外流力量減小,靜息電位(RP)的絕對值減小,和閾電位(TP)的差值減小,細(xì)胞的興奮性升高;當(dāng)K+大幅度升高時, RP的絕對值減小到-55mv時,鈉通道的開放效率降低,鈉通道逐漸失活,細(xì)胞的興奮性降低或喪失,嚴(yán)重時,可導(dǎo)致心肌停搏于舒張狀態(tài).此時,僅由Ca2+來構(gòu)成動作電位,故上升支小而緩慢,使興奮傳導(dǎo)性降低.當(dāng)細(xì)胞外K+時,細(xì)胞膜對鉀的通透性升高,心室肌細(xì)胞復(fù)極過程加速,平臺期縮短,不應(yīng)期也縮短. 高鉀對心肌收縮功能有抑制作用.因為細(xì)胞外的鉀和鈣在細(xì)胞膜上有競爭性抑制,因此當(dāng)膜外K+時,平臺期內(nèi)流的Ca2+減少,心肌細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度難于升高,減小了Ca2+的興奮-收縮偶聯(lián)作用,從而減

6、低了心肌的收縮能力.Ca離子對心搏曲線的影響：細(xì)胞外Ca2+在心肌細(xì)胞膜上對Na+的內(nèi)流有競爭性的抑制作用,稱為膜屏障作用.因此,細(xì)胞外Ca2+濃度發(fā)生變化時,與Na+的內(nèi)流和Ca2+的內(nèi)流相關(guān)的電活動都將受到影響,而對靜息電位則無明顯作用.當(dāng)細(xì)胞外Ca2+濃度時,對Na+的屏障作用,由于這種抑制作用,觸發(fā)Na+快速內(nèi)流產(chǎn)生0期去極化就比較困難,即TP上移,從而與RP的差距增大,興奮性降低;發(fā)生興奮后,Na+內(nèi)流的抑制則導(dǎo)致0期去極化速度和幅度降低,傳導(dǎo)性下降. Ca2+內(nèi)流是慢反應(yīng)細(xì)胞0期去極化和快反應(yīng)細(xì)胞2期的主要離子活動.當(dāng)細(xì)胞外Ca2+濃度,使Ca2+內(nèi)流加快,慢反應(yīng)細(xì)胞0期去極化加快

7、加強(qiáng),傳導(dǎo)性升高.細(xì)胞膜對Ca2+的通透性升高,心室肌細(xì)胞平臺期Ca2+內(nèi)流增加,心肌收縮力增強(qiáng)增快;當(dāng)細(xì)胞外Ca2+濃度過高時,心臟將停搏于收縮狀態(tài),稱為鈣僵直。Ach對心搏曲線的影響：乙酰膽堿與心肌細(xì)胞膜上的M型膽堿能受體結(jié)合,抑制AC,細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度降低,肌漿網(wǎng)釋放的Ca2+減少,心肌的收縮力量減弱,心率減慢.乙酰膽堿與竇房結(jié)細(xì)胞膜上的Ikach通道結(jié)合,促進(jìn)K+的外流,最大復(fù)極電位增大,自律性降低,此外還抑制4期的內(nèi)向電流If,使心率減慢。腎上腺素對心搏曲線的影響：腎上腺素與心肌細(xì)胞膜上的腎上腺素能受體結(jié)合,激活腺苷酸環(huán)化酶(AC),使細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度升高,激活PKA和細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)磷酸化過程,使心肌細(xì)胞膜上的鈣通道激活,動作電位平臺期Ca2+內(nèi)流增加,心肌收縮力增強(qiáng);另外去甲腎上腺素能加強(qiáng)4期的內(nèi)向電流If,使心率加快. 在體內(nèi),心臟的活動受自主神經(jīng)的雙重支配,交感神經(jīng)興奮時,其末梢釋放腎上腺素,使心肌收縮力量增強(qiáng),心率加快;而迷走神經(jīng)興奮時,作用相反。注意事項1、制備蛙心標(biāo)本時，勿傷靜