谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)IFCC速率法

1、項(xiàng)目谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）方法IFCC速率法目錄1. 檢測(cè)原理2. 標(biāo)本采集與處理2.1受檢者的準(zhǔn)備2.2靜脈采血2.3抗凝劑2.4標(biāo)本處理3. 試劑3.1試劑3.2校準(zhǔn)血清3.3試劑與校準(zhǔn)血清的穩(wěn)定性4. 儀器5. 操作6. 計(jì)算7. 操作性能7.1精密度7.2準(zhǔn)確度7.3靈敏度7.4可報(bào)告范圍7.5特異性7.6干擾8. 參考值9. 臨床意義附錄A:參數(shù)1.檢測(cè)原理谷草轉(zhuǎn)氨酶催化L-天冬氨酸的氨基轉(zhuǎn)移與 MDH催化的反應(yīng)偶聯(lián)，使 NADH氧化成NAD+。NADH在 340nm處有特異吸收峰，其被氧化的速率與血清中的 AST的活性成正比，在340nm處測(cè)定NADH下降速 率，即可測(cè)出AST活性。

2、ASTL-天冬氨酸+a-酮戊二酸草酰乙酸+ L-谷氨酸MDHNADH +草酰乙酸 + H+ L-蘋果酸 + NAD+2 .標(biāo)本采集與處理2.1受檢者的準(zhǔn)備：病人空腹12h，不飲酒24h后采集血樣。體檢對(duì)象抽血前應(yīng)有兩周的的正常狀況記錄。注意有無(wú)應(yīng)用 影響測(cè)試項(xiàng)目的藥物。此外，對(duì)于體檢者，采血的季節(jié)都應(yīng)做相關(guān)記錄，因?yàn)闃颖局懈黜?xiàng)目的含量有季節(jié) 性變動(dòng)，為了前后比較應(yīng)在每年同一季節(jié)檢驗(yàn)。應(yīng)囑體檢對(duì)象在抽血前24小時(shí)內(nèi)不做劇烈運(yùn)動(dòng)。2.2靜脈采血：除非是臥床的病人，一般在采血時(shí)取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外的分布，會(huì)影響測(cè)試項(xiàng)目的濃度。在采血前至少應(yīng)靜坐 5分鐘，一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時(shí)間不

3、超過(guò)1分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3抗凝劑：血漿使用肝素或EDTANa 2 (1mg/mL )作為抗凝劑。2.4標(biāo)本處理：血標(biāo)本室溫放置30min45min后離心分離血清或血漿，在兩小時(shí)內(nèi)檢測(cè)完畢；如兩小時(shí)內(nèi)不能檢測(cè) 完畢，將離心分離血清或血漿置潔凈試管加蓋2-8 'C保存。3 .試劑3.1試劑：本科使用湖南永和陽(yáng)光科技有限責(zé)任公司AST試劑盒，為液體雙試劑，各組分如下：組成R1:R2=5:1混合后溶液的濃度R1: Tris緩沖液：80mmol/L PH=7.8L-天冬氨酸200mmol/LLDH>1.2U/mLMDH>0.8U/mLR2:起動(dòng)液NADH0.18mm

4、ol/La酮戊二酸12mmol/L3.2 :校準(zhǔn)血清使用湖南永和陽(yáng)光科技有限責(zé)任公司提供的40項(xiàng)校準(zhǔn)血清。校準(zhǔn)頻次：空白定標(biāo)：每日需做試劑空白定標(biāo)。全點(diǎn)定標(biāo)：試劑換批號(hào)使用時(shí)或質(zhì)控結(jié)果超過(guò)規(guī)定的2SD范圍，需要全點(diǎn)定標(biāo)。3.3試劑的穩(wěn)定性：原包裝試劑儲(chǔ)存在2-8 C至標(biāo)簽所示失效日期。18-22 'C穩(wěn)定28天，試劑應(yīng)避免污染。當(dāng)試劑空白吸光度低于0.8時(shí)，試劑按照失效處理。多項(xiàng)校準(zhǔn)血清在2-8 C儲(chǔ)存至標(biāo)簽所示失效日期，復(fù)溶后 -20 C保存，可穩(wěn)定一個(gè)月，只可凍融一次, 避免反復(fù)凍融。參見校準(zhǔn)血清說(shuō)明書。4 儀器KONELAB 30型號(hào)儀器。性能：波長(zhǎng)340nm，儀器測(cè)定吸光度的靈

5、敏度應(yīng)達(dá)到0.001ABS以上。5 操作樣品為血清或肝素/EDTA抗凝血漿。本法為IFCC法。參數(shù)見后附，附錄 A。試劑參數(shù)設(shè)置、定標(biāo)操作以及樣本檢測(cè)常規(guī)操作，見儀器操作規(guī)程。6 計(jì)算 A/min x Vt x 1000AST（U/L） = = A/min xfeXVsxd式中：AA/min 每分鐘吸光度變化率；e18.5摩爾吸光系數(shù)；Vt 反應(yīng)液總體積（ml） ； d1比色杯光徑（cm）；1000變化因數(shù)； Vs標(biāo)本體積（ml）；7操作性能7.1精密度:批內(nèi) CV<0.34% ，批間 CV<3.81% 。7.2 準(zhǔn)確度：檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)不準(zhǔn)確度 <± 10%7.3 靈敏度：谷草轉(zhuǎn)氨酶濃度為：300U/L時(shí)，吸光度變化率 A40nm/min為0.1260.154。7.4 可報(bào)告范圍：血清與試劑用量之比為 1:12 時(shí)，測(cè)定上限為 600U/L 。7.5 特異性：測(cè)量值在給定值的 90%-110 范圍內(nèi)。7.6 干擾：內(nèi)源性干擾物溶血為 1000mg/ml 、脂血 2000mg/ml 、黃疸 30mg/ml 、抗壞血酸 300mg/ml 對(duì)測(cè)試結(jié)果 無(wú)明顯影響。8參考值0 38U/L9臨床意義天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶又稱