次黃嘌呤和尿酸酶抑制劑在大鼠高尿酸血癥模型復(fù)制中的應(yīng)用

1、次黃嘌呤和尿酸酶抑制劑在大鼠高尿酸血癥模型復(fù)制中的應(yīng)用        【摘要】  目的考察不同劑量尿酸酶抑制劑對大鼠血清尿酸值的影響。方法采用相同劑量次黃嘌呤，不同劑量尿酸酶抑制劑單次和連續(xù)給予復(fù)制代謝性高尿酸血癥模型，測定造模后不同時段大鼠血尿酸值。結(jié)果采用次黃嘌呤500 mg/kg，尿酸酶抑制劑100 mg/kg，可使受試動物血清尿酸值明顯高于空白對照組（P<0.01）,且可維持12 h。采用該劑量連續(xù)給予復(fù)制的大鼠高尿酸血癥模型可使動物血清尿酸持續(xù)在飽和濃度以上。結(jié)論灌胃給予次黃嘌呤500 m

2、g·kg-1，2次/d，同時皮下注射尿酸酶抑制劑100 mg·kg-1，連續(xù)給予，是復(fù)制持續(xù)性大鼠高尿酸血癥模型的適當(dāng)組合。 【關(guān)鍵詞】  高尿酸血癥； 次黃嘌呤； 尿酸酶抑制劑； 動物模型    Abstract：ObjectiveTo study the effect of different dosage of uricase inhibitor on the serum uric acid of rat. MethodsThe same dosage of hypoxanthine, different uricase inh

3、ibitor are used singly or combined to replicate hyperuricemia model, inspect the uric acid in serum at different periods of time. ResultsWhen we combined hypoxanthine(500mg·kg-1) with uricase inhibitor(100mg·kg-1), the uric acid in serum was much higher than control group（P<0.01）,which

4、could last for 12h.Continuous use of the dosage might maintain the serum uric acid concentration above the saturated in the rat hyperuricemia model.  ConclusionContinuous administering 500mg·kg-1 hypoxanthine twice per day via stomach and 100 mg·kg-1 uricase inhibitor intraperitoneall

5、y is the appropriate method of replicating continuing rat hyperuricemia model.    Key words：Hyperuricemia；  Hypoxanthine；  Uricase inhibitor；  Animal model    本實(shí)驗(yàn)室曾使用次黃嘌呤和尿酸酶抑制劑復(fù)制小鼠和大鼠急性高尿酸血癥模型，對尿酸酶抑制劑在造模中的給藥途徑、配制的溶劑等分別進(jìn)行了篩選13。本實(shí)驗(yàn)擬通過調(diào)整尿酸酶抑制劑的使用劑量及給予次數(shù)觀察對受

6、試動物血清尿酸水平的影響，為進(jìn)一步復(fù)制持續(xù)性大鼠高尿酸血癥模型提供。    1  材料與儀器    1.1    動物  SD雄性大鼠，（200±20）g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)許可證號：SYXK（蘇）2002-0002。    1.2    試劑與材料尿酸酶抑制劑（Uricase Inhibitor，UI），Sigma公司，批號：S27869-095。次黃嘌呤（Hypoxanthine，HX

7、），南京鼎潤生物科技有限公司，批號：20031101，20050913。尿酸（UA）試劑盒， 上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)有限公司，批號：D051221。液體石蠟，上海凌鋒化學(xué)試劑有限公司，批號：040211。羊毛脂， 江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司，批號：021126。    1.3  儀器日立-7020全自動生化分析儀，日立儀器（蘇州）有限公司。1             2    方法與結(jié)果   

8、 2.1  單次給予HX和不同劑量UI對大鼠血清尿酸的影響將大鼠隨機(jī)分為4組，即空白對照組、模型組，每組8只，按照表1，灌胃給予相同劑量的HX（3%可溶性淀粉配制），體積為2 ml/kg，皮下注射不同劑量的UI（溶劑：羊毛脂與石蠟油按質(zhì)量比為3：2在70下混合而成），體積為0.5 ml/kg。各組分別于造模后3，9，12，24 h取血，置37水浴溫浴20 min，3 500 r/min離心10 min，取血清，全自動生化分析儀測定血清UA，結(jié)果見表1。表1  單次給予HX和不同劑量UI對大鼠血清尿酸的影響與空白對照組比較，*P0.05，*P0.01；與相同HX劑量，UI劑量

9、為25mg·kg-1組比較，P0.05，P0.01；n=8    結(jié)果表明，造模后3h，各組血清尿酸值明顯升高，與空白對照組比較，有顯著性差異（P<0.01）。但是，當(dāng)UI劑量為25 mg·kg-1時，血清尿酸在3 h后降至正常水平，UI為50 mg·kg-1和100 mg·kg-1組的血清尿酸值仍高于空白對照組（P<0.05，P<0.01），并且隨著UI劑量的增加作用增強(qiáng)，具有明顯的量效關(guān)系。當(dāng)給予100 mg·kg-1的UI，500 mg·kg-1的HX后，可使受試動物血清尿酸水平持

10、續(xù)升高達(dá)12 h。但造模后24 h，各組大鼠血清尿酸均降低至正常水平，甚至低于空白對照組（P<0.05）。    比較相同劑量的HX，不同劑量的UI，可見隨UI劑量增加，大鼠血清尿酸升高的水平也相應(yīng)增加，具有明顯的量效關(guān)系。    2.2    連續(xù)給予HX和不同劑量UI對大鼠血清尿酸的影響將大鼠隨機(jī)分為4組，即對照組、模型組組，每組8只。每天給模型，組灌胃給予HX（3%可溶性淀粉配制），體積為2 ml/kg，同時皮下注射UI（溶劑：羊毛脂與石蠟按質(zhì)量比為32在70下混合而成），體積為0.5 ml/

11、kg，12 h后，模型，組再次灌胃給予HX，模型組同時再次皮下注射UI。劑量見表2。對照組灌胃給予等體積可溶性淀粉，皮下注射等體積羊毛脂-石蠟油溶劑，連續(xù)5 d。各組分別于開始實(shí)驗(yàn)的第24，72，120 h取血，置37水浴溫浴20 min，3 500 r/min離心10 min，取血清，全自動生化分析儀測定測血UA值。結(jié)果見表2。表2  連續(xù)給予次黃嘌呤和不同劑量UI對大鼠血清尿酸的影響與空白對照組比較，*P0.05，*P0.01    在單次注射不同劑量UI觀察對大鼠血清尿酸影響的實(shí)驗(yàn)中，可見一次注射造模，在大鼠血清尿酸升高12 h后基本降至正常水平。

12、本實(shí)驗(yàn)各組均采取每天間隔12 h灌服HX500 mg·kg-1，其中模型組每天與第1次灌服HX的同時皮下注射UI 100 mg·kg-1，連續(xù)造模5 d后，僅在第120小時可見大鼠血清尿酸值高于對照組（P<0.01），血清尿酸升高的水平遠(yuǎn)不及模型，組。若每日皮下注射UI的劑量增加一倍為200 mg·kg-1一次給予（模型組），或每次皮下注射UI的劑量為100 mg·kg-1每日間隔12 h皮下注射1次（模型組），則可使大鼠高尿酸水平維持24 h以上，第24，72，120 h血尿酸值顯著高于對照組（P<0.01）。可見UI一日總量為200 mg

13、·kg-1不變，分別采用一次性給予或間隔12 h分兩次給予，動物血清尿酸值均可顯著升高，并且升高的水平相當(dāng)，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。因此UI可以每日一次給予200 mg·kg-1，以簡化造模程序，減少多次給藥造模對動物的損傷。因此，這是復(fù)制持續(xù)性大鼠高尿酸血癥模型的適當(dāng)組合。    3  討論    課題組曾單獨(dú)使用次黃嘌呤或尿酸酶抑制劑,均難以使受試動物血清尿酸水平明顯升高。為此,采用次黃嘌呤和尿酸酶抑制劑聯(lián)合使用的造模方法，以尿酸酶抑制劑阻斷受試動物體內(nèi)尿酸的降解，給予次黃嘌呤以增加尿酸的

14、來路，建立一種類似人體嘌呤代謝的環(huán)境，使大鼠尿酸水平明顯升高，復(fù)制動物高尿酸血癥的模型。    本實(shí)驗(yàn)單次給予次黃嘌呤和不同劑量尿酸酶抑制劑復(fù)制大鼠高尿酸血癥模型，結(jié)果顯示，采用HX 500 mg·kg-1，UI 100 mg·kg-1組合，一次性給藥，高尿酸水平僅可持續(xù)12 h左右。該模型由于高尿酸水平持續(xù)時間較短，因此僅可用于抗高尿酸血癥或痛風(fēng)類藥物的篩選實(shí)驗(yàn)。若能使該模型中血清尿酸水平維持在較高水平，則可觀察藥物對高尿酸血癥或痛風(fēng)的作用，并對藥物的相關(guān)機(jī)理進(jìn)行探討。故在該劑量的基礎(chǔ)上，通過進(jìn)一步調(diào)整次黃嘌呤的給藥次數(shù)，采取每日間隔12 h分別補(bǔ)充HX 500 mg·kg-1，將尿酸酶抑制劑采取每日一次給予UI 200 mg·kg-1的方法，一次給藥，即可使動物高尿酸水平維持24h左右，如連續(xù)造模給藥，則可使血清尿酸水平持續(xù)升高并保持在飽和濃度以上。    因此，每次灌胃給予次黃嘌呤500 mg·kg-1，2次/d，同時皮下注射尿