調(diào)肝脾方對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠紅細胞免疫功能的影響(一)

1、調(diào)肝脾方對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠紅細胞免疫功能的影響(一)    【摘要】 目的探討調(diào)肝脾方對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠紅細胞免疫功能的影響。方法采用健脾和肝、除痹止痛為原則組方，以補肝腎方、火把花根為陽性對照組，建立AA大鼠模型，隨機分為調(diào)肝脾方組、補肝腎方組、芬必得組、火把花根片組、正常對照組、模型組6組，觀察各組對AA大鼠足腫脹度及紅細胞免疫功能的影響。結(jié)果調(diào)肝脾方能明顯降低AA大鼠原發(fā)與繼發(fā)性關(guān)節(jié)腫脹度，表現(xiàn)出較好的抗炎作用，并能顯著增強紅細胞的免疫功能。結(jié)論調(diào)肝脾方具有明顯的抗炎作用，其作用機理與增強紅細胞免疫功能有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 調(diào)肝脾方藥；佐劑性關(guān)節(jié)炎；

2、RBC-C3b受體花環(huán)率； RBC-IC花環(huán)率The Influence of the Means of Attempering the Liver and the Spleen on AA Rats' Red Blood Cell Immunity FunctionAbstract:ObjectiveTo study the influence of the means of attempering the liver and the spleen on red blood cell immune function in adjucant arthritis (AA) rats. M

3、ethodsThe arthritis model was induced by intracutaneously injection of complete Freud's adjurant in the right hind foot pad of rat. Th rats are randomly divided into 6 groups: the means of attempering the liver and the spleen group, the means of complementing the liver and the kidney group, Fenb

4、id group, Huobahuagen pian group, normal control group, and model group and the foot swelling degree and the red blood cell immunity function of AA rats. ResultsThe means of attempering the liver and the spleen could obviously reduce the foot swelling degree, and of AA rats observed showed fairy ant

5、i-inflammntory effect. The red blood cell immune function could notably be strengthened. ConclusionThe means of attempering the liver and the spleen has obvious anti-inflammation function, and the mechanism of action is relevant to strengthen the red blood cell immune function.Key words:The means of

6、 attempering the liver and the spleen; Adjuvant arthritis; RBCC3b reception body garlend rate; RBCIC garland rate類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis, RA)屬于自身免疫性疾病，是一種以周圍關(guān)節(jié)對稱性炎癥為主、伴反復(fù)發(fā)作的慢性全身性疾病，屬于中醫(yī)痹證范疇。歷代醫(yī)家對治療痹證積累了豐富的經(jīng)驗，并根據(jù)痹癥的病因病機不同，進行不同的組方配伍，如疏風(fēng)祛濕，化痰祛淤，助陽散寒，養(yǎng)陰清熱，舒筋通絡(luò)，強筋壯骨等，形成了諸多行之有效的治療方法。筆者經(jīng)大量臨床文獻研究1，2發(fā)現(xiàn)，“

7、肝脾失調(diào)”有可能是RA發(fā)病的重要基礎(chǔ)，且調(diào)肝脾方藥對RA治療亦有良好的效果。為進一步探討中藥調(diào)和肝脾配伍抗炎增效的作用機制，筆者采用健脾和肝、除痹止痛為原則組方，并以補肝腎方和火把花根作為陽性對照組,探討調(diào)肝脾方的抗炎作用，以及對紅細胞免疫功能的影響，為臨床治療RA提供藥理學(xué)依據(jù)。1 材料與方法1.1 動物、分組及造模、給藥雄性Wistar大鼠60只，體重(180±20)g，購于山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。按體重隨機分為6組，調(diào)肝脾組（H1）、補肝腎組(H2)、芬必得組(X)、火把花根片組(Z)、正常對照組（K組）、模型組（O組），每組10只。佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠模型建立參照文獻

8、3，4方法，實驗前大鼠稱重, 標號，測量左右后足足踝周長，按1 ml/100 g大鼠灌胃給藥，連續(xù)3 d，1次/d。于第3次給藥后1 h，每鼠右后足足跖皮內(nèi)注射Freund's完全佐劑0.05 ml致炎。致炎后正常飼養(yǎng)，每8 h灌胃給藥1次，共2次。于致炎后18 h復(fù)測右后足足踝周長，觀察對原發(fā)性病變的影響。之后每7天復(fù)稱體重、復(fù)測左右后足足踝周長，觀察各組大鼠繼發(fā)性病變。并于致炎后19 d再行灌胃給藥，連續(xù)7 d。致炎后26 d采血處死，檢測各項指標。1.2 藥物1.2.1 調(diào)肝脾方由白芍、徐長卿、白術(shù)、巴戟天、秦艽、白薇等組成；補肝腎方由生地、鹿銜草、骨碎補、淫羊藿、雞血藤、萊菔子

9、等組成。以上藥材均購自濟南市建聯(lián)藥店，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥鑒定教研室鑒定，符合中國藥典2000年版標準。煎煮兩次，合并藥液，濃縮至含生量2.34 g/ml，用時蒸餾水稀釋至所需濃度。1.2.2 火把花根片0.18 g/片，重慶市中藥研究院制藥廠產(chǎn)品，批號：021135，蒸餾水配制成0.029 g/ml的混懸液。1.2.3 芬必得膠囊300 mg/粒，由中美天津史克制藥有限公司出品，批號：03040226b，蒸餾水配制成0.005 4 g/ml的混懸液。1.3 試劑及儀器Freund's完全佐劑，為Sigma公司產(chǎn)品；戊二醛25水溶液，由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院購得，臨用時用生理鹽水配成

10、濃度為0.25的戊二醛；DDL-5冷凍離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠。1.4 觀察指標及方法1.4.1 關(guān)節(jié)腫脹度計算方法：原發(fā)性腫脹度分別以致炎后18 h 右后足足踝周長減致炎前右后足足踝周長；繼發(fā)性腫脹度分別以致炎后9，16，23，26 d左右后足足踝周長減致炎前左右后足足踝周長。1.4.2 紅細胞免疫功能檢測RBC-C3b受體花環(huán)實驗：每組每只大鼠腹主動脈取血4 ml（肝素抗凝）以2 000 r/min離心10 min。取紅細胞于生理鹽水配成1.25×107/ml的紅細胞懸液。取50 l此懸液加等量補體致敏酵母菌懸液（1×108/ml），充分混勻。于37水浴30 min后

11、加0.25%戊二醛固定，水平涂片，自然干燥，瑞氏染色，于油鏡下觀察200個紅細胞。以結(jié)合一個或一個以上酵母菌者為一個花環(huán)，花環(huán)形成百分率（）紅細胞花環(huán)數(shù)/200×100。RBC-IC花環(huán)實驗：方法基本同上，不同的是將致敏酵母菌懸液改為未致敏酵母菌懸液。2 結(jié)果2.1 對AA大鼠足腫脹度的影響2.1.1 對原發(fā)性病變的影響結(jié)果見表1。表1 各組對AA大鼠原發(fā)性足腫脹度的影響 (略)2.1.2 對繼發(fā)性病變的影響見表23。表2 各組對AA大鼠繼發(fā)性足腫脹度的影響（略）表3 各組對AA大鼠繼發(fā)性足腫脹度的影響（略）2.2 對AA大鼠紅細胞免疫的影響結(jié)果見表4。表4 各組對AA大鼠RBC-C

12、3b受體花環(huán)率和RBC-IC花環(huán)率影響（略）3 討論3.1 方劑來源及方藥分析本研究調(diào)肝脾方采用健脾和肝、除痹止痛為原則組方。方中白術(shù)苦甘而溫，補脾燥濕以治土虛，并“主風(fēng)寒濕痹”；白芍酸寒除痹，柔肝緩急止痛，土中瀉木，木中疏土，二者共為君藥，起調(diào)肝脾，和寒熱，治痹痛的作用。徐長卿辛溫，祛風(fēng)止痛，行氣活血，利濕解毒；秦艽辛苦，微寒，祛風(fēng)濕，止痹痛，清濕熱，二者共為臣藥，增強君藥的通利關(guān)節(jié)除痹作用。白薇歸肺、肝、胃經(jīng)，清熱利濕，解毒益陰，既可防治蘊邪化熱，又可防止疾病上傳心肺；巴戟天歸肝、腎、脾胃經(jīng)，能補腎陽，強筋骨，健脾胃，祛風(fēng)濕，既增強白術(shù)的溫陽健脾作用，又可防止疾病下傳肝腎，與白薇共為佐使。

13、諸藥合用，補脾勝濕而除痹，柔肝養(yǎng)陰而止痛，使脾健肝和，內(nèi)生諸邪得解，痹痛自止。對照組補肝腎方是從李廷俊教授研制的新藥抗骨增生丸加減而來，其主要功效為益腎壯骨，活血通絡(luò)，除寒止痛，祛風(fēng)利濕、消刺蠲痹，臨床主要用來治療各關(guān)節(jié)部位骨質(zhì)增生，虛寒性風(fēng)濕、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。對照組火把花根片為近年來開發(fā)的治療RA等自身免疫性疾病的新藥?；鸢鸦ǜ犊酀詼?、有毒，具有祛風(fēng)通絡(luò)、活血化淤之功5。但臨床報道其有一定不良反應(yīng)，如惡心、嘔吐、胃脘不適等，個別出現(xiàn)頭昏、失眠6，并可引起婦女閉經(jīng)，血清轉(zhuǎn)氨酶升高等7。3.2 影響紅細胞免疫作用結(jié)果分析紅細胞免疫是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，而參與免疫功能的就是C3b受體，其

14、主要作用為清除血液循環(huán)中的免疫復(fù)合物。紅細胞C3b受體活性的強弱直接影響機體中免疫復(fù)合物被清除的程度。張驥，郭峰8對RA患者研究表明，血清中CIC檢測陽性率較高，致使IC免疫復(fù)合物進一步升高，存積于局部關(guān)節(jié)激活補體系統(tǒng)巨噬細胞和中性粒細胞吞噬IC，釋放炎癥介質(zhì)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)。從本次實驗結(jié)果看，模型組紅細胞受體RBC-C3bR花環(huán)率顯著降低，說明模型大鼠機體清除免疫復(fù)合物的能力較低。與模型組相比較，各給藥組均能顯著提高模型大鼠的RBC-C3bR花環(huán)率，降低模型大鼠的RBC-IC花環(huán)率，而且H1組RBC-IC花環(huán)率明顯低于Z組、補肝腎組，說明調(diào)肝脾方能增強清除免疫復(fù)合物能力，且作用強于火把花根、補肝腎組。本研究結(jié)果顯示補肝腎方清除免疫復(fù)合物能力不及調(diào)肝脾方，與前面消腫結(jié)果一致。該實驗結(jié)果表明調(diào)和肝脾配伍具有明顯的抗炎增效作用，其作用機理與增強紅細胞的免疫功能有關(guān)。此認識與“肝脾失調(diào)”有可能是RA發(fā)病重要基礎(chǔ)的中醫(yī)認識相一致,對此我們將進一步深入探討?！緟⒖嘉墨I】1艾 英，顏文明.治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的經(jīng)驗J.遼寧中醫(yī)雜志，1994，21（4）：153.2單書健，陳子華.古今名醫(yī)臨證金鑒·痹證卷上M.北京：中國中醫(yī)藥出版社，1999，8：244.3徐叔云，卞如濂，陳 修.藥理實驗方法學(xué)，第2版M.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991