脂質(zhì)體作為疫苗佐劑的研究進(jìn)展.docx

1、脂質(zhì)體作為疫苗佐劑的研究進(jìn)展王禮燕郭亞東衛(wèi)東昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院.云南昆明650500【摘要】總結(jié)近年來的有美文獻(xiàn)，對疫苗免疫佐劑的研究現(xiàn)狀及主要的免疫佐削脂質(zhì)體的理化性質(zhì)與免疫原性、脂質(zhì)體疫苗的特點進(jìn)行了歸納、分析和嫁述，對脂質(zhì)體作為疫苗免疫佐荊存在問題及研究方向提出建議。【關(guān)鍵詞】免疫佐劑；脂質(zhì)體；脂質(zhì)體疫苗；研究進(jìn)展【中圖分類號】K967【文獻(xiàn)標(biāo)志佃】A【文章編號】1007-8517(2014)01-0027-03TheresearchprogressofliposomeasavaccineadjuvantWangLiyan,GuoYadong,IaiWridong(lolk-grofph

2、armacy,Kunmingrnc<ii<-aluniversity,Yunnan,Kunming650500)Abstract：Theprogressinirnmunoadjuvantofvaccineandthephysicochemicalpropertiesandimmunogenicityofli|)osomes,whichisthemainirnmunoadjuvant,aswellasthefeaturesandproblemsofliposomevaccinewereanalyzedandsummarized,what圖1單層囊泡圖2脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)shouldIm?fo

3、cusoninthefutureresearchwasindicated.Keywords:innuunoudjuvant;liposome;liposomevaccine;1免疫佐劑1.1免疫佐劑的說述在免疫學(xué)中，佐劑(adjuvant)是指能夠增強(qiáng)成調(diào)節(jié)抗原體液或細(xì)胞免疫應(yīng)答的物質(zhì)。佐劑在有限抗原數(shù)械時有助于誘導(dǎo)早期的、較強(qiáng)的和長時間的免疫應(yīng)答。成為純化疫苗.亞單位疫苗和DNA疫苗研究的焦點，這些疫苗的免疫原性較弱，需要佐劑來激活免疫應(yīng)答，-4jo隨看免疫學(xué)研究的不斷深入和基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展，基于對免疫效果和生產(chǎn)使用成本降低的追求，佐劑的研究在現(xiàn)代免疫學(xué)中顯得越來越互要。通過提高佐劑的

4、效果，達(dá)到減少抗原用ht,降低對機(jī)體的傳副作用.是理想佐劑的一個更要標(biāo)志。1.2疫苗佐劑的研究現(xiàn)狀2009年以前，鋁佐劑是美國FDA唯一認(rèn)可用于人用疫苗的佐劑。但由于鉛佐劑疫菌引發(fā)不夠理想的Thl免疫應(yīng)答以及較弱的細(xì)胞免疫.并且.以鋁化合物為佐劑的疫苗無法冷凍保存，限制了鋁佐劑在earchprogress疫苗使用中的廣泛性，因而尋找替代佐劑迫在眉睫9。在所有替代佐劑的研究中，脂質(zhì)體是最具發(fā)展前景的一種。1974年.Gregoriadis和Allison首次報道了脂質(zhì)體作為免疫佐劑的應(yīng)用：6-71o從此，脂質(zhì)體以及相關(guān)的泡囊載體作為高效的誘導(dǎo)體液及細(xì)胞免疫的佐劑廣泛用于感染性疾病及癌癥疫苗中5。

5、目前，至少有8種脂質(zhì)體佐劑疫苗系統(tǒng)被批準(zhǔn)用于人用或在進(jìn)行臨床實驗。其中，瑞士Crucell的流感疫InflexalV及甲型肝炎疫苗Epaxal是目前上市的唯-兩種脂質(zhì)體佐劑疫苗。2脂質(zhì)體基金項目：云南省科技廳社會發(fā)展棲礎(chǔ)研究基金資助項目(2OO8ZCII3M)。作者簡介：王禮燕(1989-),女，江蘇省句容巾人.在讀研究生，主要從鄲藥劑學(xué)研究工作。通信作者：瞥東。E-mail#169;基金項目：云南省科技廳社會發(fā)展棲礎(chǔ)研究基金資助項目(2OO8ZCII3M)。作者簡介：王禮燕(1989-),女，江蘇省句容巾人.在讀研究生，主要從鄲藥劑學(xué)研究工作。通信作者：瞥東。E-m

6、ail#169;2.1脂質(zhì)體的形態(tài)脂質(zhì)體(lissome)自I960年由英國學(xué)者Bangham首次制得，系指將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層形成的薄膜中間所制成的超微型球狀藥物載體制劑。是由脂質(zhì)雙分子層組成的、內(nèi)部為水相的閉合囊泡，H有生物膜的功能和特性，如圖I,圖2。脂質(zhì)體主要是由磷脂及其它附加劑組成，磷脂在脂質(zhì)體中形成雙分子層，其它附加劑起到提高脂質(zhì)體的穩(wěn)定性和靶向性等作用。由于脂質(zhì)體包封材料的特殊性，具有很多優(yōu)點，如：生物相容性，靶向性，緩釋性，增加藥物的穩(wěn)定性等。2.2脂質(zhì)體的制備方式傳統(tǒng)的薄膜蒸發(fā)法是脂質(zhì)體制備方法中最基本和應(yīng)用最廣泛的方法本法簡單，易操作，適合實

7、驗室研究。流感病毒是囊膜病毒，對乙醮，氯彷等有機(jī)溶劑均敏感。用薄膜蒸發(fā)被動載藥法制備流感疫苗脂質(zhì)體，它避免了疫苗與有機(jī)溶劑的直接接觸。主要存在的問題是工藝的不完善、有機(jī)溶劑或表面活性劑的殘留都會導(dǎo)致蛋白質(zhì)藥物的生物活性降低，而且難以實現(xiàn)大批量脂質(zhì)體的制備【。2.3脂質(zhì)體理化性質(zhì)對其免疫原性影響對脂質(zhì)體的主要理化性質(zhì)對脂質(zhì)體流感疫苗免疫原性的影響從機(jī)制上進(jìn)行系統(tǒng)的研究，為脂質(zhì)體作為流感疫苗佐劑的應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。經(jīng)過35年以及超過1300個研究，很明顯脂質(zhì)體理化性質(zhì)對其免疫原性影響極為重要。對免疫原性影響較大的包括：2.3.1抗原的包被方式。決定抗原釋放速度以及被APC識別的難易如。2.3.2脂

8、質(zhì)體組成、電荷、粒徑等。能改變脂質(zhì)體藥動學(xué)性質(zhì)從而獲得理想的停留和抗原攝取、處理以及遞呈在MHC分子（,4-,5：oMann等研究發(fā)現(xiàn)，小粒徑脂質(zhì)體剌激較強(qiáng)烈的Th2應(yīng)答，大徑粒剌激的應(yīng)答較強(qiáng)（IFN-r及IgG2水平較高），并能刺激較強(qiáng)的保護(hù)性抗體3）。粒徑大小對抗原向淋巳結(jié)的轉(zhuǎn)運、攝取、加工也至關(guān)重要E）。大顆粒易被DC攝取，小顆粒向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)運，被MP和DC攝取。提示攝取部位與顆粒大小有關(guān)。小顆粒易到達(dá)淋巴結(jié)，誘導(dǎo)lgG2抗體、B細(xì)胞核CD8T細(xì)胞免疫應(yīng)答帶正電荷脂質(zhì)體通過與帶負(fù)電的細(xì)胞膜形成電子對復(fù)合物降低細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，使抗原能更有效地傳遞到細(xì)胞質(zhì)。大顆粒、正電荷脂質(zhì)體被APC吞噬作用

9、強(qiáng)另外，與陰離子脂質(zhì)體相比，陽離子脂質(zhì)體更易促進(jìn)DC成熟水平（由CD83表達(dá)），從而增加DC吞噬作用。大粒徑、陽離子脂質(zhì)體會通過增加抗原在給藥部位的停留，促進(jìn)DC成熟，從而增強(qiáng)T細(xì)胞免疫應(yīng)答皿）。陽離子脂質(zhì)體本身有佐劑效應(yīng)，可以激活A(yù)PC。陽離子脂質(zhì)體某些成分可能能誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子的釋放.導(dǎo)致TM型的免疫反應(yīng)，從而增加APC對抗原的攝取-22】。脂質(zhì)膜流動性可通過使用具有不同相變溫度的脂質(zhì)材料來調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，使用具有較高相變溫度的脂質(zhì)材料有利于激發(fā)更強(qiáng)的抗體應(yīng)答）。另外，脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)對其包被的抗原的免疫作用也會產(chǎn)生影響，單室脂質(zhì)體激發(fā)IgG是同劑最多室脂質(zhì)體的2倍M。脂質(zhì)體的剛性在促進(jìn)免疫增

10、強(qiáng)上也有影響。Barouche等研究發(fā)現(xiàn),僅有DSPC的GCSA不激發(fā)免疫應(yīng)答，加入膽固醇增加脂質(zhì)膜剛性后免疫應(yīng)答作用增強(qiáng)。Barouche等研究還發(fā)現(xiàn)，剛性增強(qiáng)及相變溫度升高可剌激機(jī)體產(chǎn)生較高的抗體及細(xì)胞免疫。3脂質(zhì)體疫苗的研究進(jìn)展脂質(zhì)體疫苗的研究于近10年非常熱門，1974至2010年，根據(jù)Pubmed統(tǒng)計，有1316個相關(guān)的研究報道，其中一半在近8年瑚。與其它疫苗佐劑相比，脂質(zhì)體作為疫苗佐劑有很多獨到之處：3.1安全、耐受已批準(zhǔn)使用的InflexalVH前已在43個國家使用超過六千萬例，其安全性與耐受性已得到很好證實，此外，目前正在進(jìn)行的幾個脂質(zhì)體疫苗的臨床使用也證實了具有可接受的低基因

11、反應(yīng)0）。另外，由于脂質(zhì)體是由一些類細(xì)胞膜材料組成，因而可以完全生物降解。3.2廣泛性脂質(zhì)體組成以及脂質(zhì)體制備方法能定制，以達(dá)到特定要求的脂質(zhì)體理化性質(zhì)物°親水性抗原可包裹于親水區(qū)域或螯合在脂質(zhì)體表面，親脂性抗原包于親脂空間，這使得幾乎所有性質(zhì)的抗原（包括蛋白質(zhì)、多肽、碳?xì)浠衔?、核酸以及小分子半抗原等），在通過對脂質(zhì)體理化性質(zhì)進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)以適應(yīng)抗原不同分子量大小及電荷，均可被包封，因而得到了廣泛的應(yīng)用。3.3靶向性抗原能否準(zhǔn)確靶向抗原呈遞細(xì)胞上特定的受體（如DC上的DC-SIGN）也極為重要-30）。在脂質(zhì)材料中加入免疫調(diào)節(jié)劑，如TLR激動劑或其它的PRR激動劑等，能增強(qiáng)特定受體

12、的靶向性。此外，由于脂質(zhì)體的包封以及微粒結(jié)構(gòu)，不僅保護(hù)抗原不被降解，而且促進(jìn)巨噬細(xì)胞攝取疫苗抗原：。3.4緩釋性可延K抗原或半抗原的作用時間，協(xié)助抗原或半抗原誘導(dǎo)體液免疫和/或細(xì)胞免疫。3.5可冷凍干燥經(jīng)研究，以脂質(zhì)體為佐劑的疫苗抗原，凍干后與凍干前相比，其物理性狀及免疫原性均無太大差別。這為減輕脂質(zhì)體疫苗產(chǎn)品冷鏈運輸?shù)膲毫Φ於嘶A(chǔ)。4展望以上是近35年研究比較集中的脂質(zhì)體理化性質(zhì)，它們對免疫原性的影響涉及到其包被的抗原的攝取、轉(zhuǎn)運、處理以及呈遞的各個環(huán)節(jié)。然而由于各理化性質(zhì)之間相互作用，脂質(zhì)體理化性質(zhì)與免疫原性二者之間的關(guān)系很難界定另外，由于不同研究中使用的脂質(zhì)體組成、抗原種類、免疫途徑、

13、抗原用域及實驗動物種類的不同，使得二者之間的關(guān)系沒有統(tǒng)一可用的標(biāo)準(zhǔn)。此外，還應(yīng)注意到，佐劑與不同的抗原合用，其非特異性免疫調(diào)節(jié).作用是不可預(yù)知的，因而佐劑的批準(zhǔn)是與特定的抗原綁定，而不是作為單獨的佐劑。所以單純脂質(zhì)體作為佐劑的作用機(jī)理不可能得到全面的詮釋，也沒有太大的研究價值.除非與特定的抗原綁定在-起研究。此外免疫途徑、抗原用量對特定脂質(zhì)體疫苗免疫原性也有極大影響。參考文獻(xiàn)IDegenWGJ.JansenT.SchijnsVEJC.VaccineadjuvantIchnology:frommechanittticconceptstopracticalapplications（J.Expert

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