腸道病毒71型及其疫苗的研究進(jìn)展.docx

1、腸道病毒71型及其疫苗的研究進(jìn)展楊俊杰'綜述；李薇'，王玉琳'審校(1蘭州生物制品研究所,蘭州730046;2北京微谷生物醫(yī)藥有限公司,北京100024)摘要:腸道病毒71型(E71,EV71)是手足口病的主要病原體,是一種具有較強(qiáng)傳染性和致病性的病毒，其流行范圍波及全世界,近年來(lái)在亞太地區(qū)尤其是在中國(guó)的流行日趨頻繁前HV71病原學(xué)病學(xué)以及動(dòng)槌型的研究均取得了一定進(jìn)展，為疫苗的研發(fā)奠定了相應(yīng)的基礎(chǔ)，中國(guó)三家公司的EV71滅活疫苗現(xiàn)已率先獲得臨床批件,有望成為預(yù)防手足口病的有效手段。關(guān)鍵詞：腸道病毒71型；疫苗研究;動(dòng)物模型；研究進(jìn)展中圖分類號(hào)：R373-2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

2、文章編號(hào):1005-5673(2011)02-005-06腸道病毒71型屬于小RNA病毒科(P)腸道病毒屬(E)，是引起手足口病(Hand-foodandmoudiHFMD)的主要病原體，并有一定的幾率引發(fā)無(wú)菌性腦膜炎(AszpacmeihgpH腦炎(Braiig】和脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹(P。偵y等多種神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥1969年在美國(guó)首次分腐A來(lái)，EV71已在世界范圍內(nèi)引起十多次爆發(fā)與流行，尤其是I997年以來(lái),EV71在亞太地區(qū)的流行呈顯著上升趨勢(shì)"3來(lái)西亞3*坡亞等國(guó)以及中國(guó)的大陸V準(zhǔn)和臺(tái)灣地區(qū)等均發(fā)生了不同程度的爆發(fā)流行，其中，臺(tái)灣1998年和2000年的EV71大爆發(fā)中分別有129

3、106人和80677人感染，并最終導(dǎo)致78人和41人死亡回1于缺乏有效的抗病毒藥物以及可用的疫苗,EV7【的廣泛流行造成了巨大的疾病負(fù)擔(dān)，同時(shí)也引起了社會(huì)的恐慌2008年中國(guó)安徽省阜陽(yáng)市爆發(fā)人手足II病疫情，并隨后擴(kuò)展到全國(guó)其他地區(qū)，全年共報(bào)告發(fā)病488955例，重癥病例1165例，死亡126例月衛(wèi)生部把手足口病納入丙類法定傳染病管理009年，全年報(bào)告發(fā)病I15535例，死亡約例VH0年共報(bào)告病例1774669例，死亡905VHFMD在中國(guó)大規(guī)模流行己引起人們的廣泛關(guān)注文對(duì)EV71的病原學(xué)因分型，亍病學(xué)收稿日期:20lI-02-28;修回日期:20lI-03-10基金項(xiàng)目：甘謝科技重大專項(xiàng)(0

4、92GKDA010)通訊作者：王玉琳，E-m*ilyliw我i注r作者簡(jiǎn)介:楊俊杰(I985-).男.碩士研尤生,主要從事病毒性疫苗的研究研發(fā)以及動(dòng)物模型研究等作一綜述1病原學(xué)與基因分型1-1病原學(xué)特征EV71的病毒顆粒為直徑2430nm的二十面體立體對(duì)稱的球形結(jié)構(gòu)，無(wú)包膜和突起V核心為一條長(zhǎng)約7.4kb的正鏈RNA,基因組中僅有一個(gè)開(kāi)放閱讀框，編碼含2194個(gè)氨基酸的多聚蛋白路聚蛋白可進(jìn)一步被水解成PlVX三個(gè)前體街，PI前體蛋白編碼VP18。四種病爭(zhēng)卜殼蛋白，P2和P3前體蛋白編碼7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(2A2C和3A3D)層的衣殼首先由四種衣殼蛋白構(gòu)成原聚體，再由5個(gè)原聚體拼裝成具有五聚體樣結(jié)構(gòu)

5、的亞單位,60個(gè)亞單位通過(guò)各自的結(jié)構(gòu)域相互連接，形成病毒的衣殼和VP3三種結(jié)構(gòu)蛋白裸露于病毒顆粒的表面，而VP4則位于病毒顆粒衣殼內(nèi)側(cè)與RNA核心緊密連接而病毒的抗原決定簇基本上位于VP1VP3上其在VP1上含有多個(gè)中和抗原表位馬VP1蛋白的基因在外界選擇壓力下易發(fā)生變異從而賦予EV71病毒顆粒不同的抗原特性，因此VP1基因被認(rèn)為是序列分析的最佳選擇*71受體研究顯示，VPI能與多種人類蛋白受體結(jié)合，在病毒對(duì)細(xì)胞的吸附以及穿入金過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用C5oI-2EV7I的基因分型腸道病毒傳統(tǒng)的中和血清分型逐漸被基因分型所取代，至今腸道病毒己發(fā)現(xiàn)的10()多個(gè)血清型，按基因分型則分為腸道病毒A

6、D組，EV71和柯薩奇病毒A16(CoxMrkieirusAl6,CVAl6)均屬于腸道病毒A組71的基因分型主要基于VP1和VP基因基因編碼EV71的主要抗原決定簇具有高度的遺傳多樣性，它不僅可作為腸道病毒屬內(nèi)不同血清型分類的依據(jù)，亦可作為小RNA病毒科內(nèi)不同屬的分類參考，因此VPi基因被認(rèn)為是系統(tǒng)進(jìn)化分析最具研究?jī)r(jià)值的區(qū)域n等對(duì)113株EV71的VPlf亥酸序列的同源性進(jìn)行了分析，首先將EV7I劃分為個(gè)基因型，屬于A型枚有BrCr原型株，與其他EV71分離株的核苜酸差異在I6.5o19.7%等m最近研究顯示2008年中國(guó)安徽省六安地區(qū)分離到的5株EV7I的VP1序列與BrCr株的同源性均超

7、過(guò)97.4%，屬于A型是繼1969年發(fā)現(xiàn)BrCr原型株之后，A型EV71株的首次被分離的報(bào)道因B型和C型又被進(jìn)T劃分為BlB5以及ClC5亞型，也有學(xué)者將中國(guó)大陸地區(qū)流行的C4亞型進(jìn)一步分為C4a和C4b群然EV7I結(jié)構(gòu)蛋白VP4的氨基酸序列非保守，但其核昔酸序列的變異幅度達(dá)17.5%24-4%，也據(jù)此用于分子流行病學(xué)和基因分型的研究基因亞型之間和EV71與柯薩奇病毒之間艦的基因重組，使全序列的基因分型則更為準(zhǔn)確'，但在流行病學(xué)調(diào)查方面有其局限性2流行病學(xué)2J血清流行病學(xué)迄今為止,EV7I流行已遍布全球，病毒主要通過(guò)糞-口傳播，且隱性感染者居多，因此易出現(xiàn)爆發(fā)流行是EV7I己知的唯一自

8、然宿主，EV7I酷對(duì)象主要為5歲以下的兒童，特別是1歲以下的嬰幼兒，產(chǎn)生神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的幾率較大*清流彳病學(xué)研究表明勇】，新生兒由于帶有母?jìng)骺贵w，"具有EV71抗體，但一個(gè)月后會(huì)迅速下降;6個(gè)月至3歲的幼兒EV71抗體水平較低(4%26%);3-12歲的兒童因自然感染而EV71抗體陽(yáng)性率從26%上升到5()%；成人血清EV71抗體陽(yáng)性率在50%以上，證實(shí)了缺乏EV71保護(hù)性抗體是嬰幼兒高感染率和高死亡率的主要原因©德國(guó)的一項(xiàng)血清流行病學(xué)調(diào)查顯示，5，僅有27.3%的0-3歲幼兒以及45.6%的3-6歲兒童具有EV7I中和抗體，而63.4%的學(xué)前兒童無(wú)EV7I中和抗體，10歲以

9、上兒童和成人中和抗體陽(yáng)性率均超過(guò)50%f.東南亞和南美地區(qū)血清流行病淌查也顯示了類似的數(shù)據(jù)表明了嬰幼兒血清中缺乏EV71中和抗體可能是引起EV7I大爆發(fā)并導(dǎo)致較高病死率的原因2J分子流行病學(xué)對(duì)腸道病毒衣殼蛋白VP1序列的分析己成為腸道病毒基因分型的金標(biāo)準(zhǔn)，也是分子流行病學(xué)研究的主要手段，通過(guò)EV71VP1基因序列的分析，發(fā)現(xiàn)EV71在流行過(guò)程中的基因型變化情況)9犢國(guó)首次分離并于1974年報(bào)道的EV71病毒株BrCrCAJO是一直以來(lái)僅有的A型株，2009年在中國(guó)安徽省六安地區(qū)又分離到5株A型株2(1止紀(jì)70-80年代EV71引起的爆發(fā)流行中，優(yōu)勢(shì)毒株的基因型則為B型，包括1975和1978年

10、保加利亞和匈牙利分別導(dǎo)致44和47名兒童死亡的EV71第一次大爆發(fā)流行，以及美國(guó)僉大利亞國(guó)等的部流行8年之后，B基因型在美國(guó)消失，取而代之的是C基因型，而在美國(guó)以外的其他地區(qū)，尤其是東南亞各國(guó)，則出現(xiàn)了B和C基因型共流行和交替流行，包括198年期間中國(guó)的香港與臺(tái)灣僉國(guó)西等地的EV71第二次大流行，以及199800年發(fā)生丁東南亞各國(guó)的EV7I第三次大流行V*中B3四個(gè)亞型均于100年在馬來(lái)西亞流行中出現(xiàn)，B3一型為1997年流行的優(yōu)勢(shì)基因型，但到2000年，則變?yōu)镃1和B4亞型''幻，一時(shí)期中國(guó)的臺(tái)灣坡。|匚國(guó)大量病例報(bào)告顯示，患者以C2亞型感染為主，同時(shí)也有少量B4亞型的出現(xiàn)，

11、到2000年優(yōu)勢(shì)流行基因型又轉(zhuǎn)為亞型年C基因型再次引起流行，但為以前從未出現(xiàn)過(guò)的©亞型"年則出現(xiàn)B5IE型，呈B型C型交替流行，而這種優(yōu)勢(shì)基因型或亞型的替換與HFMD的爆發(fā)流行密切相關(guān)e1,對(duì)同一地區(qū)EV7I頻繁發(fā)生基因型的交替尚無(wú)確切解釋，2005年M預(yù)右等知一項(xiàng)長(zhǎng)達(dá)6年的研究提示兩個(gè)可能的原因：EV71在鄰近國(guó)家或地區(qū)之間傳播活躍，導(dǎo)致不同基因型病毒株的頻繁引入或輸出；與所有RNA病毒相同,EV7I基因組突變頻率高，進(jìn)化速度快，尤其是用來(lái)進(jìn)行基因分型的VP1區(qū)，由于編碼病毒抗原表位面臨宿主免疫系統(tǒng)強(qiáng)大的選擇壓力，使其新發(fā)現(xiàn)的B5亞型在短期內(nèi)便取代了C4亞型成為流行株，并

12、發(fā)生了抗原表位變異e中國(guó)自1981年上海發(fā)現(xiàn)的HFMD在全國(guó)十幾個(gè)省均有報(bào)道，從2007年至今，EV71的流行范圍和規(guī)模均進(jìn)一步擴(kuò)大，對(duì)分離到的EV71基因序列分析顯示，均屬于C4亞型，但不同時(shí)間不同地區(qū)分離到的C4亞型毒株也存有一定的差異，示0亞型在中國(guó)大陸較長(zhǎng)時(shí)間的傳播過(guò)程中，可能通過(guò)變異和基因重組產(chǎn)生了不同的分支。EV71基因型間的交替與其基因重組現(xiàn)象是有一定聯(lián)系的，基因重組在腸道病毒中普遍存在，在同一次爆發(fā)流行中不同基因型病毒的共感染為病毒的基因重組提供了可能，如馬來(lái)西亞EV7I流行中同時(shí)出現(xiàn)四種基因亞型回W'HFVD的主要病脈為EV71和CVA16,以及存在其他的腸道病毒共同

13、感染，這都為EV71各基因型間的種內(nèi)重組以及EV7I與其他腸道病毒（主要是CVA16瞥）的PI間重組提供了一定的條件'皿，增加了EV71流行的不可預(yù)測(cè)性，目前發(fā)現(xiàn)的基因重組主要發(fā)生在非結(jié)構(gòu)蛋白基因區(qū)或非編碼區(qū)，一些重組株可能會(huì)發(fā)展成為某一階段的流行株，如造成2008年安徽阜陽(yáng)HFMD大爆發(fā)的C4亞型為C4與CVA16的重組株2。©3疫苗研究EV71的持續(xù)爆發(fā)流行使得疫苗的研發(fā)變得非常迫切并備受關(guān)注，目前國(guó)內(nèi)外很多研究機(jī)構(gòu)正在致力于EV7I疫苗的研發(fā)*71疫苗的研究主要集中在滅活疫苗有舌疫苗j樣顆粒（ViuskepaoralVLP）疫苗一位疫苗V疫苗V嘩VP1中和表位的多肽疫苗

14、等研究方向些研究在實(shí)驗(yàn)室階段均有一定的保護(hù)作用，但目前尚無(wú)上市疫苗用于EV71感染的預(yù)防得慶幸的是前不久國(guó)藥北京微谷生物醫(yī)藥有限公司京科興生物制品有限公司以及中國(guó)醫(yī)科院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所率先完成rEV7I滅活疫苗的臨床前研究，獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）臨床研究批件，預(yù)計(jì)臨床試驗(yàn)將很快啟動(dòng)，有望成為預(yù)防手足曰病的有效手段Di-233滅活疫苗滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗（VV）對(duì)脊髓灰質(zhì)炎感染和流行預(yù)防的成功經(jīng)驗(yàn)，亦可為EV71疫苗的研發(fā)借鑒過(guò)熱滅活的EV7I疫苗顯示出了良好勺免疫原性，用其免疫受孕前的母鼠，可在新生小鼠體內(nèi)檢測(cè)到EV71中和抗體，該母?jìng)骺贵w對(duì)以23OOLD知病毒株攻擊的保護(hù)效

15、果達(dá)80%以上，顯示出比VPI重組疫苗以及DNA疫苗更好的保護(hù)效果”門來(lái)西亞學(xué)者Ong等e用甲醛滅活一/鼠適應(yīng)的EV71毒株MAV（B3亞型）制備的滅活疫苗，免疫小鼠后產(chǎn)生的抗體對(duì)B3C5«EV71均有良好的交叉中和活性，該滅活疫苗對(duì)ER乳鼠在I天一兩針免疫后，能抵抗5）LDMAV病毒株的攻擊一前尚不能證實(shí)其在小鼠源上以B3亞型外的其他基因型或亞型的EV71進(jìn)行攻擊的交又保護(hù)性71滅活疫苗有效免疫劑量的研究顯示，80EU滅活疫苗可誘導(dǎo)靈長(zhǎng)類動(dòng)物產(chǎn)生高水平的中和抗體，并維持4個(gè)月以上臺(tái)灣一項(xiàng)研究探討了EV71滅活疫苗（C2亞型）與滅活脊髓灰質(zhì)炎疫苗I咳疫苗流感嗜血搐疫苗V喉類毒素和破傷

16、風(fēng)類毒素五價(jià)疫苗共同免疫的可行性結(jié)果顯示EV7I滅活疫苗與該五價(jià)疫苗的免疫效果互不干擾，EV71滅活疫苗單獨(dú)免疫和與五價(jià)疫苗共同免疫小鼠，兩針免疫后產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)均為1:256,并對(duì)致死劑量EV7I活病毒攻擊具有保護(hù)性，同時(shí)所產(chǎn)生的抗血清對(duì)型的EV7I病毒具有廣泛的交叉中和作用，為今后EV71滅活疫苗與現(xiàn)有疫苗使用的可行性提供了一定依據(jù)制備滅活疫苗需要大量的病毒為基礎(chǔ)，目前報(bào)道用于EV7I滅活疫苗制備的細(xì)胞系主要是Veo細(xì)胞以及人二倍體細(xì)胞系KMB-I7,因此EV71在這些細(xì)胞系上的適應(yīng)培養(yǎng)是研制EV71滅活疫苗的首要條件等'E實(shí)驗(yàn)室選育的Veo細(xì)胞適薄株YN3-4a以及Dong等

17、D9選育的KMB-17細(xì)胞適應(yīng)毒株FYW3KB在各自的適應(yīng)細(xì)胞系上顯示出生長(zhǎng)速度快滴度高等特性疫動(dòng)物產(chǎn)的血清對(duì)不同時(shí)期O同地區(qū)分離的多株EV7I期"交叉保護(hù)作用，YN3-4a和FY-23K-B株是具有應(yīng)用前景的滅活疫苗候選株卜，Wu等阮利用2L生物反應(yīng)器進(jìn)行了無(wú)血清Veo細(xì)胞微載體培養(yǎng)，為病毒的大量制備提供了條件，71通過(guò)生物反應(yīng)微載體培養(yǎng)的病毒產(chǎn)量比轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)可提高三倍，在無(wú)血清培養(yǎng)條件下病毒滴度可高達(dá)58107TCP/n1且后續(xù)研究表明，與血清培養(yǎng)收獲的病毒相比，無(wú)血清培養(yǎng)的病毒免疫動(dòng)物后產(chǎn)生的中和抗體滴度更高，此可見(jiàn)，無(wú)血清微載體培養(yǎng)的EV7I病毒為滅活疫苗的開(kāi)發(fā)提供了有利的條件

18、目前國(guó)內(nèi)外對(duì)EV71疫苗的研究主要為滅活疫苗，中國(guó)上述三家公司的EV71滅活疫苗獲得SFDA的臨床批件，表明在疫苗用毒種選育苗生產(chǎn)檢起藝研究以及疫苗評(píng)價(jià)動(dòng)物模型等關(guān)鍵技木方面取得了突破，為生產(chǎn)人用EV71疫苗奠定了基礎(chǔ)。2基因工程疫苗基因工程疫苗的研究主要集中在EV71病毒樣顆粒疫苗以及通過(guò)各種表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的完整或部分VP1蛋白的亞單位疫苗©VLP由呈一定空間結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)蛋白組成，與全病毒相比，因其不含感染性的核酸，是理想的EV71疫苗®昆蟲(chóng)細(xì)胞SF9共同表達(dá)P解【13CD蛋白，可組裝成VLP，其免疫效果優(yōu)于經(jīng)變性處理的VLP和熱滅活的EV7I病毒，能產(chǎn)生更高滴度的中和抗體,

19、對(duì)新生小鼠有更好的保護(hù)效果，并且VLP還能誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答，尤其產(chǎn)生較高水平的FN-2以及I：-4,于表達(dá)量和最后的收率械，限制了其大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用，最近，Chu331使用2L生物反應(yīng)器對(duì)VLP的表達(dá)進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，通過(guò)表達(dá)載體設(shè)計(jì)3細(xì)胞抱密度，模式恐氧量等關(guān)鍵參數(shù)的篩選，獲得較高的表達(dá)量（m廈），是用轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)產(chǎn)量的43倍rP釋放于細(xì)胞培養(yǎng)液，簡(jiǎn)化了后續(xù)的純化工藝，提高了產(chǎn)品的收率，為規(guī)?；a(chǎn)奠定了基礎(chǔ)外，其免疫小鼠產(chǎn)生的抗血清對(duì)EV71不同基因型具有的廣譜交叉保護(hù)作用，EV71VLP疫苗是一種很有前景的候選疫苗VP1±含有病毒主要的抗原決定簇，基于VP1蛋白的亞單位疫苗也是

20、基因工程疫苗的主要研究方向，有通過(guò)原核I蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)以及轉(zhuǎn)地哺乳動(dòng)物狎因植物成功表達(dá)EV7IVPI蛋郵J報(bào)道，并且都顯示出一定的免疫原性，Wu等對(duì)通過(guò)大腸桿菌BL2I原核表達(dá)的重組VPI蛋白疫苗（10田劑），免疫小鼠能產(chǎn)生對(duì)EV71四個(gè)亞型均有保護(hù)作用的中和抗體，誘導(dǎo)T輔助細(xì)胞增殖并產(chǎn)生高水平的I：-10和正N-些通過(guò)口服途徑謎的VPI疫苗如利用可食用植物因動(dòng)物;汁C35以及在減毒的百日咳桿菌表面表達(dá)VP1蛋白正處于研究階段©3其他候選疫苗處于實(shí)驗(yàn)室研究階段的候選疫苗還有減毒活疫苗V收疫苗和DNA疫苗等EV71減毒株S1-3CV是將脊髓灰質(zhì)炎病毒S*bi!疫苗株位于5NTR合酶和3

21、NTR的溫螂感突變位點(diǎn)引入EV71BrCr株基因組構(gòu)建而成的，盡管誘導(dǎo)產(chǎn)生的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答很好，同時(shí)在小鼠感染模型以及貓猴感染模型上表現(xiàn)出神經(jīng)毒力明顯減弱，但還是出現(xiàn)了輕度的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，表明減毒并不徹底1#EV71的毒力決定位點(diǎn)研邢深入，在借鑒脊觥灰質(zhì)炎口服活疫苗（OPV）成功經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,將有可能開(kāi)發(fā)出減毒徹底的EV71減毒活疫苗多肽疫苗的研究主要集中在VPI上，目前對(duì)VP1蛋白的線性中和表位”以及T細(xì)胞表位3J研究己經(jīng)比較清楚，但多肽的局限性在于其免疫原性較弱且表位較為單一，不能產(chǎn)生全面的免疫應(yīng)答因此，設(shè)計(jì)出含有中和性B細(xì)胞表位以及T細(xì)胞表位的復(fù)合肽段對(duì)EV71感染的預(yù)防會(huì)更有意義T

22、uqg等"'將流行株中分離的EV71基因，經(jīng)PCR擴(kuò)增后克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒pVAXI構(gòu)建了EV71DNA疫苗組質(zhì)粒在Veo細(xì)胞中具有林VP南白的能力，但動(dòng)物免疫效果不盡理想，隨著免疫佐劑峻系統(tǒng)等技術(shù)的發(fā)展，EV71DNA孀仍是很有發(fā)展前景的一種候選疫苗。4動(dòng)物模型動(dòng)物模型在病毒的毒力V苗效力的評(píng)價(jià)V性試驗(yàn)等方面的研究具有重要的作用VX舟，EV71的動(dòng)物模型主要有狒猴模型以及小鼠模型，密猴口J通過(guò)皮卜或脊髓接種的途徑感染EV71病毒并出現(xiàn)典型的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，用于安全性評(píng)價(jià)和保護(hù)效果驗(yàn)證，但由于價(jià)格昂貴，應(yīng)用受限71感染的舊齡新生TR或BALB/t乳鼠是最為常見(jiàn)的EV71模型動(dòng)物

23、一使用B3亞型的小鼠適應(yīng)株，可通過(guò)灌胃與注射感染2周齡IR小鼠本研究成功了N0D/SCD小鼠感染模型4!,VP1GI45位k氨基酸點(diǎn)突變的變異株是N0DZCD小鼠的適應(yīng)病毒株，病毒感染持續(xù)時(shí)間可達(dá)個(gè)月以上，組織分布也更廣泛，可用3周齡以上小鼠進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)，是該模型迄今為止能感染EV71病毒的年齡最大的小鼠中國(guó)大陸地區(qū)的EV7I流行株主要屬于C4亞型，而實(shí)驗(yàn)動(dòng)物普遍對(duì)該毒株不敏感®前主要建立了恒河猴感染模型以及IR乳鼠模型等3：通過(guò)腹腔注射對(duì)1日齡的TR乳鼠進(jìn)行病毒感染，繪制了病毒在骨骼肌內(nèi)的復(fù)制曲線,并聯(lián)合組織的病理變化，建立了中國(guó)流行的C4亞型毒株的小鼠模型河猴感染模型'0

24、在以EV7IIOCCD、,的劑量鼻腔感染（氣霧劑形式）后，可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)*系統(tǒng)H等檢出病毒，并伴隨利超病理組織學(xué)改變，為分析EV7I感染過(guò)程提供了病原學(xué)及病理學(xué)的指標(biāo)5展望近十幾年來(lái)EV71在亞太地區(qū)越來(lái)越頻繁的爆發(fā)流行，現(xiàn)已成為一個(gè)嚴(yán)重威脅兒童健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題71病毒被認(rèn)為是脊髓灰質(zhì)炎病毒即將消滅之際，最重要的嗜神經(jīng)性腸道病毒，由于其致病機(jī)制以及流行趨勢(shì)目前尚不明確，既無(wú)可用的疫苗用于預(yù)防，又無(wú)有效的藥物用于治療，使疫情在很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)雅以得到緩解，而中國(guó)巳有三種候選疫苗獲準(zhǔn)臨床fit件，給EV7I感染的成功預(yù)防帶來(lái)了希望。當(dāng)前EV71研究己取得了一定進(jìn)展，今后仍需進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)EV71致病機(jī)

25、理，尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)致病機(jī)理的研究病毒受體研究的基礎(chǔ)上建立理想的動(dòng)物模型，為抗病毒藥物的開(kāi)發(fā)以及疫苗效果的評(píng)價(jià)提供條件強(qiáng)流行病學(xué)研究，建立完善的監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，及時(shí)了解病毒基因的變異情況，外，還應(yīng)加強(qiáng)公共衛(wèi)生條件的改善以及預(yù)防知識(shí)的宣傳，這將對(duì)預(yù)防和治療EV71感染具有重大意義考文獻(xiàn)：D1SdimidoNJ.?ntpptra>6|noEisihidironpwiaiCKwi1idixzucofA<2cxKralncriois;?5'>6taij.J再feu5Dis1974,129:304-309.DTomSolmon.PciinyLs&tideVk>電，岐.

26、paio-andoaniold'E71J.Laica6lii'<£6Dis2010,10:778-790.HunKY,LbiTY.E71infcaicni»xlprcrcn<M)nDJ-Tiii*inEpklanblbiiU6ii,200S.24：415-426.Qh6(:Z4uw.m(i.ai/pjbdiiKfcs/fiiotJ)y-Z0II02ZI>646.hanEB.51PWcXP,BouknJM.R<rcp6)rskltnoifkilferhaid.foaSaidmouAirusD.Nw.McxI.2009.15(7):7!8

27、-729.6 BrownBA,0bcr>6cMS.JrAbundciJP,willMokxkcpkle-miol1項(xiàng)dc£<>l(«nofE71>4iinsis>Bkd(r(wI970dol99SD-ViniI999,73:9969-9975.7 ShiniaH.Mofculi<pklur)cfE71r>4uWcstmPiicilvRcji)n)-PcdEiriasli<Krnax>niil2004.46:231-235.BYnHY.CJcdW.Gaitei:6eVPIrqy()n<)fE71refoiBu'

28、;ihcencrjpjexxpeAinoairalChiiaii2008J.Vi-DsGaes2010.41(1):1-4.ZhtngY.TinXJ.Anoubreakcfkuid<fixxSmdinoh*diKavcibHKXixxinidsbysjaypcC4cfkdmmE71iiSh<n-dongCihaDJ.JoumakfCliixilVro*g，2009,41:26?-267.DOChenXM.Zha)gQ.LiJH.Aitil>istfr<»xiibauk*i)aidniur«dkc<xi*>niihumtnE710.V*&l

29、t;>略，2010,39$:25-261.D11Ci4«iYF.PhIgjtfKctc<ifE71pcs;4nd«byuscxxpoiu5gc<mpl6c:qonicsxq:cbc。J-Iifet:-&nGcsKciirxundEiol(axi»2Of0.10:404-412.D2HoM.E71:Aeiris;i<S»iiica'iiiixaidatbrcakxD.MkrrobiollimsnoIJifcea2000.33:205-216.D3DilikiiS.Wtiibredi6A.Sdrcia!E.Secpra

30、abceuKlmo-IeiiItcpilanio電cfE71iiGermanyJ.ArdVrol2009.IS:II39-1142.D>LccMS,CkangLY.DcfclpmenocfEn(kroirus7l1ikx:iicmJ.E>p<rdRd：Vo?cii62010,9:149-Ifb.D51HcarttoLJ.LbCS.HuirelrilkRJ.alMofciki-olg-ofE71inkMtiBsib1997-2000D.ArchVrol2003,148:1369-135.06WingJR,TuinYC.TxiHP.<6alChinpofmyjjgpoapc

31、ofE71iiex(brofcsoflaid-foo6-aid-maddtcatoiiTa»aibuycu)I991aid2000D.C11Mkrcbbl2(X)2,40:10-I5.07LiL»HeY,YaigH,alG<n<ficdirivartofcscfhumanE71aidcoxwk蛀訕sAl6crcufciigfromI999<fo2004inSb*ii<n.P9pKsR<pub1:ofChi)aDI-C1)Mfcro-bi>1200543:3?35-3839.0IHumgSW.HsYW,SmuDJ,<6alRceiic

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