高效液相色譜法測定茶葉中游離糖的含量

1、第35卷分析化學(xué)（FENXI HUAXUE）來搞摘登2007年6月Chinese Journal of Analytical Chemistry930高效液相色譜法測定茶葉中游離糖的含量曾曉雄袞李雅萍孫怡葉紅劉俊向小麗王克其（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，南京210095）1引f茶葉中的游離糖不僅是構(gòu)成茶葉滋味的主要成分，給茶湯帶來甜醇的味道，而且在茶葉加工過程中可發(fā)生非酶促褐 變作用，生成相應(yīng)的醛類和毗咯類、毗嗪類等含氮化合物,因而對于茶葉的色澤和香氣的形成有重要影響。目前茶葉游 離糖含量的測定主要采用蔥酮比色法，但該法測定準確度不高,而且測定的是游離糖總量。已有人用離子色譜法測定了 綠茶中果糖

2、、葡萄糖和蔗糖的含量，但該法需要昂貴的儀器設(shè)備。高效液相色譜（HPLC）已廣泛應(yīng)用于食品成分的分析, 但HPLC用于茶葉游離糖含量測定的報道很少。本研究利用HPLC和Sugar-D色譜柱，建立了 HPLC分析茶葉中游離糖 含量的方法，并對綠茶、烏龍茶、紅茶和普洱茶中游離糖的含量進行了測定與比較。2實驗部分2.1儀器與試劑 H00高效液相色譜儀（美國Agilent）,包括四元泵、示差折光檢測器（RID）、柱溫箱;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （Heidolph,德國）。色譜純乙睛（進口分裝，Burdick & Jackson）購于江蘇漢邦科技公司；麥芽糖、果糖、葡萄糖、半乳糖、 蔗糖標準樣（Fluka公司

3、），水蘇糖、棉籽糖標準樣（Merck公司）。22樣品制備 精密稱取l.Og茶葉，加入50mL沸水，在沸水浴中浸提15 min,稍冷卻后抽濾;濾液經(jīng)預(yù)處理的732強 酸性陽離子交換樹脂和717強堿性陰離子交換樹脂（各15 mL）層析柱進行離子交換層析,去離子水洗脫液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀濃縮至干，用HPLC流動相溶解定容至5 mL,離心后上清液經(jīng)0.45 pjn纖維素膜過濾，取濾液待用。'2.3標準溶液的配制 精確稱取果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖和水蘇糖的標準樣品各51 mL HPLC流動相溶解作為母液,再用流動相配制成濃度為0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 g/L的混合標準溶液。2

4、.4 色譜條件 色譜柱 Sugar-D（4.6 mm x250 mm, 5 |xm, Nacalai Tesque Inc. , H本），色譜柱溫 40乜，檢測器為 RID, 檢測池溫度為室溫,流動相為乙睛:水二75：25（ V/V），流速1 mV min,進樣體積20 jiLo3結(jié)果與討論31線性回歸方程、檢出限 以75%乙騰為流動相和RID為檢測器,除葡萄糖與半乳糖不能有效分離外，各種糖在 Sugar-D色譜柱上分離良好。對配制的糖標準液進行HPLC測定，并以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準曲線, 結(jié)果如下。果糖：線性回歸方程丫 =182570%-470.74,相關(guān)系數(shù)/? = 0.

5、9992,檢出限為0.259 g/L；葡萄糖：線性回歸方 程Y = 167764x -9038. 90,相關(guān)系數(shù)R=0.9991,檢出限為0. 120 "L；蔗糖：線性回歸方程Y =相關(guān)系 數(shù)7? = 0.9974,檢出限為0.253 g/L；棉子糖：線性回歸方程K = 169030% - 1628,相關(guān)系數(shù)R =0.9993,檢出限為 0. 039 g/L；水蘇糖：線性回歸方程Y = 1382061472. 8,相關(guān)系數(shù)Z? = 0. 9953,檢出限為0. 063 g/L。32日本玉露茶中游離糖含量的測定在同樣的色譜條件下，若用綠茶湯直接進樣分析，得到的

6、色譜圖基線不平，各 種游離糖不能完全分離，且色譜峰有嚴重的拖尾。這是由于茶葉成分復(fù)雜，特別是茶多酚的存在，因而茶葉樣品需要特 殊的前處理。本研究用陰、陽離子交換樹脂層析柱處理茶湯，以除去部分多酚類、有機酸和氨基酸等干擾物質(zhì)。結(jié)果發(fā) 現(xiàn)，經(jīng)本方法處理后玉露茶中各種游離糖（果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、棉子糖和水蘇糖）得到了很好的分離，無拖尾現(xiàn)象。33精密度和回收率實驗 結(jié)果表明，果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖和水蘇糖的相對標準偏差在0.94% -4.76%內(nèi)，回 收率分別為 111.2% .109.2%、91.0% .88.0%和 104.0%o34茶葉樣品分析 各種茶樣中游離糖的成分和含量差異很大，綠茶的游離糖含量最高且豐富,尤其是兩種日本綠茶 中蔗糖含量高達26m&/g以上，總糖含量45 m&/go烏龍茶含糖量亦較高，紅茶次之,普洱茶的含糖量最低（總糖含量僅 為4.13 mg/g） o形成這種差異，與茶樹的生長環(huán)境和茶葉的加工工藝有關(guān)。綠茶制造過程中，首先通過高溫使酶產(chǎn)生變 性,及時制止了鮮葉中酶的活動，能減少糖的消耗。而普洱茶是一種后發(fā)酵茶，茶葉在渥堆過程中，由于微生物的作用各 種化學(xué)成分發(fā)生顯著變化，可溶性糖被大量消耗。烏龍茶屬于半發(fā)酵茶，在其加工過程中可溶性糖的含量變化總體上是 增加的，因而烏龍茶中的游離糖含量比較高。niH