阿司匹林原料含量測定及有關(guān)物質(zhì)檢查

1、阿司匹林原料及腸溶片有關(guān)物質(zhì)和含量測定方法比較（中國藥典（2005）和中國藥典（2010），要求結(jié)合大家藥物分析實(shí)驗(yàn)和課本知識(shí)及藥典內(nèi)容進(jìn)行比較，說明各方法的原理及比較方法的優(yōu)缺點(diǎn)一、阿司匹林結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)1結(jié)構(gòu)2理化性質(zhì)阿司匹林為固體，具有一定的熔點(diǎn)。在水中微溶或幾乎不溶，而能溶于乙醇、乙醚、三氯甲烷等有機(jī)溶劑中，根據(jù)溶解行為的差異可作為供試品溶液的配制或含量測定時(shí)滴定介質(zhì)選擇的依據(jù)。（1）酸性：阿司匹林的結(jié)構(gòu)中具有羧基，pKa=3.49水溶液顯酸性，并能與堿發(fā)生中和反應(yīng)。（2）具有酚羥基：阿司匹林結(jié)構(gòu)中都具有潛在的酚羥基，可與鐵鹽試液作用顯色?？捎糜阼b別試驗(yàn)。（3）具有酯結(jié)構(gòu)：阿司匹林結(jié)構(gòu)

2、中具有酯結(jié)構(gòu)，在堿性條件下可水解產(chǎn)生酚羥基和羧酸鹽。阿司匹林原料藥的含量測定1、阿司匹林原料測定（2005版）：直接滴定法（2010年版阿司匹林原料測定與2005版的相同）阿司匹林的含量測定方法：取本品約0.4g，精密稱定，加中性乙醇（對(duì)酚酞指示液顯中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于18.02mg 的C9H8O41直接滴定法 原理：阿司匹林中具羧基，在一定條件下與氫氧化鈉反應(yīng)。測定阿司匹林含量的反應(yīng)式如下：中國藥典（2005年版）阿司匹林的含量測定方法為：取本品約0.4g，精密稱定，加中性乙醇（對(duì)酚

3、酞指示液顯中性）20mL溶解后,加酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（0.lmol/L）滴定。每1mL的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（0.1moL/L）相當(dāng)于18.02mg的阿司匹林（C9H8O4）。滴定度：1ml NaOH滴定液（0.1mol/L） 0.1 mmolNaOH 0.1 mmol阿司匹林 0.1180.16mg 阿司匹林 18.02 mg 阿司匹林含量測定結(jié)果計(jì)算公式為：式中V樣品消耗的氫氧化鈉滴定溶液的體積，mL；T滴定度，mgmL；F氫氧化鈉滴定溶液的濃度校正因子；W待測藥物的稱樣量，g。原理：阿司匹林結(jié)構(gòu)中有游離羧基，顯酸性，pKa36。優(yōu)點(diǎn)：簡便、快速。缺點(diǎn)：酯鍵水解干擾（不

4、斷攪拌、快速滴定）；酸性雜質(zhì)干擾（如水楊酸 （因本法缺乏專屬性，易受酯鍵水解產(chǎn)物水楊酸和醋酸干擾）注：適用范圍：不能用于含水楊酸過高或制劑分析，只能用于合格原料藥的含量測定。1、乙醇的作用：（阿司匹林在水中微溶，但易溶于乙醇.）乙醇溶解阿司匹林；防止阿司匹林在水溶液中滴定過程易水解2、 溶劑用中性乙醇的原因：乙醇對(duì)酚酞指示劑顯酸性，可消耗NaOH而使結(jié)果偏高，故在使用前需用氫氧化鈉中和至對(duì)酚酞指示劑顯中性。（中性乙醇：對(duì)指示劑(酚酞)而言為中性，可消除滴定誤差)3、 滴定應(yīng)在不斷振蕩下稍快進(jìn)行，以防止局部濃度過大，致使阿司匹林酯水解4、 溫度在0-40對(duì)測定結(jié)果無顯著影響。5、 指示劑(酚酞)

5、：阿司匹林與氫氧化鈉形成強(qiáng)堿弱酸鹽，堿性區(qū)顯色，pH8.22、水解后剩余滴定法原理：阿司匹林中酯結(jié)構(gòu)，在堿性溶液中易于水解，加入過量標(biāo)準(zhǔn)堿滴定液，加熱使酯水解，剩余堿用酸回滴。1mol NaOH mol 阿司匹林1mol H2SO4 2 mol NaOH 方法：取本品1.5g，精密稱定加氫氧化鈉滴（0.5mol/l）50.0ml，混合，緩緩煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/l）滴定剩余的氫氧化鈉。并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.5mol/L）相當(dāng)于45.04mg的阿司匹林實(shí)驗(yàn)組：稱量 （過量定量）NaoH滴定 （剩余）NaoH硫酸滴定(消

6、耗體積V)空白組：（過量定量）NaoH 硫酸滴定液滴定（消耗體積V0）NaoH滴定度（T）=0.5X180.16 X 1/2=45.04(mg/ml)（V:樣品測定時(shí)消耗硫酸滴定液體積（ml）V0：空白試驗(yàn)時(shí)消耗硫酸滴定液的體積（ml） T:滴定度 W：供試品稱樣量（g） F:硫酸滴定液濃度校正因子 F=滴定液實(shí)際濃度/滴定液規(guī)定濃度）優(yōu)點(diǎn)：消除了酯鍵水解的干擾缺點(diǎn)：酸性雜質(zhì)干擾注：進(jìn)行空白校正（不加樣品或等量溶劑）的原因：消除CO2的干擾。（堿液在受熱時(shí)易吸收CO2，生成碳酸鹽，當(dāng)用酸回滴時(shí)，算滴定液消耗的體積會(huì)偏小，使測定結(jié)果偏小，故需空白校正。）阿司匹林有關(guān)物質(zhì)檢查阿司匹林的合成工藝：1

7、、阿司匹林中的“有關(guān)物質(zhì)”系指除“游離水楊酸”外的合成原料藥苯酚及其他合成副產(chǎn)物，如醋酸苯酯、水楊酸苯酯、水楊酸水楊酸、水楊酸酐、乙酰水楊酸苯酯、等雜質(zhì)。在2005版藥典當(dāng)中，并沒有單獨(dú)列出有關(guān)物質(zhì)的檢查方法，只通過檢查原料藥的澄清度從而間接的來檢查有關(guān)物質(zhì)的限量。溶液的澄清度檢查碳酸鈉試液中不溶物。不溶物雜質(zhì)有未完全反應(yīng)的酚類，或水楊酸精制時(shí)由于溫度過高，產(chǎn)生脫羧副反應(yīng)的苯酚，以及合成工藝過程中由副反應(yīng)生成的醋酸苯酯、水楊酸苯酯和乙酰水楊酸苯酚等。這些雜質(zhì)均不溶于碳酸鈉試液，而阿司匹林可溶解。利用溶解行為的差異，由一定量阿司匹林在碳酸鈉試液中溶解應(yīng)澄清來加以控制。原理根據(jù)這些雜質(zhì)與阿司匹林的

8、酸性強(qiáng)弱，利用它們在碳酸鈉溶液中的溶解度差異，規(guī)定一定量樣品在碳酸鈉溶液中應(yīng)澄清。方法取本品0.50g，加溫?zé)嶂良s45的碳酸鈉試液10ml溶解后，溶液應(yīng)澄清。而2010版藥典當(dāng)中不僅檢查了藥物的澄明度，還利用了HPLC進(jìn)一步的量化了雜質(zhì)的限量。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行線性梯度洗脫；檢測波長為276nm。阿司匹林峰的保留時(shí)間約為8分鐘，理論板數(shù)按阿司匹林峰計(jì)算不低于5000，阿司匹林峰與水楊酸峰分離度應(yīng)符合要求。時(shí)間（分鐘）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）0.0 100060.02

9、0 80測定法取該品約0.1g，精密稱定，置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液適量，振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液1ml，置200ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照溶液；精密量取對(duì)照溶液10ml，置100ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得靈敏度試驗(yàn)溶液。分別精密量取供試品溶液、對(duì)照溶液、靈敏度試驗(yàn)溶液及水楊酸檢查項(xiàng)下的水楊酸對(duì)照品溶液各10l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中如顯雜質(zhì)峰，除小于靈敏度試驗(yàn)溶液中阿司匹林主峰面積的單個(gè)雜質(zhì)峰、溶劑峰及水楊酸峰不計(jì)外，其余各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主

10、峰峰面積（0.5%）。方法HPLC梯度洗脫，主成分自身對(duì)照法（0.5%）色譜柱：ODS流動(dòng)相：A：乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70）B：乙腈檢測波長：276nm原料藥：供試品溶液：0.01g/ml對(duì)照溶液：0.05mg/ml靈敏度試驗(yàn)溶液：0.005mg/m有關(guān)物質(zhì) :除水楊酸峰外，其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積（0.5%）2005年在有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)未使用HPLC很大可能是因?yàn)楫?dāng)時(shí)HPLC不夠普及，而使用澄明度發(fā)檢查是簡單快捷且便宜的方法,但該方法只檢查了無羧基雜質(zhì)如苯酚、醋酸苯酯、水楊酸苯酯，而水楊酸水楊酸、水楊酸酐等含羧酸的雜質(zhì)并不能檢查到，而且由于每個(gè)人的眼睛對(duì)澄清的鑒別界限不同，作為定性檢查靈敏度也是不夠的；而HPLC的使用則增加了選擇性和靈敏度，但同時(shí)也增加了成本和實(shí)驗(yàn)要求。附：高效液相色譜的優(yōu)點(diǎn)是：檢測的分辨率和靈敏度高，分析速度快，重復(fù)性好，定量精度高，應(yīng)用范圍廣。適用于分析高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差的化合物。其缺點(diǎn)是：價(jià)格昂貴，要用各種填料柱，容量小，分析生物大分子和無機(jī)離子困難，流動(dòng)相消耗大且有毒性的居多。三、總結(jié)通過上述分析發(fā)現(xiàn)，阿司匹林原料藥與其片劑的檢驗(yàn)方法是不同的，比如，鑒別實(shí)驗(yàn)中，需要將制劑時(shí)引入的輔料等干