還原糖和總糖的測定

1、生物化學綜合實驗報告題 目：3, 5二硝基水楊酸比色法測定還原糖和總糖姓 名：學 號：同組成員：_分院（系）:_專業(yè)班級：指導教師：完成日期月 日1。實驗目的用比色法測定山芋中還原糖和總糖含量2。實驗原理先用已知濃度的葡萄糖標準溶液與DNS反應測其分光度，制得標準曲線，在測山芋中糖與DNS反應后的分光度 A從而得其總糖和還原糖含量。3。實驗儀器和試劑試劑： 1g/L 葡萄糖標準液、 3,5- 二硝基水楊酸、 6mol/L HCl，6mol/L NaOH儀器 :25 ， 100ml 容量瓶、 1， 5ml 吸量管、 50ml 移液管、 100ml 量筒、試管、滴管、離心管、玻璃棒、洗耳球、 10

2、0ml 容量 瓶、比色皿 離心機、分光光度計、恒溫水箱4。實驗步驟一、取六只比色管向其中加入葡萄糖標液0、0。2、0。4、0.6 、0。 8、1.0 毫升在加入蒸餾水 2。0、1.8 、1。6、1。4、1.2、1.0毫升，最后向其中各加入DNS試劑1。5毫升混合均勻后 100 攝恒溫水浴 5min ，冷卻后加入蒸餾水至 25ml 刻 度線，用 1 號樣調(diào)零，測其分光度，制得標準曲線。二、還原糖提取：取 3g山芋粉，加入30ml水，攪勻后在50 攝水中保溫20min，離心，取濾液，用100ml容量瓶定容得還 原糖待測液 .總糖提?。喝?.2克山芋粉，加入試管中吸取5ml HCL溶液，8ml蒸餾水

3、攪勻,100攝下恒溫水浴 30min，冷卻，NaOH調(diào)節(jié) PH至中性，離心,濾液用100ml容量瓶定容，得總糖待測液. 測定時取5支比色管分別加入還原糖 0、1。0、1。0、0、0 毫升，總糖0、0、0、0.5、0。5毫升，蒸餾水2。0、1。0、1。0、1。5、1。5毫升,DNS試劑1.5毫升100攝恒溫水浴5min后冷卻，稀釋至 25毫升用一號管調(diào)節(jié)分光度為0，測總糖和還原糖的分光度.5數(shù)據(jù)處理葡萄糖標準曲線表管號012345含糖總量（mg00.20o 40o 60o 81葡萄糖標液（ml）”00.2r 0.4 10o 60o 81蒸餾水（ml）21.81o 61.41o 21DNS劑（ml

4、）1.51。51.51o 51.51.5吸光度A100.04:0o 1170o 1920.3350o 46皿蔔萄糖鍛光度Ay二Q* 4082k山芋中還原糖和總糖測定表管號空白66'77'還原糖待測品（ml）0110P 0總糖待測液（ml）0000。50.5蒸餾水（ml）2111.51。5DN熨劑（ml）1.51.51.51。51。5 1吸光度A00。0040.0071.3421。435測量得還原糖和總糖:m還原糖=0。4235*( A6+A6)/2=0。0019mgm總糖=0。4235 *( A7+A7') /2=0.1910mg還原糖=m曲線葡萄糖* （V總N測）/m樣品* 100%3還原糖=0.0019* （100/1）/3000 衣 100% =0。0063%3總糖=m曲線葡萄糖* （V總/V測）/m樣品* 100%3 總糖=0.191 伙（100/0。5） /200 衣 100% =19。1%6。注意事項離心時中心對稱的離心管質(zhì)量要基本相等 可以增加山芋粉的質(zhì)量來使得還原糖易于測量7思考題DNS比色法是如何對總糖進行測定的？用 HCl 水解總糖中的非還原性糖從而得到還原糖進