中藥顯微鑒定PPT課件課件

1、關(guān)于中藥顯微鑒定PPT課件現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第1頁，共26頁植物顯微鑒定的簡介植物顯微鑒定的簡介(Microscopical Identification)v植物顯微鑒定是植物鑒定的重要手段之一。它通過植物組織、細(xì)胞、細(xì)胞后含物等特征進(jìn)行微觀分析，達(dá)到鑒別真、偽、優(yōu)、劣的目的。v植物顯微鑒別不但適用于中藥材（飲片），也適用于中成藥制品。這一檢測方法先后被中國藥典、香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)、日本藥局方、印度草藥典、美國藥典等采用。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第2頁，共26頁中國藥典中國藥典附錄附錄 顯微鑒別法顯微鑒別法 顯微鑒別法系指用顯微鏡對藥材（飲片）切片、粉顯微鑒別法系指用顯微鏡對藥材（飲片）切片、粉末、解離組織或表面制

2、片及含藥材粉末的制劑中藥末、解離組織或表面制片及含藥材粉末的制劑中藥材的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別的一種方材的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別的一種方法。鑒別時(shí)選擇具有代表性的供試品，根據(jù)各種鑒法。鑒別時(shí)選擇具有代表性的供試品，根據(jù)各種鑒別項(xiàng)的規(guī)定制片。制劑根據(jù)不同劑型適當(dāng)處理后制別項(xiàng)的規(guī)定制片。制劑根據(jù)不同劑型適當(dāng)處理后制片。片。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第3頁，共26頁顯微鑒別方法分類顯微鑒別方法分類 1 根據(jù)不同劑型適當(dāng)處理后制片，分為：v藥材（飲片）顯微制片：橫切片或縱切片制片、粉末制片、表面制片、解離組織制片、花粉粒與孢子制片、磨片制片。v含飲片粉末的制劑顯微制片：按粉末制片法制片v細(xì)胞壁性

3、質(zhì)鑒別：木質(zhì)化細(xì)胞壁、木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁、纖維素細(xì)胞壁。v細(xì)胞內(nèi)含物性質(zhì)鑒別：淀粉粒、菊糖、草酸鈣結(jié)晶 2 根據(jù)切片方法，分為：徒手切片、冷凍切片、半薄切片（0.5-2.0微米）、超薄切片（ 50-70nm)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第4頁，共26頁永久制片永久制片（以石蠟切片為例）（以石蠟切片為例）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第5頁，共26頁石蠟切片石蠟切片v石蠟制片法石蠟制片法 借助于石蠟的特性，以其作為填借助于石蠟的特性，以其作為填充劑和包埋劑，用石蠟切片機(jī)進(jìn)行切片的制充劑和包埋劑，用石蠟切片機(jī)進(jìn)行切片的制作方法。作方法。 v石蠟制片是目前植物性中藥重要的、常用的、石蠟制片是目前植物性中藥重要的、常用的、效果較好

4、的切片方法之一，但制片周期較長是效果較好的切片方法之一，但制片周期較長是其缺點(diǎn)。其缺點(diǎn)。v 石蠟制片的步驟及操作基本過程如下：石蠟制片的步驟及操作基本過程如下：取材取材固定固定沖洗沖洗脫水脫水透明透明浸蠟及包埋浸蠟及包埋切片切片粘片粘片脫蠟脫蠟染色染色透明透明封片。封片。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第6頁，共26頁1 1 材料的選擇材料的選擇選材（取樣）：選材（取樣）：v根據(jù)鑒定要求，選擇有代表性的部位；根、根莖、藤莖等類圓根據(jù)鑒定要求，選擇有代表性的部位；根、根莖、藤莖等類圓形的材料要包含有中心部位，至少為形的材料要包含有中心部位，至少為1/41/4以上；葉、花萼、花以上；葉、花萼、花冠等材料要包含主脈部

5、位。冠等材料要包含主脈部位。v材料切成長材料切成長3cm3cm、直徑、直徑1cm1cm左右塊或段，待切面應(yīng)削平。左右塊或段，待切面應(yīng)削平。樣品的量一般不得少于實(shí)驗(yàn)所需用的樣品的量一般不得少于實(shí)驗(yàn)所需用的3 3倍，即倍，即1/31/3供實(shí)驗(yàn)分供實(shí)驗(yàn)分析用，另析用，另1/31/3供復(fù)核用，其余供復(fù)核用，其余1/31/3則為留樣保存，保存期至少則為留樣保存，保存期至少一年。一年?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第7頁，共26頁2 2 材料的預(yù)處理材料的預(yù)處理處理：處理：v清洗清洗 水洗，用柔軟的毛刷輕輕的刷洗表面。水洗，用柔軟的毛刷輕輕的刷洗表面。v殺生殺生 固定固定 保存保存 將需要制片材料迅速殺死，使組織保持原生活

6、狀態(tài)將需要制片材料迅速殺死，使組織保持原生活狀態(tài)，一般以滲透力較強(qiáng)的的藥劑作殺生劑較好。，一般以滲透力較強(qiáng)的的藥劑作殺生劑較好。 v固定液固定液 FAA FAA固定液固定液 38%38%甲醛：冰醋酸：甲醛：冰醋酸：70%70%乙醇乙醇 5 5：5:955:95 用于根、莖、葉、花藥、子房的固定，固定時(shí)間用于根、莖、葉、花藥、子房的固定，固定時(shí)間24h24h FPA FPA固定液固定液 38%38%甲醛：丙酸：甲醛：丙酸：70%70%乙醇乙醇 5 5：5:955:95 卡諾氏固定液卡諾氏固定液 乙醇：冰醋酸乙醇：冰醋酸 3:13:1 用于根尖、花藥、子房的固定，固定不超過時(shí)間用于根尖、花藥、子房

7、的固定，固定不超過時(shí)間24h24h材料處理時(shí)，注意不能影響要觀察的顯微鑒別特征。如要觀察菊糖、粘液等在軟材料處理時(shí)，注意不能影響要觀察的顯微鑒別特征。如要觀察菊糖、粘液等在軟化、切片、裝片等過程中，均不可與水接觸，以免溶解消失；要觀察揮發(fā)油、樹化、切片、裝片等過程中，均不可與水接觸，以免溶解消失；要觀察揮發(fā)油、樹脂等，則不可與高濃度乙醇或其它有機(jī)溶媒接觸。脂等，則不可與高濃度乙醇或其它有機(jī)溶媒接觸。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第8頁，共26頁3 3 脫水脫水v脫水常用乙醇、二氧六環(huán)、正丁醇、叔丁醇、丙酮等脫水常用乙醇、二氧六環(huán)、正丁醇、叔丁醇、丙酮等v目的目的 除去組織中的水分，使細(xì)胞變硬；除去組織中的水分

8、，使細(xì)胞變硬； 便于包埋物進(jìn)入組織及細(xì)胞，便于切片；便于包埋物進(jìn)入組織及細(xì)胞，便于切片； 脫水后的組織再經(jīng)過透明，便于觀察。脫水后的組織再經(jīng)過透明，便于觀察。v方法方法 由由30%30%、 50% 50%、 70% 70%、 85% 85%、 95% 95%、 100% 100%、 100% 100%各級酒精處理各級酒精處理2-4h2-4h?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第9頁，共26頁4 4 透明透明v透明常用二甲苯、氯仿、苯、甲苯等透明常用二甲苯、氯仿、苯、甲苯等v目的目的 便于包埋劑便于包埋劑( (石蠟）及封藏劑（加拿大樹膠）的互相融合石蠟）及封藏劑（加拿大樹膠）的互相融合v方法方法 用用1/41/4二甲

9、苯、二甲苯、 1/3 1/3二甲苯、二甲苯、 1/2 1/2二甲苯、二甲苯、 二甲苯、二甲苯、 二甲苯各處理二甲苯各處理3-3-4h4h?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第10頁，共26頁4 4 透蠟、包埋透蠟、包埋v透蠟常用固體石蠟透蠟常用固體石蠟v目的目的 石蠟進(jìn)入細(xì)胞組織內(nèi)，便于切片石蠟進(jìn)入細(xì)胞組織內(nèi)，便于切片v透蠟方法透蠟方法 50%50%、75% 75% 、100%100%石蠟各處理石蠟各處理3h3h。溫度：。溫度：63-64 63-64 v包埋包埋 材料在石蠟中央，便于修蠟和切片材料在石蠟中央，便于修蠟和切片現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第11頁，共26頁5 5 蠟塊的分割、切片蠟塊的分割、切片v 蠟塊的分割蠟塊的分割

10、 將蠟塊修成適合的大小，蠟邊與材料盡量平行。上寬下將蠟塊修成適合的大小，蠟邊與材料盡量平行。上寬下窄，分割好的材料要妥善保管。窄，分割好的材料要妥善保管。v 切片切片 將蠟塊粘在切片機(jī)上，調(diào)整刀的角度（與蠟塊保持將蠟塊粘在切片機(jī)上，調(diào)整刀的角度（與蠟塊保持1515的傾角），厚的傾角），厚度調(diào)整為度調(diào)整為2020微米以內(nèi)。微米以內(nèi)。v 注意：切片時(shí)速度要快，不可來回拉鋸式切割；注意：切片時(shí)速度要快，不可來回拉鋸式切割； 切片時(shí)右手不動(dòng)，只是右臂移動(dòng)，動(dòng)作用臂力而不用腕力。切片時(shí)右手不動(dòng)，只是右臂移動(dòng)，動(dòng)作用臂力而不用腕力?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第12頁，共26頁 機(jī)器切片機(jī)器切片v 石蠟切片機(jī)石蠟切片機(jī)v

11、 滑走切片機(jī)滑走切片機(jī)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第13頁，共26頁v選片選片 選擇薄而完整的切片置載玻片上，加水選擇薄而完整的切片置載玻片上，加水1 1滴于玻片上，在展片臺(tái)上展滴于玻片上，在展片臺(tái)上展片，置低倍鏡下觀察，選取組織構(gòu)造完整、顯微特征清晰者備用。片，置低倍鏡下觀察，選取組織構(gòu)造完整、顯微特征清晰者備用。v 粘片粘片 用蛋清與甘油（用蛋清與甘油（1:11:1）。順時(shí)針用力攪拌）。順時(shí)針用力攪拌均勻，攪拌至無泡沫產(chǎn)生為止。粘片時(shí)，滴少均勻，攪拌至無泡沫產(chǎn)生為止。粘片時(shí)，滴少許粘片劑，用手指涂抹均勻。許粘片劑，用手指涂抹均勻。6 6 選片、粘片選片、粘片現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第14頁，共26頁v染色方法染色方法

12、 復(fù)染和單染復(fù)染和單染 ；滴染和泡染。；滴染和泡染。v染料的分類染料的分類 天然和人工染料；堿性、中性和酸性染料；核燃料、細(xì)胞質(zhì)染料、細(xì)胞天然和人工染料；堿性、中性和酸性染料；核燃料、細(xì)胞質(zhì)染料、細(xì)胞壁染料、組織化學(xué)染料、活體染料等。壁染料、組織化學(xué)染料、活體染料等。v常用染料常用染料 蘇木精、堿性品紅、番紅和固綠；蘇木精、堿性品紅、番紅和固綠； v 封片封片 用加拿大樹膠封片、用加拿大樹膠封片、v 目的目的 便于長期保存；由于加拿大便于長期保存；由于加拿大樹膠折射率高適合在顯微鏡下觀察。樹膠折射率高適合在顯微鏡下觀察。 7 7 染色、透明及封片染色、透明及封片v 透明透明 梯度二甲苯梯度二甲

13、苯v 目的目的 便于觀察便于觀察 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第15頁，共26頁冷凍切片冷凍切片v儀器：冷凍切片機(jī)儀器：冷凍切片機(jī)v包埋材料：水、膠水包埋材料：水、膠水v切片溫度：切片溫度：-20v優(yōu)點(diǎn)：節(jié)省時(shí)間、方便快捷。優(yōu)點(diǎn)：節(jié)省時(shí)間、方便快捷。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第16頁，共26頁注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)：包埋時(shí)，不能有氣泡，否則會(huì)有空洞。包埋時(shí)，不能有氣泡，否則會(huì)有空洞。一定要將材料放直立膠水的中央，使材料完全被膠水包一定要將材料放直立膠水的中央，使材料完全被膠水包裹。并且外圍膠水的厚度要大于等于材料的半徑，有利裹。并且外圍膠水的厚度要大于等于材料的半徑，有利于粘片。于粘片。不宜將材料和膠水凍的太硬，否則在切片過程中

14、會(huì)造成中不宜將材料和膠水凍的太硬，否則在切片過程中會(huì)造成中間材料的破損。間材料的破損。切片時(shí)，切片卷起形成圓筒，是刀刃太鈍并附有雜物、切片時(shí)，切片卷起形成圓筒，是刀刃太鈍并附有雜物、刀得傾角太大、切片太厚等原因引起的。刀得傾角太大、切片太厚等原因引起的。切片有橫紋及薄厚不均一，是刀夾松緊不均一、刀的傾角切片有橫紋及薄厚不均一，是刀夾松緊不均一、刀的傾角過大引起的。過大引起的。切片有縱裂或縱條紋，是因?yàn)榈犊谟腥笨?，組織太切片有縱裂或縱條紋，是因?yàn)榈犊谟腥笨?，組織太硬引起的。硬引起的。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第17頁，共26頁冷凍切片機(jī)冷凍切片機(jī)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第18頁，共26頁 粉末制片粉末制片現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第1

15、9頁，共26頁1 1 藥材粉碎藥材粉碎 選取完整的藥材或待鑒定部位，粉碎，過選取完整的藥材或待鑒定部位，粉碎，過中國藥典中國藥典4 4號篩備用。號篩備用?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第20頁，共26頁 斯氏液裝片斯氏液裝片 斯氏液斯氏液由醋酸由醋酸甘油甘油水（水（111111）組成，主要用于觀察淀粉粒）組成，主要用于觀察淀粉粒及一些遇水合氯醛試液易溶解的成分。如多糖類成分、樹脂類成分及一些遇水合氯醛試液易溶解的成分。如多糖類成分、樹脂類成分等。等。 水合氯醛液裝片水合氯醛液裝片 水合氯醛試液能滲透組織，使皺縮的細(xì)胞膨脹；并能溶解淀粉粒、水合氯醛試液能滲透組織，使皺縮的細(xì)胞膨脹；并能溶解淀粉粒、蛋白質(zhì)、樹脂、揮

16、發(fā)油和葉綠素等，使細(xì)胞組織變得透明而清晰。蛋白質(zhì)、樹脂、揮發(fā)油和葉綠素等，使細(xì)胞組織變得透明而清晰。3.4 3.4 粉末特殊處理制片方法粉末特殊處理制片方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第21頁，共26頁v含多量淀粉的藥材粉末含多量淀粉的藥材粉末 大量淀粉粒的存在會(huì)影響觀大量淀粉粒的存在會(huì)影響觀察、描繪及攝影等效果。取一部分粉末于試管中加水察、描繪及攝影等效果。取一部分粉末于試管中加水煮沸，使淀粉粒糊化而溶解，放置或用離心機(jī)使所需煮沸，使淀粉粒糊化而溶解，放置或用離心機(jī)使所需細(xì)胞、組織下沉管底，用長吸管將沉淀物吸出供制片細(xì)胞、組織下沉管底，用長吸管將沉淀物吸出供制片觀察。觀察。3 3 粉末特殊處理制片方法粉末特

17、殊處理制片方法v含多量油類的藥材粉末含多量油類的藥材粉末 進(jìn)行脫脂以除去大部分油脂進(jìn)行脫脂以除去大部分油脂，取少許粉末于小燒杯中，加氯仿少許攪拌浸漬，過濾，取少許粉末于小燒杯中，加氯仿少許攪拌浸漬，過濾，在濾紙上再加少許氯仿洗滌粉末即可。也可直接將粉，在濾紙上再加少許氯仿洗滌粉末即可。也可直接將粉末置載玻片進(jìn)行。末置載玻片進(jìn)行?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第22頁，共26頁v含纖維較多的粉末含纖維較多的粉末 細(xì)胞彼此不分離，則可以用細(xì)胞彼此不分離，則可以用5%5%氫氧化氫氧化鉀溶液浸漬若干小時(shí)或在水浴上加熱浸漬，使組織分解后再鉀溶液浸漬若干小時(shí)或在水浴上加熱浸漬，使組織分解后再行制片觀察。行制片觀察。 v顏色

18、很深的藥材粉末顏色很深的藥材粉末 進(jìn)行脫色處理，取粉末少許置小進(jìn)行脫色處理，取粉末少許置小燒杯中或載玻片上，加少許燒杯中或載玻片上，加少許3%3%的過氧化氫溶液（雙氧水）的過氧化氫溶液（雙氧水）浸漬數(shù)分鐘，待粉末顏色變淺時(shí)，除去多余液體，加新煮沸浸漬數(shù)分鐘，待粉末顏色變淺時(shí)，除去多余液體，加新煮沸的冷蒸餾水，以除去粉末中的大量氣泡即可，然后再行制片的冷蒸餾水，以除去粉末中的大量氣泡即可，然后再行制片觀察。觀察?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第23頁，共26頁v水泛丸：全球面取樣，將丸藥從中心剖開，從水泛丸：全球面取樣，將丸藥從中心剖開，從1/21/2球面上刮球面上刮取。取。v大蜜丸：將丸藥從中心剖開，從大蜜丸：將丸藥從中心剖開，從1/21/2或或1/41/4球面上刮?。灰睬蛎嫔瞎稳?；也可從內(nèi)部挑取適量粉末?？蓮膬?nèi)部挑取適量粉末。4 4 中成藥粉末制片中成藥粉末制片v 散劑、顆粒劑、膠囊：挑取部分粉末；散劑、顆粒劑、膠囊：挑取部分粉末；v 包衣丸、片：剝除糖衣或包衣，取適量丸或片心磨碎后，包衣丸、片：剝除糖衣或包衣，取適量丸或片心磨碎后，取粉末裝片。取粉末裝片。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第24頁，共26頁5 5 粉末半永久制片或永久制片粉末半永久制片或永久制片v 永久制片永久制片 制備粉末永久片需將粉末置離心管中，加制備粉末永久片需將粉末置離心管中，加5