論前Ｓ１抗原檢測(cè)體會(huì)

1、論前抗原檢測(cè)體會(huì)        關(guān)鍵詞：前S1；抗原檢測(cè)；體會(huì) 論文摘要：前S1抗原（Pre-S1Ag）檢測(cè)是對(duì)乙肝“兩對(duì)半”尤其是e抗原和HBV-DNA測(cè)定的重要補(bǔ)充和加強(qiáng)。前S1抗原酶免測(cè)定試劑盒經(jīng)過在北京、四川、浙江、河南、深圳、海南等近百家與乙肝“兩對(duì)半”檢測(cè)聯(lián)合應(yīng)用后正式推向臨床，充分顯示了該試劑在病毒性乙型肝炎的臨床診斷，指導(dǎo)等方面的重要價(jià)值。筆者就前S1抗原檢測(cè)談?wù)勛约旱捏w會(huì)。  S、前S2和前S1是乙型肝炎病毒（HBV）的三種成分，含有前S1的蛋白主要存在于Dane顆粒和管型顆料上，前S1

2、蛋白在病毒感染、裝配、復(fù)制和刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)以及在病毒侵入肝細(xì)胞等方面起著十分重要的作用。    1 基因結(jié)構(gòu)  乙肝病毒為嗜肝DNA病毒，約3200個(gè)氨基酸，由一個(gè)不完全雙鏈DNA組成。長(zhǎng)鏈L含4個(gè)開放讀碼框架，為病毒蛋白的編碼區(qū)：S、C、P、X；短鏈S相當(dāng)于長(zhǎng)鏈的50%100%，其不固定端可被內(nèi)原性DNA多聚酶延長(zhǎng)，使病毒成為完整的雙鏈。HBV基因組編碼HBV抗原，所有四個(gè)功能性讀碼框架位于DNA負(fù)鏈，P基因編碼DNA聚合酶，C基因編碼HbcAg，S基因編碼S抗原，前S1抗原和前S2抗原，X基因編碼X產(chǎn)物。編碼不同形式的表面抗原（HBsAg）的H

3、BV基因區(qū)域由大蛋白（LHBs），中蛋白（MHBs）和小蛋白（SHBs）組成，在第一和第二個(gè)起始密碼子之間的序列稱為Pres1，在第二和第三個(gè)之間為Pres2，從第三個(gè)密碼子到終點(diǎn)密碼子的序列為S。    2 臨床意義和用途  反映HBV的感染與復(fù)制狀況的指標(biāo)：前S1抗原主要存在于血清中提示機(jī)體內(nèi)含有HBV就有前S1抗原，它是一項(xiàng)十分重要的病毒復(fù)制指標(biāo)，提示前S1抗原可作為HbeAg和HBV-DNA檢測(cè)的補(bǔ)充和對(duì)照?？笻BeAb（+）慢性乙型肝炎和HBV慢性無癥狀攜帶者中，前S1抗原（+）可表示病毒的復(fù)制，提示臨床上只檢測(cè)“乙肝五項(xiàng)”是不夠的，補(bǔ)充前S1

4、抗原的測(cè)定十分重要。病毒附著于肝細(xì)胞上，最重要的介導(dǎo)部位是前S1蛋白的氨基酸（AA）21-47片段，變異的病毒只要這一區(qū)段完好就有傳染性；預(yù)后及藥物療效：前S1抗原陰轉(zhuǎn)越早，預(yù)后越好，是病毒清除的最早跡象是急性乙型肝炎患者，慢性肝炎前S1抗原持續(xù)陽性。因病毒基因變異的HBeAb（+）慢性乙型肝炎病人，較易進(jìn)展為肝硬化，甚至肝癌，前S1抗原檢測(cè)是疾病預(yù)后的良好手段。前S1抗原可作為藥物抗病毒療效的指標(biāo)，是對(duì)HBV-DNA和HBeAg指標(biāo)的補(bǔ)充和加強(qiáng)；乙型肝炎早期診斷：前S1抗原出現(xiàn)在急性乙型肝炎感染的最早期，在轉(zhuǎn)氨酶升高前即可查出，提示可作為早期診斷乙肝病毒感染。在體檢和獻(xiàn)血員中加查前S1抗原，

5、可起來疾病的早期診斷和盡早切斷傳染源的重要作用。    3 常見問題  對(duì)于HBV的檢測(cè)人們常常會(huì)產(chǎn)生一些問題，主要有三個(gè)方面：檢驗(yàn)兩對(duì)半為何還要查Pre-S1？目前，乙型肝炎病毒血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目主要是HBV-M（即乙肝五項(xiàng)，包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb）。目的是診斷患者的感染狀況，病毒復(fù)制情況，病程預(yù)后和藥物療效的觀察等。前S1抗原的檢測(cè)能夠從以下幾個(gè)方面彌補(bǔ)和加強(qiáng)乙肝五項(xiàng)檢測(cè)的不足：一是前S1抗原出現(xiàn)在急性乙型肝炎感染的早期，在轉(zhuǎn)氨酶升高前即可查出，提示可作為早期診斷乙肝病毒感染的指標(biāo)；二是急性乙型肝炎患者前S1抗原陰

6、轉(zhuǎn)越早，預(yù)后越好，是病毒清除的最早跡象。反之，前S1抗原持續(xù)陽性，將至慢性肝炎；三是HBeAb（+）慢性乙型肝炎約占慢性乙肝的30%-50%，檢測(cè)前S1抗原，提示病毒在機(jī)體內(nèi)繼續(xù)復(fù)制，此類患者更容易演變?yōu)楦斡不蚋伟?加查前S1抗原，彌補(bǔ)了因HBeAg缺失造成的診斷和治療困難；四是在HBV無癥狀攜帶者中，有一定比例的HBeAb（+）者，加查前S1抗原（+）提示病毒在體內(nèi)還較活躍，病毒并沒有清除，肝臟還有潛在的病理損傷的可能；五是抗病毒治療乙型肝炎，加查前S1抗原可作為治療前的患者篩查和治療后的療效判斷，尤其對(duì)HBeAb（+）的慢性肝炎患者抗病毒治療的排查也起到重要作用。因此檢驗(yàn)兩對(duì)半，加查前

7、S1抗原可在急性肝炎、慢性肝炎、HBV無癥狀攜帶者和抗病毒治療乙型肝炎診療過程中起到十分重要的作用；HbeAb（+）的HBV感染者中，為何要檢查前S1抗原？慢性乙型肝炎患者，抗HBe陽轉(zhuǎn)后，部分可演變?yōu)楦斡不蚋伟?，好轉(zhuǎn)率非常低；HBeAb（+）的HBV無癥狀攜帶者，往往是因?yàn)椴《净蜃儺愃拢渌鶖y帶的HBV變異毒株大多數(shù)表現(xiàn)為在病毒基因組前C區(qū)末端突變，產(chǎn)生一個(gè)新的終止密碼子（TAG），阻斷了HBeAg的形成，導(dǎo)致在臨床上出現(xiàn)HBeAg缺陷和HBV血清型。因HBeAg的缺失，造成診斷和治療的困難，此時(shí)檢測(cè)前S1抗原既能較為準(zhǔn)確的檢測(cè)病毒在機(jī)體內(nèi)復(fù)制狀況，又能診斷疾病的轉(zhuǎn)歸和了解是否攜帶HB

8、V變異毒株，充分顯示了前S1抗原的臨床價(jià)值；為什么檢測(cè)HBV-DNA還要檢測(cè)前S1抗原？一是前S1蛋白是乙型肝炎病毒（HBV）外膜蛋白的主要專長(zhǎng)部分，在病毒感染機(jī)體的整個(gè)周期中，前S1蛋白的獨(dú)特功能，使其能夠較充分的反應(yīng)機(jī)體的體液免疫狀況，直至病程的轉(zhuǎn)歸過程，這是單一測(cè)定HBV-DNA所不能做到的；二是免疫測(cè)定技術(shù)因其有效、直接、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，已經(jīng)在臨床診斷應(yīng)用上占主導(dǎo)地位。前S1抗原的檢測(cè)與基因測(cè)定HBV-DNA在治療方面能夠相互補(bǔ)充和加強(qiáng)；三是HBV DNA-PCR技術(shù)要求精密、所需要的條件高，易發(fā)生污染和假陽性，不適于做常規(guī)檢測(cè)，前S1抗原測(cè)定與之相互補(bǔ)充和加強(qiáng)。  1

9、         4 檢測(cè)與操作  乙型肝炎病毒前S1抗原酶免診斷試劑盒采用ELISA雙抗體夾心法，測(cè)定前S1抗原肽，最低檢測(cè)濃度為0.1ug/L。檢測(cè)原理采用雙抗體夾心ELISA法，用抗-PreS1和抗HBs作為固相化抗體和酶標(biāo)抗體。如果標(biāo)本中存在乙肝病毒PreS1抗原，則形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，反之則無顯色反應(yīng)，適用于血漿和血清類標(biāo)本。試劑盒組成：微孔板、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照、酶結(jié)合物、顯色液A、顯色液B、終止液、洗滌液。  操作步驟第一步，反應(yīng)孔

10、內(nèi)加入待測(cè)標(biāo)本50uL，設(shè)陰、陽性對(duì)照各2孔，每孔加入陰、陽性對(duì)照各50uL，并設(shè)空白對(duì)照1孔，置37孵育30min；第二步洗板；第三步每孔加入酶結(jié)合物1滴或50uL（空白對(duì)照孔除外），置37孵育30min；第四步洗板，第五步加入顯色液A、B各一滴，充分混勻后，置37孵育15min；第六步加入終止液、混勻；第七步酶標(biāo)儀讀數(shù)。    5 判斷及需要注意的問題  5.1 判斷標(biāo)準(zhǔn)  （1）所有陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和標(biāo)本的讀數(shù)值減去空白對(duì)照讀數(shù)即為值；  （2）陽性對(duì)照讀數(shù)必須比陰性對(duì)照讀數(shù)大0.300，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立；  （3）臨界值（CUTOFF）=2.1，陰性對(duì)照平均OD值。測(cè)試標(biāo)本的計(jì)算值大于或等于臨界值為陽性；測(cè)試標(biāo)本的計(jì)算值小于臨界值為陰性。  5.2 注意事項(xiàng)  （1）使用前試劑盒應(yīng)預(yù)先在室溫下平衡30min；  （2）試劑盒啟用后應(yīng)盡快用完；  （3）不同批次