HPLC日常維護(hù)辦法之三

1、HPLC日常維護(hù)辦法之三HPLC0常維護(hù)辦法之三：譜圖的各種問題作者：一轉(zhuǎn)貼自：一點(diǎn)擊數(shù)：339更新時(shí)間：2003-11-10文章錄入：剣液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的 正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。A、峰拖尾原因解決方法1、篩板阻塞1、a、反沖色譜柱b、更換進(jìn)口篩板C、更換色譜柱2、色譜柱塌陷2、填充色譜柱3、干擾峰3、冬使用更長的色譜柱b、改變流動相或更換色譜柱4、流動相PH選擇錯誤4、調(diào)整PH值。對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱峰5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生5

2、、a、加入離子對試劑或堿性揮反應(yīng)發(fā)性修飾劑圖b、更改色譜柱B、峰前延原因解決方法1、柱溫低1、升高柱溫2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)2、使用流動相作為樣品溶劑3、樣品過載3、降低樣品含量4、色譜柱損壞4、見 Al、A2C、峰分叉原因解決方法1、保護(hù)柱或分析柱污染圖1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果 必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻 塞，拆下來清洗。如果問題仍然 存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì) 污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。?果問題仍然存在，入口可能被阻 塞，更換篩板或更換色譜柱。2、樣品溶劑不溶于流動相2、改變樣品溶劑。如果可能釆取 流動相作為樣品溶劑。D、峰變形原因解決方法1、樣品過載1、減少樣品載量E、早出的

3、峰變形原因解決方法1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)1、a、減少進(jìn)樣體積b、運(yùn)用低極性樣品溶劑F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解決方法1、柱外效應(yīng)1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路）b、使用小體積的流通池K'增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重原因解決方法1、二級保留效應(yīng)，反相模式1、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）c、加入鹽或緩沖劑（或離子 化樣品）d、更換一支柱子2、二級保留效應(yīng)，正相模式2、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）C、加入水（或多官能團(tuán)化合物）d、試用另一種方法3、二級保留效應(yīng)，離子對3、加入三乙胺（或堿性樣品）H、酸性或堿性化合物的峰拖尾原

4、因解決方法1、緩沖不合適1、冬 使用濃度50-100mM的緩沖液b、使用Pka等于流動相PH值的緩沖液I、額外的峰原因解決方法1、樣品中有其他組份1、正常2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰2、a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰3、a、檢查流動相是否純凈b、使用流動相作為樣品溶劑C、減少進(jìn)樣體積J、保留時(shí)間波動原因解決方法1、溫控不當(dāng)1、調(diào)好柱溫2、流動相組分變化2、防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）3、色譜柱沒有平衡3、在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱K、保留時(shí)間不斷變化原因解決方法1、流速變化1、重新設(shè)定流速2、泵中有氣泡2、從泵中除去氣泡3、流動相選擇不恰當(dāng)3、a、更換合適的流動相b、

5、選擇合適的混合流動相L、基線漂移解決方法1、柱溫波動。（即使是很小的溫1、控制好柱子和流動相的溫度,度變化都會引起基線的波動。通在檢測器之前使用熱交換器常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、 較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。）2、流動相不均勻。（流動相條件2、使用HPLC級的溶劑，高純度變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)的鹽和添加劑。流動相在使用前致的漂移。）進(jìn)行脫氣，使用中使用氮?dú)狻?、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）4、檢測器出口阻塞。（高壓造成4、取出阻塞物或更換管子。參考流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）檢測器手冊更換流通池窗

6、。5、流動相配比不當(dāng)或流速變化5、更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢査流動相組成及流速。6、柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗,變化時(shí)更改流動相時(shí)，在分析前用10-20 倍體積的新流動相對柱子進(jìn)行沖 洗。7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì) 溶劑配成7、檢査流動相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K， 值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而 表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。8、使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調(diào) 整。9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測器動力 學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流 動相。10

7、、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收 波長處。10、將波長調(diào)整至最大吸收波長處M、基線噪音（規(guī)則的）原因解決方法1、在流動相、檢測器或泵中有空氣1、流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去 檢測器或泵中的空氣。2、漏液圖2、見第三部分。檢査管路接頭是 否松動，泵是否漏液，是否有鹽 析出和不正常的噪音。如有必要， 更換泵密封。3、流動相混合不完全3、用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑4、溫度影響（柱溫過高，檢測器 未加熱）4、減少差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開LC、檢測器和記錄儀， 檢查干擾是否來自于外部，加以 更正。6、泵振動6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器N、基線噪音（不規(guī)則的）原因解決方法1

8、、 漏液圖1、見第三部分。檢査接頭是否松 動，泵是否漏液，是否有鹽析出 和不正常的噪音。如有必要，更 換密封。檢查流通池是否漏液。2、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2、檢查流動相的組成。3、流動相各溶劑不相溶3、選擇互溶的流動相4、檢測器/記錄儀電子元件的問題4、斷開檢測器和記錄儀的電源， 檢査并更正。5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)6、檢測器內(nèi)有氣泡6、清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器7、流通池污染（即使是極少的污 染物也會產(chǎn)生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、檢測器燈能量不足8、更換燈9、色譜柱填料流失或阻塞9、更換色譜柱10、流動相混合不均勻或混合器

9、工作不正常10、維修或更換混合器，在流動 相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的 混合裝置O、寬峰原因解決方法1、流動相組成變化1、重新制備新的流動相2、流動相流速太低2、調(diào)節(jié)流速3、漏液（特別是在柱子和檢測器之間3、見section 3O檢査接頭是否松 動、泵是否漏液、是否有鹽析出 以及不正常的噪音。如果必要更 換密封。4、檢測器設(shè)定不正確4、調(diào)整設(shè)定5、柱外效應(yīng)影響a、柱子過載b、檢測器對反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大5、a、小體積進(jìn)樣（例如:10ul而不是 lOOul）以 1： 10 或 1： 100的比例稀釋樣品C、柱子與檢測器之間的管路太長 或管路內(nèi)徑太大d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長圖b、減少響應(yīng)時(shí)間或使

10、用更小的流 通池c、使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管 路d、減少響應(yīng)時(shí)間6、緩沖液濃度太低6、增加濃度7、保護(hù)柱污染或失效7、更換保護(hù)柱8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低8、更換同樣類型的色譜柱。如果 新柱子可以提供對稱的色譜峰， 則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。9、柱入口塌陷9、打開柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子10、呈現(xiàn)兩個或多個未被完全分離的物質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果11、柱溫過低11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過75-C12、檢測器時(shí)間常數(shù)太大12、使用較小的時(shí)間常數(shù)P、分離度降低原因解決方法1、流動相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間變化）1、重新配置流動相2、保護(hù)柱或分析柱阻塞圖2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必 要則更換保護(hù)柱。如果分析柱阻 塞，可進(jìn)行反沖。如果問題仍然 存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染 物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕?序。如果問題仍然存在，進(jìn)口可 能阻塞了，更換入口處的篩板或 更換色譜柱