葛根提取物的技術(shù)要求

1、葛根提取物技術(shù)要求本技術(shù)要求的編寫(xiě)格式是按GB/T 1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則的有關(guān)規(guī)定編輯。本技術(shù)要求檢驗(yàn)方法引用了中華人民共和國(guó)藥典2010年版一部；GB/T 5009.11；GB 5009.12；GB/T 5009.13；GB/T 5009.15；GB/T 5009.17；GB/T 5009.19等國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，以保證檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。本技術(shù)要求的附錄A、附錄B均為規(guī)范性附錄。1 范圍 本技術(shù)要求適用于以豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi 的干燥根（習(xí)稱(chēng)野葛）為原料經(jīng)加工制成的提取物。 2 規(guī)范性引用文件 本技術(shù)要求中引用的文件對(duì)于本技術(shù)要求的應(yīng)用是必不可

2、少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本技術(shù)要求。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本技術(shù)要求。GB/T 5009.11 食品中總砷及無(wú)機(jī)砷的測(cè)定GB 5009.12 食品中鉛的測(cè)定GB/T 5009.13 食品中銅的測(cè)定GB/T 5009.15 食品中鎘的測(cè)定GB/T 5009.17 食品中總汞及有機(jī)汞的測(cè)定GB/T 5009.19 食品中有機(jī)氯農(nóng)藥多組分殘留量的測(cè)定GB 4789.2 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定GB 4789.3 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群測(cè)定GB 4789.4 食品衛(wèi)生徽生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)GB 4789.5 食品衛(wèi)生

3、微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)GB 4789.10 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)GB 4789.11 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 溶血性鏈球菌檢驗(yàn)GB 4789.15 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)中華人民共和國(guó)藥典2010年版一部3 技術(shù)要求3.1 制法 取葛根，粉碎成粗粉，加30%乙醇加熱回流提取兩次，每次2小時(shí)，第一次加10倍量，第二次加8倍量，濾過(guò)，合并濾液，濾液于60減壓濃縮至相對(duì)密度為1.101.20（室溫）的清膏，放冷，加乙醇使含醇量為70%，靜置12小時(shí)，取上清液，減壓回收乙醇，并濃縮至稠膏，干燥，即得。3.2 感官要求：應(yīng)符合表 1 規(guī)定。表1 感官要求項(xiàng) 目要 求

4、色澤淡黃色至棕黃色、色澤均勻。滋味及氣味具有本品應(yīng)有的氣味、味微甜。性狀干燥均勻的粉末。雜質(zhì)無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)。3.3 功效成分：應(yīng)符合表2規(guī)定。表2 功效成分項(xiàng)目指標(biāo)葛根素（C21H20O9）(以干燥品計(jì))/( mg/g) 100.0其它異黃酮總量（大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素）(以干燥品計(jì))/( mg/g) 25.0葛根素與其它異黃酮總量（大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素）的比值8.03.4 理化指標(biāo)：應(yīng)符合表3規(guī)定。表3 理化指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)薄層鑒別應(yīng)符合規(guī)定水分/%5.0熾灼殘?jiān)?%5.0鉛（以Pb計(jì)）/( mg/kg)2.0鎘（以Cd計(jì)）/( mg/kg)0.3砷（以As計(jì)）/( m

5、g/kg)2.0汞（以Hg計(jì)）/( mg/kg)0.2銅（以Cu計(jì)）/( mg/kg)20六六六/( mg/kg)0.02滴滴涕/( mg/kg)0.02特征圖譜應(yīng)符合規(guī)定3.5 微生物指標(biāo)：應(yīng)符合表4規(guī)定。表4 微生物指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)菌落總數(shù)/（cfu/g）1000大腸菌群/（MPN/100g）40霉菌/（cfu/g）25酵母菌/（cfu/g）25沙門(mén)氏菌不得檢出志賀氏菌不得檢出金黃色葡萄球菌不得檢出溶血性鏈球菌不得檢出4 檢驗(yàn)方法4.1 感觀檢驗(yàn) 取適量試樣，置于白瓷板上，在自然光下，用肉眼觀察其色澤、性狀、雜質(zhì)，聞其氣味，用溫開(kāi)水漱口，品嘗其滋味。4.2 功效成分檢驗(yàn)按規(guī)范性附錄A規(guī)定的方法

6、測(cè)定。4.3 理化檢驗(yàn) 薄層鑒別 取本品0.1g，加甲醇10ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取葛根對(duì)照藥材0.8g，加甲醇10ml，放置2小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。再取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄 B）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，使成條狀，以三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5：0.25）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和葛根素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光條斑。

7、 水分：按中華人民共和國(guó)藥典2010年版一部附錄 H（第一法）測(cè)定，不得過(guò)5.0%。 熾灼殘?jiān)喊粗腥A人民共和國(guó)藥典2010年版一部附錄 J測(cè)定，不得過(guò)5.0%。 鉛：按GB 5009.12食品中鉛的測(cè)定規(guī)定的方法測(cè)定。 鎘：按GB/T 5009.15食品中鎘的測(cè)定規(guī)定的方法測(cè)定。 砷：按GB/T 5009.11食品中總砷及無(wú)機(jī)砷的測(cè)定規(guī)定的方法測(cè)定。 汞：按GB/T 5009.17食品中總汞及有機(jī)汞的測(cè)定規(guī)定的方法測(cè)定。 銅：按GB/T 5009.13食品中銅的測(cè)定規(guī)定的方法測(cè)定。 六六六及滴滴涕：按GB/T 5009.19食品中有機(jī)氯農(nóng)藥多組分殘留量的測(cè)定規(guī)定的方法測(cè)定。 特征圖譜 按規(guī)范

8、性附錄B規(guī)定的方法測(cè)定。4.4 微生物檢驗(yàn) 菌落總數(shù)：按GB 4789.2 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定規(guī)定的方法測(cè)定。 大腸菌群：按GB 4789.3 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群測(cè)定規(guī)定的方法測(cè)定。 霉菌和酵母菌：按GB 4789.15 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)規(guī)定的方法測(cè)定。 沙門(mén)氏菌：按GB 4789.4 食品衛(wèi)生徽生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)規(guī)定的方法測(cè)定。 志賀氏菌：按GB 4789.5 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)規(guī)定的方法測(cè)定。 金黃色葡萄球菌：按GB 4789.10 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)規(guī)定的方法測(cè)定。 溶血性鏈球菌：按GB 478

9、9.11 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 溶血性鏈球菌檢驗(yàn)規(guī)定的方法測(cè)定。5 貯藏 密封，置涼暗干燥處。附 錄 A(規(guī)范性附錄)功效成分的檢驗(yàn)葛根素、其它異黃酮總量（大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素）、葛根素與其它異黃酮總量（大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素）的比值的測(cè)定A.1 原理用60%乙醇作為溶劑，超聲提取試樣中的葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素，經(jīng)高效液相色譜柱（C18）分離，紫外檢測(cè)器（UV）檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，峰面積外標(biāo)法定量，測(cè)定試樣中葛根素、其它異黃酮（大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素）的含量，并計(jì)算葛根素與其它異黃酮總量（大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素）

10、的比值。A.2 試劑A.2.1 水：純化水。A.2.2 甲醇、色譜純。A.2.3 乙腈：色譜純。A.2.4 乙酸銨：分析純。A.2.5 冰乙酸：分析純。A.2.6 乙醇：分析純。A.2.7 0.02mol/L乙酸銨（pH 4.6）：稱(chēng)取乙酸銨1.54g，加水約900ml，攪拌使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至4.6，用水稀釋至1000ml，搖勻，即得。A.2.8 葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素對(duì)照品：由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。A.3 儀器高效液相色譜儀，帶紫外檢測(cè)器。超聲波清洗器。A.4 分析步驟A.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（AichromBo

11、nd-AQ C18 4.6×250mm 5，或相當(dāng)者）；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.02mol/L乙酸銨溶液（用冰乙酸調(diào)pH值至4.6）為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速為1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。時(shí)間（min）A（%）B（%）0.09.09.010.010.012.012.018.018.018.518.526.0203030304848482020807070705252528080 色譜圖A.4.3 溶液的制備A.4.3.1 對(duì)照品混合溶液的制備 取葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素對(duì)照品各適量，精密稱(chēng)定，

12、加甲醇制成每1ml中含葛根素1mg、大豆苷0.2mg、染料木苷0.1mg、大豆素0.1mg和染料木素0.1mg的混合溶液，搖勻，即得對(duì)照品混合溶液。A.4.3.2 供試品溶液的制備 取本品約50mg，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加60%乙醇適量，超聲處理30分鐘，放冷至室溫，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。A.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密量取對(duì)照品混合溶液0.05、0.1、0.5、2.0、5.0ml,置10ml量瓶中，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，得對(duì)照品系列溶液。分別精密吸取對(duì)照品系列溶液各10l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對(duì)照品溶液濃度（g/ml）為橫坐標(biāo)，峰面

13、積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 精密吸取供試品溶液10l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法以峰面積計(jì)算，即得。 計(jì)算C×25X= W×（1-M）式中：X試樣中單一成分的含量，mg/g；C從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得供試品溶液中相應(yīng)成分的濃度，g/ml；W取樣量，mg；M水分，%。計(jì)算結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后一位。A.4.7 允許差同一樣品兩次測(cè)定，相對(duì)平均偏差不得超過(guò)5.0%。附 錄 B(規(guī)范性附錄)特征圖譜B.1 原理用60%乙醇作為溶劑，超聲提取試樣中的特征成分，經(jīng)高效液相色譜柱（C18）分離，紫外檢測(cè)器（UV）檢測(cè)，根據(jù)參照物色譜峰的保留時(shí)間，計(jì)算各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間。B.2 試

14、劑B.2.1 水：純化水。B.2.2 甲醇、色譜純。B.2.3 乙腈：色譜純。B.2.4 乙酸銨：分析純。B.2.5 冰乙酸：分析純。B.2.6 乙醇：分析純。B.2.7 0.02mol/L乙酸銨（pH 4.6）：稱(chēng)取乙酸銨1.54g，加水約900ml，攪拌使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至4.6，用水稀釋至1000ml，搖勻，即得。B.2.8 葛根素由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。B.3 儀器高效液相色譜儀，帶紫外檢測(cè)器。超聲波清洗器B.4 分析步驟B.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（AichromBond-AQ C18 4.6×250mm 5，或相當(dāng)者）

15、；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.02mol/L乙酸銨溶液（用冰乙酸調(diào)pH值至4.6）為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速為1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。時(shí)間（min）A（%）B（%）0.09.09.010.010.012.012.018.018.018.518.526.0203030304848482020807070705252528080B.4.2 溶液的制備參照物溶液的制備 取葛根素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1ml含葛根素1mg的溶液，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備 取本品50mg，精密稱(chēng)定，置50ml量瓶中，加60%乙醇適量，超聲處理30分鐘，放冷至室溫，加60%乙醇稀釋至