Countstar+細(xì)胞計(jì)數(shù)儀操作手冊

1、Countstar 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀操作手冊計(jì)數(shù)儀的標(biāo)準(zhǔn)操作程序和細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序一、啟動(dòng)Cedex XS 系統(tǒng)1. 打開計(jì)數(shù)儀: 按下計(jì)數(shù)儀上的ON/OFF按鈕, 按鈕亮起藍(lán)色光表示儀器已打開;2. 打開 Cedex XS 控制軟件:打開配套電腦, 進(jìn)入Windows操作系統(tǒng);雙擊桌面上的Cedex XS 圖標(biāo) , 進(jìn)入 Cedex XS 控制中心;3. 調(diào)節(jié)白平衡: 首次安裝Cedex XS系統(tǒng)或移動(dòng)系統(tǒng)后必須調(diào)節(jié)白平衡。把樣品板支架拉出;點(diǎn)擊 Cedex XS 控制中心中的HWM鍵 , 打開硬件管理對話框;點(diǎn)擊 WHITE BALANC鍵進(jìn)行調(diào)節(jié)E, 結(jié)果將自動(dòng)保存;調(diào)節(jié)完畢后關(guān)

2、閉對話框。二、細(xì)胞計(jì)數(shù)與活性測定1. 樣品制備用培養(yǎng)基或PBS將樣品稀釋至細(xì)胞數(shù)不高于5× 106/ml;使用0.2%臺(tái)盼藍(lán)染色(一般為10 l 、 1:1): 臺(tái)盼藍(lán)對血清蛋白親和力更強(qiáng)若大量血清蛋白導(dǎo)致圖像背景過暗, 可以將樣品離心, 用無蛋白培養(yǎng)基或生理鹽水懸浮細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù);將細(xì)胞懸液充分混勻;用移液槍取細(xì)胞懸液加入樣品板, 每槽10 l; 可以一次測定八槽, 也可測定單槽。2. 進(jìn)樣 : 樣品板有八個(gè)槽, 一次可測定四個(gè)樣品槽。拉出樣品板支架;加有樣品方向朝里, 將樣品板放上支架;將支架推入計(jì)數(shù)儀, 有少許卡扣感表示已就位: 樣品槽位置指示燈表示樣品測定進(jìn)程。三、軟件設(shè)置:1

3、. 打開測定界面: 在 Cedex XS 控制中心點(diǎn)擊MEASUR鍵E, 進(jìn)入測定界面;2. 設(shè)置樣品參數(shù):在樣品參數(shù)欄輸入樣品名(Reactor ID), 可在下拉欄選擇或手動(dòng)輸入, 最多可輸入 21 個(gè)字符 ;輸入樣品編號(hào)(Sample ID), 最多 21 個(gè)字符 ; 若樣品名已存在, 軟件將自動(dòng)延續(xù)樣品編號(hào), 也可手動(dòng)重新輸入編號(hào);軟件將自動(dòng)記錄日期和時(shí)間, 表明樣品測定的實(shí)際時(shí)間點(diǎn)擊MI×鍵, 出現(xiàn)進(jìn)樣體積對話框;輸入?yún)?shù): 樣品量 (Sample V olume) 、臺(tái)盼藍(lán)用量(Dye Volume) 、稀釋劑用量 (Diluent V olume);系統(tǒng)將自動(dòng)計(jì)算稀釋比

4、例等, 可以手動(dòng)輸入注釋(Comments)。3. 設(shè)置測定與分析參數(shù):在分析參數(shù)欄選擇需要的精度水平(Precision): 精度水平表示單次測定樣品數(shù) , 最多 8 個(gè) ;選擇細(xì)胞類型, 默認(rèn)的細(xì)胞類型有: 標(biāo)準(zhǔn)大小細(xì)胞直徑約12-14 m;可識(shí)別對象 ; 小細(xì)胞直徑約8 m;系統(tǒng)自動(dòng)添加系統(tǒng)名和測定時(shí)間。四、開始測定點(diǎn)擊 START MEASUREM鍵EN; T測定多個(gè)樣品時(shí), 在彈出對話框后將樣品板支架推進(jìn)一格, 點(diǎn)擊確定自動(dòng)開始測定程序;重復(fù)上一步驟測定其他樣品;若測定樣品多于四個(gè), 可將支架抽出后樣品板調(diào)轉(zhuǎn)方向重新插入進(jìn)行上述測定程序 ;全部測定結(jié)束后關(guān)閉對話框。五、計(jì)數(shù)結(jié)果1.

5、在測定界面獲得結(jié)果測定程序完成后, 結(jié)果在測定界面的數(shù)據(jù)欄(Result Data) 顯示 , 數(shù)據(jù)欄有兩個(gè)表格 : 第一個(gè)表格顯示總細(xì)胞數(shù), 第二個(gè)表格顯示單次測定中每個(gè)樣品室的測定結(jié)果。兩個(gè)表中分別列出以下參數(shù): Viable Cell Conc.: 活細(xì)胞濃度 × 105/mL Total Cell Conc.: 總細(xì)胞濃度 × 105/mL Viability (%):細(xì)胞總數(shù)中活細(xì)胞的百分比 Total Cell Count: 測定總細(xì)胞數(shù) Avg Compactness: 活細(xì)胞與理想狀態(tài)細(xì)胞形狀的平均變異程度(1 表示細(xì)胞形狀均一) Avg Diameter:

6、 測定活細(xì)胞平均直徑 m Aggregate Rate (%): 成團(tuán)細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比值 Dead Cell Conc.: 死細(xì)胞濃度 × 105/mL Viable Cell Count: 測定活細(xì)胞數(shù) Dead Cell Count: 測定死細(xì)胞數(shù) Total Object Count: 全部測定數(shù) Total Object Conc.: 總濃度 × 105/mL Avg Object Diameter: 測定總?cè)后w平均直徑 m Avg Object Compactness: 所有測定群體與理想狀態(tài)細(xì)胞形狀的平均變異 程度。在單個(gè)樣品結(jié)果表中, 會(huì)有三項(xiàng)列在表頭: I

7、mage No.: 圖像編號(hào) Valid: 表示圖像質(zhì)量是否能夠達(dá)到分析要求 Excluded: 復(fù)選框以排除或包括該樣品在總結(jié)果表中的顯示2. 在柱形圖中看結(jié)果: 此結(jié)果不包括已經(jīng)由上述復(fù)選框選擇排除的計(jì)數(shù)結(jié)果在測定界面點(diǎn)擊HISTOGRAM鍵 S, 打開柱形圖對話框;可選擇以下項(xiàng)目:成團(tuán)細(xì)胞柱形圖細(xì)胞直徑柱形圖細(xì)胞形狀均一度柱形圖總?cè)褐睆街螆D六、查看圖像單副圖像: 在測定界面的右側(cè)顯示的是選定的單個(gè)樣品測定結(jié)果所對應(yīng)的圖像多幅圖像: 在圖像顯示區(qū)點(diǎn)擊VIEW IMAGES鍵出現(xiàn)圖像列表, 可顯示單次測定的多個(gè)樣品。1. 在圖像框查看圖像圖像框提供放大圖像, 系統(tǒng)自動(dòng)分析活細(xì)胞與死細(xì)胞,

8、并用綠色圈和紅色圈分別標(biāo)出 , 還可以使用下列功能: 雙擊圖像可打開大圖, 調(diào)節(jié)對比、亮度和焦距; 顯示或隱藏細(xì)胞的圈標(biāo)記 ; 瀏覽前后樣品的圖像;按住左鍵圈定可將選定圖像放大或自定義尺寸 , 右鍵點(diǎn)擊圖像進(jìn)行保存或復(fù) 制。七、系統(tǒng)優(yōu)化: 調(diào)節(jié)白平衡若圖像亮度不均衡, 則需調(diào)節(jié)白平衡, 影響圖像亮度的調(diào)節(jié)。把載物支架拉出;點(diǎn)擊 Cedex XS 控制中心中的HWM鍵 , 打開硬件管理對話框;點(diǎn)擊 WHITE BALANC鍵進(jìn)行調(diào)節(jié)E, 結(jié)果將自動(dòng)保存;調(diào)節(jié)完畢后關(guān)閉對話框。八、結(jié)果列表1. 點(diǎn)擊 Cedex XS 控制中心中的LIST 鍵 , 或在 Measurements菜單中選擇Measurement List, 可選擇以下功能:查找結(jié)果打印報(bào)