samjimmy之色譜分析

1、鄭州大學(xué)現(xiàn)代遠程教育現(xiàn)代色譜技術(shù)課程考核要求說明：本課程考核形式為撰寫課程論文，完成后請保存為WORD 2003格式的文檔，登陸學(xué)習(xí)平臺提交，并檢查和確認(rèn)提交成功（能夠下載，并且內(nèi)容無誤即為提交成功）。一 論文撰寫要求1.論文摘要部分應(yīng)包括：目的、方法、結(jié)果和結(jié)論四個發(fā)明，大約200字左右，正文部分約3000字。2. 3-6個關(guān)鍵詞3.參考文獻不少于20篇。二 參考題目1.手性固定相研究進展2.氣相色譜法在有機農(nóng)藥殘留物分析中的應(yīng)用研究3.液相色譜在中藥分析中的應(yīng)用4.超臨界流體色譜在中藥有效成分提取中的應(yīng)用研究5.薄層色譜在雜質(zhì)檢查中的應(yīng)用6.反相液相色譜在藥物質(zhì)量控制中的應(yīng)用研究7.正相高

2、效液相色譜的應(yīng)用研究8.環(huán)糊精類固定相拆分手性藥物的研究進展9.毛細(xì)管電泳法在生物大分子中的研究進展10.手性藥物的毛細(xì)管電泳法拆分方法研究手性固定相研究進展摘要：對映體的拆分曾被認(rèn)為是相當(dāng)困難及復(fù)雜的實驗技術(shù), 隨著20世紀(jì)70年代手性色譜的興起和迅速發(fā)展,該難題得以逐步解決1,尤其是近幾年,藥物對映體的分析已成為藥學(xué)領(lǐng)域的研究熱點。將手性化合物鍵合到固定相表面后,由于樣品中的對映體與鍵合的子性分子形成非對映異構(gòu)體絡(luò)合物的結(jié)合能力的差異而達到拆分目的,該固定相即被稱為手性固定相(Chiral stationary phase,CSP)。由手性固定相液相色譜分離測定對映體已成為對映體

3、分離發(fā)展最為迅速的領(lǐng)域2。目前,采用高效液相色譜法(HPLC)分離手性化合物取得了顯著進展,已廣泛應(yīng)用于眾多領(lǐng)域,并已制備出大量用于HPLC的CSP。本文擬就目前應(yīng)用較廣泛的幾類CSP作一簡要介紹。摘要：手性色譜、手性固定相、進展、領(lǐng)域1 、多糖類衍生物CSP 多糖類衍生物包括纖維素衍生物和直鏈淀粉衍生物。纖維 素自身具有手性識別能力, 但不能直接做固定相, 然而其衍生 物作為CSP 具有較高的手性識別能力, 能拆分大量的對映體; 直鏈淀粉與纖維素同樣系由d - 葡萄糖單元構(gòu)成,

4、60;但直鏈淀粉 因在其d - 葡萄糖單元鍵上存在1 個螺旋結(jié)構(gòu)而致使其結(jié)構(gòu) 更有序;同時,上述2 種衍生物的手性識別能力存在較大差異, 可能是因葡萄糖單元構(gòu)象不同、結(jié)構(gòu)有序性存在差異所致。目 前,其廣泛用于HPLC ,可分離眾多藥物對映體。 Miyazawa T 等3  研究用纖維素三(3 , 5 二甲基苯基 氨基甲酸酯) (CDMPC) CSP 對非蛋白氨?；ヮ惖膶τ丑w化 

5、;合物進行拆分, 結(jié)果顯示, 其對幾乎所有的烷基酯類和苯甲基 酯類對映體化合物的拆分性優(yōu)于甲基酯類, 而對- 氨基酸衍 生物的拆分性不及- 氨基酸衍生物。In WK 等4 制備了涂鋯 CDMPC(CDMPC - Zirconia) CSP 并與CDMPC 比較,發(fā)現(xiàn)其 可增強分離對映體的識別能力。Kubota T 等5  對CDMPC CSP 進行了研究,并在HPLC

6、 上實現(xiàn)了對乙烯基聚合物的拆分, 結(jié)果顯示, 其識別能力較好, 但穩(wěn)定性差。李凌云等6  研究在 CDMPC 和直鏈淀粉三(3 , 5 二甲基苯基氨基甲酸酯) 構(gòu)成 的CSP 上采用HPLC 正相條件,分離系列含磷手性化合物,并 考察了流動相中有機改性劑的種類及濃度對手性分離的影響。2 、大環(huán)抗生素類CSP 大環(huán)抗生素類物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)具有多種官能團和不對稱 中心的特點, 其糖肽型還含有孔穴結(jié)構(gòu),&

7、#160;可與被分離物質(zhì)產(chǎn)生 多種作用,如疏水作用、包合作用、氫鍵形成、立體排斥、范德華 相互作用等。在大環(huán)抗生素類分子中,除含疏水部位外,通常還 具有親水基和可離子化的基團, 因而其具有良好的水溶性。目 前, 用于對映體分離的大環(huán)類抗生素根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點可分為糖 肽類柄狀霉菌素類、多肽與氨基糖苷類3 類, 由此提示抗生素 類CSP 具有應(yīng)用范圍廣、柱容量較高等特點。 張鵬等7 采用細(xì)徑去甲萬古霉素手性柱對布洛芬進行拆分, 并對其機制進行了初步探討。結(jié)果顯示

8、, 選用合適的硅烷化試 劑是去甲萬古霉素能否與硅膠鍵合的關(guān)鍵。研究者選用了2 種 硅烷化試劑- 氯丙基三乙氧基硅烷和- 氨醛三乙氧基硅烷 合成去甲萬古霉素CSP 。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在該實驗條件下,前者不具 備手性拆分能力,故采用- 氨醛三乙氧基硅烷作為CSP 的硅 烷化試劑, 合成后裝入細(xì)徑柱即可拆分布洛芬。去甲萬古霉素 鍵合量對異構(gòu)體的拆分起著重要作用, 為獲得盡可能大的鍵合 量,還需對鍵合反應(yīng)的各種條件進行優(yōu)化選擇。李凌云等8 

9、采 用HPLC 極性有機分離模式, 在萬古霉素CSP 上, 對阿替洛 爾、噻利洛爾、卡替洛爾、沙丁胺醇、尼卡地平、異丙嗪6 種藥物 對映體進行了手性分離。3 、分子烙印CSP 分子烙印技術(shù)是一種在模擬生物體內(nèi)抗原與抗體相互作用時利用“鎖匙”原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新技術(shù),利用該技術(shù) 制得的分子烙印聚合物對烙印分子具有“預(yù)定”選擇性,解決了 針對具體手性分子的CSP 設(shè)計問題, 為其設(shè)計提供了嶄新、有 效的解決方法, 在HPLC 

10、手性分離和制備方面受到人們的廣 泛關(guān)注。王進防等9 考察了溫度對分子烙印CSP 分離的影響, 計算了手性分離過程中的熱力學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示, 分子烙印 CSP 的分離過程為焓控制過程。隨著溫度的升高,樣品的容量 因子降低, 手性選擇因子值減小; 樣品與分子烙印CSP 的作 用力包括非特異和特異作用力, 只有特異作用力的差值才是產(chǎn) 生手性分離的本質(zhì)。分子烙印產(chǎn)生的空穴對熱力學(xué)參數(shù)有較大 影響, 只有烙印分子與其空穴的匹配性達到最好,

11、0;才使烙印空 穴對烙印分子的結(jié)合在能量上和構(gòu)型上均達到有利狀態(tài)。4、環(huán)糊精類CSP 環(huán)糊精(Cyclodextrin ,CD) 類最初應(yīng)用于薄層色譜固定相 中, 對HPLC 而言, CD 具有較好的光學(xué)純度且不干擾紫外光 譜對化合物的檢測, 因此可將其鍵合到合適的載體上制備 CSP , 也可用于流動相添加劑。目前, 采用環(huán)糊精類作為CSP 拆分對映體的研究已有報道10 。He H 等11 采用-

12、 環(huán)糊精類 CSP 成功分離了對映體去甲羥安定(Oxazepam) 和氯羥安定 (Lorazepam) 。阮源萍等12 采用自行研制的2 , 6 二O 烷 基環(huán)糊精涂漬CSP , 以反相色譜模式研究了聯(lián)萘酚類對 映異構(gòu)體的拆分。該試驗采用2 ,6 二O 戊基環(huán)糊精 涂漬Symmetry C8 柱,甲醇- 水(體積比60 40) 為流動相,聯(lián) 萘酚對

13、映體的容量因子分別為9111 和10192 , 分離選擇性為 1119 ,分離度為1155  聯(lián)萘酚2 甲氧基和聯(lián)萘酚3 , 3二甲酸 對映體在2 , 6 二O 戊基環(huán)糊精涂漬柱上也得到較 好的拆分,出峰順序均為S 構(gòu)型在前,R 構(gòu)型在后。- 環(huán)糊精 疏水空腔對萘環(huán)的包絡(luò)作用和環(huán)糊精端口羥基與萘羥基的氫 鍵作用可能是手性拆分的主要機制。5、 蛋白質(zhì)CSP 將1 -&#

14、160;酸性糖蛋白化學(xué)鍵合到微粒硅膠上制備得到蛋白 質(zhì)CSP 1 。1 - 酸性糖蛋白是天然蛋白質(zhì), 分子中具有部分特 殊的結(jié)合位點, 對藥物對映體具有高度立體選擇性, 故可固化 為CSP 。蛋白質(zhì)是一類復(fù)雜的高分子聚合物,所含亞單位L - 氨基酸具有手性特異性, 能特異性地鍵合小分子, 對手性分子 具有很強的識別能力, 因其獨到的手性選擇性而備受人們青 睞,但同時也存在柱效和柱容量低、柱強度差等缺點。 張

15、哲峰等13  研究鹽酸西替利嗪對映體在蛋白質(zhì)及纖維素 衍生物CSP 上的保留行為并優(yōu)化分離條件, 結(jié)果顯示, 該法準(zhǔn) 確、靈敏、專屬性好。該試驗采用蛋白柱為色譜柱, 柱溫25 , 檢測波長均為230nm ,將聚- 葡糖苷酯、1 - 酸性糖蛋白及卵 粘蛋白作為CSP 時, 分別以正己烷- 異丙醇- 乙醇- 三氟乙 酸(430 45 25 1 ,

16、60;V/ V) 、乙腈- 10mmol / L 磷酸鹽緩沖液 (NaOH調(diào)至p H710) (4 96 ,V/ V) 及乙腈- 20mmol / L 磷酸 二氫鉀(三乙胺調(diào)至p H710) (1217 8713 ,V/ V) 為流動相。靜 電作用是影響保留的因素之一, 可通過調(diào)節(jié)流動相的p H 值優(yōu) 化對映

17、體分離, 由于溶質(zhì)在蛋白類CSP 中的傳質(zhì)較慢, 所以在 一定范圍內(nèi)降低流速,有利于提高柱效,改善分離狀況。6、 聚合物CSP 目前, 部分常用的CSP 包括環(huán)糊精類、氨基酸類等, 多由 小分子物質(zhì)制成,因其易受流動相極性,酸、堿性及溫度等因素 的影響, 所以能分離的藥物對映體有限, 且分離效果通常不盡 人意。而另外一部分聚合物CSP ,如聚硅氧烷類、聚多糖類等, 則在較大程度上克服了上述不足, 并能良好拆分許多小分子

18、0;CSP 無法分離或分離效果差的對映體14 。聚合物CSP 能拆分 大量的對映體,包括軸向和平面非對稱化合物、含金屬化合物、 含手性硫和磷原子的化合物及其衍生物。由于外消旋體主要差 異僅在于其立體化學(xué)構(gòu)型, 因此HPLC 的聚合物CSP 對其手 性識別能力也直接與對映體自身的幾何構(gòu)型有關(guān), 對映體除了 與聚合物CSP 形成不穩(wěn)定的復(fù)合物外, CSP 的手性空間也是 其重要因素, 此外, 操作溫度等多種因素均可對手性

19、識別能力 產(chǎn)生極大影響15 。Okamoto Y 等16 曾研究采用3 ,5 二甲基苯基氨基甲酸 酯為CSP , 對510 種旋光物質(zhì)進行了拆分, 并認(rèn)為約60 %的旋 光物質(zhì)可采用3 ,5 二甲基苯基氨基甲酸酯進行拆分。7、 配體交換型CSP 配體交換型CSP 與手性配體流動相的拆分機制相同, 均為 手性配體鍵合到固定相基質(zhì)成為CSP 。配體交換型CSP 主要用&#

20、160;于拆分氨基酸17 。目前,該色譜模式已成為拆分未衍生化DL - 氨基酸的最簡便且有效的方法。其可分為CSP 配體交換色譜法 (CSP - L EC) 和手性流動相配體交換色譜法(CMP - L EC) , 前 者因具有使用方便、分離樣品種類多的優(yōu)點備受人們關(guān)注。 Okubo S 等18 研究利用配體交換型CSP CRX453 B 通過 HPLC 拆分

21、L - 乳酸和D - 乳酸,結(jié)果表明,其可對DL - 乳酸進行良好分離。黃曉佳19 等將(3 ,4 環(huán)氧環(huán)己基) 乙基三甲 氧基硅烷與硅膠反應(yīng), 得到環(huán)氧化硅膠中間體, 隨后其與L - 異亮氨酸反應(yīng), 再與銅離子進行配位, 最后得到1 種新型配體 交換CSP 。該實驗采用DL - 氨基酸19 對該CSP 進行了色譜評價,同時探討了其分離機制20 。

22、8 、結(jié)語 CSP 具有較高的手性拆分能力和良好的耐用性, 可對較多藥物對映體進行快速、高效的分離, 具有廣泛的臨床應(yīng)用前 景。手性識別能力除與對映體自身結(jié)構(gòu)特征有關(guān)以外, 還與溶 液p H 值、操作溫度等有關(guān)。目前,雖然CSP 還存有一些不足, 但筆者認(rèn)為, 通過對CSP 結(jié)構(gòu)和手性拆分能力的關(guān)系研究, 人們必將尋找到更為高效的CSP ,從而推動藥物對映體分析工作 的深入開展。CSP 的研究為拓寬HPLC 

23、;的應(yīng)用范圍奠定了基礎(chǔ),并推動其發(fā)展。  參考文獻： 1  孫毓慶主編1 現(xiàn)代色譜法及其在醫(yī)藥中的應(yīng)用M 1 北 京:人民衛(wèi)生出版社,1998 :111  2  鄒漢法編著1 高效液相色譜法M 1 北京: 科學(xué)出版社, 1998 :111  3  Miyazawa T ,Shindo Y ,Yamada T1

24、Separation of enantiomers of n - p rotected non - protein amino acid esters by chiral high - performance liquid chromatographyJ 1 Chromatographi a ( J apan) ,2004

25、60;,60 (78) :4191  4  In WK ,Jong KR ,Sung DA , et al 1Comparison of chiral separation on amylose and cellulose t ris (3 ,5 dimethylp henylcarbamate) coate

26、d zirconia in HPLCJ  1B ul l Korean Chem S oc,2003 ,24 (2) :391  5  Kubota T , Yamamoto C ,Okamoto Y1Preparation of chiral stationary p hase for 

27、HPLC based on immobi2 lization of cellulose 3 , 5 dimethylphenylcarbamate derivatives on silica gel J 1 Chi ral i t y 12003 ,15 (1) :771 6  李凌云, 王立新, 

28、葉勇, 等1 含磷手性化合物在多聚糖 類手性固定相上的手性分離J  1 分析試驗室, 2004 , 23 (5) :141  7  張鵬,賀浪沖1 萬古霉素手性固定相的制備及布洛芬 在其細(xì)徑柱上的拆分機理探討J  1 藥物分析雜志,1998 , 18 (增刊) :2961  8  李凌云, 錢寶英, 

29、;高如瑜, 等1 萬古霉素手性固定相分離 幾種藥物對映體J 1 分析測試學(xué)報,2003 ,22 (6) :831  9  王進防,周良模,劉學(xué)良,等1 分子烙印手性固定相分離過 程熱力學(xué)研究J 1 高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報,2000 ,21 (6) :9301 10 BielejewskaA ,Duszczyk K ,Kwaterczak A ,

30、 et al 1Comparative study on t heenantiomeric separation of 1 ,1 binaphthyl2 , 2dialkylhydrogenphosp hate and 1 , 1binaphthyl2 nap hthol by liquid chromatogra2 phy and

31、60;capillary elect rophoresis using single and com2 bined chiral selector systemsJ 1J Chromatogr A ,2002 , 977 (2) :2251 11 He H , Liu Y , Sun C , et 

32、al 1Effect of temperature on enantiomer separation of oxazepam and lorazepam by high performance liquid chromatography on a cy2 clodextrinderivatized - bonded chiral stationar y p hase J 1J Chromatog r S ci ,2004 ,42 (2) :621 12 阮源萍, 張雪曼, 陳安齊12 , 6 二O 烷基環(huán)糊 精涂漬手性固定相分離聯(lián)萘酚類對映異構(gòu)體J  1 廈門大 學(xué)學(xué)