維生素c含量測(cè)定方法

1、維生素維生素C的結(jié)構(gòu)式的結(jié)構(gòu)式 維生素C：六碳的多羥基內(nèi)酯CCCHOHOCHOOCHHOCH2OH滴定法測(cè)定滴定法測(cè)定維生素維生素C C高效液相色譜法高效液相色譜法測(cè)定維生素測(cè)定維生素C C 原理原理染料2,6-二氯靛酚在酸性溶液中呈粉紅色（在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色），被還原型抗壞血酸還原后顏色消失。還原型抗壞血酸還原染料后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質(zhì)干擾時(shí)，一定量的樣品提取液還原標(biāo)準(zhǔn)染料液的量，與樣品中還原型抗壞血酸含量成正比。 2，6一二氯靛酚法n試劑試劑 1%的乙二酸溶液，2%的乙二酸溶液，1%淀粉溶液，6%碘化鉀溶液。 抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取20mg抗壞血酸，溶于1%的乙

2、二酸中，并稀釋至100mL，置冰箱中保存。用時(shí)取出5mL，置于50mL容量瓶中，用1%乙二酸溶液定容，配成0.02mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。 標(biāo)定：吸取此標(biāo)準(zhǔn)液5mL于三角瓶中，加入6%碘化鉀溶液0.5mL，1%淀粉溶液3滴，以0.001mol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，終點(diǎn)為淡藍(lán)色。2，6一二氯靛酚法120.088VcV計(jì)算：式中： c抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度mg/mL； V1滴定時(shí)消耗0.001mol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL； V2滴定時(shí)所取抗壞血酸的體積，mL； 0.0881mL0.001mol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于抗壞血酸的量，mg/mL。 2，6一二氯靛酚法n試劑試劑 0.000167

3、mol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取干燥的碘酸鉀0.3567g，用水稀釋至100mL，取出1mL，用水稀至100mL，此溶液1mL相當(dāng)于抗壞血酸0.088mg。 2,6-二氯靛酚溶液：稱取2,6-二氯靛酚50mg，溶于200mL含有52mg碳酸氫鈉的熱水中，待冷，置于冰箱中過夜。次日過濾于250mL棕色容量瓶中，定容，在冰箱中保存。每周標(biāo)定1次。 標(biāo)定：取5mL已知濃度的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入1%乙二酸溶液5mL，搖勻，用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉紅色，在15s內(nèi)不褪色即為終點(diǎn)。 2，6一二氯靛酚法計(jì)算：式中：T每毫升染料溶液相當(dāng)于抗壞血酸的毫克數(shù)，mg/mL； c抗壞血酸的濃度，mg/

4、mL； V1抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL； V2消耗2,6-二氯靛酚的體積，mL。12c VTV2，6一二氯靛酚法n測(cè)定步驟測(cè)定步驟提取n鮮樣制備：稱100g鮮樣，加等量的2%乙二酸溶液，倒入組織搗碎機(jī)中打成勻漿。取1040g勻漿（含抗壞血酸12mg）于100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀釋至刻度，混合均勻。n干樣制備：稱14g干樣（含12mg抗壞血酸）放入研缽內(nèi)，加1%乙二酸溶液磨成勻漿，倒入100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀釋至刻度。過濾上述樣液，不易過濾的可用離心機(jī)沉淀后，傾出上清液，過濾備用。 2，6一二氯靛酚法n測(cè)定步驟測(cè)定步驟滴定 吸取510mL濾液，置于50mL三角瓶中，快速用2，

5、6-二氯靛酚溶液滴定，直到紅色不能立即消失，而后再盡快地一滴一滴地加入（樣品中可能存在其他還原性雜質(zhì)，但一般雜質(zhì)還原染料的速度均比抗壞血酸慢），以呈現(xiàn)的粉紅色在15s內(nèi)不消失為終點(diǎn)。同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。 2，6一二氯靛酚法n結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算0()100VVTXm式中：X樣品中抗壞血酸含量，mg/100g； m滴定時(shí)所取溶液中含有樣品的質(zhì)量，g； T1mL染料溶液相當(dāng)于抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的量，mg/mL； V滴定樣液時(shí)消耗染料的體積，mL； V0滴定空白時(shí)消耗染料的體積，mL。2，6一二氯靛酚法n注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)（1）所有試劑最好用重蒸餾水配制。（2）樣品采取后，應(yīng)浸泡在已知量的2%乙二酸溶液中，以防

6、止維生素C氧化損失。測(cè)定時(shí)整個(gè)操作過程要迅速，防止抗壞血酸被氧化。（3）若測(cè)動(dòng)物性樣品，需用10%三氯乙酸代替2%乙二酸溶液提取維生素C。（4）若樣品濾液顏色較深，影響滴定終點(diǎn)觀察，可加入白陶土脫色后再過濾。白陶土使用前應(yīng)測(cè)定回收率。2，6一二氯靛酚法n注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)（5）若樣品中含有Fe2+、Sn2+、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等還原性雜質(zhì)時(shí)，會(huì)使結(jié)果偏高；Cu2+可與抗壞血酸反應(yīng)，也干擾測(cè)定。有無這些干擾離子可用以下方法檢驗(yàn)：取樣品提取液、偏磷酸-乙酸溶液各5mL混合均勻，加入0.05%亞甲基藍(lán)水溶液2滴。如亞甲基藍(lán)顏色在510s消失，即證明有干擾物存在；此檢驗(yàn)對(duì)Sn2+無反應(yīng)，可在另一份10

7、mL的樣品溶液中加入1：3鹽酸溶液10mL，加0.05%靛胭脂紅水溶液5滴，若顏色在510s消失；證明有Sn2+或其他干擾性物質(zhì)存在。為消除上述雜質(zhì)帶來的誤差，可采取以下測(cè)定方法：取10mL提取液兩份，各加入0.1mL10%硫酸銅溶液，在110加熱10min，冷卻后在用染料滴定。有銅存在時(shí)，抗壞血酸完全被破壞，從樣品滴定值中扣除校正值，即得抗壞血酸含量。CCCHOHOCHOOCHHOCH2OHOClClNOHOHClClNOHCCOCHCOOOCHCH2OHHO 維生素C 2,6-二氯酚靛酚 維生素C 2,6-二氯酚靛酚（還原型） （氧化型，粉紅色） （氧化型） （還原型） + + = v2,

8、6-二氯酚靛酚染料的鈉鹽在水溶液中顯藍(lán)色，在酸性溶液中呈紅色，被還原后紅色消失。2高效液相色譜法測(cè)定維生素高效液相色譜法測(cè)定維生素C原理原理樣品中的維生素C經(jīng)乙二酸溶液（1g/L）迅速提取后，在反相色譜柱上分離測(cè)定。 主要儀器及試劑主要儀器及試劑高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器等。乙二酸溶液（1g/L）。維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取維生素C樣本2mg與50ml容量瓶中，用乙二醇溶液（1g/L）溶解、定容，搖勻備用，用前配制。2高效液相色譜法測(cè)定維生素高效液相色譜法測(cè)定維生素Cn樣品處理樣品處理液體樣品：取原液5mL與25mL容量瓶中，用乙二醇溶液（1g/L）定容，搖勻后經(jīng)0.45m濾膜過濾后待測(cè)。固體

9、樣本：稱1g樣品于研缽中，用5mL乙二醇溶液（1g/L） 迅速研磨，過濾，殘?jiān)靡叶既芤海?g/L）洗滌，合并提取液于25mL容量瓶中，蒸餾水定容，搖勻后經(jīng)0.45m濾膜過濾后待測(cè)。2高效液相色譜法測(cè)定維生素高效液相色譜法測(cè)定維生素Cn測(cè)定測(cè)定 取5m標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行色譜分析，重復(fù)進(jìn)樣3次，取標(biāo)樣峰面積的平均值。然后在相同條件下，取5L樣品液進(jìn)行分析，以相應(yīng)峰面積計(jì)算含量。 n色譜條件色譜條件 色譜柱，-Bondapak C18（直徑3.9mm*300mm）；流動(dòng)相，H2C2O4（1g/L）；流速，1.0mL/min；檢測(cè)器，紫外245nm；進(jìn)樣量，5L。 2高效液相色譜法測(cè)定維生素高效液相色譜法測(cè)定維生素Cn