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1、大孔吸附樹(shù)脂分離純化地黃中梓醇工藝的研究論文作者:張秀麗報(bào)告人:江南報(bào)告時(shí)間:2018.4本論文利用大孔吸附樹(shù)脂分離提取地黃中梓醇。以地黃粗提液中梓醇含量為指標(biāo),高效液相色譜(HPLC)為含量測(cè)定方法,考察9種不同極性大孔吸附樹(shù)脂 對(duì)梓醇的吸附和解吸附性能, 篩選出最佳樹(shù)脂D101 進(jìn)行分離實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,D101 大孔吸附樹(shù)脂的靜態(tài)吸附容量為69. 2mg /g 干樹(shù)脂 , 其吸附等溫線符合Langmuir 和 F reundlich 吸附等溫式。采用5%乙醇作為洗脫劑, 洗脫液減壓濃縮后進(jìn)行硅膠柱層析分離, 氯仿、甲醇梯度洗脫得到梓醇單體, 純度達(dá) 90% 以上 ,梓醇得率為6%。本論文的

2、主要內(nèi)容包括:1 地黃提取液的制備;2.梓醇含量的測(cè)定;3.靜態(tài)吸附解吸實(shí)驗(yàn);4.吸附等溫線實(shí)驗(yàn)取 D 101、 H PD 100 型大孔吸附樹(shù)脂適量(相當(dāng)于 1g 干樹(shù)脂 ), 處理后置于小錐形瓶?jī)?nèi), 取地黃粗提液倍比稀釋后, 各取20m l 加入錐形瓶中, 于室溫下放入120r /min 的搖床中充分振蕩, 測(cè)其平衡濃度,以平衡濃度和吸附量為橫縱坐標(biāo)繪制吸附等溫線;5.吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)取 D 101、H PD 100型大孔吸附樹(shù)脂適量(相當(dāng)于1g干樹(shù)脂),處理后置于小錐形瓶,取 20ml 地黃粗提液加入錐形瓶?jī)?nèi), 置于搖床恒溫振蕩18h, 在 0. 5、 1、 2、 4、 8、18h 取樣測(cè)

3、定 , 計(jì)算樹(shù)脂對(duì)梓醇的吸附量, 繪制吸附動(dòng)力學(xué)曲線。6.動(dòng)態(tài)吸附解吸實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱取D101 大孔吸附樹(shù)脂適量(相當(dāng)于5g 干樹(shù)脂 ), 預(yù)處理后濕法裝于 1.2cmx40 cm 小層析柱內(nèi), 用一定濃度的地黃粗提液通入柱中, 控制吸附條件 , 定時(shí)接收流出液, 貫穿后 , 依次用 5 倍柱體積水、5% 乙醇、10%乙醇、20%乙醇、 40%乙醇、60%乙醇、80% 乙醇、 95% 乙醇洗脫, 對(duì)上樣液、殘余液及洗脫液定容取樣, 0. 22Lm 微孔濾膜過(guò)濾, HPLC 測(cè)定峰面積, 計(jì)算對(duì)應(yīng)梓醇含量,確定最佳洗脫溶劑。本論文與本人課題相似,雖然梓醇的得率較低,但純度很高,這也提示說(shuō)如果要得到高

4、純度小批量的梓醇可以選擇最后的純化工藝為硅膠層析。總結(jié)其實(shí)驗(yàn)步驟的工藝流程圖為:怫fe頻憶像一城)1參懦浸泡一次合做液川川保樹(shù)脂吸附一柱層析圖5梓醇的分離純化工藝流程圖F ig 5 Separation and pur ification p roc csschart ofcata 明。1生地黃中梓醇純化工藝優(yōu)選論文作者:楊菁報(bào)告人:江南 報(bào)告時(shí)間:2014.12.12本文采用高效液相色譜法檢測(cè)梓醇含量。以梓醇含量為指標(biāo),比較不同型號(hào)的大孔樹(shù)脂、活性炭對(duì)梓醇的分離效果,再對(duì)所含梓醇的部分應(yīng)用不同的葡聚糖 凝膠進(jìn)行分離。結(jié)果:優(yōu)選確定的工藝為:用15%活性炭對(duì)梓醇粗提物吸附后, 活性炭用20%乙

5、醇洗脫,將收集洗脫液濃縮后用葡聚糖凝膠G-15進(jìn)行分離,所得產(chǎn)物中梓醇含量在 85%以上。梓醇化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定,易受酸堿等條件影響,這為梓醇的純化增加了難度, 本文在地黃中梓醇提取工藝條件優(yōu)化的基礎(chǔ)上,應(yīng)用活性炭及葡聚糖凝膠對(duì)地黃 醇提取物進(jìn)行分離,以期獲得純度較高的梓醇。本課題的主要內(nèi)容包括:1.梓醇粗提物的制備取生地黃 500 g適當(dāng)粉碎,加入12倍量95%乙醇,回流提取 2次,每次1h;合并兩次濾液,減壓濃縮至 500m L,過(guò)濾,得地黃醇提物備用; 2.量取100 m L樣品,向其中加入15 g粉末狀活性炭,攪拌,靜置2 h,濾過(guò), 收集濾液,高效液相分別檢測(cè)濾液和活性炭吸附前藥液中梓醇

6、含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,活性炭對(duì)梓醇具有較強(qiáng)的吸附能力, 平均吸附量為19. 9 mg /g。根據(jù)活性炭 特點(diǎn),選擇不同濃度的乙醇及水對(duì)活性炭進(jìn)行洗脫。取 200 m L樣品,向其中 加入30 g活性炭,攪拌,靜置2 h,濾過(guò),收集活性炭陰干,用1 000 m L水、 1 000 m L 10% 乙醇、1 000 m L 20% 乙醇、1 000m L 40% 乙醇、1 000 m L 95% 乙醇洗脫,分別收集洗脫液,減壓濃縮至體積為 200 m L,薄層跟蹤檢測(cè)。實(shí)驗(yàn) 結(jié)果提示10%20%乙醇洗脫效果較好,收率在 80%左右,梓醇純度約為45% , 采用活性炭吸附可作為梓醇的粗分離手段。3.活

7、性碳處理后,選用不同型號(hào)的葡聚糖凝膠對(duì)梓醇進(jìn)行分離,取10 m L 樣品,分別緩慢加到葡聚糖凝膠G-15、葡聚糖凝膠G-25、葡聚糖凝膠LH20凝膠柱中,打開(kāi)活塞,當(dāng)藥液面接近膠面時(shí)加水洗脫,采用部分自動(dòng)收集器進(jìn)行收集,流速為0. 5 m L min/min ,每 10 min 收集一管。薄層跟蹤檢測(cè)梓醇。通過(guò)薄層跟蹤對(duì)3 種不同型號(hào)的葡聚糖凝膠對(duì)梓醇的分離效果進(jìn)行比較,由試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)葡聚糖凝膠G-25、葡聚糖凝膠 LH20 對(duì)梓醇的分離效果不理想,而葡聚糖凝膠G-15 能將梓醇與其他成分實(shí)現(xiàn)較好的分離。結(jié)果表明葡聚糖凝膠G-15 分離效果好,收率高達(dá)50%以上,純度能達(dá)到85% 以上。 4.

8、 梓醇分離純化驗(yàn)證試驗(yàn)根據(jù)以上試驗(yàn)結(jié)果,采用活性炭吸附、20% 乙醇洗脫及G15 分離的方法,對(duì)梓醇粗提物進(jìn)行了分離純化。生地中梓醇富集純化工藝路線及降血糖活性功能評(píng)價(jià)論文作者:蒲東報(bào)告人:江南報(bào)告時(shí)間:2014.11.07本文對(duì)梓醇的富集純化工藝進(jìn)行了初步的研究,并對(duì)生地及梓醇進(jìn)行了降血糖活性的功能性評(píng)價(jià)。 本課題的主要研究?jī)?nèi)容:1.在建立梓醇含量測(cè)定的方法基礎(chǔ)上,以梓醇得率為考察指標(biāo),選用正交實(shí)驗(yàn)篩選出梓醇的最佳提取工藝;2.通過(guò)對(duì)D101、 HPD600等多種吸附材料進(jìn)行比較,選擇吸附量最大的吸附材料采取乙醇回流的方式對(duì)篩選出的吸附材料進(jìn)行洗脫;3.應(yīng)用高血糖小鼠模型對(duì)提取出的梓醇進(jìn)行降

9、糖活性等的研究對(duì)提取出的梓醇進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)。 通過(guò)以上實(shí)驗(yàn),得到以下結(jié)果:1.梓醇的最佳提取工藝為10倍量乙醇回流提取兩次,每次1h, 2應(yīng)用高效液相色譜儀檢測(cè) D101、HPD600等十余種樹(shù)脂吸附后 剩余梓醇量,選出活性C為實(shí)驗(yàn)用吸附材料,解吸方式為乙醇回流兩次,每次2h, 結(jié)果顯示有60%梓醇能被洗脫下來(lái),剩余無(wú)法解吸,推測(cè)活性C是為不可逆吸附; 3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,梓醇能明顯降低四氧嚓睫致糖尿病小鼠的血糖水平,提高糖尿病小鼠的糖耐量,運(yùn)用生化試劑盒對(duì)小鼠血清進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明梓醇能明顯提高糖尿病小鼠血液抗氧化能力,且呈劑量依賴關(guān)系。該篇論文結(jié)構(gòu)嚴(yán)謹(jǐn),實(shí)驗(yàn)路線清晰,為本人論文-地黃葉

10、中梓醇的純化工藝研究提供了思路。梓醇的化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定,對(duì)敏感,且地黃中的環(huán)烯醚菇昔類物質(zhì)大都結(jié)構(gòu)類似,給分離造成很大麻煩,常規(guī)的純化分離手段分離不易分開(kāi)。目前較為常用的方法是大孔樹(shù)脂分離,但大孔樹(shù)脂吸附量較小,容易造成吸附量與樹(shù)脂量比例過(guò)小,造成成本較大,從而限制了梓醇的工業(yè)開(kāi)發(fā)。但在本實(shí)驗(yàn)中,采用活性作為梓醇的吸附劑,不僅吸附量大,且操作簡(jiǎn)單,解吸簡(jiǎn)便活性的造價(jià)也較低,易于應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)但應(yīng)用活性作為吸附材料,梓醇的損失較大,達(dá)到,因此,迫切需要需找一種更為簡(jiǎn)便,損失量更小的純化分離手段。在本實(shí)驗(yàn)中,利用實(shí)驗(yàn)制備的生地浸膏及梓醇研究了對(duì)高血糖小鼠體重、血糖水平、血清SOD 活性、 AR 活

11、性、 MDA 含量的影響。該實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立高血糖小鼠模型,并分別灌胃陽(yáng)性藥物和試驗(yàn)制備的生地浸膏和不同劑量的梓醇,對(duì)比各組血糖水平及小鼠血清生化指標(biāo)。結(jié)果顯示,生地的降血糖效果明顯,同時(shí)在提高小鼠血液抗氧化能力方面作用顯著,這為下一步糖尿病并發(fā)癥的藥物研發(fā)提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。豨薟草抗關(guān)節(jié)炎作用的研究論文作者:蔣芳萍報(bào)告人 : 江南 報(bào)告時(shí)間:2014.12.20本論文通過(guò)小鼠急性損傷性關(guān)節(jié)炎模型、小鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型、大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型、單克隆抗體組合誘導(dǎo)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠模型等四種動(dòng)物模型研究了豨薟草提取物的抗關(guān)節(jié)炎作用。結(jié)果表明:豨薟草乙醇提取物的抗關(guān)節(jié)炎作用優(yōu)于豨薟草水提取物;豨

12、薟草乙醇提取物能顯著降低這四種模型動(dòng)物的關(guān)節(jié)腫脹度,能明顯降低急性損傷性關(guān)節(jié)炎小鼠組織中 IL-1% Rantes IL-10水 平和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠血清或組織中 IL-1 0、IL-6、IL-17和MMP-3水平,顯著 升高急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎小鼠組織中IL-4 水平和急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-10 水平,提示豨薟草提取物可能是通過(guò)調(diào)節(jié)與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的一些炎癥因子而起作用。小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示豨薟草乙醇提取物毒性明顯低于豨薟草水提取物。本論文還用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化了豨薟草乙醇提取工藝,得到的最優(yōu)工藝為:用8倍量的70%乙醇提取3次,提取時(shí)間依次為2.5h、 1.0h 和 1.0h。本文對(duì)豨簽

13、草提取物的藥效學(xué)進(jìn)行了全面的評(píng)價(jià),2010 版中國(guó)藥典中也以奇壬醇作為豨簽草提取物中的有效成分,但中藥提取物的作用往往是很多或一類物質(zhì)綜合作用的結(jié)果,所以, 該課題如果繼續(xù)做下去是不是可以通過(guò)柱層析來(lái)分離其中同類物質(zhì)進(jìn)行藥效學(xué)研究,以期提高療效或?qū)ζ渌膊∮携熜?。關(guān)節(jié)炎目前尚無(wú)特效藥及特效療法,主要以對(duì)癥減輕疼痛,控制病情,延緩關(guān)節(jié)退行性變化。西藥治療不良反應(yīng)多,價(jià)格昂貴,患者難以接受,中醫(yī)中藥和天然藥物有效成分具有療效可靠、價(jià)格便宜、不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn),治療關(guān)節(jié)炎這種慢性疾病可能比西藥更具有優(yōu)勢(shì)。但中藥及天然藥物有效成分復(fù)雜,其治療關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)理機(jī)制尚未完全明確,有待進(jìn)一步更深的研究。期待開(kāi)發(fā)出更多安全有效的治療關(guān)節(jié)炎的中藥新藥。待考察的炎癥因子的篩選也為本人論文即將要進(jìn)行的急性腎衰竭所要考察的炎癥因子的種類提供了參考。白細(xì)胞介素-4( IL-4) 是小鼠巨噬細(xì)胞趨化因子,是與急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有關(guān)的抗炎性白細(xì)胞介素類的主要細(xì)胞因子之一,主要由T細(xì)胞分泌,能減少I(mǎi)L-1和TNF-a的分泌,抑制關(guān)節(jié)軟骨的腐蝕破壞。IL-4可以促

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