關(guān)于靈芝-----一種有藥用價值的真菌

1、關(guān)于靈芝關(guān)于靈芝Ganoderma有治有治療作用的一種真菌的回顧療作用的一種真菌的回顧靈芝是擔(dān)子菌類，幾個世紀(jì)以來一直用于醫(yī)學(xué)治療，尤其在中國，日本和韓國。靈芝最常用的名字包括Lingzhi, Munnertake, Sachitake, Reishi 和Youngzhi. 本文通過例舉最常見的種和最典型的化合物對已發(fā)表的文獻(xiàn)進(jìn)行回顧。靈芝的生物活性方面的報道比較多，結(jié)構(gòu)方面的信息相對而言少一些。其提取物主要包括多糖和萜類，許多物質(zhì)對當(dāng)代主要的病都有作用，它們的作用范圍很廣，從抗癌到消除膽囊腫。然而，這些報道沒有系統(tǒng)地利用純的化合物進(jìn)行令人信服的論證。下一步任務(wù)就是生產(chǎn)一些有用的藥物，但批量生

2、產(chǎn)可能是個瓶頸。背景靈芝含有大量新奇的“真菌化合物”。雖然沒被重視，但它在自然界木質(zhì)素的分解過程中的確貫穿始終。圖1是一個典型的靈芝子實體，僅從形態(tài)學(xué)來看有點(diǎn)像樹舌靈芝。這種真菌當(dāng)做藥物使用已經(jīng)上千年，特別是在中國（公元前100年就有記載了），他們把它稱作Lingzhi。在日本則稱為Munnertake , Sachitake 和 Reishi，在韓國被稱作Youngzhi。然而，這個種或其它任何別的種的名字是否始終代表相同的物種，一直是個問題。靈芝的分類情況很不清晰，因為種和屬的概念混淆不清。舉例來說，相似的真菌在層孔菌，多孔菌和Tomophagus都存在?！癓ingzhi”是對中國產(chǎn)的靈芝

3、子實體的稱呼。然而，文獻(xiàn)中提到一些名字對鑒定等工作造成困難( Huie and Di, 2004)?！癓ingzhi”這個詞還是有人推崇的。靈芝確實含有生物活性成分（比如三萜和多糖），它們對許多疾病有預(yù)防和治療作用，這其中包括高血壓，糖尿病，肝炎，癌癥和愛滋病。這些生物醫(yī)學(xué)實踐主要在中國，韓國，日本和美國開展。很奇怪其它國家沒有進(jìn)行?！癓ingzhi”產(chǎn)品的研究，質(zhì)量保證和控制取決于活性組分的分離純化(Huie and Di, 2004)。迫切需要一個權(quán)威的分類法來界定某種靈芝真正代表什么。另外,關(guān)于活性產(chǎn)物生理學(xué)的研究也很必要。 “Lingzhi”有關(guān)的生物制劑被廣泛用作保健品和“草本”藥材

4、。當(dāng)然，這種真菌并不是草本（它們屬植物），如此隨意地叫它“Lingzhi”容易造成混淆。菌種保藏沒什么商業(yè)價值，且極其耗錢。在網(wǎng)上搜索到更多的組織賣靈芝相關(guān)產(chǎn)品。比如，美國某公司有個網(wǎng)站（http:/ Polyporus, Tomophagus等有什么關(guān)系？不是拉丁文的那些名字代表什么？如Lingzhi, Songshan lingzhi, Reishi。保存在菌種保藏室的靈芝標(biāo)本獲得統(tǒng)一認(rèn)證沒有？這些憑證對其它標(biāo)本適用嗎（Paterson, 2005)？這些晦澀難懂的信息有多少價值？曾經(jīng)發(fā)生過僅用一個標(biāo)本來進(jìn)行種的鑒定（Di et al., 2003）的情況，但這對那些沒獲得標(biāo)本的變種是無法

5、進(jìn)行鑒定的。例如，一種已經(jīng)被廣泛應(yīng)用的靈芝，就是從上文提到的一些組織獲得的（Ziegenbein et al., 2006)。這些私人企業(yè)在多大程度上應(yīng)用了科學(xué)鑒定？菌種保藏也存在相同的問題：不管是公共機(jī)構(gòu)還是私人企業(yè)，都沒有注冊，保存和鑒定的程序：中國保藏的菌種極有可能與美國的不適用同一標(biāo)準(zhǔn)。 “Lingzhi”主要的活性成分是三萜和多糖。很奇怪其它種類的內(nèi)源次級代謝物尚未發(fā)現(xiàn)。比如多酮途徑和莽草酸途徑就沒有其它種類的代謝產(chǎn)物的存在。靈芝能從寄主身上轉(zhuǎn)化一些化合物，但脫離寄主后其自身卻不能產(chǎn)生。比如木質(zhì)素衍生的化合物，因為在白腐菌中存在以下代謝途徑：木質(zhì)素酚類二氧化碳水能量(Leonowic

6、z et al., 1999) 。 “Lingzhi”這個詞應(yīng)該避免出現(xiàn)在科技文獻(xiàn)中(cf. Huie and Di, 2004)，因為它不夠準(zhǔn)確，應(yīng)該使用拉丁文。作為折衷的辦法，筆者建議加引號?！癓ingzhi”已被用作治療：偏頭痛，高血壓，關(guān)節(jié)炎，支氣管炎，氣喘，厭食癥，胃炎，痔瘡，糖尿病，高膽固醇血癥，腎炎，痛經(jīng)，便秘，紅斑狼瘡，肝炎和心血管疾病。據(jù)報道，“Lingzhi”有以下功效：(a)抗癌（包括白血?。?，（b）抗衰老和（c）抗菌，抗病毒（包括HIV）。近來有研究表明，“Lingzhi”提取物中存在刺激神經(jīng)組織的化合物，能調(diào)節(jié)神經(jīng)元的分化并對鼠PC12細(xì)胞有保護(hù)作用(Huie and

7、 Di, 2004)。如上所述，靈芝不是草本植物：它是一類復(fù)雜的真菌，人類幾個世紀(jì)以來一直在認(rèn)識，了解和利用它。真菌獨(dú)立于植物自成體系，在進(jìn)化層面它更接近動物。比如，一般認(rèn)為靈芝不含木質(zhì)素，但在Huie and Di (2004)的文章中提到，木質(zhì)素可能是基于酶（纖維素酶）的提取法（提取活性成分）很有效的原因。這種酶分解纖維素，從而就可以提取出需要的物質(zhì)。這個與以前的理論相差甚遠(yuǎn)。 “草本”藥用真菌靈芝 Sliva (2006) and Stanley et al. (2005) 提到靈芝是一種常見的藥用真菌，在亞洲國家當(dāng)做中藥（TCM）使用已有超過2000年的歷史。它能維持人的活力并能促進(jìn)長

8、壽。雖然它的有效性尚待考察，但這種真菌已經(jīng)被用于許多疾?。òò┌Y）的預(yù)防，甚至治療。西醫(yī)已經(jīng)開始研究中藥。在美國，中草藥已經(jīng)越來越普遍地用于癌癥的治療?？茖W(xué)地闡明這種天然產(chǎn)物的作用機(jī)制，將表明它們是否是有效的治療選擇，或者是否可以作為癌癥治療的輔助方式，這是對治療的有益嘗試。此外，Chen et al. (2006)提到許多“草本”藥材在亞洲國家被廣泛用作免疫調(diào)節(jié)劑。靈芝是其中之一，臨床前試驗證明其多糖成分有很強(qiáng)的作用。但是，正如前面所提，臨床的證據(jù)太少。Pero et al. (2005)表明，在營養(yǎng)食品工業(yè)中，往往采用幾種營養(yǎng)品聯(lián)用的方式來達(dá)到協(xié)同效應(yīng)。然而，這些方法還只是存在于假設(shè)層面

9、，因為它們通常沒有經(jīng)過科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臋z測，沒有考慮到各種活性成分之間的相互作用（Aydemir, 2002).目前，靈芝干燥粉末以保健品的形式在世界范圍內(nèi)廣泛使用。Stanley et al. (2005)證實靈芝能導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖，以及抑制人體前列腺癌細(xì)胞PC-3的轉(zhuǎn)移。Hajjaj et al. (2005) 認(rèn)為靈芝是多孔菌類藥用真菌，在日本它被稱作Reishi。此外，Muller et al. (2006)強(qiáng)調(diào)，過去的幾個世紀(jì)，這種“草藥”已經(jīng)用于許多疾病的治療。Lin et al. (2006)指出，G. tsugae其實就是中國的Songshanlingzhi，在臺灣已得到馴

10、化，并廣泛應(yīng)用于疾病治療。Johnston (2005)提到靈芝被當(dāng)做治療癌癥的一種中藥（TCM）使用。粗提物簡要描述 通過TLC檢測發(fā)現(xiàn)靈芝酸B和C僅“l(fā)ingzhi”中含有。用TLC進(jìn)行靈芝種之間的鑒定，發(fā)現(xiàn)各自特有的三萜類化合物(Huie and Di, 2004).通過HPLC法可以將樣品（僅限所參考的文獻(xiàn)）歸為18類。從靈芝和松杉靈芝的子實體中同樣得到了三萜類化合物，它們的TLC圖譜很特別。Miller et al. (1995) 記述了一種快速從寄生在油棕上的靈芝子實體和培養(yǎng)基中分離化合物的方法。通過質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)有些化合物并不是羊毛甾醇類。Di et al. (2003)首次用高效

11、TLC法檢測了靈芝糖類，得到了樹舌靈芝和靈芝特有的提取物，更多的種類需要進(jìn)一步的研究。靈芝及相關(guān)種中三萜類化合物通過HPLC法進(jìn)行了分類，通過HPLC圖譜的比對，可以把它們分為18個組，與形態(tài)學(xué)的觀察（包括TLC）高度一致，這是對 “Lingzhi”高速而有效的檢測方法。用這種方法對松杉靈芝及靈芝子實體中的三萜進(jìn)行了分析。用HPLC分析從靈芝粗提物中分離出氧化的三萜，這是粗提物在化學(xué)分離方面的應(yīng)用(Lin and Shiao, 1987).靈芝菌株的數(shù)據(jù)庫已經(jīng)建立(Nishitoba et al., 1986), Hirotani et al. (1993a)做了“相關(guān)種”相似的工作. 傅里葉

12、變換紅外吸收光譜及HPLC應(yīng)用于靈芝和松杉靈芝商業(yè)化產(chǎn)品的分類鑒定，把它們分為三類。其它科學(xué)工作者從松杉靈芝的子實體中分離出九種三萜，它們都是首次用HPLC進(jìn)行分析。一種檢測靈芝不同部位靈芝酸B的方法檢測到菌蓋含量最高，其次是菌柄，孢子中含量最少。從栽培的和野生靈芝中檢測到靈芝酸A,C,D,E，這種方法也適用于“中藥”制劑（當(dāng)然包括lingzhi）的質(zhì)量檢驗(Huie and Di, 2004)。一種同時能分析靈芝中赤芝孢子酸A，赤芝酸A，靈芝酸B和靈芝酸C的方法已經(jīng)得到驗證。研究表明四種三萜的量在子實體中比孢子高，而破壁率85的孢子比沒有破壁的孢子的高。另一種定量分析孢子中靈芝酸和靈芝醇的方

13、法也已經(jīng)有報道，從來自不同國家五種靈芝子實體分離得到六種靈芝醇。用相同的柱子（2乙醇：乙腈=7:3作流動相）進(jìn)行分離，除了靈芝酸C1和H外，還得到了另外七種靈芝酸。結(jié)果表明：孢子中總?cè)坪渴亲訉嶓w中的5-20倍(Huie and Di, 2004)。然而，有其它研究表明三萜在孢子中含量最低。Miller et al. (1995)介紹了一種HPLC方法，它運(yùn)用梯度洗脫和紫外光檢測，用于寄生在油棕上的靈芝的檢測，發(fā)現(xiàn)提取物產(chǎn)量可觀。Wang et al. (2006)定性分析了各種靈芝中的三萜。靈芝和紫芝都作為中藥靈芝的法定原植物來源種收錄進(jìn)05版中國藥典，認(rèn)為它們具有相同的治療效果，但是靈芝

14、中總?cè)频钠骄渴亲现サ?0倍，也就是說它們的療效可能完全不同。所以提議把它們作為兩種不同的“中藥”。另外，有些人認(rèn)為這些化合物的療效并不是那么可靠，或者說這些療效沒有得到科學(xué)的證明?？傊?，靈芝的療效有待進(jìn)一步證明。據(jù)報道，“Lingzhi”及“相關(guān)種”中的多糖由各種單糖組成，如：葡萄糖，半乳糖，甘露糖，阿拉伯糖，木糖，巖藻糖，鼠李糖，葡糖醛酸和galacuronic。它們可用紙層析進(jìn)行分離(Huie and Di, 2004).而用HPLC（或TLC）進(jìn)行多糖的分離很少有報道。高效分子量排阻層析（HPSEC）已用于靈芝產(chǎn)品Siwei Lingzhi的質(zhì)量檢驗。靈芝化學(xué)組分多糖及三萜是靈芝及

15、相關(guān)種中研究最深入的兩類物質(zhì)，固醇，凝集素和蛋白質(zhì)也有所涉及。本文列出了刊登在本刊（Phytochemistry）的所有與靈芝有關(guān)的多糖和三萜化合物。有些種提取出相同的化合物，因此研究了它們之間的親緣關(guān)系。Cole et al. (2003)列出了從無柄紫靈芝中得到的四種化合物 .Cole 和Schweikert (2003)從樹舌靈芝中分離出含28個C的固醇類物質(zhì)：麥角固醇；(24S)24-methyl-5-cholesta-7,16-dien-3-ol；(24S)24-methylcholesta-7,22-dien-3-one (麥角甾-7,22-二烯-3-醇十五酸酯 )。然而，這些名字

16、與層孔菌中的一些化合物“相同”。C30的固醇類軟木三萜酮和赤楊酮存在同樣的問題：它們都列在樹舌靈芝名下。阿里紅酸和senexdiolic acid（也是C30）分別列在F. officinalis 和 F. senex名下。而靈芝中列出：（a）40種靈芝酸，（b）14種靈芝醇，（c）靈赤酸和（d）15種赤芝酸。另外，Akihisa et al. (2005)描述了從靈芝子實體中獲得的下列物質(zhì)：（a）兩類三萜類化合物：20(21)-dehydrolucidenic acid A 和 methyl 20(21)-dehydrolucidenate A，（b）5種新20-羥基赤芝酸 : 20-hyd

17、roxylucidenic acid D2, 20-hydroxylucidenic acid F, 20-hydroxylucidenic acid E2, 20-hydroxylucidenic acid N和20-hydroxylucidenic acid P。Shim et al.(2004)從樹舌靈芝子實體的甲醇提取液中分離到四種羊毛甾烷類的三萜，它們是(a) 3b,7b,20,23n-tetrahydroxy-11,15-dioxolanosta-8-en-26-oic acid, (b) 7b,20,23n-trihydroxy-3,11,15-trioxolanosta-8-e

18、n-26-oic acid, (c) 7b,23n-dihydroxy-3,11,15-trioxolanosta-8,20E(22)-dien-26-oic acid,and(d)7b-hydroxy-3,11,15,23-tetraoxolanosta-8,20E(22)-dien-26-oic acid methyl ester。作者表示將來會有更多的此類物質(zhì)的報道。樹舌靈芝和靈芝中的自由甾醇（固醇）類物質(zhì)主要包括：麥角固醇和24-methylcholesta-7,22-trien-3-ol.另，從靈芝中首次獲得了8,9-環(huán)氧麥角甾-5,22-二烯-3,15-二醇 (Huie and D

19、i, 2004).靈芝和G. orgonense 子實體中分離的抗菌成分能抑制G+。Sudirman and Mujiyati (1997)觀察到七種印尼靈芝的提取物抑制枯草芽孢桿菌的生長。Yoon et al. (1994)利用四種抗生菌研究了靈芝的水溶性提取物的累加效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)抗菌活性有所提高。Coletto and Mondino (1991)報道，無柄靈芝和靈芝的菌絲體和培養(yǎng)基的甲醇提取物抑制枯草芽孢桿菌生長，前者同時還抑制金黃葡萄球菌。靈芝菌絲體的乙醇提取物有較強(qiáng)的抗炎癥活性(Kendrick, 1985). Shieh et al. (2001)推測靈芝的保肝護(hù)腎功能可能源于它的超氧

20、化物清除能力。Lin et al. (1995)注意到抗肝毒素活性即等于自由基清除能力。小分子量的水相部分能強(qiáng)烈地抑制HIV-1(Kim et al., 1997).靈芝子實體提取物能降低小鼠血漿中的膽固醇含量(Kabir et al.,1988). 科技工作者進(jìn)行了靈芝對癌細(xì)胞作用的研究(Sliva, 2006)，觀察了其對白血病，淋巴瘤和骨髓瘤細(xì)胞增殖的抑制和細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)。他們得出結(jié)論，惡性白血病細(xì)胞的抑制與細(xì)胞周期的阻斷和細(xì)胞凋亡有關(guān)，而淋巴瘤細(xì)胞的抑制是通過基因表達(dá)的上游調(diào)控來調(diào)節(jié)的。正好，靈芝能抑制不同癌癥細(xì)胞的信號途徑。用含0.15靈芝酸C2的靈芝提取物進(jìn)行了研究，然而，不確定劑

21、量效應(yīng)關(guān)系（對造血細(xì)胞的作用）。三萜的種類和含量取決于：產(chǎn)地，培養(yǎng)條件，提取的方法和菌種的不同。 靈芝某些提取物明顯地抑制細(xì)胞內(nèi)的信號鏈路和癌細(xì)胞的擴(kuò)散，而其它的則不能：這種復(fù)雜性意義重大。天然產(chǎn)物的某些組分能減少整個產(chǎn)品的細(xì)胞毒活性（反之亦然-筆者加）。另外，不同的生物活性成分調(diào)節(jié)不同的信號鏈路，能起到協(xié)同作用（Aydemir, 2002).由此可見靈芝中的三萜抑制癌細(xì)胞的生長和擴(kuò)散，而多糖通過產(chǎn)生細(xì)胞因子來提高免疫能力及激活免疫細(xì)胞的抗癌活性來起作用(Sliva, 2006).總之，靈芝能抑制：（a）胸腺和前列腺癌細(xì)胞的增殖和擴(kuò)散；（b）胸腺和前列腺癌細(xì)胞的生長及細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)；（c）肝癌

22、細(xì)胞的生長和（d）血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的分泌及前列腺癌細(xì)胞生長因子的轉(zhuǎn)化。此外，能誘導(dǎo)直腸癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡(Sliva, 2006). Stanley et al. (2005)也指出靈芝誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖，抑制人前列腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。然而，其分子機(jī)制還不是太清楚。靈芝對直腸癌晚期病人有免疫調(diào)節(jié)作用(Chen et al.,2006). 此外，許多證據(jù)表明靈芝有抑制前列腺癌細(xì)胞增殖的功能(Johnston, 2005). Pero et al. (2005)報道了一個含28種真菌（包括冬蟲夏草，豬苓，灰樹花，變色栓菌和靈芝）提取物制劑優(yōu)化免疫能力的模型，但是實際效果比預(yù)期差。Muller

23、 et al. (2006)從靈芝中篩選出對人體癌細(xì)胞株有抗增殖的組分，這個結(jié)論表明，靈芝對抗白血病，淋巴瘤和多發(fā)性骨髓瘤等癥有深遠(yuǎn)意義，并且可能是一種新的治療血液惡性腫瘤的輔助療法。Kuo et al. (2006)有足夠證據(jù)表明干的靈芝菌絲體可增強(qiáng)免疫能力。Lin et al.(2006)研究了松杉靈芝的兩種保健品，結(jié)果表明，保健品通過減少炎癥細(xì)胞的分泌及滲透進(jìn)入肺和氣管可以緩解支氣管炎。19種食藥用蘑菇中，靈芝的甲醇提取物具有最強(qiáng)的5-還原酶抑制能力(Noguchi et al., 2005)。臨床試驗通過患輕微尿道堵塞病人的治療來評估提取物的安全性和功效，發(fā)現(xiàn)其有顯著的功效，靈芝提取物

24、是安全的，完全可以接受。Fujita et al. (2005)研究了19種食藥用蘑菇的甲醇提取物對5-還原酶抑制作用（同樣見Noguchi et al., 2005)，還是靈芝提取物表現(xiàn)最好。靈芝子實體或提取物表現(xiàn)出很強(qiáng)的對閹割小鼠生成睪丸酮的抑制能力。這些結(jié)論表明靈芝可能對良性前列腺增生有效。松杉靈芝一般以Ling chih和“baby Ling chih”，菌絲體和發(fā)酵液等形式被利用(Mau et al., 2005a). “Baby”這個詞當(dāng)然不科學(xué)。成熟和“ babyLing chih”的甲醇提取物表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗氧化活性?？偡邮亲钪饕奶烊豢寡趸M分，在所有提取物均有發(fā)現(xiàn)，含量為24

25、.035.6 mg g. 在熱水提取物中同樣檢測到高的抗氧化活性(Mau et al., 2005b).在20 mg/ml濃度時，消除羥基的能力分別是Ling chih baby Ling chih mycelia filtrate.總酚同樣是熱水提取物主要的抗氧化組分。濃度范圍40.8642.34 mg/g.由EC50 來看，松杉靈芝（Ling chih and baby Ling chih）有較好的抗氧化活性（除了對亞鐵離子的螯合力）。Lu et al. (2004)通過建立一個特別的，包含HUC-PC和其它細(xì)胞的HUC(人尿道上皮)模型，在體外對靈芝的預(yù)防能力進(jìn)行了研究，研究過程中用到了

26、靈芝子實體和孢子的乙醇和水提物。結(jié)果表明，乙醇提取物有更強(qiáng)的抑制能力。在無毒害濃度范圍內(nèi)(4080 lg/ml) （見表2）,這些提取物能誘導(dǎo)肌動蛋白的聚合，從而抑制致癌物質(zhì)4-aminobiphenyl對兩種細(xì)胞株轉(zhuǎn)移的誘導(dǎo)。它們的化學(xué)組分（乙醇和水提?。┡c前面提到的提取物（甲醇和熱水提取）很相似?？偠灾?，臨床前與臨床試驗對靈芝用于預(yù)防和或治療癌癥以及其它一些應(yīng)用都是必要的(Sliva, 2006)靈芝單一化合物及其生物醫(yī)學(xué)的應(yīng)用 Gao et al. (2003)回顧了靈芝屬的“抗病毒作用”。靈芝的抗癌作用與三萜，多糖和或免疫調(diào)節(jié)蛋白有關(guān)，后者通過抑制DNA聚合酶活性,抑制Ras腫瘤蛋白

27、的翻譯后修飾或促進(jìn)細(xì)胞因子的產(chǎn)生來實現(xiàn)(Sliva, 2006).靈芝子實體被公認(rèn)含有活性成分其活性組分主要存在于：（a）液態(tài)培養(yǎng)菌絲體(Gao et al., 2000b),（b）培養(yǎng)基(Song et al., 1998; Tasaka et al., 1988a)和（c）孢子(Min et al., 2001). ，在表2中列出了主要的生物活性成分。1. 三萜和固醇類 萜類包括四類化合物：（a）揮發(fā)性單萜和倍半萜（香精油）（C10和C15）；（b）不易揮發(fā)的二萜（C20）；（c）不揮發(fā)的三萜及固醇類（C30）和（d）類胡蘿卜素（C40）。大多數(shù)研究集中在不揮發(fā)的三萜和固醇上，其實它們有點(diǎn)

28、名不副實( Lindequist,1995). Kim and Kim (1999a)總結(jié)了靈芝三萜等的化學(xué)結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系。三萜的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)是羊毛甾醇，它是一種重要的中間體，（三萜）結(jié)構(gòu)的多樣性都是由于這種基本結(jié)構(gòu)的立體化學(xué)的重構(gòu)而產(chǎn)生的。自靈芝酸A和B被發(fā)現(xiàn)以來，已經(jīng)有130多種羊毛甾醇類的三萜的物化屬性被描述(Kim and Kim, 1999a)?！癓ingzhi”中的苦味組分是三萜，它具有藥理學(xué)活性(Table 2; Huie and Di, 2004).Nishitoba et al. (1986)認(rèn)為三萜是靈芝特有的。然而，它們隨后被發(fā)現(xiàn)存在于以下“種”中：G. colossum

29、,松杉靈芝，樹舌靈芝，一種沒有被鑒定的種，熱帶靈芝，G. concinna和弗氏靈芝(Roberts,2004).這表明它們遠(yuǎn)比首次發(fā)現(xiàn)時的親緣關(guān)系要近，從子實體中都分離得到三萜就是最好的證明。許多都有抗腫瘤和抗病毒等生物活性。事實上，孢子中的靈芝醇與靈芝酸含量比子實體中的更高(Min et al., 1998).栽培的菌絲體也含有相似的化合物(Lin et al., 2003).三萜被認(rèn)為具有抗癌的潛能，因為它能抑制腫瘤的增殖(Lin et al., 2003)；它們對腫瘤細(xì)胞有直接的細(xì)胞毒活性(Gonzalez et al., 2002)，而不像多糖一樣是增強(qiáng)免疫能力。靈芝的子實體有特別的

30、苦味組分，那極有可能是其具有活性的原因所在(Mizuno, 1997).另外，三萜能抑制HIV-1蛋白酶的活性(Min et al., 1998)和HIV-2蛋白酶活性(El-Mekkawy et al., 1998).從靈芝孢子中得到的赤芝孢子酸A的護(hù)肝機(jī)制已經(jīng)弄清楚了( Chen and Yu 1999).從靈芝和樹舌靈芝的子實體分離得到的三萜及丙二酸半酯能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖(Chairul et al., 1991; Lin et al., 1991).然而，一些酯類在高濃度時表現(xiàn)出一定的毒害作用(Chairul et al., 1990).Su et al. (2000)檢測了從松杉靈

31、芝分離到的lanostanoids（羊毛固烷系化合物），發(fā)現(xiàn)它對三個癌細(xì)胞株有抑制作用。羊毛固烷與一種固醇通過細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)能致細(xì)胞死亡，表明是這種固醇具有切斷細(xì)胞周期的作用(Gan et al., 1998a). Gonzalez et al. (2002)觀察到把白血病人的HL-60細(xì)胞與從G. concinna.中分離的三種羊毛固烷接觸能導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。從G.concinna分離的三萜抑制小牛和小鼠DNA聚合酶的活性，從而導(dǎo)致DNA修復(fù)，重組及DNA復(fù)制都受到影響(Mizushina et al.,1999).赤芝酸O和赤芝內(nèi)酯能抑制HIV I型逆轉(zhuǎn)錄酶活性。靈芝中的兩種腦苷酯能選擇性地抑制

32、哺乳動物DNA聚合酶的復(fù)制(Mizushina et al., 1998)，但對其它的聚合酶，轉(zhuǎn)移酶，HIV逆轉(zhuǎn)錄酶，DNA聚合酶，脫氧核糖核酸酶和ATP酶沒什么作用。Morigiwa et al. (1986)注意到靈芝子實體的甲醇提取物能抑制血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶活性，這種酶能緩解高血壓。研究發(fā)現(xiàn)這種提取物含有十種羊毛甾醇類三萜，其中八種具有活性。而且，靈芝酸S通過促進(jìn)磷脂酰肌醇4,5-bisphosphate的水解來防止血小板凝集(Shiao, 1992).根據(jù)近來的一些研究可知，三萜有各種生物活性，如：抗氧化，護(hù)肝，抗過敏，降血壓，降膽固醇及抗血小板凝集。這些作用是通過控制相應(yīng)的酶來實現(xiàn)的，

33、如半乳糖酶，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，膽固醇合成酶(Huie and Di, 2004)等. Hajjaj et al. (2005)報道了26-oxygenosterols（氧化甾醇）類靈芝醇A,靈芝醇B,靈芝醛A，靈芝酸Y的分離和鑒定，他們認(rèn)為膽固醇合成抑制的關(guān)鍵點(diǎn)就在羊毛甾醇和1，7-烯膽（甾）烷醇。26-oxygenosterols有降低血液中固醇含量的療效。Timo et al. (2005)從弗氏靈芝的子實體中分離出四種固醇和十種三萜，其中包括三種新的三萜. 其中Ganoderone A, lucialdehydeB有較強(qiáng)的抑制單純性皰疹病毒（HSV）活性的能力。從擬鹿角靈芝分離的羊毛甾醇

34、類三萜能抑制：（a）各種癌細(xì)胞株的生長，（b）拓?fù)洚悩?gòu)酶I和IIa 的活性(Li et al., 2005).其中活性最強(qiáng)的是靈芝酸X（GAX），它抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶的作用，后者促進(jìn)癌細(xì)胞細(xì)胞凋亡，滿足抗癌藥物的特征。Liu et al. (in press)認(rèn)為靈芝的乙醇提取液對5-還原酶的同工酶有抑制作用，能抑制前列腺的增生。分析表明活性成分是三萜。這些結(jié)果表明靈芝的三萜成分“可能”是治療良性前列腺增生的有效要素。含0.15%靈芝酸C2的靈芝提取物有抗癌作用，然而不知道是否存在劑量效應(yīng)關(guān)系。不同的化合物能調(diào)控不相干的信號途徑，所以能產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。再一次表明三萜和多糖作用機(jī)制的不同?？傊鼇淼?/p>

35、研究表明：（1）從靈芝菌絲體得到的一種三萜成分對肝癌細(xì)胞有抑制作用，（2）已證實了靈芝提取物的抗氧化活性，三萜成分（包括靈芝酸A,B,C,D, lucidenic acid B和靈芝酮三醇）對經(jīng)焦棓酸氧化的紅細(xì)胞膜和Fe(II)-抗壞血酸誘導(dǎo)的酯質(zhì)過氧化的肝細(xì)胞線粒體有很強(qiáng)的作用效果，（3）靈芝孢子中的三萜，如靈芝酸，luciumol B,靈芝酮二醇，靈芝酮三醇和靈赤酸，有較強(qiáng)的抗HIV-1蛋白酶活性。靈芝中發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)相近的固醇及三萜。其子實體和菌絲體有一定的細(xì)胞毒活性。Ergosterolperoxide能增強(qiáng)亞油酸對哺乳動物DNA聚合酶的抑制作用(Mizushina et al., 1998

36、).靈芝固醇（GS）及它的主要組分（GS1）對小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)系處在(H/R)條件下的作用在體外進(jìn)行了研究(Zhao et al., 2005)，結(jié)果表明，GS對H/R（低氧/再給氧）誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥有作用。另外，用GS1預(yù)處理，能明顯延妨神經(jīng)元細(xì)胞的衰老和活性氧的生成。從樹舌靈芝子實體中分離的甾族化合物，證明具有廣泛的活性和殺菌能力(Smania et al., 1999).弗氏靈芝中的Ganomycins A and B,具有抗G+和G-細(xì)菌的作用(Mothana et al., 2000).固醇(Komoda et al., 1989) 和氧化三萜(Shiao, 1992)

37、在體外有抑制膽固醇生成的能力。2.多糖多糖是一類結(jié)構(gòu)多變的物質(zhì)，它們理化性能差別較大。最主要的靈芝多糖是-1-3 和 -1-6-D葡聚糖。-1-3 D-glucopyronan含1-15個-1-6單葡糖基單元?？鼓[瘤化合物包括：糖蛋白（多糖和蛋白質(zhì)），雜多糖和多聚糖A,B和C(Lindequist, 1995).它們有個共同的特征，即具有高的分子量，其水溶性較大，抗腫瘤活性也越強(qiáng)。然而，有些難溶于水的多糖也具有抗腫瘤活性(Wang et al.,1993)和多糖支鏈作用活性。關(guān)于靈芝抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性的研究早在1957年就有報道，近來更多的研究集中在抗腫瘤組分上，尤其是多糖和肽聚糖。比如，1

38、980s用水和堿液提取得到的葡聚糖證明有生物活性。具有生物活性的多糖主要從子實體(Bao et al., 2002; Zhang and Lin, 2004)和液體培養(yǎng)菌絲體(Kim et al., 1993)中獲得。而從培養(yǎng)基(Kim et al., 2003)則很少獲得。靈芝中水溶性的多糖能強(qiáng)烈地抑制頑固性腫瘤Sarcoma 180的增殖，抑制率達(dá)95。大多數(shù)抗腫瘤的葡聚糖含有一個分枝的葡聚糖核心，其平均分子量為1,050,000Da.多糖被認(rèn)為是通過增強(qiáng)宿主免疫調(diào)節(jié)能力而不是直接對腫瘤細(xì)胞有毒害作用而起作用的。非水溶性的多糖生物活性大于水溶性的多糖。已經(jīng)有超過200種多糖從靈芝子實體，孢

39、子，菌絲體和液體培養(yǎng)基中獲得(Huie and Di, 2004).靈芝多糖具有抗單純性皰疹病毒（HAS-1,2）(Eo et al., 1999b, 2000; Kim et al.,2000; Oh et al., 2000)活性。多糖高濃度時具免疫抑制力，所以在治療中使用適當(dāng)?shù)臐舛染惋@得相當(dāng)重要了。靈芝中分離得到的組分能抑制腫瘤細(xì)胞的生長，通過刺激單細(xì)胞核白血球細(xì)胞細(xì)胞因子（T淋巴細(xì)胞）的形成從而激活宿主的免疫應(yīng)答來實現(xiàn)(Lieu et al., 1992)，它還能刺激白細(xì)胞介素2的形成(Lei and Lin, 1992; Ooi et al.,2002).這些多糖的活性和作用機(jī)理是當(dāng)

40、時的一個研究熱點(diǎn)。宿主抗腫瘤的能力會隨著依附到葡聚糖的羥基的增加而增強(qiáng)(Sone et al., 1985).小鼠Sarcoma 180細(xì)胞的轉(zhuǎn)移會被靈芝子實體或培養(yǎng)基(Sone et al.,1985)中的-D-glucan多糖阻止。Ooi et al. (2002)同樣也注意到沸水提取的靈芝多糖對惡性腫瘤Sarcoma 180增殖的抑制和明顯的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子表達(dá)水平的提高。而紫芝水溶性的葡聚糖(Ukai et al., 1983)或菌絲體的提取物(Chen et al., 1991)對口腔腫瘤細(xì)胞沒檢測到細(xì)胞毒性（即沒作用）。六種水溶性的多糖相繼從松杉靈芝的菌絲體中獲得(Peng et

41、al.,2005).它們是雜多糖-蛋白質(zhì)復(fù)合物。GTM3和GTM4包含(13)-D-glucans 和(14)-D-glucans（葡聚糖），而GTM5和GTM6主要包含(1 6)-branched (1 3)-D-glucan.隨著分離的進(jìn)展，部分質(zhì)量分?jǐn)?shù)從90.2%下降到57.1%,伴隨著抗腫瘤活性的增強(qiáng)。多糖GTM1,2,3對頑固性腫瘤Sarcoma 180的抑制率達(dá)到50以上。表明多糖的抗腫瘤活性“并不是微不足道的”。多糖有增強(qiáng)DNA聚合酶活性的作用(Lei and Lin, 1993).研究人員觀察到，腹腔注射靈芝多糖（GL-B）后，小鼠脾臟細(xì)胞的DNA聚合酶活性增強(qiáng)。Zhang a

42、nd Lin (2004) 和 Hikino et al. (1985)發(fā)現(xiàn)從靈芝子實體中分離的多糖對小鼠有降血糖的作用。然而，Tomoda et al. (1986)研究表明不是多/聚糖在起作用，而是肽聚糖。一個不太常規(guī)的報告指出，從松杉靈芝子實體的濾渣中發(fā)現(xiàn)一種“靈芝幾丁質(zhì)”被用來生產(chǎn)繃帶(Su and Hsu, 1995).Chen et al. (2006)總結(jié)了近來大多數(shù)報告，發(fā)現(xiàn)靈芝有較強(qiáng)的對晚期直腸癌的免疫調(diào)節(jié)能力。 多糖的研究主要集中于：（1）水溶性多糖能防止DNA分解，從而說明“l(fā)ingzhi”的抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)能力與其抗氧化能力有密切關(guān)系。（2）靈芝多糖肽能通過消除活性氧來

43、降低低密度脂蛋白的氧化。（3）靈芝分離得到的一種蛋白多糖的C/P值為（11.5：1）它能刺激鼠脾臟淋巴球的增加，導(dǎo)致a,b,c,d 3到4倍的增長:(a)B細(xì)胞的百分比，（b）免疫球蛋白的分泌，(c)白細(xì)胞介素2的生成，（d）蛋白激酶的表達(dá)。（4）靈芝菌絲體多糖有抑制雌雄小鼠纖維肉瘤的作用，同時還能抑制一種腫瘤細(xì)胞向肺部的遷移。多糖能刺激血漿單核細(xì)胞細(xì)胞因子，腫瘤抗壞死因子，干擾素和白介素的增長。同時發(fā)現(xiàn)植入腫瘤小鼠的壽命增長（它們嚴(yán)格執(zhí)行GLP,即良好實驗室管理規(guī)范）。（5）2種蛋白聚糖：NPBP（中性蛋白聚合糖）和APBP（酸性蛋白聚合糖）從靈芝水溶性物質(zhì)中獲得，APBP有更強(qiáng)的抗病毒能力

44、，它能抑制HSV，它的活性可能與它能結(jié)合細(xì)胞膜上的HSV特有糖蛋白有關(guān)(Huie and Di, 2004).靈芝多糖(Gl-PS)有多種免疫調(diào)節(jié)能力，試驗結(jié)論表明(Gl-PS)是一種有潛力的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)器和免疫強(qiáng)化因子(Zhu and Lin, 2006).多糖的提取過程符合標(biāo)準(zhǔn)的方法論(Huie and Di, 2004).“l(fā)ingzhi”的水溶性多糖的提取可通過纖維素酶的水解作用來實現(xiàn)，此法是基于酶對多糖基底板（由纖維素和木質(zhì)素構(gòu)成）的分解來實現(xiàn)。木質(zhì)素出現(xiàn)在靈芝中很奇怪，可能是個錯誤的假設(shè)?？赡艿脑蚴牵涸?jīng)以為靈芝是草本，而草本植物中是含有木質(zhì)素的。有報道稱，酶的水解作用能被超聲波

45、強(qiáng)化。3 . 蛋白質(zhì)，多肽及氨基酸 從各種“l(fā)ingzhi”中已經(jīng)分離得到具有生物活性的蛋白質(zhì)，通過層析/電泳技術(shù)對它們進(jìn)行了分析。比如，一種新的免疫調(diào)節(jié)蛋白Lingzhi-8(LZ-8),就是從靈芝菌絲體中得到的。LZ-8是編碼110個氨基酸組成的蛋白，有一個乙酰化的氨基末端，其分子量為12KDa (Tanaka et al., 1989).亦有報道稱它有促進(jìn)有絲分裂活性(e.g. van der Hem et al., 1995).Ngai and Ng (2004)從薄蓋樹芝中分離到一種凝集素，它有較強(qiáng)的促進(jìn)鼠脾臟細(xì)胞有絲分裂及抑制白血病和肝癌病人癌細(xì)胞擴(kuò)散的能力。它促有絲分裂的能力甚至

46、比刀豆蛋白A還強(qiáng)。發(fā)現(xiàn)三種蛋白質(zhì)具有促進(jìn)有絲分裂的能力。以酶的形式存在的蛋白質(zhì)也通過各種柱層析和電泳技術(shù)得到分離和分析。DEAE-Sephadex column凝膠過濾和Con A-Sepharose親和層析已經(jīng)應(yīng)用于靈芝子實體牛乳糖的純化。另外，發(fā)現(xiàn)Lingzhi中含大量氨基酸。氧化應(yīng)激性與許多人類疾病的發(fā)病機(jī)制有聯(lián)系，這些疾病包括：癌癥，衰老和動脈硬化(Sun et al., 2004).研究發(fā)現(xiàn)靈芝多肽有較強(qiáng)的抗氧化活性。靈芝多（聚）糖與多肽復(fù)合體與這種抗氧化作用有關(guān)。然而，又有研究表明靈芝多肽是主要的抗氧化成分。對另一種靈芝多聚糖和多肽復(fù)合體（Gl- PP）的研究表明其對小鼠具有抗腫瘤作用和較強(qiáng)的抑制血管再生的能力(Cao