知柏地黃片質量標準研究

1、知柏地黃片質量標準研究     【摘要】  目的 建立知柏地黃片的質量標準。方法 對知柏地黃片中的山藥、牡丹皮進行顯微鑒別；采用HPLC測定山茱萸中馬錢苷的含量及牡丹皮中丹皮酚的含量。結果 顯微鑒別能快速檢出山藥、牡丹皮；馬錢苷、丹皮酚的質量濃度在4.6292.32、5.12102.50 g/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系，平均回收率分別為99.69%、97.78%，RSD分別為1.70%、1.80%。結論 建立的方法能準確、快速地進行定性、定量檢測，可用于知柏地黃片的質量控制。 【關鍵詞】  知柏地黃片；顯微鑒別；高效液相色譜法

2、；馬錢苷；丹皮酚Abstract:Objective To establish the  quality  standards  of  Zhibaidihuang tablets. Method  Microidentification   was  used to identify  Rhizoma  dioscoreae  and  Cortex  moutan； and  HPLC was used to assay loganin and pae

3、onol.Results  Rhizoma  dioscoreae  and  Cortex  moutan can be identified  by microidentification. Loganin and paeonol showed  good linearities over the ranges of 4.62-92.32 and 5.12-102.50 g/mL  with the  average recoveries of 99.69% (RSD=1.70%) and 97.78

4、%(RSD=1.80%), respectively.  Conclusin  This quality  control  method  can  be used  for qualitative  identification  and  quantitative  assay  of Zhibaidihuang tablets.Key words:Zhibaidehuang tablets; Microidentification; HPLC; loganin; pa

5、eonol知柏地黃片由知母、黃柏、山茱萸、牡丹皮、熟地黃、澤瀉、茯苓、山藥等八味藥材組成，收載于衛(wèi)生藥品標準中，具有滋陰降火的功效，用于治療陰虛火旺、潮熱盜汗、口干咽痛、耳鳴遺精、小便短赤等1。該標準中包括了茯苓、山茱萸的顯微鑒別，黃柏與牡丹皮的薄層色譜鑒別。為了提高藥品標準而加強藥品質量的控制，本文增訂了山藥、牡丹皮的顯微鑒別，并對方中山茱萸中所含有效成分馬錢苷及牡丹皮中所含有效成分丹皮酚2進行了含量測定。1  儀器與試藥1.1  儀器         OLYMPUS生物顯微鏡CX31，島津

6、LC2010A HT高效液相色譜儀， HU10300F2型超聲波清洗器。1.2  試藥         馬錢苷對照品（批號: 111640-200502 ）、丹皮酚對照品（批號：110766-200416）均由中國藥品生物制品檢定所提供；知柏地黃片（廣東益和堂制藥有公司，批號：GC001、GC002、GC003），陰性對照（廣東益和堂制藥有限公司）；乙腈為色譜純，水為超純水；其他試劑均為分析純。2  定性鑒別21  山藥的顯微特征    顯微鑒別方法能快速

7、、準確地檢出山藥的顯微特征：淀粉粒三角狀卵形或矩圓形，直徑2440 ，臍點短縫狀或人字狀;草酸鈣針晶成束存在于壁細胞中或散在,見圖1。2 2  牡丹皮的顯微特征    顯微鑒別方法能快速、準確地檢出牡丹皮的顯微特征：草酸鈣簇晶存在于無色薄壁細胞中，有時數個排列成行，見圖2。3  含量測定31  色譜條件       馬錢苷：色譜柱為DiamonsilTM(鉆石)  C18 （5 m，250 mm×4.6 mm）,柱溫：40 ，流動相：四氫呋喃乙腈甲醇0.0

8、5%磷酸溶液（體積比17389），流速：1.0 mL/min，檢測波長：236 nm，進樣量：10 L。    丹皮酚：色譜柱為DiamonsilTM(鉆石)  C18 （ 5 m，250 mm×4.6 mm）,柱溫：室溫，流動相：甲醇水（體積比7030），流速：1.0 mL/min，檢測波長：274 nm，進樣量：20 L。32  系統(tǒng)適應性321  對照品溶液的制備 取馬錢苷對照品適量，精密稱定，加體積分數50%的甲醇制成每1 mL含20 g的溶液，即得。另取丹皮酚對照品適量，精密稱定，加體積分數50%的甲醇制

9、成每1 mL含30 g的溶液，即得。322  供試品溶液的制備 取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細，取約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積分數50%的甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用體積分數50%的甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。323  陰性樣品溶液的制備 324  干擾試驗 精密吸取各對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，按上述條件進樣分析，記錄色譜圖。結果陰性樣品溶液色譜圖均無干擾色譜峰，見圖3,4。

10、60;    3.3  線性關系考察    精密量取馬錢苷對照品溶液(0.2308 mg/mL)0.4、1、2、3、5、8 mL，分別置20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1 mL含馬錢苷4.62、11.54、23.08、34.62、57.70、92.32 g的梯度溶液。分別精密吸取10 L進樣測定，以對照品質量濃度作為橫坐標，測得的峰面積作為縱坐標，進行線性回歸，得線性方程Y=1212.5X+7407，r=0.999 5。結果表明馬錢苷對照品質量濃度在4.6292.32 g/mL之間與其峰面積呈良好的線性關系。&#

11、160;   精密量取丹皮酚對照品溶液(0.205 mg/mL)0.5、2、3、4、5、10 mL，分別置20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1 mL含丹皮酚5.12、20.50、30.75、41.00、51.25、102.50 g的梯度溶液。分別精密吸取20 L進樣測定，以對照品質量濃度作為橫坐標，測得的峰面積作為縱坐標，進行線性回歸，得線性方程Y=105.15X-3.2071，r=0.999 8。結果表明丹皮酚對照品質量濃度在5.12102.50 g/mL之間與其峰面積呈良好的線性關系。3.4  精密度試驗    分別吸取

12、馬錢苷對照品、丹皮酚對照品溶液適量，重復進樣6次，測定其峰面積，結果平均峰面積分別為36 313.2及4 303.6，RSD分別為0.75%和0.97%(n=6)。3.6  穩(wěn)定性試驗    取同一批號（批號：GC001）制備的供試品溶液，分別在0、1、2、3、4、5及6 h，分別測定馬錢苷和丹皮酚的含量，結果RSD分別為1.05%和0.70%。表明供試品溶液在6 h內穩(wěn)定。3.7  回收率試驗    取同一供試品（批號:GC001）分別對馬錢苷和丹皮酚進行回收率測定，平均回收率分別為99.69%和97.78%，R

13、SD分別為1.70%和1.80%。結果見表1,2。表1  馬錢苷回收率的測定結果（略）表2  丹皮酚回收率的測定結果（略）4  討  論4.1  由馬錢苷和丹皮酚對照品溶液紫外掃描圖譜可見，兩成分的最大吸收波長分別為236 nm和274 nm，因此本法采用236 nm和274 nm 分別作為馬錢苷和丹皮酚的檢測波長。 4.2  衛(wèi)生部藥品標準中收載了知柏地黃片的茯苓、山茱萸的顯微特征，本文增加了山藥和牡丹皮的顯微特征，方法簡單，顯微特征具有代表性，從而可以更有效地控制產品的內在質量。4.3  采用2005年版藥典收載的“六味地黃丸”山茱萸含量測定項下的四氫呋喃乙腈甲醇0.05%磷酸溶液（體積比18 487）作為流動相，但是結果分離效果不好，將體積比調整為17389，結果供試品馬錢苷峰能達到基線分離，峰形對稱，保留時間適中，理論塔板數均大于4 000，故本法采用四氫呋喃乙腈甲醇0.05%磷酸溶液（體積比17389）作為馬錢苷含量測定的流動相。4.4  本