免疫組化在腫瘤病理診斷中的應用課件

免疫組化在腫瘤病理診斷中的應用免疫組織（或細胞）化學技術是免疫學與組織化學兩種技術的結合，它的基本原理是應用抗原與抗體的特異性結合，再用顯色劑顯色達到標記細胞的某種抗原物質的定性與定位檢測技術，是一種方法簡單，且有效的腫瘤標記技術。當前在免疫組化技術圍繞著提高敏感性與特異性不斷改進和發(fā)展，但它仍有其局限性——應用于蛋白水平，敏感性與特異性不足，故應與其他組織化學、電鏡及分子生物學技術相結合。

一、免疫組化在診斷中的應用原則1．防止假陽性與假陰性，防止操作中的污染，規(guī)范操作，設陽性與陰性對照。2．選用2種以上同類抗體：目前腫瘤均為相關抗原，特異性不足，多種同類抗體可提高陽性率。3．正確評價免疫組化的結果：其結果受抗體、特異性與質量、操作、標本固定等多種因素影響。4．合理的選擇抗體：既要符合設計的要求，價廉物美，分1、2、3線抗體。5．待檢標本抗原保存要好：要求快速、新鮮、充份的固定，合適固定劑，福爾馬林液固定標本要修復抗原。二、免疫組化在腫瘤診斷中的應用（一）上皮性腫瘤標記1．角蛋白（Keratin）：一種中間絲蛋白，分（1）表皮角蛋白（Epidermalkeratin，EK）——鱗狀上皮或高分化鱗癌標記；（2）細胞角蛋白（cytokeratin，CK）——低分子角蛋白，對腺癌、移行細胞部及低分化鱗癌標記。一般用廣譜型角蛋白抗體為好，常用。2．上皮膜抗原（Epithelialmembraneantigen，EMA）：這亦是常用的上皮細胞標記抗體，細胞膜陽性，用Zanker’s、Bouin或B5固定液中固定為好。其在低分化和未分化上皮中表達好，但亦可在間變性大細胞淋巴瘤、惡性橫紋肌樣瘤中表達。

3．橋粒蛋白（Desmoplakin）：主要標記上皮橋粒，DesmoⅡ僅表達于復層上皮。2．結蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、橫紋肌均可陽性。3．肌動蛋白（Actin）：平滑肌、血管內皮、肌上皮細胞標記，HHF35特異。4．肌球蛋白（Myotlobin），肌紅蛋白（myosin）：對橫紋肌標記較好。

5．第因子Ⅷ，CD34：對血管內皮細胞腫瘤標記較特異。6．S-100蛋白：是一種周圍神經雪旺氏細胞特異標記抗體，后發(fā)現(xiàn)對脂細胞、朗格罕氏細胞、肌上皮細胞、黑色素細胞及其腫瘤均可陽性。

7．酸性或堿性磷酸酶：對骨與軟骨腫瘤標記好。（三）雙向分化腫瘤標記即有上皮與間葉兩種細胞分化的腫瘤的標記，如滑膜肉瘤、間皮肉瘤、腦膜瘤、癌肉瘤、上皮樣肉瘤等，一般采用CK、EMA標記上皮，Vim等標記間葉細胞。另外有一種惡性纖維組織細胞瘤，由纖維細胞、肌纖維母細胞和組織細胞混合組成的惡性腫瘤，故應用Vim和組織細胞標記來診斷。（四）神經細胞、膠質細胞及神經內分泌腫瘤標記1．神經原特異性烯醇化酶（NeuronSpecificEnolase，NSE）：神經原腫瘤標記。2．膠質纖維酸性蛋白（GlialFibrillalyAcidicprotein，GFAP）：腦膠質細胞特異性標記抗體。CD34+F8血管3．神經內分泌腫瘤標記：包括類癌、胰島、垂體瘤、甲狀腺髓樣癌、皮膚Merkel細胞癌、原始神經外胚層瘤（PNET）等，目前應用NSE、嗜鉻蛋白顆粒A（CgA）及觸突素（Syn）三種抗體同時或兩種一起用，因NSE不夠特異。（五）淋巴網狀組織腫瘤（淋巴瘤）標記1．B細胞標記抗體：CD20（L26），Ig重鏈（IgG、M、A、E）、輕鏈（λ、κ）、CD79a。2．T細胞標記抗體：CD45RO（UCHL-1），CD3較好。CD56

3．組織細胞標記抗體：Mac387、CD14、抗溶菌酶（lysozyme）、抗糜蛋白酶（α-1Antichymotrypsin）等。4．霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’slymphoma，HL）R-S細胞（Reed-Sternbergcell）標記抗體：CD15、CD305．白細胞共同抗原（leucocytecommonAntigen，LCA）：它對淋巴網狀細胞均為膜陽性，作第一線抗體為好。注：（1）國際上將百余種標記抗體統(tǒng)稱為CD（ClusterDesignation）系列。（2）淋巴細胞標記與R-S細胞多數(shù)為膜陽性，而Ig與組織細胞標記為胞漿陽性。（六）腫瘤細胞增殖活性與細胞凋亡標記抗體瘤細胞增殖指數(shù)反應細胞增殖活性，是瘤細胞新生（惡性）狀況的客觀指標，與凋亡指數(shù)呈反比關系。常用抗體有：1．增殖細胞核抗原（proliferativeneuclearAntigen，PCNA），核陽性。

2．Ki-67，Brdu抗體：原要求新鮮組織，新近有Ki-67石蠟切片標記抗體問世。3．細胞凋亡（Apoptosis）標記抗體：開始發(fā)現(xiàn)細胞凋亡發(fā)生于正常細胞受基因調控性自然性死亡。后發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞亦可發(fā)生，而且某些藥物放、化療亦可誘發(fā)細胞凋亡，故成了研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展、治療的熱點。其標記抗體有：（1）凋亡抑制基因蛋白抗體：Bcl-2、Bcl-XL、mtp53。（2）促凋亡基因蛋白抗體：Fas/FasL系統(tǒng)，wtp53、Bax、Bcl-xs、Fas等。T