高中生物選修一生物技術(shù)實(shí)踐知識(shí)點(diǎn)總結(jié)精華

1、選修一生物技術(shù)實(shí)踐知識(shí)點(diǎn)總結(jié)專題一 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用課題一 果酒和果醋的制作（ 一 ） 基本原理1 酵母菌是異養(yǎng)兼性厭氧菌型真菌，20左右最適宜酵母菌繁殖，所以酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在 18 -25 2、在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。C 6H2Q+6Q+6HO6CO+12HO+I總量在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。C6H2Qf2GHO+ 2CO+能量3、醋酸菌是異養(yǎng)需氧型細(xì)菌, 醋酸菌最適生長(zhǎng)溫度為32，所以醋酸發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在30 -35，控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時(shí)間縮短，又減少雜菌污染的機(jī)會(huì)。4、當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；C 6H12Q

2、+ 2Qf 2CH3COOH 2CO+ 2HO當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?。C 2H5。* Qf CH3COOH H2O（二）、實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄-沖洗-榨汁-酒精發(fā)酵-果酒（-醋酸發(fā)酵-果醋）（三）、實(shí)驗(yàn)裝置：1 、充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出二氧化碳的；出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身相連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。開口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)該充氣口連接氣泵，輸入氧氣。2、酒精檢驗(yàn)：果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重鉻酸鉀來檢驗(yàn)。在酸性

3、條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。先在試管中加入發(fā)酵液2ML再滴入物質(zhì)白量濃度為3mol/L的H2SO3滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3 滴，振蕩試管，觀察顏色疑難解答：1）你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？應(yīng)該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)。（ 2）你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？如：要先沖洗葡萄，再除去枝梗；榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈，并進(jìn)行酒精消毒；每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。（3）制葡萄酒時(shí)，為什么要將溫度控制在1825C?制葡萄醋時(shí)，為什么要將溫度控制在30 35 C?溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)

4、酵的重要條件。20左右最適合酵母菌的繁殖，因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長(zhǎng)溫度為32 C,因此要將溫度控制在 3035 C。（ 4）酵母菌的來源？為什么葡萄酒呈紅色？在葡萄酒自然發(fā)酵的過程中, 起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌. 在發(fā)酵過程中, 隨著酒精濃度的提高, 紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液, 使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色. 在缺氧、呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。課題二 腐乳的制作（一）實(shí)驗(yàn)原理1 、多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。2、毛霉是一種絲狀真

5、菌，代謝類型是異養(yǎng)需氧型，最適生長(zhǎng)溫度1518C。產(chǎn)生菌絲的類型：直立菌絲和匍匐菌絲。毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。（二） 實(shí)驗(yàn)流程：讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉-加鹽腌制-加鹵湯裝瓶-密封腌制1 、 釀造腐乳的主要生產(chǎn)工序是將豆腐進(jìn)行前期發(fā)酵和后期發(fā)酵。前期發(fā)酵的主要作用：1. 創(chuàng)造條件讓毛霉生長(zhǎng)。2. 使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。后期發(fā)酵主要作用：酶與微生物協(xié)同參與生化反應(yīng)的過程。2、將豆腐切成 3cmK 3cmX 1cm的若干塊。所用豆腐的含水量為70%左右，水分過多則腐乳不易成形。 毛霉的生長(zhǎng)：條件：將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)

6、，將籠屜中的控制在1518C,并保持一定的濕度。來源： 1. 來自空氣中的毛霉孢子，2. 直接接種優(yōu)良毛霉菌種 加鹽腌制：將長(zhǎng)滿毛霉的豆腐塊分層整齊地?cái)[放在瓶中，同時(shí)逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。 食鹽的作用：1.抑制微生物的生長(zhǎng)，避免腐敗變質(zhì)2.析出水分，使豆腐變硬，在后期制作過程中不易酥爛3. 調(diào)味作用，給腐乳以必要的咸味 用鹽腌制時(shí)，注意控制鹽的用量：鹽的濃度過低，不足以抑制微生物的生長(zhǎng)，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過高會(huì)影響腐乳的口味 配制鹵湯：鹵湯直接關(guān)系到腐乳的色、香、味。鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的。鹵湯中酒的含量一般控制在12%左右。 酒

7、的作用：1.防止雜菌污染以防腐 2.調(diào)味酒精含量的高低與腐乳后期發(fā)酵時(shí)間的長(zhǎng)短有很大關(guān)系，酒精含量越高，對(duì)蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長(zhǎng)；酒精含量過低，蛋白酶的活性高，加快蛋白質(zhì)的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成塊。 香辛料的作用：1.調(diào)味作用2.殺菌防腐作用疑難解答： 1）利用所學(xué)的生物學(xué)知識(shí)，解釋豆腐長(zhǎng)白毛是怎么一回事？豆腐生長(zhǎng)的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴(yán)格地說是直立菌絲，在豆腐中還有匍匐菌絲。 2）為什么要撒許多鹽，將長(zhǎng)毛的豆腐腌起來？鹽能防止雜菌污染，避免豆腐腐敗。 3）我們平常吃的豆腐，哪種適合用來做腐乳？含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量高的豆腐制作腐乳，不易

8、成形。 4）吃腐乳時(shí)，你會(huì)發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢？它對(duì)人體有害嗎？它的作用是什么？“皮”是前期發(fā)酵時(shí)在豆腐表面上生長(zhǎng)的菌絲（匍匐菌絲），對(duì)人體無害。它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形。（ 5）你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。裝瓶時(shí)，操作要迅速小心。整齊地?cái)[放好 豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時(shí)，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被 污染。課題三 制作泡菜（一）實(shí)驗(yàn)原理1 .制作泡菜所用微生物是乳酸菌，是異養(yǎng)厭氧型細(xì)菌。在無氧條件下，將葡萄糖分解為乳酸酶反應(yīng)式為：QH2O62c3H6Q+能量。含抗生

9、素牛奶不能生產(chǎn)酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌。2 .亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水，在食品生產(chǎn)中用作食品添加劑。膳食中的亞硝酸鹽一般不會(huì)危害人體健康，被吸收后隨尿液排出體外，但在適宜pH、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。亞硝酸鹽3.測(cè)定亞硝酸鹽含量的方法是：比色法原理是在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-泰基乙二胺鹽酸鹽 結(jié)合形成 玫瑰紅色染料，與已含酸鹽含量。發(fā)酵時(shí)間（d）1H知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測(cè)比較，估算泡菜中亞硝4.一般在腌制10天后亞硝酸鹽含量開始降低，故在10天之后食用最好（二）實(shí)驗(yàn)流程專題六植物有效成分的提取課題一植物芳香油的提?。ㄒ唬┗A(chǔ)原理

10、1.天然香料的來源：動(dòng)物：抹香鯨、海貍、麝、靈貓植物：根、莖、葉、花、果實(shí)、種子芳香油的提取方法： 蒸儲(chǔ)、壓榨、萃取等。2芳香油的特點(diǎn)：物理性質(zhì)：揮發(fā)性強(qiáng)，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑化學(xué)組成：以菇類化合物及其衍生物為主 。3.芳香油的提取方法：蒸儲(chǔ)法、壓榨法、萃取法（1）水蒸氣蒸儲(chǔ)法原理：水蒸汽可將揮發(fā)性較強(qiáng)的芳香油攜帶出來形成油水混合物，冷卻后水油分層。方法： 水中蒸餾：原料放在沸水中加熱蒸餾。水上蒸餾：原料隔放在沸水上加熱蒸餾。水汽蒸餾：利用外來高溫水蒸氣加熱蒸餾。（ 2）壓榨法：通過機(jī)械壓縮力將精油從原料中分離出來的一種簡(jiǎn)單操作）（ 3）萃取法：原理：芳香油易溶于有機(jī)溶劑，溶

11、劑揮發(fā)后得到芳香油。方法：原料浸泡在溶劑中f得到浸泡液-有機(jī)溶劑揮發(fā)-芳香油。（二）基本裝置1. 水蒸氣蒸餾法蒸餾裝置可分為左、中、右三部分，其中左邊的部分通過加熱進(jìn)行蒸餾，中部將蒸餾物冷凝，右邊的部分用來接收。安裝儀器一般都按照自下而上、從左到右的順序。拆卸儀器的順序與安裝時(shí)相反。具體安裝順序和方法如下。（三）基本流程玫瑰精油的提取mL氯化鈉溶液：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的分離。無水硫酸鈉：吸收油層中的水分。蒸餾時(shí)間不能過短，溫度不能過高橘皮精油的提取石灰水：防止壓榨時(shí)滑脫，提高出油率，降低壓榨液黏稠度，過濾不堵塞篩眼。小蘇打、硫酸鈉：促進(jìn)油和水的分離（用量分別為橘皮質(zhì)量的和5）。課

12、題二胡蘿卜素的提?。ㄒ唬┗A(chǔ)知識(shí)1. 胡蘿卜素性質(zhì)： 橘黃色結(jié)晶，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不揮發(fā)，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有機(jī)溶劑。分類：依據(jù)碳碳雙鍵的數(shù)目 劃分為“、3、丫 三類，其中最主要的組成成分為3-胡蘿卜素。作用：治療夜盲癥、幼兒生長(zhǎng)發(fā)育不良、干皮癥等疾??；常用于食品色素；使癌變細(xì)胞恢復(fù)成正常細(xì)胞。提取方法：從植物中提取從大面積養(yǎng)殖的巖藻中獲得利用微生物的發(fā)酵生產(chǎn)I、萃取劑的選擇水溶性的：乙醇、丙酮水不溶性的：石油醚 、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳等選擇：具有較高的沸點(diǎn)，能夠充分溶解胡蘿卜素，低毒并且不與水混溶。n、影響萃取的因素主要因素：萃取劑的性質(zhì)和使用量次要因素：原料顆粒

13、的大小、緊密程度、含水量、萃取的溫度和時(shí)間等一般來說，原料顆粒小，萃取溫度高，時(shí)間長(zhǎng)，需要提取的物質(zhì)就能夠充分溶解，萃取效果就好。萃取前，要將胡蘿卜進(jìn)行粉碎和干燥（二）基本流程鑒定：紙層析法疑難解答1 .乙醇和丙酮能夠用于胡蘿卜素的萃取嗎？為什么？答：胡蘿卜素可溶于乙醇和丙酮，但它們是水溶性有機(jī)溶劑，因萃取中能與水混溶而影響萃取效果，所以不用它們作萃取劑。2 .在石油醛、醋酸乙酯、乙醛、苯和四氯化碳這幾種有機(jī)溶劑中，哪種最適宜用來提取胡蘿卜素？答：在這五種有機(jī)溶劑中，石油醛的沸點(diǎn)最高，在加熱萃取時(shí)不易揮發(fā)，所以 石油醛最適宜用作萃 取劑。取方法實(shí)驗(yàn)原理方法步驟適用范圍優(yōu)缺點(diǎn)1.玫瑰花+水優(yōu)：簡(jiǎn)

14、單易行，便于分離2.水蒸氣蒸儲(chǔ)適用于提取玫瑰油、缺：水中蒸儲(chǔ)會(huì)導(dǎo)致原料焦糊和有效成分利用水蒸氣將揮薄荷油等揮發(fā)性強(qiáng)、蒸氣蒸儲(chǔ)發(fā)性較強(qiáng)的芳香油攜帶出3.油水混合物水解等問題化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、不溶來4分離油層于水的芳香油5.除水過濾1.石灰水浸泡、漂洗適用于柑優(yōu)：生產(chǎn)成本低，能保持原有的結(jié)構(gòu)和功能通過機(jī)械加壓，（榨法橘、檸檬等易焦糊、壓榨出果皮中的芳香油2.壓榨、過濾、靜置缺：分離困難，出油率較低有效成分易水解原料3.再次過濾的提取卜機(jī)溶劑萃取使芳香油溶解在有機(jī)溶劑中，蒸發(fā)溶劑后就可獲得芳香油1 .粉碎、干燥2 .萃取、過濾3.濃縮適用范圍廣，要求原料的顆粒要盡可能細(xì)小，能充分浸泡在有機(jī)溶液中優(yōu)：出油

15、率高，易分離缺：如使用的有機(jī)溶劑處理不當(dāng)會(huì)影響芳香油的質(zhì)量專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)一.基本原理（一）培養(yǎng)基1.定義：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。2分類：?按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)；固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定；半固體培養(yǎng)基則常用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)及菌種保藏等。按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點(diǎn)，在

16、培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。3.成分：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如 餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如 基酸、尿素、牛肉膏、蛋白陳（有機(jī)氮源）等。（生長(zhǎng)因子）等。CO、NaHC*無機(jī)碳源；糖類、石油、花生粉 單質(zhì)碳不能作為碳源。Nb、NH、NO-、NH+ （無機(jī)氮源）；蛋白質(zhì)、氨 只有固氮微生物才能利用 N2o培養(yǎng)基還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)PHH特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要 在培養(yǎng)基中添加 維生素，培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌是需要

17、將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無氧的條件（二）無菌技術(shù)1 .消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽胞和抱子）。消毒方法：煮沸消毒法巴氏消毒法（對(duì)于一些不耐高溫的液體）化學(xué)藥劑消毒法 （如酒精、氯氣、石炭酸等）紫外線消毒法2 .滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽抱和抱子。滅菌方法： 灼燒滅菌法（接種環(huán)、接種針、試管口等使用）所用器械是酒精燈干熱滅菌法（玻璃器皿、金屬用具等使用）所用器械是干熱滅菌箱；高壓蒸汽滅菌法（培養(yǎng)基、無菌水等使用）所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，

18、所用器械是紫外燈。比較項(xiàng)理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽抱和抱子能否被消滅較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能火菌強(qiáng)烈全部微生物能二.基本操作（一）制作牛肉膏蛋白豚固體培養(yǎng)基1 .方法步驟：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。2 .倒平板操作的步驟：將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約1020mD倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。等待平板冷卻凝固，大約需510min。然后，將平板倒過來放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。（二）純化大腸桿菌1. 微生

19、物接種的方法最常用的是平板劃線法和 稀釋涂布平板法。2. 平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這就是菌落。3. 稀釋涂布平板法是先用無菌水 將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和 涂布平板操作兩步。4. 用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。5. 平板劃線法操作步驟：將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅

20、。在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。試管口通過火焰。 將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。試管通過火焰，并塞上棉塞。左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)皿。灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。6. 涂布平板操作的步驟：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻 810s。用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。疑難解答：1

21、. 培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手 時(shí)，就可以進(jìn)行倒平 板了。2. 為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3. 平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止培養(yǎng)基表面的水分過度地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4. 在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，

22、因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。5. 為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。6. 在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。7. 在作第二次以及其后的

23、劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。8. 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第 2 步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？答：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。（三）菌種的保存（ 1 ）對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法。臨時(shí)保藏方法：將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落

24、長(zhǎng)成后，將試管放入 4c的冰箱中保藏。以后每 36個(gè)月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新 鮮的培養(yǎng)基上。缺點(diǎn)是這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。（ 2）對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在 20 的冷凍箱中保存。課題二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)一 基本原理：1. 尿素 是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨 之后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕浮?尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的。2.

25、 篩選菌株（ 1 ）實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH 等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。配置選擇培養(yǎng)基。（ 2）配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。3. 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目（ 1 ）測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和 顯微鏡直接計(jì)數(shù)。（ 2）稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一

26、個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置35個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并 取平均值。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。二基本流程1. 土壤取樣：同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物，數(shù)量最大，種類最多。在富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層，有更多的微生物生長(zhǎng)。從富含有機(jī)物、潮濕、pH- 7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約38cm的土壤層取樣。2 樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目。在實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30300 之

27、間、適于計(jì)數(shù)的平板。測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用104 10 5 106測(cè)定放線菌的數(shù)量，一般選用103 10 4 105測(cè)定真菌的數(shù)量，一般選用102 10 3 1043 微生物的培養(yǎng)與觀察不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)菌3037 12 天 ; 放線菌 2528 57 天 ; 霉菌 2528 34 天每隔 24 小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致一樓菌落的數(shù)目。一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。如形狀、大小、隆起程度、顏色.疑難解答（ 1）如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)？

28、統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3 個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值每 ml 樣品中的菌落數(shù)=（ C/V） *M 其中， C 代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V 代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（ml） , M代表稀釋倍數(shù)課題三 分解纖維素的微生物的分離一 基本原理1. 纖維素和纖維素酶（ 1 ）纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈等也富含纖維素。（2）纖維素酶 是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即 。酶、Cx酶和葡萄糖甘酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)。2. 纖維素分解菌的篩選（ 1 ）篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過顏色反應(yīng)直接對(duì)微生物進(jìn)行