茶薪菇總氮含量的測定研究

1、茶薪菇總氮含量的測定研究                                        作者：嚴志強 熊耀康 吳巧鳳 【摘要】  目的測定茶薪菇中總氮的含量及比較凱氏定氮法與分光光度法

2、在茶薪菇總氮含量測定的優(yōu)越。方法采用凱氏定氮法與分光光度法。結(jié)果兩種方法測得茶薪菇總氮含量基本相同，為30.70mg/g。兩種方法無顯著性差異（P>0.1）。結(jié)論分光光度法法具有操作簡便，快速，準確等優(yōu)點，可以用于測定總氮的含量。 【關(guān)鍵詞】  茶薪菇；總氮；凱氏定氮法；分光光度法；含量測定Abstract：ObjectiveTo measure the nitrogen content in Agrocybe cylindracea R.Maire，compare the advantages of Kai's Nitrogentesting method and S

3、pectrophotometric method.MethodTake Kai's Nitrogentesting method and Spectrophotometric method.ResultThe two methods were almost the same in the measurement of nitrogen，i.e.30.70mg/g，which had no marked difference by t test.ConclusionSpectrophotometric method is simple and convenient for operati

4、on，quickly and correctly，and can be used for measurement of total nitrogen.Key words：Agrocybe cylindracea R.Maire；total nitrogen；Kai's Nitrogentesting method；Spectrophotometric method；content measurement    茶薪菇（Agrocybe Cylindracea （Dc.ex Fr.） R.Maire）又名茶樹菇、楊樹菇、柳松茸。屬擔子菌綱，傘菌目，糞銹傘科，

5、田蘑屬。民間稱之為“神菇”，是一種新開發(fā)的野生真菌。該菇味道鮮美，脆嫩爽口，營養(yǎng)豐富。據(jù)報道茶薪菇中含有豐富的氨基酸和礦物質(zhì)元素，特別含有人體需要的17中氨基酸，其中賴氨酸含量高達1.75%，經(jīng)常使用能增強記憶，具有健脾、利尿、祛濕、止瀉等功效。近年來發(fā)現(xiàn)它能提高機體免疫能力，抗衰老，降低膽固醇、防癌、抗癌的特殊功能，是一種不可多得的食藥兼用珍稀菌類1。目前對茶薪菇的研究主要集中在多糖的研究，李寧寧等2以脈沖式電流直接刺激離體腓腸肌作為疲勞模型，探討了茶薪菇多糖對改善疲勞狀態(tài)下肌力減退的作用，傅明輝等3茶薪菇子實體多糖的抗氧化性進行了研究，李肇獎等4通過正交試驗等方法研究了茶薪菇菌絲體多糖提取

6、方法，而對其總氮含量的測定尚無報道。為了探討其營養(yǎng)成分，本文采用凱氏定氮法5和分光光度法6對其總氮的含量進行了測定，并對兩種方法進行了初步的探討。1  材料1.1  藥材  茶薪菇產(chǎn)自浙江慶元縣并由浙江中醫(yī)藥大學熊耀康教授鑒定為糞銹傘科茶薪菇（Agrocybe Cylindracea （Dc.ex Fr.）R.Maire）.1.2  試劑  消化液（30%H2O2:H2SO4=4:1）；萘氏試劑（堿性的碘化汞鉀：按照2005版中國藥典配制）；聚乙烯醇液（0.1g/L），混合指示液（1份的0.1甲基紅乙醇溶液與5份的0.1溴甲酚綠溶液臨用時混合）

7、。其它試劑均為分析純。1.3  儀器  全自動回流消化儀（重慶南岸玻璃儀器廠）、772型可見分光光度計（普惠上海分析儀器有限公司）、凱氏定氮儀。2  實驗方法與結(jié)果2.1  凱氏定氮法2.1.1  鹽酸標準溶液的制備  精確移取36.5%的濃鹽酸2.5ml于500ml的容量瓶中，加水稀釋，定溶后用基準硼砂標定即得濃度為0.06151mol·L-1標準溶液。2.1.2  供試品液的制備  精密稱取0.5g茶薪菇樣品加入到全自動回流消化儀中，再加入0.2gCuSO4，3.0gK2SO4和10ml濃硫酸，放置電

8、爐上加熱，至液體變成透明澄清后繼續(xù)加熱30min，冷卻后將液體定溶至100ml容量瓶中，作為供試品溶液。2.1.3  總氮的測定  取10ml供試品液加入凱氏定氮儀的蒸餾瓶中，按藥典法5蒸餾，蒸出液用鹽酸標準溶液滴定至溶液由藍綠色變?yōu)榛易仙涗淃}酸所用的體積，算出總氮的含量。并用空白試驗校正。結(jié)果見表1。表1  總氮含量測定結(jié)果（略）2.2  分光光度法2.2.1  標準品液的制備：精密稱取0.7630gNH4Cl，加入至250ml容量瓶中，用蒸餾水溶解，定溶。即得含氮濃度為79.94mg·L1標準品溶液。2.2.2  供

9、試品液的制備：精密稱取0.3g茶薪菇樣品加入到全自動回流消化儀中，再加5ml濃硫酸，加熱至全部變黑后，加消化液8.0ml，加熱回流消化至無色透明，再繼續(xù)加熱2min以除去氧化劑。冷卻后用蒸餾水定容到50ml容量瓶中，即得。平行做5份。2.2.3  標準曲線的制作  取7個25ml的容量瓶，各加標準品液0.00，0.30，0.60，0.90，1.20，1.50，1.80ml，加聚乙烯醇液20ml，加奈氏試劑1.00ml，再用聚乙烯醇液定容。同行試劑空白，在460nm處測定吸光度，得吸光度A與濃度C（g）的回歸方程。A0.0047C-0.0115，r=0.9995，表明在0.0

10、0143.89g濃度范圍內(nèi)，吸光度與濃度呈線性關(guān)系。結(jié)果見表2。嚴志強，等:  茶薪菇總氮含量的測定研究                             表2  吸光度測定結(jié)果（略）2.2.4  樣品的含量測定：精密吸取5份供試品液0.75ml入25ml容量瓶中，加聚乙烯醇液20m

11、l，按“2.2”項下操作，測定吸光度，并計算樣品中總氮含量，結(jié)果見表3。表3  總氮含量的測定結(jié)果（略）2.2.5  穩(wěn)定性試驗：用新鮮配制的標準NH4Cl溶液，取一定量加入25ml的容量瓶中，加聚乙烯醇液20ml，按“2.2”項下操作，在06h內(nèi)測定其吸光度，結(jié)果表明在4h內(nèi)吸光度穩(wěn)定。見表4。表4  穩(wěn)定性試驗結(jié)果（略）2.2.6  加樣回收試驗：精密吸取0.30ml已知濃度的供試品液（5份）入25ml容量瓶，各加入23.98g標準品溶液，其余操作按“2.2”項下方法進行，測定吸光度，并按回收率（%）=測得值/（樣品量+加入量）×100%，

12、計算回收率。結(jié)果見表5。表5  加樣回收試驗結(jié)果（略）3  討論3.1  實驗分別采用凱氏定氮法與分光光度法測定茶薪菇中總氮含量，由表1和表3可知兩種方法所測得總氮含量基本相同。經(jīng)統(tǒng)計學t檢驗法處理，實驗結(jié)果表明兩種測定方法無顯著性差，P>0.1。3.2  目前國內(nèi)測定食品與中藥中的總氮多用凱氏定氮法，該方法以其測定結(jié)果穩(wěn)定，準確，被國內(nèi)外廣泛采用7，但從快速和方便的要求來衡量，此法操作繁瑣，消耗時間長，一般為45h，另試劑消耗量大，并消化時排放的SO2對人體健康造成直接危害，而且費時，費電，費水8。3.3  本實驗采用了分光光度法測定總

13、氮含量，使用全自動回流消化裝置，可以將消化時排放的SO2吸收掉，消除環(huán)境污染；以過氧化氫濃硫酸為消化液，使消化的速度大大的提升，節(jié)省時間。并取代了蒸餾滴定步驟，既節(jié)約了時間和水電，又克服了凱氏定氮法操作過程繁瑣，儀器安裝復(fù)雜、試劑消耗量大等缺點。且具有操作簡便，快速，準確等優(yōu)點，用萘氏試劑顯色，并加入聚乙烯醇液試劑可以穩(wěn)定萘氏試劑與氨形成的膠狀結(jié)合物，使測定液透明，顯色穩(wěn)定。實驗結(jié)果表明其方法穩(wěn)定性可達4h，其平均回收率為98.44。3.4  由本實驗可知，浙江慶元生產(chǎn)的茶薪菇總氮含量較高，折算成粗蛋白含量為19.31%，具有較高的營養(yǎng)價值，值得進一步開發(fā)和研究?！緟⒖嘉墨I】  1 顏麗君，劉國剛.北方茶薪菇栽培技術(shù)J.中國林副特產(chǎn)，2001，（2）:118.2 李寧寧.茶薪菇多糖延緩離體骨骼肌疲勞的研究J.濱州醫(yī)學院學報，2004，27（1）:79.3 傅明輝.薪菇子實體多糖的分離純化和抗氧化活性的測定J.生物技術(shù)，2004，11（5）:321323.4 李肇獎.茶薪菇茵絲體多鏞捉取方法的研究J.中國食品添加劑，2004（5）：14.5 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典S