液泡系和線粒體的活體染色及觀察

1、編輯ppt液泡系和線粒體的活體染色及觀察液泡系和線粒體的活體染色及觀察College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity編輯ppt一、實驗目的一、實驗目的n學習并了解線粒體和液泡系超活染色的基本原學習并了解線粒體和液泡系超活染色的基本原理、方法和注意事項；理、方法和注意事項；n學習如何觀察動、植物活細胞內線粒體、液泡學習如何觀察動、植物活細胞內線粒體、液泡系；系；n了解動、植物活細胞內線粒體、液泡系的形態(tài)、了解動、植物活細胞內線粒體、液泡系的形態(tài)、數量與分布；數量與分布；n學習并掌握線粒體和液泡系的超活染色技術。學習并掌握線粒

2、體和液泡系的超活染色技術。n了解植物細胞液泡系的發(fā)育過程。了解植物細胞液泡系的發(fā)育過程。編輯ppt二、實驗原理二、實驗原理 活體染色是指對生活有機體的細胞或活體染色是指對生活有機體的細胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。組織能著色但又無毒害的一種染色方法。它的目的是顯示生活細胞內的某些結構，它的目的是顯示生活細胞內的某些結構，而不影響細胞的生命活動和產生任何物理、而不影響細胞的生命活動和產生任何物理、化學變化以致引起細胞的死亡。活染技術化學變化以致引起細胞的死亡?；钊炯夹g可用來研究生活狀態(tài)下的細胞形態(tài)結構和可用來研究生活狀態(tài)下的細胞形態(tài)結構和生理、病理狀態(tài)。生理、病理狀態(tài)。編輯ppt 根據

3、所用染色劑的性質和染色方法的根據所用染色劑的性質和染色方法的不同，通常把活體染色分為體內活染與體不同，通常把活體染色分為體內活染與體外活染兩類。體內活染是以膠體狀的染料外活染兩類。體內活染是以膠體狀的染料溶液注入動、植物體內，染料的膠粒固定、溶液注入動、植物體內，染料的膠粒固定、堆積在細胞內某些特殊結構里，達到易于堆積在細胞內某些特殊結構里，達到易于識別的目的。體外活染又稱超活染色，它識別的目的。體外活染又稱超活染色，它是由活的動、植物分離出部分細胞或組織是由活的動、植物分離出部分細胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細胞的某種結構上而顯色。在活

4、細胞的某種結構上而顯色。 二、實驗原理二、實驗原理編輯ppt 活體染料之所以能固定、堆積在細胞內某些特活體染料之所以能固定、堆積在細胞內某些特殊的部分，主要是染料的殊的部分，主要是染料的“電化學電化學”特性起重要作特性起重要作用。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠用。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠粒表面帶陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離粒表面帶陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引作子或陽離子，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作為活體染色劑之用，用。但不是任何染料皆可以作為活體染色劑之用，應選擇那些對細胞無毒性

5、或毒性較小的染料，而且應選擇那些對細胞無毒性或毒性較小的染料，而且總是要配成稀淡的溶液來使用。一般是以堿性染料總是要配成稀淡的溶液來使用。一般是以堿性染料最為適用，可能因為它具有溶解在類脂質（如卵磷最為適用，可能因為它具有溶解在類脂質（如卵磷脂、膽固醇等）的特性，易于被細胞吸收。詹姆斯脂、膽固醇等）的特性，易于被細胞吸收。詹姆斯綠綠B B（Janus green BJanus green B）和中性紅（）和中性紅（neutral redneutral red）兩）兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和液泡系的染色各有專一性。粒體和液泡系

6、的染色各有專一性。二、實驗原理二、實驗原理編輯pptn線粒體是細胞內重要的細胞器，線粒體內膜上線粒體是細胞內重要的細胞器，線粒體內膜上分布有細胞色素氧化酶，該酶能使詹姆斯綠分布有細胞色素氧化酶，該酶能使詹姆斯綠B B保持在氧化狀態(tài)，呈現藍綠色從而使線粒體顯保持在氧化狀態(tài)，呈現藍綠色從而使線粒體顯色，而細胞質中的染料被還原成無色。色，而細胞質中的染料被還原成無色。n液泡是細胞內濃縮產物的主要場所，有十分重液泡是細胞內濃縮產物的主要場所，有十分重要的功能。中性紅是液泡的特殊染色劑，將液要的功能。中性紅是液泡的特殊染色劑，將液泡染成紅色。在活細胞中，細胞質和細胞核不泡染成紅色。在活細胞中，細胞質和細

7、胞核不著色。如果細胞死亡，染料會彌散開來，使核著色。如果細胞死亡，染料會彌散開來，使核著色。著色。二、實驗原理二、實驗原理編輯ppt三、實驗用品三、實驗用品（一）器材（一）器材顯微鏡、恒溫水浴鍋、解剖盤、剪刀、鑷顯微鏡、恒溫水浴鍋、解剖盤、剪刀、鑷子、雙面刀片、載玻片、凹面載玻片、蓋子、雙面刀片、載玻片、凹面載玻片、蓋玻片、表面皿、吸管、牙簽、吸水紙等。玻片、表面皿、吸管、牙簽、吸水紙等。編輯ppt（二）試劑（二）試劑1 1、Ringer Ringer 溶液溶液 氯化鈉氯化鈉0.85g0.85g（變溫動物用（變溫動物用0.65g0.65g） ；氯化鉀；氯化鉀 0.25g 0.25g ； 氯化鈣

8、氯化鈣 0.03g 0.03g ；蒸餾水；蒸餾水 100ml100ml2 2、10%10%、1/30001/3000中性紅溶液中性紅溶液 稱取稱取0.50.5中性紅溶于中性紅溶于50ml Ringer50ml Ringer溶液，稍加熱溶液，稍加熱（30403040度）使之很快溶解，用濾紙過濾，裝入棕色瓶于度）使之很快溶解，用濾紙過濾，裝入棕色瓶于 暗處保存，否則易氧化沉淀，失去染色能力。暗處保存，否則易氧化沉淀，失去染色能力。 臨用前，取已配制的臨用前，取已配制的1%1%中性紅溶液中性紅溶液1ml1ml，加入，加入29ml 29ml Ringer Ringer溶液混勻，裝入棕色瓶備用。溶液混勻

9、，裝入棕色瓶備用。31%1%、1/50001/5000詹姆斯綠詹姆斯綠B B溶液溶液 稱取稱取50mg50mg詹姆斯綠詹姆斯綠B B溶于溶于5ml Ringer5ml Ringer溶液中，稍加溶液中，稍加 微熱（微熱（30403040度）使之溶解，用濾紙過濾后，即為度）使之溶解，用濾紙過濾后，即為1%1%原原液。取液。取1%1%原液原液1ml1ml加入加入49ml Ringer49ml Ringer溶液，即成溶液，即成1/50001/5000工工作液，裝入瓶中備用。最好現用現配，以保持它的充分作液，裝入瓶中備用。最好現用現配，以保持它的充分氧化能力。氧化能力。 編輯ppt（三）材料（三）材料n

10、人口腔上皮細胞人口腔上皮細胞n洋蔥鱗莖內表皮細胞洋蔥鱗莖內表皮細胞n蟾蜍胸骨劍突軟骨細胞蟾蜍胸骨劍突軟骨細胞n小麥或黃豆幼根根尖小麥或黃豆幼根根尖編輯ppt四、實驗步驟四、實驗步驟（一）線粒體的超活染色與觀察（一）線粒體的超活染色與觀察1 1、線粒體是細胞進行呼吸作用的場所，其形態(tài)和、線粒體是細胞進行呼吸作用的場所，其形態(tài)和數量雖不同物種、不同組織器官和不同的生理數量雖不同物種、不同組織器官和不同的生理狀態(tài)而發(fā)生變化。狀態(tài)而發(fā)生變化。1 1）人口腔粘膜上皮細胞線粒體的超活染色與觀察）人口腔粘膜上皮細胞線粒體的超活染色與觀察取清潔載玻片放在取清潔載玻片放在3737恒溫水浴鍋的金屬板上，恒溫水浴鍋

11、的金屬板上，滴滴2 2滴滴1/50001/5000詹納斯綠詹納斯綠B B染液。染液。編輯ppt實驗者用牙簽寬頭在自己口腔頰部粘膜處稍用實驗者用牙簽寬頭在自己口腔頰部粘膜處稍用力刮取上皮細胞，將第一次刮下的粘液狀物洗力刮取上皮細胞，將第一次刮下的粘液狀物洗去，將第二次刮下的粘液狀物放入載玻片的染液去，將第二次刮下的粘液狀物放入載玻片的染液滴中，染色滴中，染色101015min15min（注意不可使染液干燥，（注意不可使染液干燥，必要時可再加滴染液），蓋上蓋玻片，用吸水紙必要時可再加滴染液），蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去四周溢出的染液，置顯微鏡下觀察。吸去四周溢出的染液，置顯微鏡下觀察。在低倍鏡下，選

12、擇平展的口腔上皮細胞，換高在低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細胞，換高倍鏡或油鏡進行觀察?？梢姳馄綘钌掀ぜ毎暮吮剁R或油鏡進行觀察?？梢姳馄綘钌掀ぜ毎暮酥車|中分布著一些被染成藍綠色的顆粒狀或周圍胞質中分布著一些被染成藍綠色的顆粒狀或短棒狀的結構，即線粒體。短棒狀的結構，即線粒體。 四、實驗步驟四、實驗步驟編輯ppt 2 2）植物細胞線粒體的活體染色與觀察）植物細胞線粒體的活體染色與觀察（洋蔥鱗莖內表皮細胞）（洋蔥鱗莖內表皮細胞）用吸管吸取用吸管吸取1/50001/5000詹納斯綠詹納斯綠B B染液，滴一滴在干染液，滴一滴在干凈的載波片上，然后用鑷子撕取洋蔥鱗莖內表凈的載波片上，然后用鑷子撕取

13、洋蔥鱗莖內表皮一小塊，置于染液中，染色皮一小塊，置于染液中，染色101015min15min。吸去染液，加一滴吸去染液，加一滴Ringer Ringer 液，注意使洋蔥內表液，注意使洋蔥內表皮展平，蓋上蓋片，顯微鏡觀察。皮展平，蓋上蓋片，顯微鏡觀察。在高倍鏡下，可見表皮細胞中央被一大液泡所在高倍鏡下，可見表皮細胞中央被一大液泡所占據，細胞核被擠至旁邊，在其周圍有線粒體占據，細胞核被擠至旁邊，在其周圍有線粒體被染成藍綠色，呈顆粒狀或線條狀。仔細觀察被染成藍綠色，呈顆粒狀或線條狀。仔細觀察細胞質中線粒體的形態(tài)、數目和分布。細胞質中線粒體的形態(tài)、數目和分布。 編輯ppt2 2液泡系的超活染色與觀察液

14、泡系的超活染色與觀察 中性紅為弱堿性中性紅為弱堿性. .染料，對液泡系（即高染料，對液泡系（即高爾基體）的染色有專一性，只將活細胞中的爾基體）的染色有專一性，只將活細胞中的液泡系染成紅色，細胞核與細胞質完全不著液泡系染成紅色，細胞核與細胞質完全不著色，這可能是與液泡中某些蛋白質有關。色，這可能是與液泡中某些蛋白質有關。編輯ppt 1 1）蟾蜍胸骨劍突軟骨細胞的液泡系中性）蟾蜍胸骨劍突軟骨細胞的液泡系中性紅染色與觀察紅染色與觀察n軟骨細胞能分泌軟骨粘蛋白和膠原纖維等，因軟骨細胞能分泌軟骨粘蛋白和膠原纖維等，因而粗面內質網和高爾集體都發(fā)達，用中性紅超而粗面內質網和高爾集體都發(fā)達，用中性紅超活染色后

15、，可明顯地顯示出液泡系。活染色后，可明顯地顯示出液泡系。n將蟾蜍處死，剪取胸骨劍突最薄的部分一小塊，將蟾蜍處死，剪取胸骨劍突最薄的部分一小塊，放入載玻片上的放入載玻片上的1/30001/3000中性紅染液滴中，染色中性紅染液滴中，染色510min510min。n用吸管吸去染液，滴加用吸管吸去染液，滴加RingerRinger液，蓋上蓋玻片液，蓋上蓋玻片進行觀察。進行觀察。n在高倍鏡下，可見軟骨細胞為橢圓形，細胞核在高倍鏡下，可見軟骨細胞為橢圓形，細胞核及核仁清楚易見，在細胞核的上方胞質中，有及核仁清楚易見，在細胞核的上方胞質中，有許多被染成玫瑰紅色大小不一的泡狀體，這一許多被染成玫瑰紅色大小不

16、一的泡狀體，這一特定區(qū)域叫特定區(qū)域叫“高爾基區(qū)高爾基區(qū)”，即液泡系。，即液泡系。編輯ppt2 2）小麥或黃豆根尖細胞液泡系的中性紅染）小麥或黃豆根尖細胞液泡系的中性紅染色觀察色觀察實驗前，把小麥種子或黃豆培養(yǎng)在培養(yǎng)皿內潮濕的濾實驗前，把小麥種子或黃豆培養(yǎng)在培養(yǎng)皿內潮濕的濾紙上，使其發(fā)芽，胚根生長到紙上，使其發(fā)芽，胚根生長到1 1以上備用。以上備用。 用雙面刀片把小麥或黃豆幼苗根尖（約用雙面刀片把小麥或黃豆幼苗根尖（約12cm12cm長）小長）小心切一縱切面，放入載玻片上的心切一縱切面，放入載玻片上的1/30001/3000中性紅染液滴中，中性紅染液滴中，染色染色510min510min。吸去染

17、液，滴一滴吸去染液，滴一滴RingerRinger液，蓋上蓋玻片，并用鑷子液，蓋上蓋玻片，并用鑷子輕輕地下壓蓋玻片，使根尖壓扁，利于觀察。輕輕地下壓蓋玻片，使根尖壓扁，利于觀察。在高倍鏡下，先觀察根尖部分的生長點的細胞，可見在高倍鏡下，先觀察根尖部分的生長點的細胞，可見細胞質中散在很多大小不等的染成玫瑰紅色的圓形小泡，細胞質中散在很多大小不等的染成玫瑰紅色的圓形小泡，這是初生的幼小液泡。然后，由生長點向延長區(qū)觀察，這是初生的幼小液泡。然后，由生長點向延長區(qū)觀察，在一些已分化長大的細胞內，液泡的染色較淺，體積增在一些已分化長大的細胞內，液泡的染色較淺，體積增大，數目變少。在成熟區(qū)細胞中，一般只有

18、一個淡紅色大，數目變少。在成熟區(qū)細胞中，一般只有一個淡紅色的巨大液泡，占據細胞的絕大部分空間，將細胞核擠到的巨大液泡，占據細胞的絕大部分空間，將細胞核擠到細胞一側貼近細胞壁處。細胞一側貼近細胞壁處。 編輯ppt 五實驗結果五實驗結果 1.1.在人口腔粘膜上皮細胞制片中，可見扁平狀上在人口腔粘膜上皮細胞制片中，可見扁平狀上皮細胞的核周圍胞質中分布著一些被染成藍綠皮細胞的核周圍胞質中分布著一些被染成藍綠色的顆粒狀或短棒狀的結構，即線粒體。色的顆粒狀或短棒狀的結構，即線粒體。2. 2. 在洋蔥鱗莖內表皮細胞制片中，可見表皮細胞在洋蔥鱗莖內表皮細胞制片中，可見表皮細胞中央被一大液泡所占據，細胞核被擠至旁邊，中央被一大液泡所占據，細胞核被擠至旁邊，在其周圍有線粒體被染成藍綠色，呈顆粒狀或在其周圍有線粒體被染成藍綠色，呈顆粒狀或線條狀。線條狀。3