畢業(yè)論文 張凱平

1、 本科生畢業(yè)論文芒果葉中芒果苷的分離The Mangiferin in Mangifera indica leaves extract學(xué)生姓名張凱平所在專業(yè)制藥工程所在班級1071申請學(xué)位工學(xué)學(xué)士指導(dǎo)教師杜建喜職稱教授答辯時間2011年 6 月 日目 錄摘 要IabstractII1 緒論11.1 前言11.2 芒果苷藥理作用研究概況11.2.1 對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用11.2.2 對呼吸系統(tǒng)的作用11.2.3 對心血管系統(tǒng)的作用11.2.4 抗病毒作用21.2.5 抗輻射作用21.2.6 抗腫瘤作用21.2.7 抗糖尿病作用21.2.8 保肝利肝作用21.3 芒果苷的常用提取和純化方法31.3

2、.1 有機(jī)溶劑萃取31.3.2 熱水提取31.3.3 堿性稀醇或堿性水提取31.3.4 系統(tǒng)溶劑提取31.3.5 超濾法提取31.3.6 雙水相萃取31.3.7 超聲波提取41.3.8 離心分配色譜法41.3.9 其他分離方法41.4 芒果葉的來源以及其中的主要物質(zhì)41.5 本實(shí)驗(yàn)的研究內(nèi)容和意義42 實(shí)驗(yàn)部分52.1 芒果葉中總黃酮的提取52.1.1 材料儀器與試劑52.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備52.1.3 總黃酮提取方法52.1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果52.2 聚酰胺柱分離芒果苷52.2.1 材料，儀器與試劑52.2.2 聚酰胺樹脂的預(yù)處理62.2.3 樣品裝柱62.2.4 樣品洗脫62.2.7 紅外光

3、譜分析62.2.8 熔點(diǎn)測定73 結(jié)果與討論73.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果73.1.1 聚酰胺洗脫73.1.2 高效液相色譜分析93.1.3 紅外色譜分析93.1.4 熔點(diǎn)的測定記錄103.2 討論10鳴 謝12參考文獻(xiàn)13摘 要芒果葉為漆樹科植物芒果的干燥葉，含有止咳化痰作用的有效成分芒果苷1，是生產(chǎn)芒果止咳片、銀花芒果顆粒劑等中成藥的主要原料。芒果苷的現(xiàn)代藥理研究表明，其還具有免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等作用2-4。本實(shí)驗(yàn)采用聚酰胺對芒果葉的總黃酮物質(zhì)進(jìn)行分離提純，重點(diǎn)考察此過程中利用再生聚酰胺分離芒果苷的效果，然后采用紅外光譜法、高效液相色譜等方法進(jìn)行純度分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芒果葉經(jīng)過酒精提取，

4、再生后的聚酰胺柱仍能分離得到純度較高的芒果苷。在分離純化的過程中，酒精的濃度以及含量，聚酰胺的再生處理以及實(shí)驗(yàn)時間等等都對實(shí)驗(yàn)有較大的影響。關(guān)鍵詞： 芒果葉；芒果苷；聚酰胺；分離精制ABSTRACTMango leaves dry sumac leaves of plants,The role of containing the active ingredient in cough and phlegm is inside mangiferin,It is the production of cough mango slices,mango Yinhua the main raw materi

5、al of proprietary Chinese medicines particulate agents Mangiferin modern pharmacological studies have shown that It also has immunomodulatory,antimicrobial,anti-virus, anti-tumor effects In this study, polyamide resin，mango leaves on the separation and purification of total flavonoids,and then analy

6、zed by high performance liquid chromatography purity. The results showed that mango leaves after alcohol extraction, separation and purification of polyamide column with high purity can be mangiferin. In the extraction and purification process,the alcohol concentration and content,processing and rec

7、ycling of polyamide experimental time,and so are a great influence on the experiment.KEYWORDS: Mango leaves;mango glycosides;extraction芒果葉中芒果苷的提取理學(xué)院,2007級制藥工程一班,200711931132,張凱平指導(dǎo)教師：杜建喜1 緒論1.1 前言芒果苷(mangiferin)，又名芒果素、知母寧，分子式為C19H18O11，分子量為422，熔點(diǎn)267272，在紫外檢測下240nm，258nm，316 nm，366 nm有明顯的吸收，

8、淡灰黃色針狀結(jié)晶（50%乙醇）。熔點(diǎn)267272（分解）。旋光度+43.3°（c=0.9，吡啶），32°（乙醇）。略溶于甲醇、乙醇、水、可溶于熱稀甲醇、熱稀乙醇，不溶于非極性溶劑，與fecl3試劑反應(yīng)呈污綠色，對Hcl-mg反應(yīng)呈橙紅色。芒果苷是一種四經(jīng)基毗酮的碳糖昔，屬雙苯毗酮類黃酮類化合物，在多種植物中存在，芒果苷具有廣泛的藥理活性，除了傳統(tǒng)意義上的抗氧化，抗炎，抗變態(tài)反應(yīng)，抗病毒，保肝等生物活性外，近年來對其治療糖尿病，降血脂，免疫調(diào)節(jié)以及抗治療腫瘤作用的研究日趨深入，開發(fā)芒果苷作為治療糖尿病，降血脂，治療自身免疫性疾病以及防治腫瘤藥物的前景十分廣闊6。因此，芒果苷制

9、品將更受人們歡迎而獲得迅速發(fā)展。1.2 芒果苷藥理作用研究概況 對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用芒果苷具有明顯的中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮作用，50100 mg/kg劑量的芒果苷腹腔注射可使所有受試動物出現(xiàn)動作震顫、豎毛、強(qiáng)迫性撕打和自主活動增加等癥狀。黃華藝等7的研究認(rèn)為，芒果苷具有清除腦組織中過氧化脂質(zhì)的作用，減輕過氧化脂質(zhì)對神經(jīng)元的損傷，從而保護(hù)神經(jīng)元的正常功能。對呼吸系統(tǒng)的作用鄧家剛等8的研究表明，芒果苷對豚鼠組胺、乙酰膽堿混合引喘有明顯延長引喘潛伏期作用；對小鼠濃氨水引咳可明顯延長引咳潛伏期，并明顯減少小鼠咳嗽次數(shù);對小鼠醋酸所致腹腔毛細(xì)血管通透性增高有明顯抑制作用；對小鼠氣管酚紅排泌有明顯促進(jìn)作用。芒果

10、苷具有腎上腺糖皮質(zhì)激素樣抗炎作用，可降低毛細(xì)血管通透性，其抗炎反應(yīng)率達(dá)38%。對心血管系統(tǒng)的作用12 mg劑量的芒果苷對正?；蚬δ艿拖碌碾x體Ringer' s液灌注蛙心均有短暫，確切的增強(qiáng)心肌收縮力的作用，且該作用不被普萘洛爾所阻斷。因此，它可能是一種心臟直接刺激劑8。在心肌缺血再灌注損傷中，芒果苷能清除心肌缺血再灌注產(chǎn)生的NO和活性氧，降低缺血再灌注心臟冠狀動脈流出物中乳酸脫氫酶和肌酸激酶的活力，保護(hù)心肌缺血再灌注損傷，0.1mmol/L芒果苷的保護(hù)作用與1 500 U/ml SOD和過氧化氫酶相同9?？共《咀饔肸heng等10使用組織培養(yǎng)技術(shù)研究了芒果苷在單純皰疹病毒中的抗病毒效應(yīng)

11、，表明芒果苷具有體外抗I型單純皰疹病毒(HSV-I)作用，空斑減少率為56.8%，其抗病毒作用歸因于它抑制細(xì)胞內(nèi)病毒復(fù)制的能力?？馆椛渥饔妹⒐帐且环N天然的清除自由基的抗氧化劑，也是一種天然的輻射保護(hù)劑，其分子結(jié)構(gòu)中的4個酚羥基具有親電子能力，且苯環(huán)是良好的能量陷阱，所以可使生物分子受輻照引發(fā)的自由基進(jìn)行一定的轉(zhuǎn)移，從而保護(hù)生物分子?？鼓[瘤作用在正常和生有腫瘤的小鼠體內(nèi)或體外治療中，芒果苷均能提高脾臟細(xì)胞和腹膜巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒用11。芒果苷在58g/ml濃度范圍內(nèi)，對早幼粒血病細(xì)胞(HL-60)的細(xì)胞生長和增殖有抑制作用，呈明顯的劑量依賴關(guān)系。黃華藝等12發(fā)現(xiàn)不同濃度芒果苷在不同時間對肝癌細(xì)胞

12、株均有毒性作用，并濃度升高和作用時間的延長而增強(qiáng)，凋亡也隨之增加，芒果苷阻滯肝癌細(xì)胞周期于G2/M期，20mol/L果苷作用24 h后上述效果開始明顯。農(nóng)朝贊等13的究，提示芒果苷是一個具有針對介導(dǎo)的細(xì)胞黏附和號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的潛在的抗癌物質(zhì)?？固悄虿∽饔妹⒐占捌淦咸擒湛诜山档蚄K-Ay小鼠血糖水平，而對正常小鼠血糖水平?jīng)]有影響，提示芒果苷及其葡糖苷可用于治療非胰島素依賴型糖尿病。此外，芒果苷及其葡糖苷可改善KK-Ay小鼠的高胰島素血癥?；谝陨辖Y(jié)果，芒果苷及其葡糖苷可能通過胰島素增敏而顯示抗糖尿病活性。保肝利肝作用芒果苷有穩(wěn)定溶酶體膜的作用，且對溶酶體酸性磷酸酶活力有直接抑制作用。芒果苷還具有

13、明顯的利膽作用，按20 mg/kg體重劑量經(jīng)靜脈給藥，受試動物膽汁流量30 min后開始增加(增加190%)，60 min后膽汁分泌量達(dá)高峰(增加290%)，90 min后開始下降(增加220%)，至240 min后幾乎恢復(fù)正常。給藥后30 min、60 min和90 min的膽汁流量與基礎(chǔ)膽汁流量比較，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。1.3 芒果苷的常用提取和純化方法有機(jī)溶劑萃取這是目前國內(nèi)外使用最廣泛的方法，很容易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生成。其原理是利用黃酮類化合物與混入雜質(zhì)極性不同，選用不同的溶劑萃取。常用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等，一般采取乙醇為提取溶劑。高濃度的乙醇(

14、如90%95%)適于提取苷元，濃度60%左右的乙醇適于提取苷類。提取次數(shù)一般為24次，提取方法有熱回流提取和冷浸提取兩種方式。傳統(tǒng)的熱回流提取法具有成本低、安全性高、適合工業(yè)生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)是：總黃酮提取率低；溫度過高導(dǎo)致部分黃酮類化合物分解；由于提取溶劑中含水，在加熱狀態(tài)下，一些溶于水的雜質(zhì)如糖類、蛋白質(zhì)等一并進(jìn)入提取液中，加大了進(jìn)一步分離的困難。 熱水提取此方法只限于提取苷類。雖然設(shè)備簡單，但因提取雜質(zhì)多、黃酮收率低，故不常使用。 堿性稀醇或堿性水提取黃酮類成分大多具有酚羥基，可用堿性水或堿性稀醇浸出，浸出液經(jīng)酸化后析出類黃酮化合物。需要注意的是，應(yīng)用此方法時，所用堿的濃度不宜過高，以免在

15、強(qiáng)堿條件下加熱破壞黃酮類化合物的母核。系統(tǒng)溶劑提取用極性由小到大的溶劑依次提取，可以提取出大多數(shù)游離的黃酮化合物，但此法目前僅用于實(shí)驗(yàn)室，很難工業(yè)化。超濾法提取選用超濾法可以提高提取物的純度，并且在提取生產(chǎn)過程中，可以減少廢水排放，避免臭水、污水產(chǎn)生，環(huán)保且降低生產(chǎn)成本。雙水相萃取雙水相萃取技術(shù)(ATPE)分離原理是物質(zhì)在雙水相體系中的選擇性分配。該法設(shè)備投資少，操作簡單，無有機(jī)溶劑殘留污染。由于天然植物中所含的化合物眾多，而雙水相萃取技術(shù)具有較高的選擇性和專一性，因此利用這些技術(shù)有希望為從天然植物中提取有效藥用成分開辟一條新的思路，但目前研究不多。超聲波提取近年來，超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的

16、生物堿、黃酮、苷類、生物活性物質(zhì)、動物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報(bào)道，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點(diǎn)。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動、高的加速度、強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進(jìn)入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時間，并且還可避免高溫對提取成分的影響易行。離心分配色譜法在天然產(chǎn)物提純領(lǐng)域，一些常用的分離提取方法，例如索氏提取法、水蒸氣蒸餾和液液萃取等只能用在天然產(chǎn)物中有效成分的粗提過程中。天然產(chǎn)物粗提物的進(jìn)一步精制，尤其是制備規(guī)模的精制提純，是頗受人們關(guān)注的問題。制備色譜技術(shù)以其極高的分離效率而被日益廣泛地應(yīng)用于天然產(chǎn)物的分離提純，在此背景下

17、，離心分配色譜正在成為天然產(chǎn)物分離提純領(lǐng)域中的一種新興制備技術(shù)。 其他分離方法天然黃酮類化合物的分離純化方法很多，常見的有柱層析、薄層層析、鉛鹽沉淀、硼酸絡(luò)合、pH梯度萃取、溶劑萃取以及近年來應(yīng)用的高效液相色譜(HPLC)、液滴逆流層析(DC-CC)、氣相層析、微乳薄層色譜等。1.4 芒果葉的來源以及其中的主要物質(zhì)我國是芒果主要生產(chǎn)國之一，芒果在我國南方分布廣泛，特別是廣東省，芒果資源尤其豐富。原料易得，價格低廉，甚至四季可采等優(yōu)點(diǎn)。從所獲得的化合物來看，芒果苷和黃酮類山奈酚、槲皮素、楊梅素是芒果葉子的主要化學(xué)成分，且芒果苷含量最高。文獻(xiàn)報(bào)道，芒果苷具有降血糖與降血脂、抗惡性腫瘤與抗HIV、抗

18、過氧自由基和保護(hù)腎臟等生物活性。經(jīng)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明芒果苷能夠降低胰島素抵抗，口服降糖比甲糖寧好，而且本身毒性很小。1.5 本實(shí)驗(yàn)的研究內(nèi)容和意義本實(shí)驗(yàn)通過對芒果葉中芒果苷的分離工藝的探索，采取簡化的方法從芒果葉中分離出高純度的芒果苷，芒果苷是一種原料來源廣，生理活性和藥理活性廣泛的物質(zhì)，現(xiàn)今，利用芒果葉開發(fā)的制劑品種為數(shù)甚少，劑型單一，如何充分、合理開發(fā)芒果葉資源具有重要意義，因此，隨著人們生活水平的提高和社會的發(fā)展，研究從芒果葉中提取出高純度芒果苷具有很大的經(jīng)濟(jì)效益。2 實(shí)驗(yàn)部分2.1 芒果葉中總黃酮的提取 材料儀器與試劑試劑： 分析純無水乙醇、石油醚、檸檬酸、蒸餾水等材料： 芒果葉（采自廣東海

19、洋大學(xué)校園內(nèi)，洗凈晾干切碎備用） 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備UNIC UV-2202 紫外可見分光光度計(jì)SHB 循環(huán)水式多用真空泵RE-52C 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器PHS-3C 型數(shù)字酸度計(jì)恒溫水浴鍋等?？傸S酮提取方法工藝流程：芒果葉粉碎多次乙醇回流提取濾液合并濾液濃縮石油醚萃取。操作步驟：將芒果葉陰干切碎后,稱取500克投入提取鍋,加入70%的乙醇于油浴中回流提取三次, 第一次用13L乙醇提取1.5小時，第二次用13L乙醇提取1小時,第三次用10L乙醇提取1小時，合并提取液。真空濃縮至膏狀,置于干燥箱內(nèi)80干燥成干膏。將提取所得的干膏置于500ml圓底燒瓶中，加入100ml石油醚，攪拌萃取，倒出石油醚層，重復(fù)萃取

20、，直至石油醚層無青色，收集萃余部份于80干燥箱內(nèi)烘干。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)過回流提取，干燥濃縮后，得到粗黃酮稱得重量為135.97g。.2.2 聚酰胺柱分離芒果苷 材料，儀器與試劑材料 芒果葉總黃酮提取物，聚酰胺，微孔濾膜試劑 無水乙醇，蒸餾水，氫氧化鈉，醋酸，甲醇儀器 UV-2102p 紫外可見分光光度計(jì)SHZ-D 循環(huán)水式真空泵EV201 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器HH-S 恒溫水浴箱DZF-6050 真空干燥箱GZX-9140MBE 酒精比重計(jì)藥物天平，數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱，安捷倫液相色譜儀，紅外光譜儀 聚酰胺樹脂的再生處理 樹脂使用一段時間后受到污染導(dǎo)致吸附能力下降，需要再生以恢復(fù)其吸附能力，用過的聚酰胺由于受到污

21、染，吸附了很多雜質(zhì)，因此失去了其本來的顏色，為棕黃色，有粘性，用過的聚酰胺樹脂先用95%乙醇浸泡48h后，過濾，粘性減小，然后用蒸餾水洗至流出的水無酒精味，再用1% NaOH浸泡24h，濾掉上層堿液，以蒸餾水洗至中性后用4倍量10%醋酸浸泡24 h，再用蒸餾水洗至中性并浸泡備用15。當(dāng)其pH為7并且無酒精味時表示已經(jīng)處理好了，經(jīng)過再生處理后的聚酰胺，主鏈上帶有的酰胺基團(tuán)具有較強(qiáng)的極性，在大分子鏈聚集時，易形成氫鍵，因此分子間相互作用力較大，易結(jié)晶，致使材料的力學(xué)性能優(yōu)良，并具有較高的熔點(diǎn)，是一種較優(yōu)良的工程塑料，具有較優(yōu)良的摩擦和耐磨性能，有一定的自潤滑性，可在100度以下使用，耐熱性較好，化

22、學(xué)穩(wěn)定性較好，耐各種熔劑及油類，可耐海水，但不耐酸，高溫下可溶解于濃硫酸中，燃燒時可自熄，有異味，制品無毒，無臭，不易霉?fàn)€，吸水性大，可影響尺寸的穩(wěn)定性，如果采用玻璃纖維增強(qiáng)則可減少吸水率，電性能良好，但要注意受吸水率的影響。 樣品裝柱一般每100ml體積的聚酰胺上樣1.5到2.5g，根據(jù)量取得實(shí)驗(yàn)所用的聚酰胺積為1496ml，所以本實(shí)驗(yàn)中稱取含黃酮芒果葉醇提干膏量30g進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。取已處理好的聚酰胺，用蒸餾水濕法裝柱，并用充足的蒸餾水沖洗，讓其充分沉降，使聚酰胺緊密，而達(dá)到使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，取已經(jīng)準(zhǔn)確稱量的芒果葉總黃酮干膏30g加入少量水加熱溶解，再加入少量聚酰胺攪拌，充分吸附后，真空揮去水分，

23、上樣到裝好的聚酰胺柱中，在聚酰胺柱中的需要分離的總黃酮上加蓋濾紙。 樣品洗脫首先，用適量的水洗，除去極性較大雜質(zhì)成分，并用20%NaOH溶液和紫外色譜檢測跟蹤黃酮類成分的洗脫情況。當(dāng)洗脫至洗脫溶液使NaOH溶液變成青綠色，在紫外檢測下240nm，258nm，316nm，366nm有明顯的吸收（掃描）換35%乙醇洗脫至大約24倍量，并紫外監(jiān)測。濃縮洗脫液，放置冰箱中冷卻結(jié)晶備用。 用乙醇萃取重結(jié)晶 將上面所得的晶體，以1：700(g:mL)比例加入50%的乙醇溶解，過濾棄去不溶物。真空回收乙醇濃縮至出現(xiàn)少量不溶顆粒，倒出置于冰箱結(jié)晶24小時。然后用微孔濾膜過濾，棄去濾液，收集晶體，于干燥箱中恒溫

24、50烘干。 純度檢查及含量測定 芒果苷高效液相色譜分析含量測定采用歸一化法，通過主峰面積和雜質(zhì)峰面積比，進(jìn)行純度分析。取35%乙醇洗脫所得結(jié)晶適量，用適量的流動相溶解，采用RP-HPLC法， C-18柱分離。流動相：甲醇一0.05 molL-1 磷酸(三乙胺調(diào)pH為35)65：134，檢測波長258 nm，柱溫為室溫，流速0.5mL?min-1 。以各結(jié)晶中芒果苷含量及純度為分析指標(biāo)，分析乙醇洗脫所得的結(jié)晶。 紅外光譜分析利用物質(zhì)對紅外光波的吸收不進(jìn)行定性及定量的，不同的物質(zhì)具有不同的化學(xué)鍵，其吸收波長不同，而對光波吸收的多少與物質(zhì)的量成正比的

25、原理，對芒果苷的紅外吸收光譜分析 熔點(diǎn)測定當(dāng)晶體加熱到一定溫度時，隨即從固態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橐簯B(tài)，此時的溫度可視為該物質(zhì)的熔點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)用毛細(xì)管熔點(diǎn)測定，方法如下：a 樣品的干燥和研磨b 裝樣（把兩頭封閉長度約10到12cm的熔點(diǎn)管中間割裂，開口的一端插入樣品粉末中，裝樣約高3到4mm，倒轉(zhuǎn)填緊后，樣高23mm）c 把裝樣品的毛細(xì)管附于溫度計(jì)上（樣品部分在水銀球中部）d 放入熱浴（溫度計(jì)水銀球在熱浴中部，水銀球不能碰瓶底也不能離開熱浴液面）e 加熱、控溫（開始升溫可快，接近熔點(diǎn)10時，控制升溫速度1至2/minf 觀察熔點(diǎn)（始熔：固體收縮，當(dāng)樣品開始塌落并出現(xiàn)液相時，即為始熔；全熔：固體完全消失而成透明的

26、液體時，即為全熔）g 記錄結(jié)果（熔點(diǎn)范圍，即始熔至全熔溫度）。重復(fù)以上結(jié)果三次，求平均值3 結(jié)果與討論3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果聚酰胺洗脫樣品在聚酰胺柱中進(jìn)行洗脫過程中，用紫外分光光度法進(jìn)行檢測，按時間順序得到以下不同時間段的圖譜：其中a圖為蒸餾水洗脫時聚酰胺柱中分離出物質(zhì)的圖譜，b1，b2，b3為用乙醇洗脫時分離出的物質(zhì)圖譜，其中在b3洗脫液前用20%NaOH進(jìn)行測定洗脫液為洗脫液的本色，在b3后用變成青綠色，用35%乙醇洗脫至大約24倍量，并紫外監(jiān)測當(dāng)檢測到的物質(zhì)發(fā)生變化時，停止洗脫。濃縮洗脫液，放置冰箱中冷卻結(jié)晶備用。圖1 水的洗脫液UV圖譜如下圖所示：圖2 35醇的洗脫液B1UV圖譜圖3 35醇

27、的洗脫液B2UV圖譜圖4 35醇的洗脫液B3UV圖譜B3為芒果苷的紫外圖譜，在240nm，258nm，316 nm，366 nm有明顯的吸收，在B3洗脫液之前洗脫出的物質(zhì)不是芒果苷，在其后檢測出的物質(zhì)為芒果苷，說明聚酰胺對芒果苷的吸附比較強(qiáng)，較難洗脫。當(dāng)洗脫至洗脫溶液使NaOH溶液變不成青綠色，在紫外檢測下240nm，258nm，316 nm，366 nm沒有明顯的吸收（掃描）時，停止洗脫，將洗脫出的含有芒果苷的的溶液進(jìn)行真空濃縮，放至冰箱中24小時結(jié)晶，抽濾稱量：1.6g粗品。用0.9g用乙醇萃取重結(jié)晶，干燥稱量：0.5g，沒有進(jìn)行重結(jié)晶的粗芒果苷干燥

28、后：0.4g，具體分析如下表格：項(xiàng)目芒果葉提取出的芒果浸膏試驗(yàn)用到的芒果浸膏粗分離的芒果苷實(shí)驗(yàn)用到的粗提取芒果苷量重結(jié)晶后得到的芒果苷收率重量g500135.9301.60.90.55.24 高效液相色譜分析取35%乙醇洗脫所得結(jié)晶適量，用適量的流動相溶解，采用RP-HPLC法， C-18柱分離。流動相：甲醇一0.05 mol?L-1 磷酸(三乙胺調(diào)pH為35)65：134，檢測波長258 nm，柱溫為室溫，流速0.5mLmin-1 ，測得到的結(jié)果如下圖：根據(jù)歸一化法得出，芒果苷的純度為97.7395.3.1.3 紅外色譜分析標(biāo)準(zhǔn)的芒果苷的紅外

29、吸收特征如下，3 360,3 155(肩峰，oh),1 652(共扼c=0)，1 618，1 565，1 492（苯環(huán)c=c），1hnmr(dmso-d6,500mhz)ppm：13.73(1h,s，c1-oh ), 10.42(3h,br.s,c3-oh,c6-oh,c7-oh), 6.42(1h，s)，6.90(1h，s)，7.45(1h，s)(芳環(huán)的三個氫)，4.75(1h，d，j=10 hz)(糖端基c1-h)， 3.23.8(5h,m,糖上其余氫)；13cnmr(dmso-d6,500 mhz)ppm：161.6(c-1)，107.3(c-2)，163.8(c-3)，93.5(c-4

30、)，156.3(c-4a)，150.9(c-4b)，102.7(c-5)，153.9(c-6)，143.7(c-7)，108.2(c-8)，111.8(c-8a)，101.4(c-8b)，179.2(c=o)，81.5(糖c-1)，73.2(糖c-2)，70.5(糖c-3)，70.3(糖c-4)，79.0(糖c-5)，61.4 (糖c-6)。下圖為實(shí)驗(yàn)所得的芒果苷紅外光譜圖：圖6 樣品紅外標(biāo)準(zhǔn)圖譜圖7 芒果苷紅外標(biāo)準(zhǔn)圖譜從圖中可以對比出，用標(biāo)準(zhǔn)品做的紅外圖譜和樣品的紅外圖譜大體相同，但是也有差別，其原因如下，樣品干燥不夠，所含水分比標(biāo)準(zhǔn)品多，由于實(shí)驗(yàn)條件的限制和個人經(jīng)驗(yàn)知識水平等原因，樣品的含

31、量不能夠達(dá)到百分之百的含量，所有樣品的紅外圖譜與標(biāo)準(zhǔn)品會有差別。3.1.4 熔點(diǎn)的測定記錄文獻(xiàn)表明，芒果苷的熔點(diǎn)267272（分解），略溶于甲醇、乙醇、水、可溶于熱稀甲醇、熱稀乙醇，不溶于非極性溶劑，第一次測定第二次測定第三次測定平均值269268269268.3實(shí)驗(yàn)測得數(shù)據(jù)符合文獻(xiàn)資料所寫的熔點(diǎn)，再一次驗(yàn)證了芒果苷的熔點(diǎn)。3.2 討論1. 精制所得芒果苷熔點(diǎn)、UV圖譜、IR圖譜、高效液相分析證明所得精品是芒果苷，含量在97.5%以上。2. 結(jié)表明，從芒果葉中大量提取高純度芒果昔是可行的，本文的研究為芒果苷分離精制生產(chǎn)提供了簡潔途徑。3. 結(jié)果表明，芒果苷收率較低，如果用應(yīng)于生產(chǎn)，很多因素以及

32、技術(shù)尚有待改進(jìn)。4. 影響提取以及純化的因素很多，從原料、提取溶劑到提取條件、脫色條件，每一步都影響到提取效率。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)已有的資料，找到最佳的提取條件，但是如果用應(yīng)與工藝生產(chǎn)，有待進(jìn)一步檢驗(yàn)。5. 芒果葉藥材資源非常豐富，且具有分布地域廣，原料易得，價格低廉，甚至四季可采等優(yōu)點(diǎn)。但目前利用芒果葉開發(fā)的制劑品種為數(shù)甚少，劑型單一，更加限制其臨床應(yīng)用。如何充分、合理開發(fā)芒果葉資源，為其臨床應(yīng)用提供充分的藥學(xué)、藥理學(xué)依據(jù)，還有待在系統(tǒng)的藥效學(xué)、藥代動力學(xué)、分子藥理學(xué)和制劑學(xué)等方面進(jìn)行進(jìn)一步的研究工作。鳴 謝本實(shí)驗(yàn)在導(dǎo)師杜建喜老師和郝心敏老師的悉心指導(dǎo)下完成，在此表示最衷心的感謝！他們淵博的學(xué)識和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度都使我受益匪淺。在他們的嚴(yán)格要求下，啟發(fā)了我的獨(dú)立思考和動手操作的能力，令我不僅在理論學(xué)習(xí)和實(shí)驗(yàn)技能上有很大提高，而且也克服了自身的許多缺點(diǎn)，為自己將來的學(xué)習(xí)與工作打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。諄諄教誨和鼓勵，我將銘記于心。感謝理學(xué)院應(yīng)用化學(xué)系實(shí)驗(yàn)室為我們提供實(shí)驗(yàn)場所、試劑和儀器。感激所有幫助過我的老師與同學(xué)！感謝所有朋友對我的支持與鼓勵！最后，在順利地完成了大學(xué)本科學(xué)業(yè)之時，對所有關(guān)心、愛護(hù)、幫助和支持我的人致以深深的謝意和衷心的祝福。參考文獻(xiàn) 1 鄧家剛，鄭作文，曾春暉.芒果苷的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究J.中醫(yī)藥學(xué)刊，2002，7(12):37.2 楊柯，閻莉，等.芒果苷對免