農(nóng)藥生物測定

1、農(nóng)藥生物測定緒論第一節(jié) 農(nóng)藥生物測定的含義及簡史第二節(jié) 農(nóng)藥生物測定的作用和地位第三節(jié) 農(nóng)藥生物測定的內(nèi)容及應(yīng)用第一章 殺蟲劑生物測定第一節(jié) 殺蟲劑生物測定的基本概念一 殺蟲劑生物測定的內(nèi)容和意義二 生物測定的一般原理和原則第二節(jié) 標準目標昆蟲的飼養(yǎng)一 對標準目標昆蟲的要求和種類二 常用目標昆蟲的飼養(yǎng)三 標準目標昆蟲室內(nèi)大規(guī)模飼養(yǎng)的定向控制四 目標昆蟲的基本操作方法目標昆蟲群體的移取、分離和處理第三節(jié) 殺蟲劑的室內(nèi)毒力測定方法一 初步毒力測定方法二 毒殺作用方式測定方法（觸殺、內(nèi)吸、胃毒、熏蒸、殺卵）第四節(jié) 昆蟲特異性控制劑生物活性測定一 保幼激素（JH）及其類似物的活性測定二 抗蛻皮激素（幾

2、丁合成抑制劑）的活性測定三 昆蟲拒食劑的活性測定四 昆蟲引誘劑的活性測定第五節(jié) 殺蟲劑室內(nèi)生物測定的評判和統(tǒng)計分析一 殺蟲劑生物測定結(jié)果的評判和計算 1.目標昆蟲對殺蟲劑反應(yīng)標準的確定 2.殺蟲劑藥效的表示與計算二 殺蟲劑室內(nèi)毒力測定的統(tǒng)計分析三 殺蟲劑混用的聯(lián)合作用計算法第六節(jié) 殺蟲劑生物測定技術(shù)的應(yīng)用一 殺蟲劑的篩選二 殺蟲劑持效期及殘留量的測定三 在害蟲抗藥性研究中的應(yīng)用第二章 殺菌劑生物測定第一節(jié) 殺菌劑生物測定的基本概念一 殺菌劑的毒作用方式二 殺菌劑的使用方法三 殺菌劑生物測定的基本類型第二節(jié) 殺菌劑毒力、藥效測定的基礎(chǔ)操作及原理一 清潔及滅菌二 植物病原菌的培養(yǎng)第三節(jié) 殺菌劑生物

3、測定方法一 殺菌劑皿內(nèi)生物測定方法二 殺菌劑藥效的組織法測定（需補充內(nèi)容）三 殺菌劑盆栽藥效試驗四 植物病毒防治劑藥效試驗（需補充內(nèi)容）五 殺線蟲劑室內(nèi)生物測定第四節(jié) 殺菌劑生物測定技術(shù)的應(yīng)用第三章 除草劑的生物測定第一節(jié) 除草劑生物測定的基本概念一 除草劑生物測定的意義二 除草劑生物測定的基本原理三 除草劑生物測定的程序和原則四 除草劑生物測定的優(yōu)缺點第二節(jié) 除草劑生物測定試材的確定和培育一、作物試材的確定和培育二、雜草試材的確定和培育三、試材所需環(huán)境條件的創(chuàng)造第三節(jié) 除草劑生物測定的鑒定技術(shù)一 除草劑活力的鑒定方法二 除草劑的藥效評價第四節(jié) 除草劑生物測定方法一 種子發(fā)芽測定法二 植株生長

4、量測定法三 生理生化指標測定法四 癥狀鑒定法五 愈傷組織鑒定法第五節(jié) 除草劑生物測定技術(shù)的應(yīng)用（需補充）一、除草劑的篩選二、除草劑的作用特性測定三、除草劑殘效期的測定四、除草劑在土壤中淋溶性的測定第四章 植物生長調(diào)節(jié)劑的生物測定第一節(jié) 概述一、植物生長調(diào)節(jié)劑生物測定的定義二、植物生長調(diào)節(jié)劑生物測定的發(fā)展簡史三、植物生長調(diào)節(jié)劑生物測定的原理和基本類型四、植物生長調(diào)節(jié)劑生物測定的特點第二節(jié) 常用植物生長調(diào)節(jié)劑的生物測定技術(shù)一 生長素的生物測定技術(shù)二 赤霉素的生物測定技術(shù)三 細胞分裂素的生物測定技術(shù)四 脫落酸的生物測定技術(shù)五 乙烯的生物測定技術(shù)六 其它調(diào)節(jié)劑的生物測定技術(shù)第五章 高新技術(shù)在農(nóng)藥生物測

5、定中的應(yīng)用第一節(jié) 生化技術(shù)在生物測定中的應(yīng)用第二節(jié) 電子計算機在生物測定中的應(yīng)用（構(gòu)效關(guān)系研究）第三節(jié) 高通量篩選技術(shù)及其在農(nóng)藥研究中的應(yīng)用 緒論一、 藥生物測定（bioassay of pesticide）的含義及簡史（一）生物測定的含義生物測定（bioassay）原義為biological assay，是用以測定具有生理活性的物質(zhì)在某有機體產(chǎn)生效力的一種技術(shù)。但有也人從更廣的范圍來理解生物測定的函義，如Finney(1952)認為是“對生物任何刺激產(chǎn)生的效應(yīng)測定，包括來自物理、化學(xué)、生物、生理及心理等方面的刺激對生物活體產(chǎn)生的反應(yīng)”。亦即廣義的生物測定應(yīng)為：來自物理、化學(xué)、生理或心理的刺激

6、，對生物整體（living organism）和活體組織（tissue）產(chǎn)生效力大小的度量。當前，生物測定已成為研究作用物、靶標生物和反應(yīng)強度三者關(guān)系的一項專門技術(shù)。（二）農(nóng)藥生物測定（bioassay of pesticide）的定義簡單地說,農(nóng)藥生物測定就是度量農(nóng)藥對動植物群體、個體、活體組織或細胞產(chǎn)生效應(yīng)大小的生物測定技術(shù)。在農(nóng)藥生物測定中包括農(nóng)藥、生物、測定三個方面，其中“農(nóng)藥”指殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、殺螨劑、殺線蟲劑、殺鼠劑、植物生長調(diào)節(jié)劑等；“生物”泛指農(nóng)作物病、蟲、草、鼠、衛(wèi)生害蟲及高等動物如鼠、兔等，同時還包括農(nóng)作物本身；而“測定”則是指通過供試生物對某種農(nóng)藥產(chǎn)生的特定生理反

7、應(yīng)來判定某種農(nóng)藥的活性，如通過對農(nóng)作物病、蟲、草、鼠、衛(wèi)生害蟲等的測定可知道某種農(nóng)藥的毒力、除害范圍、作用特點等。別外，需指出的是：所有的生物測定均是運用特定的試驗設(shè)計，如測定殺蟲劑的觸殺毒力采用點滴法、藥膜法，而測定殺蟲劑的胃毒作用則采用飼喂法等，沒有這一保證，生物測定的結(jié)果的可靠性就不能保證；所有生物測定均是在一定條件下（局部控制）進行的，比如殺蟲劑室內(nèi)生測要求一定的溫度、濕度、光照及一定的蟲齡等，否則所得結(jié)果無可比性，也就失去了測定的意義；生物測定均以群體反應(yīng)為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計為工具，通過對測定數(shù)據(jù)科學(xué)合理的分析而得出統(tǒng)計結(jié)果。從以上的分析討論，我們可以知道，所謂的農(nóng)藥生物測定是指：運用

8、特定的試驗設(shè)計，利用生物的整體或離體的組織、細胞對農(nóng)藥（或某些化合物）的反應(yīng)，并以生物統(tǒng)計為工具，分析供試對象在一定條件下的效應(yīng)，來度量（判斷或鑒別）某種農(nóng)藥的生物活性。（三）農(nóng)藥生物測定的簡史農(nóng)藥生物測定的發(fā)展歷史還不過一百年。自19世紀末法國學(xué)者埃利希（）研究出測定白喉抗毒素含量的標準方法以后，到1920至1923年間，陸續(xù)采用了測定多種醫(yī)藥激素含量的生物測定技術(shù)，但這每時期都是用單個動物體作直接的效力測定，將待測的藥劑與標準藥劑相比較來估計其相對藥效。這種方法只能用于某些特定的藥劑和生物類型。生物對藥劑反應(yīng)越快，測定結(jié)果越精確。不同生物個體或同一生物個體的不同發(fā)育階段，對藥劑的忍受力不同

9、。由于生物個體從受藥到中毒死亡需要一個過程，因而以生物中毒死亡為反應(yīng)標準測出的致死劑量總比實際反應(yīng)所需劑量大。20世紀30年代后，研究出以生物群體為反應(yīng)基礎(chǔ)的生物測定方法，提高了測定精度，如1937年歐文（）首先提出了系統(tǒng)的生物測定方法報告。1947年芬尼（）出版了系統(tǒng)的生物測定統(tǒng)計方法。1950年芬尼及古德溫（）出版生物測定標準化一書。1957年布斯維納（）出版殺蟲劑生物測定評述。1959年張宗炳在其昆蟲毒理學(xué)一書中以專章對殺蟲劑生物測定及統(tǒng)計分析作了系統(tǒng)的論述。1963年張澤薄等出版殺蟲劑及殺菌劑的生物測定，1984年張澤薄出版生物測定統(tǒng)計專著。20世紀70年代以后，由于具有各種特殊生理活

10、性的化合物不斷出現(xiàn)，生物測定方法也在不斷發(fā)展。例如研究利用昆蟲神經(jīng)電生理方法檢測化合物對昆蟲的拒食活性已取得進展。殺菌劑也由以傳統(tǒng)的病原菌離體試驗方法為主，轉(zhuǎn)變?yōu)榧闹髦参锷系幕铙w試驗為主。由于活體試驗必須在室內(nèi)或溫室培育大量寄主植物，繁瑣費時，費用較高，80年代以來介于活體與離體之間的植物組織培養(yǎng)生物測定方法受到了廣泛的重視，有可能發(fā)展成一類新的殺菌劑生物測定方法。如適用于稻瘟病篩選的剝離葉鞘法；適用于細菌性病害篩選的塊根法；適用于大麥白粉病篩選的芽鞘表皮法；適用于水稻干枯病的蠶豆葉片法；適用于病毒病篩選的局部病斑法及葉片漂浮法等。隨著分子生物學(xué)及生理、生化方面研究技術(shù)的提高，運用分子生物學(xué)技

11、術(shù)和生化技術(shù)進行生測的研究亦發(fā)展很快，如對新藥劑的篩選及利用酶學(xué)試驗進行害物抗藥性的監(jiān)測和增效劑的篩選等等。同時，由于電子計算機軟、硬件的迅速發(fā)展，農(nóng)藥生物測定中的統(tǒng)計分析，早已普遍程序化和微機化，使生物測定結(jié)果的分析計算更加簡便、快捷，也更加準確、可靠。二、農(nóng)藥生物測定的作用和地位不論在農(nóng)藥研制方面，還是在農(nóng)藥的使用方面，農(nóng)藥生物測定是均重要的先決條件。下面列舉農(nóng)藥新品種的研制、開發(fā)及登記過程，從中可看出生物測定在農(nóng)藥研究和植物化保中的作用及地位。（插圖）以上過程中篩選如植物性農(nóng)藥的研究中，采用活性跟蹤法合成農(nóng)藥的篩選。殺蟲譜的測定，作用方式的測定，初步毒力測定等。藥效試驗（制劑的藥效試驗）

12、室內(nèi)、田間。毒性試驗。代謝研究：如除草劑在自然條件下的持效性，消解途徑（揮發(fā)、微生物化學(xué)和光分解），在 中的只附，解吸淋滌，及除草劑被植物體吸收，在體內(nèi)運轉(zhuǎn)、作用部殘留、代謝和降解均可利用生物測定的方法加以分析和鑒定。殘留分析（殺菌劑、除草劑用的多）。 水生生物魚、蛙等環(huán)境影響研究 蠶、蜜蜂、鳥類、天敵等對于混劑的研制來說，除上述外，尚需進行兩種或兩種以上農(nóng)藥混合使用的效力大小，明確其有無增效或頡頏作用，以決定其能否混用及如何混用等。農(nóng)藥生物測定除了在上述的一些過程中有重要作用外，在下面兩點中，可以看出農(nóng)藥生物測定技術(shù)在農(nóng)藥研究中的特別重要作用：發(fā)現(xiàn)新的試驗方法等于發(fā)現(xiàn)新農(nóng)藥；新農(nóng)藥發(fā)現(xiàn)存在于

13、生物測定過程的每個異?，F(xiàn)象之中?；谝陨纤觯腥嗽焉餃y定與化學(xué)合成比喻為前進中的兩個車輪，兩者互相制約、互相促進。三、農(nóng)藥生物測定的內(nèi)容及應(yīng)用農(nóng)藥生物測定主要包括殺蟲劑（殺螨劑），殺菌劑（殺線蟲劑）、除草劑、殺鼠劑、抗生素以及植物生長調(diào)節(jié)劑等有關(guān)的測定技術(shù)與方法。為了保證測定結(jié)果準確可靠，供試靶標生物要有足夠的數(shù)量和良好的質(zhì)量。為此需進行人工飼養(yǎng)，通過對飼養(yǎng)條件的定向控制使靶標生物在生理狀態(tài)、齡期大小、健康狀況及敏感性等方面達到一致性，所以人工飼養(yǎng)靶標生物也是生物測定技術(shù)的一個重要環(huán)節(jié)。此外，農(nóng)藥對非靶標生物及農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)的影響等方面的研究，也屬于生物測定的研究內(nèi)容?？傊?，農(nóng)藥生物測定是

14、一項很重要的實用技術(shù)，其內(nèi)容可歸納為以下幾個方面：1.測定農(nóng)藥對昆蟲、螨類、病原菌、線蟲、雜草以及鼠類等靶標生物的毒力或藥效，包括除害范圍、作用方式、作用特點等。2.研究農(nóng)藥對植物的生理作用。包括農(nóng)藥對植物的刺激生長作用和對植物的藥害測定。3.篩選新農(nóng)藥品種。4.研究化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與生物活性關(guān)系的規(guī)律，為定向創(chuàng)新農(nóng)藥提供依據(jù)。5.研究農(nóng)藥的理化性質(zhì)及加工劑型與毒效關(guān)系，提高農(nóng)藥的使用效果。6. 研究有害生物的生理狀態(tài)及外界環(huán)境條件與藥效的關(guān)系，以便提高農(nóng)藥使用水平，做到適時用藥。7.測定不同農(nóng)藥混用的效力及尋找增效劑，為農(nóng)藥的合理混用提供依據(jù)。8. 對有害生物抗藥性的監(jiān)測和研究克服或延緩抗藥

15、性發(fā)展的有效措施。9.研究農(nóng)藥的作用機理及生理效應(yīng)，如拒食、不育、忌避、殺卵、性引誘及激素功能等。10.還可利用敏感生物（如蚊動蟲等）來測定農(nóng)藥的有效含量及殘留量。以生物為工具，利用其對藥物劑量與活性相關(guān)規(guī)律，測定農(nóng)藥的有效成分含量，或在植物、食品中微量殘留即狹義的生物分析。11.測定農(nóng)藥對溫血動物及有益生物的毒性。隨著農(nóng)藥的迅速發(fā)展,生測技術(shù)顯得更加重要。但是,在我國生物測定技術(shù)與生產(chǎn)發(fā)展的實際需要還存在較大差距,在一定程度上影響到我國新農(nóng)藥的開發(fā)。另一方面，過去我國的生物測定技術(shù)主要是針對重點病蟲害（如棉蚜、棉鈴蟲、水稻白葉枯病等），進行新農(nóng)藥合成與篩選工作，這就有可能漏掉一些對其它病、蟲

16、、草、鼠類等靶標生物有效的農(nóng)藥品種。例如瑞士汽巴嘉基公司的殺菌劑瑞毒霉是由除草劑部門合成，而在殺菌劑部門篩選出來的優(yōu)良殺菌劑。因此，新合成的化合物應(yīng)對重要病、草、蟲害及鼠類等有害生物進行同步系統(tǒng)篩選。一個新化合物從實驗室合成到正式投產(chǎn)必須經(jīng)過室內(nèi)毒力測定、溫室測定和田間小區(qū)藥效試驗，表現(xiàn)活性高的，除進行大田藥效試驗外，還要做殘留、對高等動物的毒性及對有益生物和農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)的影響的研究，同時生產(chǎn)部門要對其劑型和加工技術(shù)進行研究?？梢娚鷾y技術(shù)在新農(nóng)藥的研究、生產(chǎn)、應(yīng)用中占有十分重要的地位，是開發(fā)新農(nóng)藥和毒理學(xué)研究的重要手段。四、教學(xué)目的和要求農(nóng)藥生物測定這門課程的教學(xué)目的主要是使學(xué)生通過學(xué)習(xí)理論和

17、實踐，掌握殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物生長調(diào)節(jié)劑及殺線蟲劑的室內(nèi)生物測定的基本理論和基本技能，掌握各類農(nóng)藥生物測定結(jié)果的評判和統(tǒng)計分析方法。以便在農(nóng)藥研究、生產(chǎn)和應(yīng)用中能夠正確合理地評價農(nóng)藥的活性，為科學(xué)合理使用農(nóng)藥提供依據(jù)。第一章 殺蟲劑生物測定第一節(jié) 殺蟲劑生物測定的基本概念殺蟲劑生物測定（bioassay）是以昆蟲（包括螨類）為測試對象，評價各種殺蟲劑對昆蟲的毒力。廣義的說，殺蟲劑生物測定就是利用生物（昆蟲、螨類）對殺蟲劑的反應(yīng)，來鑒別某一種農(nóng)藥或某一類化合物的生物活性，也就是說藥劑對昆蟲、螨類的毒力或藥效進行測定的一種基本方法。一 、殺蟲劑生物測定的意義和內(nèi)容 （一）殺蟲劑生物測定的意

18、義殺蟲劑在我國的農(nóng)藥生產(chǎn)中，無論是品種還是產(chǎn)是都占第一位，發(fā)展速度很快，尤其是近年來取得了較大的進展，如高效擬除蟲菊酯的廣泛應(yīng)用，特異性殺蟲劑的研制和生產(chǎn)等。為了安全合理、經(jīng)濟有效的使用殺蟲劑防治害蟲（螨類）保護農(nóng)作物免受危害，以達到農(nóng)作物獲得高產(chǎn)的目的，就需要不斷的開發(fā)新的殺蟲劑，改善和提高現(xiàn)有殺蟲劑的使用效果，減少環(huán)境污染，克服害蟲抗藥性以及保持自然環(huán)境的生態(tài)平衡，而這一切均離不開生物測定。因此，生物測定在取代高殘留農(nóng)藥、延緩害蟲抗藥性發(fā)展、延長現(xiàn)有殺蟲劑的經(jīng)濟使用壽命以及開發(fā)新殺蟲劑品種等方面均有重要意義。（二）殺蟲劑生物測定的內(nèi)容在農(nóng)藥中，無論是殺蟲劑、殺螨劑、殺菌劑、殺鼠劑，還是植物

19、生長調(diào)節(jié)劑等，它們的作用對象均是生物，即防治有害生物，保護和促進農(nóng)作物的生長發(fā)育。而殺蟲劑的作用對象主要是昆蟲和螨類，殺蟲劑生物測定的主要任務(wù)是將殺蟲劑作用于昆蟲、螨類等，根據(jù)它們對殺蟲劑的反應(yīng)強度來評判殺蟲劑的毒力或毒效的大小，因此，殺蟲劑生物測定研究的主要內(nèi)容有：1. 測定殺蟲劑對昆蟲（包括螨類）的效力 不同的殺蟲劑對不同種類的昆蟲有其特效。如溴氰菊酯，對蚜蟲、菜青蟲、食心蟲等多種害蟲都有很好的效果，但對紅蜘蛛、介殼蟲的效果就很差，這種現(xiàn)象是很普遍的。即使是同一種害蟲，由于蟲態(tài)、蟲齡、性別甚至害蟲所處生理狀態(tài)的不同也有很大差異，從而對同一種藥劑可以產(chǎn)生不同的效應(yīng)。就殺蟲劑應(yīng)用而言，必須要選

20、擇對某種害蟲具有高效的新藥劑，所以也就必須在室內(nèi)控制一定條件下進行活性篩選和毒力測定，這樣才可能選出最有效的藥劑，然后才能進行大田試驗肯定其藥效。2. 篩選新農(nóng)藥及探索化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與毒效關(guān)系的規(guī)律 在農(nóng)藥合成研究工作中，要想不斷篩選出質(zhì)的高效殺蟲劑，則需從系列有效的化合物中進行毒力比較，研究它們對靶標昆蟲的作用方式（觸殺、胃毒、熏殺及內(nèi)吸活性）才能選出新的殺蟲劑。殺蟲劑的活性與其化學(xué)結(jié)構(gòu)有密切的關(guān)系，如在已使用的殺蟲劑中，溴氰菊酯有八種異構(gòu)體，但只有左旋順式體對昆蟲毒效最高，六六六的八種異構(gòu)體中，也只有丙體六六六的毒效最高，因此，欲定向創(chuàng)制高效殺蟲劑，必須探索化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與活性關(guān)系的規(guī)

21、律，而這些必須應(yīng)用生物測定的技術(shù)。3.研究殺蟲劑的理化性狀與毒效的關(guān)系及鑒定加工劑型的質(zhì)量 殺蟲藥劑對昆蟲毒力的大小與殺蟲劑本身的化學(xué)特性有關(guān)以外，還與殺蟲劑的物理性能、使用方式以及加工質(zhì)量有關(guān)。如乳劑質(zhì)量好壞，油珠大小直接影響殺蟲藥劑在植物體表及昆蟲體表的濕潤性、展著性、滲透性等物理性狀，從而對其藥效產(chǎn)生很大的影響；粉劑顆粒的大小、填充料的種類，如比重、硬度、粒子的形狀等都能影響藥劑的分散性和附著量，從而對藥效產(chǎn)生顯著的影響。此外藥劑的揮發(fā)性也會影響到殺蟲劑的使用效果。在目前使用的劑型中，有粉劑、可濕性粉劑、乳油、液劑、懸浮劑、濃乳劑、顆粒劑、超低量油劑等。在什么條件下，使用哪種劑型效果最好

22、，究竟選用什么溶劑、乳化劑、濕潤劑和填充料，以及采用何種配制方法才能發(fā)揮殺蟲藥劑的最佳效果。殺蟲劑成品的質(zhì)量、使用方法以及庫存農(nóng)藥的失效和質(zhì)量降低的鑒定等，都需采用生物測定，才能確定其真正的使用價值。4.研究靶標昆蟲的生理狀態(tài)及外界條件與藥效的關(guān)系 殺蟲藥劑對靶標昆蟲毒力大小，除了與昆蟲的生理狀態(tài)有著密切關(guān)系外，還同外界環(huán)境條件密切相關(guān)。在實際防治中，在某一時間用藥的效果不如另一時期，其原因除了外界環(huán)境條件有差異外，就是與昆蟲的不同發(fā)育階段有關(guān)。這就是說，外界環(huán)境條件（溫、濕、光照）以及昆蟲的生理狀態(tài)（昆蟲變態(tài)、齡期大上或發(fā)育階段、營養(yǎng)狀況以及寄主狀態(tài)）等對殺蟲藥劑都有一定影響，因此，要改進施

23、藥方法或掌握施藥適期，達到提高藥效經(jīng)濟用藥的目的，也需用生物測定來解決。5.測定不同殺蟲劑混用的效力以及尋找增效劑 兩種或兩種以上藥劑的混合使用是否能夠增效以及混配的最佳配比，均需采用生物測定技術(shù)進行研究才能對其作出正確的評判。另外，有的化合物本身對昆蟲無毒，但同另一種殺蟲劑混用后，可以提高該藥對昆蟲的毒效或降低藥效，這只有借助生物測定技術(shù)手段才能肯定,從而尋找出有效的增效劑。6.測定害蟲抗藥性和研究延緩抗性發(fā)展的措施 近五十余年來，由于大量、不合理地使用有機合成農(nóng)藥，致使害蟲抗性種類逐年增多、抗性程度逐年增強。據(jù)報道，世界范圍內(nèi)已有589種害蟲（包括螨類）產(chǎn)生了抗藥性，其中農(nóng)業(yè)害蟲392種，

24、害蟲抗藥性的迅猛發(fā)展已成為當前開發(fā)新農(nóng)藥及使用中的重要問題，并日益引起人們的重視。對抗性昆蟲種群的鑒定、研究抗藥性程度及范圍，影響抗性產(chǎn)生和發(fā)展的因素以及研究和尋找克服或延緩害蟲抗藥性發(fā)展的有效措施，均離不開生物測定。7.測定農(nóng)藥生物體、土壤及水中的殘留量 殺蟲劑生物測定具有微量測定的特點，可以用來測定農(nóng)藥施用一定時間后，在農(nóng)作物、果木、蔬菜等作物上的殘留量以及在土壤、水中的微量農(nóng)藥，從而可以了解殺蟲劑對害蟲的殘效和判斷施藥后的安全期限，以保證人畜安全和避免環(huán)境污染。此外，還可研究殺蟲劑進入植物體內(nèi)或昆蟲體內(nèi)的分布情況，以弄清殺蟲劑的滲透、內(nèi)吸性能以及對害蟲的毒理作用等。8.測定殺蟲劑對植物的

25、藥害程度和對高等動物的毒性以及殺蟲劑對魚、鳥類、蜜蜂、天敵等有益生物的毒性，均屬于生物測定的范圍。此外，為了探索和解決符合室內(nèi)毒力測定所要求的目標昆蟲，需要采用人工飼養(yǎng)目標昆蟲，通過對飼養(yǎng)條件的控制，使目標昆蟲達到一致性并保證充分供應(yīng)。所以人工飼養(yǎng)目標昆蟲也是生物測定工作的一個重要組成部分。二、殺蟲劑生物測定效果的表示方法殺蟲劑生物測定的效果一般采用藥效或毒力來表示。藥效指的是在綜合條件下某種藥劑對某種生物作用的大小，常以%來表示，且不同作物、保護對象和處理對象的不同而有不同的計算方法。毒力即是毒性程度，用一個數(shù)量表示才能說明或比較。常用的表示方式為致死中量（Median Lethal Dos

26、e）,即殺死昆蟲群體一半個體所需要的劑量，常以LD50表示；致死中濃（Median Lethal Concentration），即殺死昆蟲群體一半所需要的藥劑濃度，以LC50表示；致死中時（Median Lethal Time）或擊倒中時（Median Knockdown Time），即殺死或擊倒昆蟲群體一半個體所需要的時間，以LT50或KT50表示。同時，在毒力比較時還常常使用LD95或LC95，即殺死昆蟲群體95%的個體所需的藥劑劑量或濃度。二、影響殺蟲劑生物測定的因素前已述及，殺蟲劑的生物測定是利用昆蟲、螨類、溫血動物等對藥劑的反應(yīng)來鑒別殺蟲劑的毒力或藥效的一種測定技術(shù)。而殺蟲劑的毒效是

27、對一定的生物范圍而言，一種殺蟲劑可能對某些昆蟲種群有效，而對另一種昆蟲的效力很差甚至無效，因此采用不同的目標昆蟲作試驗對象時，測定的結(jié)果可能完全不同。同時，在生物測定中昆蟲對藥劑的反應(yīng)程度不僅決定于殺蟲劑，而且還受到環(huán)境條件、昆蟲群體中個體的生理狀態(tài)及其對殺蟲劑的敏感性和處理方法等條件的影響。 （一）供試昆蟲方面昆蟲的種類、不同品種、個體發(fā)育階段、性別與生殖、生理狀態(tài)以及營養(yǎng)條件等對殺蟲劑的感受性有著明顯的差異。1不同種類的昆蟲對殺蟲劑的感受性不同蚜蟲、萊青蟲、棉鈴蟲等多種害蟲對溴氰菊酯的感受性較高而紅蜘蛛、介殼蟲則對溴氰菊酯的感受性較低。蚜蟲對樂果、氧樂果的感受性較高，但粘蟲對樂果的感受性就

28、低。如表1-1所示，稻褐飛虱同黑尾葉蟬、白背飛虱、灰褐虱比較，對馬拉松、稻豐散和苯硫磷的感受性低。不同種類的昆蟲對殺蟲劑感受性差異的原因可能是由于它們對殺蟲劑的分解代謝不同，或體壁厚薄，附屬物的多少等有關(guān)。表1-1 三種殺蟲劑對黑尾葉蟬、稻褐飛虱、白背飛虱和灰稻虱的LD50（g/g雌成蟲） (陳年春,1990)殺蟲劑黑尾葉蟬稻褐飛虱白背飛虱灰褐虱馬拉松0.656.851.861.63稻豐散0.759.471.801.41苯硫磷4.9120.12.390.612同種昆蟲不同品系對殺蟲劑的感受性不同采自不同地區(qū)的煙蚜對同一殺蟲劑的敏感性不同。如圖1-1，表明Greens-Ville 品系對甲胺磷、

29、馬拉松的敏感性與Brunswick品系和Lunenburg 品系有明顯的差異。同種昆蟲不同品系對殺蟲劑的感受性不同可能與它們各自的用藥歷史背景及其生長環(huán)境等因素有關(guān)。插圖3昆蟲的不同發(fā)育階段對殺蟲劑感受性的差異昆蟲在不同發(fā)育階段，由于體壁結(jié)構(gòu)和代謝生理有很大差別對殺蟲劑的感受性也存在差異。就完全變態(tài)的昆蟲來說，如家蠅、玉米螟等對殺蟲劑的感受性，一般以蛹期和卵期的感受性低，而以幼蟲期和成蟲期的感受性最高。蛹期對殺蟲劑的感受性低是因為蛹殼具有一定保護作用，不易被藥劑滲入，同時蛹期的新陳代謝及呼吸強度都特別低，因此對殺蟲劑的感受性很低。但是蛹期在不同發(fā)育階段對殺蟲劑的感受性也不一致，以蛹的中期感受性

30、最低，而以蛹的早期和晚期對殺蟲劑的感受性高，因為此時的新陳代謝及呼吸率都比中期要高，所以對殺蟲劑也較敏感。昆蟲的卵，通常對殺蟲劑的感受性也較低，雖然有的殺蟲劑 (如1605)有時也噴灑卵，但其目的是為了殺死初孵幼蟲，而對卵本身并無作用。卵期對殺蟲劑感受性低是由于其代謝強度與呼吸率比較弱之故，尤其是越冬卵對殺蟲劑的感受性更低這可能是因卵黃體外包圍一層膜，與卵殼之間形成一個空隙，即使殺蟲劑侵入卵殼，由于該層空氣阻隔，殺蟲劑也難進入卵內(nèi)，所以一般殺蟲劑對越冬卵是無效的。而夏季卵因無此空氣層，對殺蟲劑的感受性要高一些。在幼蟲 (或若蟲)期，隨著齡期的增加，對殺蟲劑的感受性也逐漸降低。在田間防治粘蟲、菜

31、青蟲、蝗蟲等害蟲時，常發(fā)現(xiàn)三齡以前的幼蟲或若蟲易被殺死，而老齡幼蟲或若蟲不易被殺死的現(xiàn)象，這是因為齡期越大的幼蟲或若蟲，表皮變厚，脂肪含量增加以及骨化程度加深等使殺蟲劑不易滲入所致。即使在同一齡期幼蟲中，其感受性與體重也有關(guān)，隨著體重的增加，感受性也隨之降低。一般講體重大，脂肪含量就多，對殺蟲劑的感受性就低，但是，表皮內(nèi)脂肪含量的多少卻與感受性成反比，即表皮內(nèi)脂肪含量越多，對殺蟲劑就越敏感?？梢?，表皮內(nèi)脂肪含量的多少，是直接影響殺蟲劑滲入蟲體的主導(dǎo)因子。此外老齡幼蟲接觸殺蟲劑時，可以立即化蛹而避免被殺死，而幼齡幼蟲則無此能力。成蟲期對殺蟲劑的感受性，雖不像幼蟲那樣有規(guī)律，但與日齡的關(guān)系很密切。

32、例如稻飛虱、葉蟬類日齡為8一5d 的個體對殺蟲劑的感受性較一致。果蠅成蟲剛羽化對殺蟲劑的感受性高，但到5d 的個體感受性就降低，5d 以后其感受性又逐漸增高。蚜蟲的各種變異型對殺蟲劑的感受性也存在差異。例如桃蚜赤色型對殺蟲劑的感受性比黃色型高2一6倍 (如圖1-2)。插圖圖1-2 桃蚜的體色和殺蟲劑的感受性4昆蟲的性別與生殖對殺蟲劑的感受性同種昆蟲因性別不同對殺蟲劑的感受性也有差異。一般講，雌性昆蟲對殺蟲劑的感受性比雄性昆蟲低，這和體內(nèi)脂肪的含量與分布、個體大小、呼吸強度等因子有關(guān)，但對有機磷殺蟲劑來講，則雄性個體比雌性個體感受性低。試驗證明，用辛硫磷處理家蠅群體，雌性家蠅死亡多，而雄性的死亡

33、少，但用溴氰菊酯處理時，雌性家蠅死亡少，而雄性家蠅死亡多，這是因為有機磷殺蟲劑的作用機制是抑制蟲體神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶的活性，而雌蟲體內(nèi)乙酰膽堿酯酶的含量比雄蟲少，所以雌蟲比雄蟲更敏感。據(jù)報道，雌成蟲在產(chǎn)卵前的感受性低，而產(chǎn)卵后則感受性高。5昆蟲的代謝與生理特點對殺蟲劑感受性的影響昆蟲的新陳代謝及呼吸率與昆蟲對殺蟲劑的感受性有關(guān)。當新陳代謝與呼吸率增加時，昆蟲對殺蟲劑的感受性就增高。越冬期昆蟲，由于新陳代謝、呼吸率都很低，體內(nèi)脂肪貯存又較多，因而對殺蟲劑的感受性就低，所以很難被殺死。但也有相反的事例，如果蠅的呼吸率增高，對殺蟲劑的感受性就降低，當然昆蟲的新陳代謝及呼吸率也受到外界環(huán)境條件的影

34、響。另外，供試昆蟲的營養(yǎng)條件對殺蟲劑的感受性也有影響。例如庫墳幼蟲以奶粉為營養(yǎng)與以藻類為營養(yǎng)的對殺蟲劑的感受性相差一倍。又如來源不同寄主植物的蚜蟲對殺蟲劑的感受性差異也很顯著。但也有相反的情況，不同作物上的小菜蛾對敵敵喪、甲胺磷等殺蟲劑的感受性變化不大 (見表1-2)。表1-2 用甘藍葉和蘿卜嫩芽飼養(yǎng)的小菜蛾三齡幼蟲對敵敵畏、甲胺磷和苯氰磷的 LC50(ppm，食葉浸漬法)(陳年春，1990)殺蟲劑甘藍葉（a）蘿卜嫩芽(b)a/b敵敵畏2702651.0甲胺磷3.53.21.1苯氰磷48510.9（二）環(huán)境因素環(huán)境條件對生物測定有顯著的影響，在測定中，影響比較明顯的因素是溫度、濕度、光照、營養(yǎng)

35、、容器和密度等，因此在生物測定中，對環(huán)境條件要嚴格控制，并給予適宜的環(huán)境條件。1溫度溫度的高低不僅直接影響生物體的新陳代謝，同時也影響到殺蟲劑的化學(xué)活性。在高溫時，昆蟲的生長發(fā)育迅速，新陳代謝作用比較強，對殺蟲劑的解毒作用增強，但是另一方面高溫可以增強殺蟲劑的穿透性和作用速度，所以，一般講，用高劑量及作用迅速的殺蟲劑時，在一定溫度范圍內(nèi)，溫度越高，毒效越大，殺死昆蟲所需時間愈短。而作用緩慢的殺蟲劑或具有負溫度系數(shù)的殺蟲劑，如擬除蟲菊酯，溫度越低，毒效越大，這可能是在低溫時，解毒及代謝作用緩慢，更有利于殺蟲劑的積累和毒效作用的發(fā)揮。這里應(yīng)區(qū)分開處理時的溫度和處理后的溫度，一般講處理時溫度高，處理

36、后恢復(fù)時的溫度低，則毒效高;反之，則毒效就低，但一般認為處理后恢復(fù)時的溫度對殺蟲劑毒效的發(fā)揮更重要。（1）處理前的溫度及飼養(yǎng)的溫度生物測定一般采用室內(nèi)飼養(yǎng)的目標昆蟲，因此，先介紹飼養(yǎng)時處理前的溫度對殺蟲劑毒效的影響。Craufuvd-Benson(1938)把扁蟲 (Ahasverus advena)分別在20和25下飼養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)20中飼養(yǎng)的昆蟲對魚藤酮更敏感。Sun(1947)把雜擬谷盜分別在25、30和35下飼養(yǎng)，然后在25時熏蒸，發(fā)現(xiàn)在35中飼養(yǎng)的雜擬谷盜對CS2更敏感。在進行生物測定之前，把目標昆蟲置于一定溫度中適應(yīng)一段時間，這一溫度稱為處理前溫度，它的影響比飼養(yǎng)的溫度有時更顯著。如熏蒸

37、介殼蟲時，處理前的溫度比熏蒸時的溫度低，則死亡率就高。但也有相反情況，Kjnght(1925)用 HCN 熏蒸瓢甲 (Hippodamia converyens)，處理前的溫度比處理時的溫度高，死亡率反而增加?？梢?，處理前溫度與處理時的溫度對殺蟲劑毒效的影響似乎沒有一定規(guī)律，但一般認為處理前經(jīng)低溫處理，可提高昆蟲對殺蟲劑的耐藥力。（2）處理時的溫度許多殺蟲劑與處理時的溫度關(guān)系隨昆蟲種類而不同。一般講，具有正溫度系數(shù)的殺蟲劑，隨著處理溫度的增高而毒效增加，如對硫磷、內(nèi)吸磷、熏蒸劑等。熏蒸劑在高溫時，氣體揮發(fā)散布快，作用迅速。高溫還可能刺激或增加昆蟲的活動，打開氣門，促進蟲體接觸有利于進人蟲體更多

38、的藥劑，所以高溫時毒效顯著。具有負溫度系數(shù)的殺蟲劑隨著處理時溫度升高而毒效降低，如DDT、擬除蟲菊酯等，據(jù)Guthrie(1950)報道，用 DDT、擬除蟲菊酯處理德國蜚蠊，在14.5時的毒效比在32時要高。Vinson 和 Kearns(1952)研究了 DDT 在l5及35時對美洲蜚蠊的毒效，也證明了DDT具有負溫度系數(shù)。但是對不同的昆蟲，DDT的毒效與處理時的溫度關(guān)系也有不同的情況。例如用DDT處理乳草 (Qncopeltus fasciatus)時，在l0一22范圍內(nèi)，死亡率逐漸上升，但在此范圍之外又再下降，表明前部分是正溫度系數(shù)，后部分為負溫度系數(shù)。六六六有時表現(xiàn)具有正溫度系數(shù)，有時

39、具有負溫度系數(shù)。（3）處理后的溫度從生物測定角度來看，處理后的溫度對測定結(jié)果影響最大，也最重要。一般講，處理后溫度越低，死亡率越大，毒效越高（表1-3）。但是，必須指出處理后的低溫，雖然使死亡率增加，但殺死害蟲所需時間延長。另一方面，殺蟲劑的毒效雖然有所提高，但也有一定范圍 (10一30之間)，這是因為在高溫時殺蟲劑更容易被代謝解毒，所以低溫時毒效反而高。但過高溫度 (30以上)，對昆蟲會造成不利的影響。2濕度 一般處理時間短，濕度的影響不大，但處理后不同相對濕度對毒效的影響較大。濕度不影響殺蟲劑的穿透性及作用速度，也不影響解毒過，通常它只影響昆蟲對殺蟲劑的忍受力，在適宜的濕度時，可以增強昆蟲

40、對殺蟲劑的忍受力，反之，就會降低昆蟲表1-3處理后溫度與死亡率的關(guān)系昆蟲殺蟲藥劑處理后溫度及死亡率（%）作者Eutettix除蟲菊酯60 81-88100 29-33Harries,1945家蠅成蟲除蟲菊酯20死亡率大38死亡率小Eagleson,1947Plutella 幼蟲0.0125%DDT70 7890 9Dustan,1947Ahasversus魚藤 20死亡率大25死亡率小Crauford-Benson,1938MacrocentrusDDT 70死亡率大 80死亡率小Peterson,1946蜜蜂除蟲菊酯及魚藤20 34.5101Bottcher,1939Tribolium除蟲菊

41、酯70 4-7801Potter et al.,1946DDT70 2.5801Lymantria幼蟲除蟲菊酯30死亡率小20死亡率大Klinger,1936Prodenia幼蟲砷酸鉛70 2801Ellisor et al.,1940對殺蟲劑的忍受力，提高毒效。通常昆蟲中毒后，往往不能控制體內(nèi)水分的蒸失，又不能繼續(xù)取食，從食物中獲取水分或中毒后新陳代謝作用加速，體內(nèi)水分損失較抉，以致大量失水而致死。濕度過小時，可增強殺蟲劑對昆蟲的毒效，提高死亡率。例如用除蟲菊酯油劑處理浮塵子(Euteffix)，無論在16或37，相對濕度在20%時的死亡率比在90%時的高。又如Cranfard-Bonson

42、(1938)用魚藤酮浸液處理半扁蟲，相對濕度為55%時的死亡率比90%時的高。但也有相反的情況，用DDT藥膜法處理雜擬谷盜，相對濕度為84%的死亡率反而比低濕度 (30%一50%)的要高。處理后的相對濕度確對殺蟲劑毒效有顯著影響，但不同昆蟲及不同殺蟲劑的情況也不相同；相對濕度對熏蒸劑的影響更大，它能影響熏蒸劑在空氣中的分布與性質(zhì)，往往濕度低時，死亡率高，殺蟲劑毒效增強。3光照光照對昆蟲的感受性一般影響不大，但光照可促進某些昆蟲活動，增加新陳代謝及能的消耗，因而增強昆蟲對殺蟲劑的感受性。Meioch等 (1972)在六種不同的環(huán)境條件下(不同溫度、不同光照強度以及不同光照時間等)用馬拉硫磷和谷硫

43、磷處理棉象甲的試驗，證明了這兩種殺蟲劑在高溫時毒效都增加，但與光照無關(guān)。值得指出的是，光照對個別易發(fā)生光解作用的藥劑，以及近年來正在研究和開發(fā)的光活性殺蟲劑對害蟲的毒效有顯著的影響。4昆蟲在藥劑處理前后的食物供應(yīng)昆蟲取食食物的種類及質(zhì)量直接影響蟲體的營養(yǎng)情況、健康程度及其個體重量，從而影響到昆蟲對殺蟲劑的忍受性。例如取食棉鈴長大的棉鈴象鼻蟲比食棉蕾的對毒殺芬的抵抗力要強；又如在玫瑰上長大的紅蜘蛛比在豆類植物上長大的抗性要強，而在番茄上長大的抗性最低；又如用酵母的培養(yǎng)基飼喂的果蠅對煙堿的抵抗力要強。可見營養(yǎng)對生物測定結(jié)果影響很大。因此，對室內(nèi)飼養(yǎng)的目標昆蟲，應(yīng)使飼養(yǎng)條件標準化。除了測定前試蟲的營

44、養(yǎng)狀況影響生物測定的結(jié)果外，處理前后饑餓對殺蟲劑的毒效也有明顯的影響，例如粘蟲在藥劑處理前饑餓者比不饑餓的對殺蟲劑的感受性高。為了獲得良好效果，一般在處理前饑餓l2h，可以促進昆蟲的進食量及藥量，從而得到滿意的結(jié)果。但必須注意，處理前饑餓的時間應(yīng)經(jīng)過試驗確定，以免造成昆蟲在饑餓中死亡；而在處理后，應(yīng)及時飼喂。5蟲口密度和容器 昆蟲在飼養(yǎng)期間，蟲口密度大小也直接影響個體重量，一般高密度飼養(yǎng)的幼蟲對殺蟲劑的感受性較高，這是因為密度過大，蟲體取食量及營養(yǎng)情況受到影響，所以個體??；同時，個體間彼此擾動增加了接觸藥量和個體的新陳代謝，也有少數(shù)昆蟲有自相殘殺或斗爭習(xí)性，所以不能使蟲口密度過大。從圖1-3看

45、出飼養(yǎng)密度大的夜盜蟲 (六齡)對苯硫磷的50%致死時間為2Omin，而飼養(yǎng)密度小的，致死時間為30min，表明高密度飼養(yǎng)的幼蟲對殺蟲劑的感受性有所提高。插圖生物測定用的容器種類、大小等對昆蟲的死亡率也有較大影響，如用煙堿處理果蠅的試驗表明，處理用的玻管直徑愈小，果蠅群體因活動面過小，相互擾動作用也愈大，則死亡率也愈高。又如，改變試驗容器時，小菜蛾對敵敵畏、苯氰磷、甲胺磷和氰戊菊酯的感受性不同。從表1-4看出，使用塑料培養(yǎng)皿時，小菜蛾三齡幼蟲對敵敵畏、苯氰磷、甲胺磷和氰戊菊酯的致死中濃度比使用塑料杯的要低，說明使用塑料培養(yǎng)皿比使用塑料杯的感受性要高。 表1-4 不同試驗容器中小菜蛾對敵敵畏、苯氰

46、磷、甲胺磷和氰戊菊酯的LC50殺蟲劑LC50 (ppm)(a)/(b)塑料培養(yǎng)皿(a)塑料杯(b)敵敵畏1902600.7苯氰磷33.70.8甲胺磷30350.9氰戊菊酯7.78.80.9注: 塑料培養(yǎng)皿（直徑90mm,高20mm）；塑料杯（直徑60mm，高40mm）。 (三)生物測定技術(shù)方面在殺蟲劑生物測定中，的處理方法應(yīng)根據(jù)藥劑的作用方式和試蟲危害特點而定。對多數(shù)藥劑而言，微量點滴法是毒力測定的最精確可靠的方法。但不是所有的藥劑和昆蟲都適合采用點滴法處理。對于內(nèi)吸性殺蟲劑或殺蝸劑，要測定出藥劑對刺吸式門錨昆蟲或蛹的毒力，還須采用植物漫漬法或噴霧法，這樣才能使藥劑的作用特點充分表達出來。測定

47、以胃毒殺蟲作用為主的藥劑時，也需采用相應(yīng)的方法。具特異性作用或殺卵作用的藥劑，不但要考慮到處理方法，還應(yīng)注意選用適合測定的蟲態(tài)，不然，測得的結(jié)果就沒有應(yīng)用價值。此外，試驗方法、處理時間及部位等對殺蟲劑的感受性也有不同的影響，在生物測定技術(shù)中均應(yīng)加以注意。 (三)對殺蟲劑的妻求供毒力測定用的藥劑莊是標準品 (化學(xué)純)，其工業(yè)品或制劑申因含雜質(zhì)或助劑，會影響到毒力。若確難獲得標準姑，也應(yīng)盡量選用高含量 (卜90)工業(yè)品，最好不用商品制劑。因采用的毒力測娃方法不同，有時也需將原藥加T成制劑。如測定胃毒毒力，需用粉劑制備夾毒葉片，或作噴粉處理都要用粉劑，這可用醫(yī)用滑百粉作填料，以丙酮為媒溶劑，用浸潤法

48、加工。需用噴霧法或浸漬法處理時，要將藥劑配成乳油，多用吐溫類乳化劑和溶解度大，毒副作用小的有機溶劑 (如二甲苯)配制。(四)對殺蟲劑處理方法的妻求殺蟲劑的處理方法應(yīng)根據(jù)藥劑的作用方式和試蟲危害特點而定。對多數(shù)藥劑而言，微量點滴法是毒力測定的最精確可靠的方法。但不是所有的藥劑和昆蟲都適合采用點滴法處理。對于內(nèi)吸性殺蟲劑或殺蝸劑，要測定出藥劑對刺吸式門錨昆蟲或蛹的毒力，還須采用植物漫漬法或噴霧法，這樣才能使藥劑的作用特點充分表達出來。測定以胃毒殺蟲作用為主的藥劑時，也需采用相應(yīng)的方法。具特異性作用或殺卵作用的藥劑，不但要考慮到處理方法，還應(yīng)注意選用適合測定的蟲態(tài)，不然，測得的結(jié)果就沒有應(yīng)用價值。無

49、論采用何種處理方法都必須設(shè)有對照組，在測定及觀察期間，往往有自然死亡的情況，尤其對于引間來回的試蟲，會存有被天敵寄生或感病個體，如無對照，無法消除自然因素對藥劑效果的干擾。對照組的設(shè)置，有空白對照，即完全不處理!溶劑對照，即不含有藥劑有效成分，僅用溶劑 (丙酮、水處理，以比較藥劑的有效性。測定中多采用溶劑對照，對照組試蟲的其他條件應(yīng)同處理組一致。測定中，如發(fā)現(xiàn)對照組死亡率大于10，則所測定的全部內(nèi)容應(yīng)重做。這說明試蟲本身個體間生活力差異較大，會直接影響到測定結(jié)果的準確性。三、生物測定技術(shù)的一般原則殺蟲劑生物測定的基本原理是研究殺蟲劑與生物（主要是昆蟲）的相關(guān)性，因此對殺蟲劑及生物的要求比較嚴格

50、，使用的殺蟲劑應(yīng)當是純品（或原藥），至少有效成分含量要準確，供試昆蟲應(yīng)該齡期一致、個體差異很小、生理狀態(tài)較一致。在一定的環(huán)境條件下，殺蟲劑與昆蟲的相互關(guān)系如圖1-1所示。因此，在生物測定中應(yīng)遵循以下幾個原則。環(huán)境條件毒性昆蟲生理狀態(tài)殺蟲劑理化特性耐藥性（一）影響因素如前所述，外界環(huán)境條件的變化，如溫度、濕度、光照等對殺蟲劑的理化性狀和昆蟲的生理狀態(tài)都有影響；而 殺蟲劑理化性能的變化，能影響對昆蟲的毒效；昆蟲的生理狀態(tài)，如發(fā)育階段、齡期、性別等的不同對殺蟲劑有不同的耐藥力。然而，在測定中，要求只有兩個變數(shù)，一個是殺蟲劑的劑量（或濃度）作為自變數(shù)（x），另一個是死亡率作為應(yīng)變數(shù)（y）。死亡率（y）

51、是殺蟲劑的劑量（或濃度）（x）的函數(shù)，可用y=f(x)表示，而其它因素應(yīng)盡可能穩(wěn)定一致，使影響因素力求穩(wěn)定。否則，我們所測得的死亡率（y）不只是由殺蟲劑劑量（x）的改變而引起的，還會因昆蟲的大小、齡期、性別、發(fā)育階段或環(huán)境條件以及處理方法等的不一致，使得測得的劑量對數(shù)死亡率機率值的關(guān)系不是y=a+bx的直線回歸式，而變成y=a+b1x1+b2x2+b3x3+bnxn的復(fù)雜的偏回歸式。其中x2可能表示昆蟲不同生理狀態(tài)的影響，x3可能表示溫度的影響,x4可能表示營養(yǎng)或食物的影響等等。顯然，這樣做是不合適的，而且造成了分析上的困難，得到的結(jié)果不可靠，因此在毒力測定中要用目標昆蟲的一致性和相對控制環(huán)境

52、條件，盡可能減少或消除處理間的相互干擾，才能提高試驗結(jié)果的精確度，獲得比較穩(wěn)定可靠的結(jié)果。主要條件有：（1）發(fā)育階段 如測定幼蟲或若蟲應(yīng)該用同一齡期，體重大小一致。如用成蟲，要用同一日齡的，以羽化后3-5天的為好。（2）性別 所用成蟲應(yīng)雌雄一致，一般以雌成蟲較好。 （3）營養(yǎng) 在室內(nèi)標準條件下飼養(yǎng)的試蟲，才能達到營養(yǎng)條件一致。從野外采集低齡幼蟲（或若蟲），也應(yīng)在室內(nèi)飼養(yǎng)一段時間后，再用來測試。 （4）溫度 溫度對試蟲的活動性、代謝率、體內(nèi)生理生化的變化等，以及對殺蟲劑的穿透性、轉(zhuǎn)化率都有較大影響。如唐振華等（1977）在室內(nèi)20和28測定氧樂果、樂果、磷胺和西維因等對棉蚜的毒力時發(fā)現(xiàn)，供試藥劑

53、對棉蚜的毒力均屬于正溫度系數(shù)。即毒力隨溫度升高而升高，尤以樂果更突出，溫度從20升至28時，LD50值從4.7g/蚜降低至0.7g/蚜，毒力提高6.7倍。因此，在測定前溫度和處理后恢復(fù)時的溫度一致是很重要的，一般在25左右。（5）世代 常因世代不同，試蟲對藥劑的敏感性不同，所以要選用同一世代的試蟲進行測試或比較。 （6）溶劑 不同溶劑對昆蟲表皮穿透率不同，單位時間內(nèi)滲入蟲體內(nèi)的藥量也不同，在體內(nèi)的代謝速率也不同，最后到達靶標部位的藥量也不同，測得結(jié)果就有明顯差異，因此配制藥液的溶劑要一致，一般以丙酮為宜。 （7）藥劑含量 殺蟲劑有效含量可直接影響到測得結(jié)果是否正確，所以一般要求純度95%以上，

54、至少是含量較高的原藥，并應(yīng)符合質(zhì)量要求才行。（8）藥劑處理部位 如點滴法，常因點滴部位不同，得到的毒力結(jié)果不同，點滴部位離作用部位遠則毒力低，以點滴于足或腹部末端毒力最低。一般以點滴胸背面或腹背部為宜。另外，濕度、光照、蟲口密度等對殺蟲劑的毒力也有影響，應(yīng)控制恒定。（二）必須設(shè)立對照在生物測定中，設(shè)立對照是很重要的，無論是采自田間的還是室內(nèi)飼養(yǎng)的目標昆蟲，有些個體因生活力弱，或天敵寄生、感病等原因，在試驗期間往往有自然死亡情況，因此藥劑處理組的死亡蟲數(shù)也包括自然死亡數(shù)，顯然這不完全是藥劑作用的效果，故應(yīng)設(shè)立對照加以校正，以消除自然因素所造成的死亡對藥劑效果的干擾。一般有3種對照：空白對照，即完

55、全不處理（在自然狀態(tài)下）；溶劑對照，即不含有效成分的溶劑、乳化劑等。如以丙酮配制的藥液進行點滴試驗，那么對照組就應(yīng)點滴丙酮，這是為了消除溶劑對測試結(jié)果的影響；標準藥劑對照，標準藥劑是指在生產(chǎn)中對某中目標昆蟲常用的有效藥劑，不僅可以同新農(nóng)藥對比，還可以消除一些偶然因素的造成的誤差。上述三種對照可以根據(jù)具體情況和試驗要求來設(shè)立，一般至少設(shè)兩種對照。（三）必須設(shè)重復(fù)生物測定技術(shù)所測試的對象不是昆蟲個體，而是昆蟲群體，在一個昆蟲群體中個體之間對殺蟲劑的敏感性有顯著的差異，因此取樣的代表性很重要。如果取樣少了，就有可能由于取樣不夠全面或不是隨機取樣而造成結(jié)果的片面性。取樣越多，試驗結(jié)果雖然越可靠，但工作量太大。從生物統(tǒng)計理論上講，增加重復(fù)次數(shù)減少每個重復(fù)的生物個體是減少試驗誤差的一種方法。但也應(yīng)根據(jù)具體情況而定，一般重復(fù)三次，每個重復(fù)20-50頭試蟲。但如果是作初步毒力試驗，大量篩選新化合物時，每個化合物只設(shè)一個濃度（或劑量），重復(fù)一次就可以得到正確的結(jié)果。（四）供試的目標昆蟲盡量選擇農(nóng)作物害蟲生物測定中所用目標昆蟲應(yīng)在同一環(huán)境條件下飼養(yǎng)得來或采自田間同一環(huán)境條件下的，在生理上、發(fā)育上盡量一致。第二節(jié) 目標昆蟲的飼養(yǎng)方法大規(guī)模有目的、有步驟地篩選新的殺蟲藥劑，就需要大量的目標昆蟲作試材。為了