島津LC20AT 型高效液相色譜儀操作規(guī)程

1、島津LC-20AT 型高效液相色譜儀操作規(guī)程 一系統(tǒng)配置系統(tǒng)組成：本系統(tǒng)由 DGU-20A3 脫氣機、2 個LC-20AT 溶劑輸送泵（分為A，B 泵）、7725i 手動進樣器、色譜柱（2個C18柱，3個手性柱）、SPD-20A紫外-可見檢測器、LCSolution（Version.1.2）中文工作站等組成。二 準備工作1流動相準備：使用前按待檢測樣品的檢驗方法準備所需的流動相（水使用蒸餾水，其他有機溶劑要求色譜純，無機鹽緩沖液濃度一般低于20mmol/L）用合適的0.45m濾膜過濾（有機相和水相分別選用各自的專用濾膜，水相使用前必須過濾，有機相用肉眼觀察有顆粒時必須過濾）。 2色譜柱準備：根

2、據待檢測樣品的需要選用合適色譜柱，柱進出口方向應與流動相流向一致（檢查柱上“FLOW”流向）。 3樣品溶液配置：配置樣品和標準溶液，用合適0.45m的樣品過濾器過濾后待用。如檢測中發(fā)現(xiàn)檢測峰拖尾嚴重，可稀釋后使用。嚴禁使用未經處理的渾濁溶液進樣。 4檢查儀器各種部件的電源線、數(shù)據線和輸液管道是否連接正常。 三 開機、參數(shù)設定及平衡系統(tǒng)1開機：接通電源，依次開啟B泵、A泵、檢測器，待泵和檢測器自檢結束后打開電腦顯示器、主機，啟動工作站軟件。 2排氣泡或更換流動相的操作方法 1） 將A/B管路的吸濾器放入裝有準備好的流動相的儲液瓶中； 2） 逆時針轉動A/B泵的排液閥180o； 3） 按A/B泵的

3、【purge】鍵，pump指示燈亮，泵大約以9.9ml/min的流速沖洗，3min（可設定）后自動停止； 4） 將排液閥順時針旋轉到底，關閉排液閥。 5） 如管路中仍有氣泡，則重復以上操作直至氣泡排盡。 6） 如按以上方法不能排盡氣泡，從色譜柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中設流速為5 ml/min沖洗3分鐘，停泵后重新接上色譜柱并將流速重新設定為規(guī)定值。 3參數(shù)設定 1）波長設定：一般設為254nm。 2）流動相設定：流速開始不宜太高應為正常分析流速的5080 沖洗一段時間，等待柱壓平穩(wěn)后可調節(jié)到正常流速（調節(jié)流速時應該每次增減0.1ml/min，不宜調節(jié)過快，柱在線時流速一般不超過1ml/m

4、in）。流動相比例設為初始比例沖洗柱子，等待基線平衡。4平衡系統(tǒng)和色譜柱1）在工作站操作軟件上設定各項方法參數(shù)，系統(tǒng)至少需要 平衡0.5h ，色譜柱需沖洗至基線平穩(wěn)。2）等度洗脫方式 用檢驗方法規(guī)定的流動相沖洗系統(tǒng)，一般最少需6倍柱體積的流動相。 檢查各管路連接處是否漏夜，如漏夜應予以排除。 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應不超過1MPa。如超過則可判斷為柱前管路仍有氣泡，進行氣泡排除操作 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.1mV/min時，可認為系統(tǒng)已經達到平衡狀態(tài)，可以進樣。 3）梯度洗脫方式 以檢查方法規(guī)定的梯度初始條件平衡系統(tǒng)。 在進樣前運行12次空白梯度。 梯度洗脫后至

5、少需要10倍柱體積的初始比例流動相沖洗柱子至平衡才可再次進樣。4）如果使用前色譜柱中保存的流動相為純甲醇或純乙睛，而新流動相中含有緩沖鹽時，應先用純水沖洗色譜柱十分鐘左右再使用流動相，以免鹽析出損壞系統(tǒng)。 5）如系統(tǒng)為正相或反相交換使用，應先將所有管路用異丙醇清洗后再換新流動相使用。四數(shù)據采集1進樣前基線調零，點擊【Single Start】快捷方式，鍵入樣品ID,選擇數(shù)據存儲路徑及數(shù)據文件名，點擊【OK】 。2用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。 3在進樣閥處于“Inject”狀態(tài)時，插入進樣器，迅速旋轉至“l(fā)oad”狀態(tài)，注入樣品，旋回“inject”位置，抽出進樣針，進樣結束，開

6、始采集數(shù)據。4. 再次分析時待色譜柱平衡后重復上述操作。 5在不進樣時隨時插入封口針。五分析數(shù)據的處理和分析報告的打印1分析數(shù)據的處理：點擊工作站啟動圖標的【Postrun】進入數(shù)據分析，在左側數(shù)據欄里找到要分析的數(shù)據文件，雙擊，點擊左側輔助欄中的【Wizard】一步一步進行積分設置，積分完成后保存數(shù)據文件。2. 分析報告的打?。狐c擊左側輔助欄中的【Data Report】，選擇想要的報告模式，將處理好的數(shù)據文件拖曳到報告模式里，打印報告。 六清洗系統(tǒng)關機1手動進樣器清洗：用注射器吸20ml超純水后套上沖洗頭，將沖洗頭輕輕頂在進樣口上（不宜用力過大，否則容易損壞進樣口），使進樣閥保持在“l(fā)oad”位置，慢慢將水推入，水將通過注射針導入口、引導管和注射針密封圈，由樣品溢出管排出。 2色譜柱清洗：分析結束后繼續(xù)以分析中使用流動相沖洗10分鐘以上，待基線平穩(wěn)后關閉檢測器，繼續(xù)沖洗色譜柱10個體積。1） 如果流動相不含緩沖鹽，可以用甲醇：水70：30（或用純甲醇）直接沖洗30分鐘以上后把流速設為零，然后關閉所有儀器設備，順序為：先退出工作站軟件，再依