支鏈淀粉合成相關(guān)酶基因SS2,SBE2等位變異及功能分析題庫(kù)

1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文開題報(bào)告論文題目：中國(guó)地方小麥淀粉合成相關(guān)基因SSII 與 SBEII 等位變異及功能分析報(bào)告人：周艷杰學(xué)號(hào)：S20142075申請(qǐng)學(xué)位：農(nóng)學(xué)碩士學(xué)科專業(yè)：作物遺傳育種所在學(xué)院：小麥研究所指導(dǎo)教師：江千濤研究員報(bào)告時(shí)間：2015/10/10四川農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生處制表1 論文選題的理由或意義：小麥籽粒主要由淀粉、蛋白質(zhì)、脂類等組成，其中淀粉約占籽粒干重的6575，是小麥籽粒的主要貯藏物質(zhì)。高等植物幾乎所有的器官，如種子、莖、葉片、根、果實(shí)和花粉等都含有淀粉。淀粉又是植物主要的能量?jī)?chǔ)藏物質(zhì)，在植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起著重要作用，同時(shí)也為人類提供70 80的熱量所需。此外，淀粉還是一種

2、重要的工業(yè)原料，被廣泛應(yīng)用于釀酒、造紙、粘合劑、紡織及生物降解塑料等行業(yè) 1 。淀粉是以葡萄糖為基本單位構(gòu)成的多糖，根據(jù)其分子結(jié)構(gòu)特征分為直鏈淀粉(amylose)和支鏈淀粉 (amylopectin)兩種糖元多聚體，其中直鏈淀粉約占總淀粉的20-25，支鏈淀粉約占75-80，直支比在不同小麥品種中的變異范圍為l ： 3-1：52 。研究證明，直鏈淀粉與支鏈淀粉的比例(直支比 )以及支鏈淀粉的精細(xì)結(jié)構(gòu)顯著影響淀粉的理化性質(zhì)，進(jìn)而決定面類制品，尤其是面條、饅頭等東方食品的外觀品質(zhì)和食用品質(zhì) 3,4 。淀粉在高等植物中主要是在葉綠體和淀粉體等質(zhì)體中合成。淀粉生物合成由以下四種酶調(diào)控進(jìn)行，分別為 A

3、DP- 焦磷酸化酶（ ADP-glucose pyrophosphorylase , AGPase）、淀粉合成酶（starch synthase,SS）、淀粉分支酶（ starch branching enzyme,SBE）和淀粉去分支酶（ starch debranching enzyme,DBE）。淀粉相關(guān)酶不僅影響淀粉的含量而且影響淀粉的結(jié)構(gòu)，淀粉合成酶及淀粉分支酶在支鏈淀粉生物合成中起到了重要作用。目前市面上推廣的小麥品種的直鏈淀粉并不理想，直鏈淀粉含量約占總淀粉的20%左右，并沒有達(dá)到人們的要求。直鏈淀粉含量極低，甚至沒有的小麥為糯性小麥，含有高水平的直鏈淀粉和分支長(zhǎng)的直鏈淀粉為抗性

4、淀粉。研究表明含有高直鏈淀粉的抗性淀粉比常規(guī)淀粉對(duì)水解作用更具有抵抗力，抗性淀粉對(duì)人體發(fā)揮了膳食纖維的功能，對(duì)腸道疾病具有一定的預(yù)防作用5 ，即含有高直鏈淀粉或高抗性淀粉的小麥對(duì)人的健康狀況的改良具有重要作用。所以本實(shí)驗(yàn)研究淀粉合成關(guān)鍵酶對(duì)淀粉總量及直 /支鏈淀粉比例的影響具有一定意義。地方品種亦稱“地區(qū)性品種 ”。在當(dāng)?shù)刈匀换蛟耘鄺l件下，經(jīng)長(zhǎng)期自然或人為選擇形成的品種。對(duì)當(dāng)?shù)刈匀换蛟耘喹h(huán)境具有較好的適應(yīng)性，同時(shí)受當(dāng)?shù)仫嬍沉?xí)慣的影響，保留了獨(dú)特的品質(zhì)特征。12 國(guó)內(nèi)外關(guān)于該課題的研究現(xiàn)狀及趨勢(shì)：籽粒淀粉的生物合成淀粉的合成機(jī)理、合成途徑、合成過(guò)程中的酶及其作用機(jī)制比較復(fù)雜，目前尚不完全清楚。一

5、般認(rèn)為，小麥淀粉由胚乳中的雙層膜結(jié)構(gòu)的淀粉質(zhì)體合成，需要以下幾種關(guān)鍵酶：ADPG 焦磷酸化酶，淀粉合成酶、淀粉分支醉和淀粉脫分支酶。從合成途徑看，所有參與淀粉合成的酶都會(huì)影響淀粉粒的結(jié)構(gòu) 6-10 。整個(gè)淀粉生物合成途徑分為三個(gè)主要過(guò)程：一是 ADP 葡萄糖的形成；二是直鏈淀粉的合成；三是支鏈淀粉合成以及淀粉粒的形成。淀粉生物合成是在胞質(zhì)中開始的，以蔗糖為底物， 在各種酶的作用下形成6-磷酸葡萄糖（ Glc-6-P）或者 1-磷酸葡萄糖（Glc-1-P）。Glc-6-P 可以直接進(jìn)入淀粉體， 而 Glc-1-P 在酶作用下合成 ADP-葡萄糖 11,12 。進(jìn)入淀粉體的 ADP- 葡萄糖在顆粒

6、結(jié)合淀粉合成酶（ GBSS）的催化形成直鏈淀粉，具體合成方式有兩種假說(shuō)，這里不再具體描述。支鏈淀粉是在淀粉粒表面，通過(guò)可溶性淀粉酶（SSS）、淀粉分支酶（ SBE）和淀粉去分支酶（ DBE ）連續(xù)循環(huán)反應(yīng)合成的。支鏈淀粉的合成同樣具有幾種模型，但其主要都是SSS 和SBE 催化形成糖原或支鏈淀粉， DBE 進(jìn)行后續(xù)修剪。 概括來(lái)說(shuō)就是 GBSS 影響直連淀粉的合成， SSS、SBE 及 DBE 影響支鏈淀粉的合成?？扇苄缘矸酆铣擅福?SSS）：淀粉合成酶 SS 有兩種不同的類型：存在于質(zhì)體基質(zhì)內(nèi)的可溶性淀粉合酶 (soluble starch sythase， SSS)和與淀粉粒結(jié)合的淀粉合酶

7、 (granule bound starch sythase，GBSS)，都以 ADPG 或 UDPG 為底物，前者負(fù)責(zé)支鏈淀粉的合成，后者負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成 13?？扇苄缘矸酆铣擅福?SSS）的作用是在支鏈淀粉的合成過(guò)程中,通過(guò) 1-4 糖苷鍵將 ADPG 中的葡萄糖加到側(cè)鏈的非還原端,延長(zhǎng)側(cè)鏈。 Keeling 及 Jenner等研究了溫度對(duì)SSS活性的影響，表明溫度升高，酶活性降低，此種現(xiàn)象稱為“Knock-down”。其它與淀粉合成有關(guān)的酶，如AGPase，UGPase，SuS，GBSS 和己糖激酶等，溫度升高對(duì)其活性無(wú)影響， “ Knock-down”現(xiàn)象只在 SSS 中存在。因此，

8、 SSS 是淀粉合成溫度的調(diào)節(jié)位點(diǎn) 14 。根據(jù) SSS 保守序列同源關(guān)系的遠(yuǎn)近可分為 5 類，其中 4 類分別為 SSI，SSIIa， SSIIb 和 SS，它們?cè)谥ф湹矸酆铣芍衅鹬煌淖饔谩?Yamamori 等將小麥中 SS命名為 SGP-1，有 3 個(gè)亞基 Sgp-A1，Sgp-B1 和 Sgp-D1，基因分別位于 7AS，7BS 和 7DS15。Li 和 Ming 等分別從中國(guó)春和 Fieder 的胚乳 cDNA 文庫(kù)中獲得 SSII 的三個(gè)亞基的 cDNA2克隆 (SSA1:AF155217;ss2a-1:AJ269502;ss2a-2:AJ269503;ss2a-3:AJ269

9、504)16,17。從這些cDNA推測(cè)編碼的蛋白質(zhì)的大小在80 85kD 之間 ,與 Yamamori 等通過(guò)SDS2PAGE 電泳檢測(cè)得到的分子量在100115kD 相差比較大 15。Ming 等將其中一個(gè) cDNA 克隆在大腸桿菌中表達(dá)后 ,認(rèn)為是 SSII 本身的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)導(dǎo)致了所推測(cè)蛋白質(zhì)的分子量與 SDS-PAGE電泳檢測(cè)分子量之間的差別 17,排除了 Li 等推測(cè)的翻譯后的加工和與淀粉粒結(jié)合導(dǎo)致分子變大的可能16 。此外， Li 等從六倍體小麥的D 組供體 (TriticumtauschII)獲得 SSII 基因的基因組克隆 (登陸號(hào) :AY133248),全長(zhǎng)約 9kb,由 8 個(gè)

10、外顯子和 7 個(gè)內(nèi)含子組成，分析基因上游調(diào)控區(qū) ,發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)子區(qū)和胚乳專化表達(dá)的順式作用元件在 -1.0kb 內(nèi)18 。T.Shimbata等利用中國(guó)春的缺體四體創(chuàng)造出 SGP-1各亞基的缺失材料，并用 PCR 成功開發(fā)三對(duì)引物用于篩選缺失 SGP-1 各亞基的變異類型 19 。Yamamori 等鑒定 SSII 的三個(gè)亞基 ,篩選出分別缺失單個(gè)亞基的突變系 ,并通過(guò)有性雜交獲得缺失SSII 的六倍體小麥，這些小麥籽粒表現(xiàn)出較高的直鏈淀粉含量，并且淀粉顆粒的外觀形狀也發(fā)生了改變。通過(guò)將 SSII 缺失的六倍體小麥與糯性小麥雜交 ,發(fā)現(xiàn)同時(shí)缺失Waxy 蛋白和 SSII 的小麥 ,能檢測(cè)到直鏈淀粉

11、的存在，推測(cè)可能是由于SSII 的缺失，使支鏈淀粉側(cè)鏈變長(zhǎng)，表現(xiàn)出直鏈淀粉的特性20 。Konik-rose 等也在對(duì) SGP-1 全缺失小麥和正常小麥雜交后代的分析中發(fā)現(xiàn)，SGP-1各亞基的缺失均能影響小麥籽粒的重量、組分、直鏈淀粉的含量以及直鏈淀粉和支鏈淀粉的分布， 而同時(shí)缺失的效應(yīng)最為明顯 21 。因此，篩選鑒定出 SGP-1 變異類型材料，不僅可以更好地了解 SGP-1 在淀粉生物合成過(guò)程中的作用， 也為選育不同淀粉品質(zhì)類型的小麥新品種提供物質(zhì)基礎(chǔ)。淀粉分支酶淀粉分支酶（SBE）是一類葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶，它首先催化-，糖苷鍵的水解，繼而將斷鏈的還原端鏈接到葡聚糖的C-6 位氫氧集團(tuán)上形成一

12、個(gè)-1,6 分支點(diǎn)，形成淀粉鏈的分支。在淀粉合成中，淀粉分支酶 (SBE)是唯一引入 -1,6 糖苷分支鍵的淀粉合成酶， 其性質(zhì)和活性是影響支鏈淀粉含量和精細(xì)結(jié)構(gòu)的重要因 22,23和 SBEII 兩種同種型 (inform) 。免疫雜交證明， SBEII 也有 SBEIIa 和 SBEIIb 兩種同工型， SBEIIa 存在于胚乳的可溶性基質(zhì)中，而 SBEIIb 結(jié)合在淀粉粒上 24。前人研究發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)抑制 SBEI 對(duì)淀粉結(jié)構(gòu)無(wú)影響 25,26 或者對(duì)淀粉結(jié)構(gòu)有很微小的影響 27 ，在玉米和水稻中同時(shí)抑制 SBEI 和 SBEIIb 的表達(dá)比單獨(dú)抑制 SBEIIb 的表達(dá)直鏈淀3粉含量增加

13、明顯。 然而在大麥和小麥中， 單獨(dú)抑制 SBEI 或 SBEIIb 的表達(dá)對(duì)淀粉結(jié)構(gòu)無(wú)影響，抑制 SBEIIa 能顯著增加直鏈淀粉含量 28,29。Rahman 等從 A.tauschII 的基因組文庫(kù)中篩選到編碼SBEII 的克隆 (命名為 wSBEII2DA1,登陸號(hào) AF338431),全長(zhǎng)約 10kb30。 wSBEII2DA1 與 cDNA 克隆比較 ,由 22 個(gè)外顯子和 21 個(gè)內(nèi)含子組成 ,外顯子的長(zhǎng)度從 43384bp 不等 ,內(nèi)含子從 831019bp 不等 31。Francesco Sestili等通過(guò)轉(zhuǎn)基因沉默硬粒小麥的 SBEIIa 基因發(fā)現(xiàn)其轉(zhuǎn)基因株系的直鏈淀粉含量

14、顯著增加，且淀粉粒變得畸形不規(guī)則相比于野生型淀粉粒明顯減小32。在酶活性方面， 前人研究發(fā)現(xiàn)，在灌漿期，淀粉合成酶的酶活變化都呈單峰曲線，且在小麥灌漿期均有酶活性，活性高峰期基本都在開花期10d 后。但因小麥品種不同而有差異，有的峰值在前期，有的卻靠后。李建敏的研究表明， 小麥中 SSII 在開花后 10d 達(dá)活性高峰 33 ，曹穎妮的研究結(jié)果顯示， SSS、AGPP、GBSS 和 SBE 活性峰值基本都出現(xiàn)在花后 20-25d34 。本實(shí)驗(yàn)所用材料為花后 20d 左右的小麥籽粒，保證其酶活性較高。注：可用A4 紙加附頁(yè)43 研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題：1：研究目標(biāo)通過(guò)對(duì)小麥 SSI

15、I 和 SBEII 蛋白缺失突變體材料的篩選， 找出 SSII 和 SBEII 蛋白缺失功能的變異及機(jī)制，并測(cè)定淀粉相關(guān)參數(shù)的測(cè)定，找出不同變異類型對(duì)蛋白功能的貢獻(xiàn)，開發(fā)成分子標(biāo)記，為創(chuàng)制高直鏈淀粉材料提供依據(jù)。2：研究?jī)?nèi)容（1）通過(guò) SDS-PAGE 篩選 SSII 和 SBEII 缺失突變體材料并進(jìn)行 Western驗(yàn)證，并對(duì)蛋白缺失材料 SSII 和 SBEII 的啟動(dòng)子及編碼序列進(jìn)行擴(kuò)增， 確定變異類型并探討變異機(jī)制；（ 2）突變體材料總淀粉、直鏈淀粉、淀粉的糊化特性、老化特性及淀粉粒形態(tài)測(cè)定，并確定不同變異類型對(duì)淀粉指標(biāo)的貢獻(xiàn)水平；（ 3）對(duì)分別缺失 SSII 和 SBEII 不用亞

16、基類型的等位變異進(jìn)行聚合，分析變異類型聚合對(duì)淀粉含量、組分的影響。3：擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題（1）分析 900 份地方小麥和栽培推廣品種中突變類型；（2）對(duì)分別缺失 SSII 和 SBEII 不同亞基材料的啟動(dòng)子和編碼序列的克隆。4 擬采取的研究方法、研究手段、技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)方案及可行性分析：1：研究方法及手段(1) SDS-PAGE 及 Western 篩選鑒定出 SSII 和 SBEII 缺失突變體材料，相關(guān)試劑盒測(cè)定其總淀粉及直連淀粉含量， 差示掃描儀及掃描電子顯微鏡測(cè)定淀粉的糊化特性及淀粉粒形態(tài)觀察。(2) 小麥 SSII 和 SBEII 啟動(dòng)子和編碼序列克隆，進(jìn)行突變及非突變材料的序列變異

17、分析并開發(fā)分子標(biāo)記。(3) 不同突變類型的基因聚合雜交。2：實(shí)驗(yàn)方案(1) 取開花后 20d 左右的小麥種子，每個(gè)品種共取 3 個(gè)單穗，每穗取中部小穗籽粒，經(jīng)液氮速凍后放入 -70超低溫冰箱中保； 之后進(jìn)行蛋白提取，采用 SDS-PAGE5電泳篩選 SSII 缺失材料， Western Blot 進(jìn)行驗(yàn)證，然后找出突變體對(duì)應(yīng)單株的完熟種子利用 Megazyme 總淀粉測(cè)定試劑盒（ K-TSTA 04/2009）及雙波長(zhǎng)法分別測(cè)定其總淀粉與直連淀粉含量； 利用差示掃描熱量計(jì) (DSC 2920; TAInstruments， Delaware， USA) 對(duì)小麥；(2) 淀粉進(jìn)行熱力學(xué)特性測(cè)定并

18、用自帶處理數(shù)據(jù)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；利用掃描電子顯微鏡（ FEI Quanta 450）觀察不同小麥淀粉粒形態(tài)，用配套軟件進(jìn)行觀察以及照相。(3) 對(duì)篩選出的不同亞基缺失型材料進(jìn)行 DNA 提取，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增相應(yīng)的 SSII，SBEII 啟動(dòng)子和編碼序列，與具有完全功能的序列進(jìn)行比較分析，找出導(dǎo)致淀粉理化性質(zhì)變化的變異及變異機(jī)制，并根據(jù)序列開發(fā)分子標(biāo)記。(4) 進(jìn)行不同突變體類型材料的雜交， 進(jìn)行基因聚合， 創(chuàng)制高直鏈淀粉材料并檢測(cè)聚合效應(yīng)。3：可行性分析目前已四川農(nóng)業(yè)大學(xué)小麥研究所已收集超過(guò)900 份來(lái)自全國(guó)各地的地方小麥和栽培推廣品種材料，地方小麥由于分布廣、歷史久遠(yuǎn)，因此較育成品種具有更高的

19、遺傳多樣性，對(duì)于篩選具有不同類型的SSII 和 SBEII 基因多樣性具有明顯的優(yōu)勢(shì)。此外，淀粉提取、電泳技術(shù)已有人報(bào)道，在本實(shí)驗(yàn)室中也已形成完善體系，此外小麥基因組全基因組shotgun、分染色體的survey 序列的測(cè)定也為快速獲得來(lái)自不同亞基因組的 SSII 和 SBEII 基因序列提供了參考， 同時(shí)前人也有一些引物可以作為參照。而測(cè)定各生理生化指標(biāo)也已經(jīng)有了一套比較完善的標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室缺少的儀器也可以通過(guò)借用學(xué)校公共平臺(tái)得到解決。因此該實(shí)驗(yàn)的可行性較高。65 本題目的創(chuàng)新之處和可預(yù)期的創(chuàng)造性成果：1：本題目的創(chuàng)新之處首先從材料出發(fā)， 本實(shí)驗(yàn)從分布于全國(guó)各個(gè)地方的 900 多份地方小麥和栽

20、培推廣品種著手， 篩選 SSII 和 SBEII 缺失突變體，地方品種一般具有一種或者少數(shù)幾種獨(dú)特優(yōu)勢(shì)， 如某種抗病或者耐鹽、 耐旱性，因此有利于挖掘 SSII 和 SBEII 基因新的變異類型；其次淀粉相關(guān)酶中， SSII 和 SBEII 相對(duì)于 Waxy 研究相對(duì)較少。2：可預(yù)期的創(chuàng)新性成果(1) 從地方品種中成功篩選出 SSII 和 SBEII 不同類型的缺失突變體；(2) 獲得豐富的 SSII 及 SBEII 基因的變異類型；(3) 聚合雜交后產(chǎn)生具有高直鏈淀粉比重的材料。76 論文工作量、年度研究計(jì)劃、可能遇到的困難和問(wèn)題及相應(yīng)的解決辦法：1：論文工作量900 多份地方品種和栽培推廣

21、品種小麥發(fā)育期種子的選取及SDS-PAGE 蛋白電泳；突變體總淀粉、直連淀粉、淀粉糊化特性測(cè)定及淀粉粒形態(tài)觀察；小麥SSII和 SBEII 啟動(dòng)子和編碼序列克隆與序列分析及分子標(biāo)記開發(fā)； 第二年進(jìn)行基因聚合雜交，創(chuàng)制高直鏈淀粉材料。2：年度研究計(jì)劃（1） 2014.09-2015.04-材料收集及田間取材；（2） 2015.05-2015.12-對(duì)小麥相應(yīng)材料進(jìn)行蛋白鑒定及篩選出的突變體的播種；（3） 2015.12-2016.05-小麥 SSII 和 SBEII 缺失突變體材料總淀粉、 直鏈淀粉及其他相關(guān)性狀的測(cè)定，SSII 和 SBEII 啟動(dòng)子和基因克隆與序列分析。（4） 2016.06

22、-2016.09-小麥不同類型SSII 和 SBEII 突變體的雜交和種子收獲。（7） 2016.10-2017.05-整理數(shù)據(jù)，完善實(shí)驗(yàn)，撰寫論文。3：可能遇到的困難和問(wèn)題及相應(yīng)的解決辦法小麥 SSII 和 SBEII 基因較大，克隆相對(duì)困難， 通過(guò)摸索條件及向同學(xué)和老師學(xué)習(xí)來(lái)解決。87 與本題目有關(guān)的研究工作積累和已取得的研究工作成績(jī)：已通過(guò) SDS-PAGE 電泳對(duì) 300 份地方小麥和 90 份栽培推廣品種進(jìn)行了 SSII 和 SBEII 蛋白鑒定并篩選出兩種不同類型的 SSII 缺失突變體，包括 4 份 SSII-D 缺失突變體和 4 份 SSII-DB 缺失突變體。8 已具備的研究

23、條件，尚缺少的研究條件和擬解決的途徑：本實(shí)驗(yàn)所使用的材料、儀器、方法以及技術(shù)實(shí)驗(yàn)室都具備，能基本滿足本研究的所有需求。9主要參考文獻(xiàn)目錄序號(hào)作者文章題目（書目）期刊名稱（出版單位）、時(shí)間1 楊榮光，戴忠民，王洪明，等 .植物淀粉生物合成的研究進(jìn)展 J. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2007， 35(28):8791-8793.2 Baga M ， Glaze S， Mallard C S ， Chibbar R A starch branching enzyme gene in wheat producesalternatively spliced transcripts Plant Mol Biol ，

24、 1 999， 40： 1 0 19-1 0303 YAO D N.LI B Y ZHU J B ，LIANG R Q 。LIU GT Study on main starch properties and predictive indexes of noodle quality in common wheatJ Sci Agric Sin (中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué) )， 1999,32(6) ：84-88(in Chinese) 4 MU FORSTER C HUANG R ，POWERS J R，et a1Physical association of starch biosyntheticenzy

25、mes with starch granules of maize endospermJ Plant Physical 1996 ， 111(3) ： 82l-8295 Regina A ， Berbezy P， Kosar Hashemi B ， et al. A genetic strategy generating wheat with very high amylose contentJ. Plant biotechnology journal ， 2015.6 MartinC ， Smith A M . Starch biosynthesis. Plant Cell ， 1995，

26、7:971-985.7 Muller-RSber B ， Kobmann J. Approaches to influence starch quality and starch quality in transgenic plants. Plant Cell Environ ， 1994，17:601-13.8 Presis J. Biology and molecular biology of starch synthesis and its regulation. Oxford Surv Plant Mol Cell Biol ，1990， 7:59-1149 PreissJ ，Siva

27、k M. Biochemistry ， molecular biology and regulation of starch synthesis. Genet Eng ( N. Y .)， 1998，20:177-223.10 Smith A M ， Denyer K M artin CR . What controls the amount and structure of starch in storage organs? Plant Physiol， 1995， 107:673-677.11 Tetlow IJ. Understanding storage starch biosynth

28、esis in plants: a means to quality improvement.Canadian Journal of Botany ， 2006， 84: 1167-1185.12 James MG ， Denyer K ， Myers AM. Starch synthesis in the cereal endosperm.Current Opinion in Plant Biology ， 2003， 6: 215222.13 熊瑛，李友軍，郭天財(cái)小麥淀粉合成相關(guān)酶的研究現(xiàn)狀J 河南科技大學(xué)學(xué)報(bào) (農(nóng)學(xué)版 ) ，2004， 24 (2)： 6-91014 JennerC F

29、 Effects of exposure of wheat ears to high temperature on dry matter accumulation andCarbohydrate metabolism in the grain of two cultivars J Aust J Plant P hysio1 1991， 18(18) ：179-19015 Yamamori M ， Endo T R. Variation of starch granule proteins and chromosome mapping of their coding genes in commo

30、n wheat J .Theo r. A pp l. Genet. ， 1996， 93: 275-281.16 L i Z ， Chu X ， Mouille G ， et a l. The location and expression of the class II Starch Synthase of w heatJ . P lant Physiology ， 1999,120:1147-1155.17 M ing Gao ， Ravindra N ， Ch ibbar. Isolation ，characterization ， and expression analysis of

31、starchsynthase IIa cDNA from wheat( T riticum aestivum L. ) J . Genom e ， 2000， 43: 768-775.18 L i Z ， Sun F， Xu Shoum in ，et al . T he structural organisation of the gene encoding class II starch synthase of wheat and barley and the evolution of the genes encoding starch synthases in p lantsJ . Fun

32、ct Integr Genomics ， 2003，3: 76-85.19 Shimbata T， Nakamura T ， Vrinten P，et al. Mutations in wheat starch synthase II genes and PCR-based selection of a SGP-1 null lineJ. Tag.theoretical & Applied Genetics.theoretische UndAngewandte Genetik ， 2005，111(6):1072-1079.20 Yam amo riM， Fujita S ， H ay

33、akaw a K ， et al . Geneticelim ination of a starch granule protein，SGP-1 of wheat generates an altered starch with apparent high amylaseJ . T heor. Appl. Genet.，2000， 101: 21-29.21 Konik-Rose C ，Thistleton J ，Chanvrier H ，et al. Effects of starch synthase IIa gene dosage on grain，protein and starch

34、in endosperm of wheatJ. Theoretical and Applied Genetics， 2007， 115(8):1053-1065.22MARTINC， SMITH A M Starch biosynthesis J PlantCell ， 1995， 7(7) ：971-985 23SATOH H， NISHI A ， YAMASHITA K， et a1 Starch-branching enzyme I-deficient mutationspecifically affects the structure and properties of starch

35、in rice endospermJ Plant Physical ，2003.133(3) ： 1111-1121 4M AR FIN C， SMITH A M Starch biosynthesisJ PlantCell ，1995， 7(7)： 971-98524 REGINA A KOSAR H B ，LI Z ，et a1Starch branching enzyme lib in wheat is expressed at low levels in the endosperm compared to othercereals and encoded at a non-synten

36、ic locusJ Planta，2005， 222(5)1899-909 1125 Blauth ， S.L.， Kim ， K.N. ， Klucinec ， J.， Shannon， J.C.， Thompson， D. and Guiltinan ， M. (2002) Identification of Mutator insertional mutants of starch-branchingenzyme 1 (sbe1) in Zea mays L. Plant Mol. Biol. 48 ， 287-297.26 Regina， A. ， Kosar-Hashemi ， B.

37、， Li ， Z.Y. ，Rampling ， L ， Cmiel ， M. ， Gianibelli ， M.C. ，Konik-Rose ，C.，Larroque ，O.，Rahman，S.and Morell ，M.K. (2004)Multiple isoforms of starchbranching enzyme-I in wheat: lack of themajor SBE-I isoform does not alter starch phenotype.Funct. Plant Biol. 31 ， 591601.27 Satoh ， H. ，Nishi ， A， Yamashita ，K. ，Takemoto ， Y. ，Tanaka， Y. ，Hosaka，Y. ， Sakurai，A. ，F(xiàn)ujita ，N. and Nakamura ，Y. (2003) Starch-branching enzyme Ideficient mutation specifically affects the structure and properties of starch in rice endosperm. Plant Physiol. 133 ， 11111121.28 Regina ， A. ， Bird ， A. ， T