HPLC流動相的緩沖液參考模板

1、HPLC流動相的緩沖液緩沖液流動相可以根據(jù)下面的操作步驟配制：將緩沖液藥品溶解在水中制成緩沖液（溶液A）。用pH計確定或調(diào)節(jié)溶液A的pH。將一定體積（如200ml）的有機(jī)溶劑B與由步驟2配制的溶液A（如800ml）混合，制成最終流動相（此處的有機(jī)相為20%）。檢查最終流動相的pH（此處為選項）。由于測定含有有機(jī)調(diào)節(jié)劑的流動相pH計發(fā)生漂移，使其測定pH不很可靠，所以上面的步驟4一般只有在考察誤差的主要來源時采用，大多數(shù)實驗室皆略去此步驟。步驟1一般是將配制緩沖液所用的兩種試劑（A1和A2）分別按計算量先溶解在水中制成水溶液，然后再將這兩種溶液按一定的比例混合得到預(yù)期pH的溶液A。若在此步驟2中

2、調(diào)節(jié)pH，則可以采用溶劑A滴定溶劑B，也可反過來滴定，并通過pH計測量得到所需pH的最終緩沖溶液。在大多數(shù)實驗室中，pH的測量精度通常不會達(dá)到±0.050.1個pH單位，這會顯著影響一些樣品的分離。當(dāng)HPLC方法對pH非常敏感時，步驟2只能大致確定pH值。        將準(zhǔn)確稱重的緩沖液配制試劑與精確體積的脫氣蒸餾水混合，使其成為均一的溶液（不進(jìn)一步調(diào)整pH），如此配得得緩沖溶液得pH可以控制在非常窄得范圍內(nèi)（±0.02單位），已知準(zhǔn)確pH值得緩沖液濃溶液已有市售。        為了改善峰形

3、或塔板數(shù)，有時在流動相中加入酸或堿（如三乙胺、乙酸等），如果這些添加劑并非為配制緩沖溶液時所采用得試劑，那么將這些試劑加入到流動相中后，還需重新滴加酸或堿，使流動相達(dá)到所需的pH值。常用緩沖液的配制        當(dāng)緩沖液被稀釋或濃縮時，pH也應(yīng)不變。其pH值應(yīng)近似恒定不變，或當(dāng)其中的離解的陽離子（K+、Na+）或陰離子（Cl-、Br-）被其它種類的離子替換時，表14中給出了響應(yīng)的配制方法，平衡陽離子為Na+，緩沖液的最終濃度為0.1mol/l，對于其它濃度的緩沖溶液或陽離子種類（通常K+）更好，表中的數(shù)據(jù)也可供參考。較稀的或較濃的緩沖溶液，及包含有不同

4、陽離子的溶液，其pH值會與表中的數(shù)據(jù)稍有出入。在方法建立過程中，精確的流動相pH值往往并不重要，重要的是每次新配制的流動相的pH值與第一次基本相同（最好控制在±0.02范圍內(nèi)）。注意，只有當(dāng)緩沖溶液的pH在緩沖試劑解離常數(shù)pKIa±1范圍內(nèi)時，緩沖溶液才具有有效的緩沖容量（如乙酸鹽的pKa=4.6，其適宜的pH范圍為3.65.6）。表1 低pH值（25）磷酸鹽緩沖溶液的配制方法溶液A1：0.1M磷酸。配制精確pH值緩沖液時，所用磷酸需滴定H3PO4的含量。溶液A2：0.1M磷酸二氫鈉溶液，稱量13.8g NaH2PO4·H2O溶解于水中，定容于1L容量瓶中。

5、60;       pH        A1體積（ml）        A2體積（ml）                pH        A1體積（ml）        A2體積（ml）        2.0        565  &#

6、160;     435                2.8        175        825        2.2        455        545                3.0 

7、;       110        890        2.4        345        655                3.2        55        945        2.

8、6        250        750                                        表2 不同pH值（25）醋酸緩沖溶液的配制方法溶液A1：0.1M醋酸溶液。6.0g（5.8ml）冰醋酸溶于水中，定容到1L容量瓶中。溶液A2：0.1M醋酸鈉溶液。8.2g C2H3O2Na（或1

9、3.6g C2H3O2Na·3H2O）溶解于水中定容到1L容量瓶中。        pH        A1體積（ml）        A2體積（ml）        pH        A1體積（ml）        A2體積（ml）        3.6       

10、; 926        74        4.8        400        600        3.8        880        120        5.0        296   

11、60;   704        4.0        820        180        5.2        210        790        4.2        736        264 

12、      5.4        176        824        4.4        610        390        5.6        96        904        4

13、.6        510        490                                表3 不同pH值（252 / 4）檸檬酸緩沖溶液的配制方法溶液A1：0.1M檸檬酸溶液。21.0g 檸檬酸溶于水中，定容到1L容量瓶中。溶液A2：0.1M檸檬酸鈉溶液。29.4g C6H5O7Na3·2H2O溶解于水中，定容到1L容量瓶中

14、。        pH        A1體積（ml）        A2體積（ml）        pH        A1體積（ml）        A2體積（ml）        3.0        930        70

15、60;       5.2        360        660        3.2        870        126        5.4        320        680     

16、60; 3.4        810        190        5.6        270        726        3.6        750        260        5.8   

17、    230        764        3.8        700        300        6.0        190        810        4.0        660

18、0;       340        6.2        140        856        4.2        610        370        6.4        60       

19、; 940        4.4        560        440        6.6        40        960        4.6        510        490   

20、60;   6.8        30        970        4.8        460        540        7.0        10        985        5.0  &#

21、160;     410        590                                表4 中等pH值（25）磷酸緩沖液的配制方法溶液A1：0.1M磷酸二氫鈉溶液。13.8g NaH2PO4·H2O溶于水中，定容到1L容量瓶中。溶液A2：0.1M磷酸氫二鈉溶液。26.8g Na2HPO4·7H2O（或35.9g Na2HPO4

22、3;12H2O）溶于水中，定容到1L容量瓶中。        pH        A1體積（ml）        A2體積（ml）        pH        A1體積（ml）        A2體積（ml）        5.6        948  

23、0;     52        7.0        390        610        5.8        920        80        7.2        280        720

24、60;       6.0        877        123        7.4        190        810        6.2        815        185     

25、60; 7.6        130        870        6.4        735        265        7.8        85        915        6.6    &

26、#160;   685        315        8.0        53        947        6.8        510        490                   

27、;             表5和6給出了適于pH=710.6范圍的兩種有機(jī)堿緩沖液配制方法，這種有機(jī)堿緩沖液可以有效低減緩硅膠基柱的柱效降低。表5 高pH（25）甘氨酸緩沖溶液的配制方法溶液A1：0.2M甘氨酸。15.01g 甘氨酸溶于水中，定容于1L容量瓶中。溶液A2：0.1M NaOH溶液，稀釋較濃的NaOH溶液。        pH        A1體積（ml）        A2體積（ml） 

28、      pH        A1體積（ml）        A2體積（ml）        8.6        25        2.0        9.6        25        11.2     

29、   8.8        25        3.0        9.8        25        13.6        9.0        25        4.4        10.0  

30、0;     25        16.0        9.2        25        6.0        10.4        25        19.3        9.4        25&#

31、160;       8.4        10.6        25        22.75        表6 高pH值（25）Tris緩沖溶液的配制方法溶液A1：0.1M Tris（無堿），12.11g Tris溶于水中，定容到1L容量瓶中。溶液A2：0.1M HCl溶液，稀釋較濃HCl溶液。        pH      &#

32、160; A1體積（ml）        A2體積（ml）        pH        A1體積（ml）        A2體積（ml）        7.1        50        45.7        8.1      

33、0; 50        26.2        7.2        50        44.7        8.2        50        22.9        7.3        50        43.4        8.3        50        19.9        7.4        50