枸杞多糖檢測方法科研申報

1、2010年研究生科研項目申報技巧與途徑選修課考試題學號： 姓名： 王暢 所屬班級： 英語六班 所屬專業(yè)： 藥物分析 入學年份： 2009 導師姓名：於洪建 一、課題名稱： 枸杞多糖質量標準研究 二、關鍵詞： 枸杞多糖;指紋圖譜;高效液相色譜法;柱前衍生化 3、 中文摘要： 枸杞多糖的單糖組成測定是控制枸杞多糖質量標準和提供多糖基本信息的最重要環(huán)節(jié)。本實驗因單糖存在互變異構體、 差向異構體、結構相似等特征 ,而且往往同一待測樣品 ,如多糖、寡糖、糖肽、糖蛋白等 ,可能含有許多類型的單糖。所以采用 PMP柱前衍生化反相高效液相色譜 (HPLC)法,通過梯度洗脫建立了9種常見單糖的分離模式做對照 ,

2、并將95%純度的枸杞多糖水解用同樣的衍生化成功地分離枸杞多糖的單糖組成分,分離效果好，具有良好的重復性。結果表明枸杞多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖7種單糖組成,摩爾比為2.051.2010.900.850.38 。該 HPLC方法是簡單，快速，靈敏，方便的分析技術 ,可用于枸杞多糖的質量控制。 4、 課題立項依據： 1.枸杞多糖單糖組分復雜枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide）簡稱LBP，是茄科植物枸杞的活性成份之一，由雜多糖的糖鏈與蛋白質的肽鏈以共價鍵的形式結合的含肽糖類，是天然存在的大分子物質1-3。因為組成多糖的單

3、糖品種繁多，而且即使只有一種單糖組成的多糖，因其連接方式的不同并可能有分支，也有可能得到結構很復雜的多糖，所以多糖結構分析比蛋白質或核酸要復雜得多。此外，由于多糖結構的微觀不均一性，或分子量發(fā)散，使多糖結構分析很難得出完全準確的結構式。多糖結構的分析包括單糖組成4-5，單糖間的連接方式、糖苷鍵構型、分支位點及分支數目，最終確定其重復結構單元。多糖結構分析的手段分為物理手段、化學降解法、酶降解和免疫化學法等。其中物理手段有IR、NMR和MS等；化學降解法有完全酸水解、部分酸水解和氧化性裂解等。但由于多糖結構的復雜性，目前還沒有一種方法可以單獨完成其結構分析，必須將多種方法結合使用6-8。儀器分析

4、法是在化學分析法的基礎上更進一步地了解和研究多糖的結構特性。與化學分析法相比，儀器分析法具有快速、準確、靈敏和操作方便等優(yōu)點，是糖鏈分析不可缺少的手段。目前，在此方面應用較多的有UV、HPLC、IR、GC、MS、NMR及電泳等。這些現(xiàn)代分析技術的出現(xiàn)和發(fā)展以及儀器的聯(lián)用，大大促進了糖鏈結構研究工作的發(fā)展。制定統(tǒng)一的質量標準需要結合枸杞多糖本身的實際特點才能得以實施，從而保護消費者的權益。2.多糖的生物活性近年來，在對免疫物質以及新藥物資源的研究過程中，人們發(fā)現(xiàn)糖類參與了生命科學中細胞的各種活動，具有多種多樣的生物學功能。枸杞多糖及其綴合物對多種危害人類健康的疾病，如免疫紊亂、肝炎、高血壓、癌癥

5、、糖尿病、血栓等，都具有顯著的療效9-10,其中最引人注目的是它們的免疫修飾和抗腫瘤活性。多糖還具有抗輻射、抗衰老、抗凝血等功效。因此，枸杞多糖的研究與開發(fā)已日益引人注目。3.枸杞多糖的研究意義目前糖生物學及糖工程己成為繼基因工程和蛋白質工程之后的第三大生工程，是當今最前沿的生物學科之一11-13。由于多糖多種多樣的生物活性以及在保健和疾病治療領域的廣泛使用，使多糖生物資源的開發(fā)利用和研究日益活躍，成為天然藥物、生物化學和生命科學等的研究熱點。到目前為止，已有300多種多糖類化合物從天然產物中被分離出來14。4.國內外枸杞多糖的研究現(xiàn)狀我國近年來對枸杞多糖藥物活性已有廣泛報道，例如：報道枸杞多

6、糖有降血糖，抗衰老、抗病毒、抗遺傳損傷、抗腫瘤、抗放射、抗突變、等藥物活性，但弄清結構說明構效關系尚少見，由于產地的不同全國范圍內還沒有報道過枸杞多糖質量標準研究，特別是枸杞多糖的HPLC指紋圖譜。中草藥作為藥物開發(fā)及理論研究，我國已落后于日本和韓國。國際上對糖類的研究日新月異，內容包括糖生物學和糖工程等，并且相繼多次召開了有關“糖生物學和糖工程”的專題會議。1995年3月，亞洲分子生物學組織(AMBO)還在日本舉辦了“糖生物學和糖工程”培訓班15。歐盟在19941998年的研究計劃中啟動了“歐洲糖研究與開發(fā)平臺”，旨在協(xié)調歐洲的糖研究與開發(fā)，強化在糖的研究成果轉化成商品與美國和日本競爭的能力

7、。目前，日本、美國及歐盟十分重視糖類的研究16，且在糖的研究與開發(fā)處于領先地位，并且提出各自的重大科研計劃。5.多糖的應用前景植物源多糖類化合物由于其獨特功能和低毒性，在臨床中顯示出越來越廣闊的前景，值得指出的是我國對于糖的質量標準控制研究尚無重大計劃?？v觀近十年，有關多糖的研究日益增多。到目前為止，雖然只有云芝多糖、香菇糖、豬苓多糖、裂褶多糖和茯苓多糖等少數應用于臨床，但它們在抗凝血、抗腫瘤、降血脂、抗突變、抗衰老和抗病毒等疑難病癥的治療方面已顯示了誘人的前景。有關專家預言“21世紀將是多糖的時代”預示著多糖研究的廣闊前景17。作為重要的植物化學成分，多糖已成為現(xiàn)在科學家研究的重要領域，不斷

8、受到人們的關注。多糖正逐漸成為當今新藥開發(fā)的重要方向之一，但是質量是保證安全使用的根本。6.指紋圖譜的應用前景通過建立相應指紋圖譜來制定質量標準，不僅是時代發(fā)展的必然，也是我國中藥走向世界的關鍵。目前中藥指紋圖譜還處于方法學研究及數據積累階段，中藥指紋圖譜的應用也僅限于生產中的質量控制，因此建立中藥指紋圖譜，應考慮其可操作性。隨著分析技術的快速發(fā)展，為中藥指紋圖譜的研究、應用及完善提供了技術保證。今后應該利用計算機容量大和速度快的特點，開發(fā)與分析儀器相配套的解讀指紋圖譜的分析軟件，使結果分析更科學合理，在中藥指紋圖譜數據積累的基礎上建立信息數據庫，使中藥質量管理更加科學化。在此基礎上進行化學成

9、分與藥效相關性的研究，使中藥的應用更加安全、有效。中藥指紋圖譜全面地反映了中藥所含化學成分的復雜性和相關性。隨著標準、規(guī)范的中藥指紋圖譜的實施和應用，將會有力地推動中藥產業(yè)現(xiàn)代化和國際化的進程18。 參考文獻：1王金童,王秀娟.枸杞子的化學成分和藥理研究概況J.天津藥學,1999,(11):14-15 2 田庚元.枸杞子糖綴合物的結構與生物活性研究J.世界科學技術中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2003,5(4): 22-30. 3 朱彩平，張聲華.枸杞子水提物中多糖含量的J 食品與發(fā)酵工業(yè)， 2005,31(2):111-113 4 張吉,鄒巧根,宋吉等.云芝糖肽的單糖組成分析J.中國藥科大學學報,2001

10、,32(2):137-140.5 姚新生.天然藥物化學 M .北京:人民衛(wèi)生出版社, 2006: 6; 71 - 77.6 鄔應龍漂白魔芋微粉的結構于特性研究D浙江大學，20067 Colquhoun I J，Jay A J，Eagles J，et alStructure and conformation of a novel genetica engineered polysaccharide P2JCarbohydrate Research，2001，330(4)：3253338 Landersjo C，Weintraub A，Widmalm GStructural analysis of

11、 the O-antigen polysacchafrom the shiga toxin-producing Escherichia coli O172JEuropean Journal of Biochemis2001268：223922459 朱彩平,張聲華.枸杞多糖對高脂血癥小鼠血脂及脂質過氧化的影響J.營養(yǎng)學報, 2005,(01):101-105 10 張華華,梁朋.枸杞子對 D-半乳糖致免疫衰老小鼠胸腺功能的作用J.中國醫(yī)藥導報, 2008,(21):99-107 11 肖春生，田華雨陳學思，等智能性生物醫(yī)用高分子研究進展J中國科學B輯學，2008，38(10)：86788012 王萍，楊愛蘭，李彩霞海洋生物多糖在醫(yī)學中的應用與研究J甘肅中醫(yī)學院學,2004，3(21)：535513 馬林，古練權化學生物學導論M北京：化學工業(yè)出版社，2006(1)：8911314 馬寶瑕，陳新，鄧軍娥中藥多糖研究進展J中國醫(yī)院藥