血清學實驗教學

1、血清學實驗原理及應用血清學實驗原理及應用血清學實驗的建立及概念血清學實驗的建立及概念1883年 俄國動物學家 發(fā)現白細胞吞噬作用1890年 德國醫(yī)師、日本學者 發(fā)現白喉抗毒素1894年 比利時血清學家 發(fā)現補體1896年 H. Durham 發(fā)現凝集反應1897年 R. Kraus 發(fā)現沉淀反應1900年 K. Landsteiner 發(fā)現ABO血型1900年 J. Bordet 發(fā)現補體結合反應1900s 英國醫(yī)師 發(fā)現調理素1945年 R.Owen 同卵雙生的兩只小牛的不同血型可以相互耐受1948年 C.Snell 發(fā)現組織相容性抗原1953年 R.Billingham 成功進行了人工耐受

2、試驗1956年 Witebsky 建立自身免疫動物模型1980s 發(fā)現眾多細胞因子， 受體、基因及其生物活性研究 建立細胞免疫學說建立細胞免疫學說免疫學（抗感染免疫）免疫學（抗感染免疫）血清學實驗血清學實驗建立體液免疫學說建立體液免疫學說免疫學免疫學免疫學（分子免疫學）免疫學（分子免疫學）抗原抗體結合反應 血清學反應的實質血清學反應的實質血清學實驗的基本原理血清學實驗的基本原理n分子表面結合（非共價鍵結合）n親水膠體轉化為疏水膠體水化膜電荷血清學反應的特點血清學反應的特點n特異性n可逆性n比例性n反應的階段性特異性結合階段可見反應階段影響血清學反應的因素影響血清學反應的因素n抗原抗體本身的性質

3、n電解質n酸堿度n溫度血清學反應的優(yōu)缺點n不需要特殊儀器設備，操作簡便。n靈敏度低，絕大多數為定性測定。血清學試驗的應用n傳染病、寄生蟲病、腫瘤、自身免疫病、變態(tài)反應性疾病的確診 n疫苗免疫效果監(jiān)測 n人群免疫水平監(jiān)測n生物活性物質的超微定量、物種及微生物鑒定和分型 n基因分離，克隆篩選，表達產物的定性、定量分析和純化等，已經成為現代分子生物學研究的重要手段 抗原抗體反應類型反應類型實驗技術判斷方法凝集反應直接凝集試驗間接凝集試驗凝集抑制試驗肉眼或放大鏡或顯微鏡觀察出現的凝集現象協(xié)同凝集試驗抗球蛋白試驗冷凝集素試驗液相沉淀試驗觀察沉淀環(huán)沉淀反應瓊脂擴散試驗觀察沉淀線或沉淀環(huán)瓊脂電泳技術觀察沉淀

4、峰或沉淀弧補體參與的反應補體溶血試驗觀察或測定溶血現象補體結合試驗中和反應病毒中和試驗觀察毒性喪失情況毒素中和試驗熒光免疫技術檢測熒光放射免疫技術檢測放射性強弱免疫標記技術酶標記免疫技術檢測酶催化的顯色反應發(fā)光免疫技術檢測發(fā)光強度金標免疫技術檢測金顆粒沉淀抗原抗體反應類型反應類型實驗技術判斷方法凝集反應直接凝集試驗間接凝集試驗凝集抑制試驗肉眼或放大鏡或顯微鏡觀察出現的凝集現象協(xié)同凝集試驗抗球蛋白試驗冷凝集素試驗液相沉淀試驗觀察沉淀環(huán)沉淀反應瓊脂擴散試驗觀察沉淀線或沉淀環(huán)瓊脂電泳技術觀察沉淀峰或沉淀弧補體參與的反應補體溶血試驗觀察或測定溶血現象補體結合試驗中和反應病毒中和試驗觀察毒性喪失情況毒素

5、中和試驗熒光免疫技術檢測熒光放射免疫技術檢測放射性強弱免疫標記技術酶標記免疫技術檢測酶催化的顯色反應發(fā)光免疫技術檢測發(fā)光強度金標免疫技術檢測金顆粒沉淀ELISA的基本原理 ELISA-enzyme-linked-immunosorbent assay 以酶作為標記指示物、以抗原抗體反應為基礎的固相吸附測定方法。 固相支持物及包被的抗原或抗體、 酶標記的抗體或抗原、 酶反應底物。ELISA原理示意圖原理示意圖ELISA測定常用模式n雙抗體夾心法測抗原n雙抗原夾心法測抗體n競爭法測抗原n競爭法測抗體n間接法測抗體n固相捕獲法酶免疫試驗的優(yōu)點和局限性n優(yōu)點1.特異性高2.靈敏性強3.操作簡便4.試劑穩(wěn)定5.對環(huán)境無污染n局限性1.影響及干擾試驗因素多2.定性ELISA試驗中cutoff值3.“灰區(qū)”樣本的確定血清學試驗的發(fā)展趨向n反應的微量化和自動化 n方法的標準化和試劑的商品化n技術的敏感、特異和精密化n檢測技術的系列化n方法簡便快速 參考文