腫瘤分子生物學(xué)復(fù)習(xí)資料

1、1. 腫瘤流行病學(xué)：研究腫瘤在人群中分布和影響因素，探索各種不同腫瘤的病因和危險(xiǎn)因素，以制定相應(yīng)預(yù)防和控制措施，并對(duì)這些措施加以評(píng)價(jià)，可以用四個(gè)詞概括：Distribution、Etiology、Prevention、Evaluation。2. 肺癌的危險(xiǎn)因素和保護(hù)因素： （1）.危險(xiǎn)因素：吸煙、新鮮蔬菜攝入少、呼吸系統(tǒng)疾病、低體質(zhì)指數(shù)、心理因素、廚房油煙、大氣污染、遺傳易感性。 （2）.保護(hù)因素：新鮮蔬菜水果、醋、蔥蒜、辛辣食品、經(jīng)常參加體育鍛煉、飲茶、常吃奶及奶制品和蛋類、-胡蘿卜素、維生素E、膳食纖維。3. 肝癌危險(xiǎn)因素和保護(hù)因素 （一）.危險(xiǎn)因素：（1）.生物學(xué)因素：病毒（病毒性肝炎）

2、、細(xì)菌（黃曲霉毒素）、寄生蟲（肝吸蟲）； （2）.化學(xué)因素：飲水污染、吸煙、飲酒、有機(jī)溶劑、藥物（癲癇藥物、降壓藥、避孕藥、解熱鎮(zhèn)痛藥、激素類藥物）； （3）.營(yíng)養(yǎng)因素：油炸食品、非新鮮水果、腌制食品、高脂高鹽食品； （4）.社會(huì)心理因素：抑郁、精神壓力 （5）.遺傳因素. （二）.保護(hù)因素： 飲綠茶、新鮮蔬菜、無(wú)油煙、接種乙肝疫苗。4. 癌基因及激活機(jī)制：（一）.癌基因：細(xì)胞中固有的一類基因，正常情況下參與細(xì)胞增殖與分化的調(diào)控，當(dāng)基因結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變異，能促使正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。激活機(jī)制：（1）基因點(diǎn)突變（主要活化方式）：?jiǎn)蝹€(gè)堿基替換 （2）DNA擴(kuò)增：原癌基因數(shù)量增加或表達(dá)活性增強(qiáng)； （

3、3）染色體易位重排：原癌基因可能移至強(qiáng)啟動(dòng)子或增強(qiáng)子附近被激活 （4）癌基因甲基化改變：發(fā)生低甲基化改變，導(dǎo)致癌基因或相關(guān)因子大量表達(dá)。 （5）獲得啟動(dòng)子與增強(qiáng)子，基因過(guò)量表達(dá)（二）.抑癌基因： 即腫瘤抑制基因，是指一大類可以抑制細(xì)胞分裂，并有抑制癌變作用的基因，在特定條件下失去正常功能而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。 失活機(jī)制： （1）.基因突變: 重要方式。點(diǎn)突變、無(wú)義突變、插入突變和缺失突變。 （2）.純合性丟失： 等位基因丟失，導(dǎo)致編碼的功能蛋白不能表達(dá)； （3）.雜合性丟失： 指細(xì)胞有絲分裂異常導(dǎo)致一個(gè)與突變基因?qū)?yīng)的正常等位基因丟失。 在腫瘤發(fā)生過(guò)程中，抑癌基因一個(gè)等位基因首先因某些原因失活，另一

4、個(gè)等位基因被同源染色體復(fù)雜拷貝取代、突變、缺失等失活，成為純合子而失去功能。 （4）.抑癌基因產(chǎn)物通過(guò)與癌基因產(chǎn)物相結(jié)合而失活。5.P53基因的功能：DNA結(jié)合功能、調(diào)控細(xì)胞周期、DNA修復(fù)、調(diào)控細(xì)胞凋亡、參與細(xì)胞分化和基因可塑性調(diào)控。 （1）.調(diào)控細(xì)胞周期：作用于細(xì)胞周期的G1、G2/M和G0等checkpoint。 （2）.與DNA結(jié)合，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄。P53蛋白誘導(dǎo)P21蛋白，并以此蛋白為介質(zhì)，抑制細(xì)胞分化和增殖，P53蛋白控制細(xì)胞從G0到G1期轉(zhuǎn)變，并在G1期生長(zhǎng)限制位點(diǎn)控制細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期后的增殖。 （3）.細(xì)胞損傷時(shí)，引發(fā)凋亡起到抑癌作用。 （4）.P53基因突變可能導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)限生長(zhǎng)。6

5、.G protein 即GTP binding protein。 與膜受體偶聯(lián)的三聚體G蛋白，由、三種亞基組成，當(dāng)受體未與配體結(jié)合時(shí)，三個(gè)亞基呈聚合狀態(tài)，此時(shí)亞基與GDP結(jié)合，無(wú)活性。 當(dāng)受體與配體結(jié)合時(shí)，GTP取代GDP與亞基結(jié)合，G蛋白被激活，隨之解聚成G-GTP和G兩部分，并且不再與受體結(jié)合。 通常G-GTP結(jié)合并激活/抑制質(zhì)膜中某種酶，再由這種酶催化產(chǎn)生第二信使。之后G把與之結(jié)合的GTP水解成GDP和Pi，G失活，重新與G亞基結(jié)合，形成無(wú)活性的G蛋白。7.第二信使 相對(duì)于細(xì)胞外信號(hào)分子（第一信使）而言，第一信使與受體作用后在細(xì)胞內(nèi)最早產(chǎn)生的信號(hào)分子稱為第二信使。目前公認(rèn)的有：cAMP、

6、cGMP、IP3、DG和Ca2+。8.受體酪氨酸激酶（RTK） 細(xì)胞內(nèi)具有酪氨酸激酶活性的跨膜結(jié)構(gòu)的酶蛋白受體。 其胞外區(qū)與生長(zhǎng)因子配體結(jié)合，然后激活胞內(nèi)段的酶活性區(qū)，啟動(dòng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、轉(zhuǎn)化及胚胎發(fā)育和腫瘤形成。如EGF、PDGF等細(xì)胞膜上生長(zhǎng)因子受體。9.MAP kinase cascade MAPK級(jí)聯(lián)系統(tǒng)是細(xì)胞適應(yīng)外界環(huán)境變化的一種非常重要的調(diào)控機(jī)制。由3種蛋白激酶組成MAPK、MAPKK、MAPKKK。上游因子激活MAPKKK，發(fā)生磷酸化MAPKK，磷酸化MAPK活化下游轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。把外界信號(hào)一級(jí)一級(jí)傳到細(xì)胞核，使細(xì)胞做出應(yīng)答。參與細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、分裂及細(xì)胞

7、間功能同步及細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。10.FAK Focal Adhesion Kinase一種非受體型胞漿酪氨酸激酶，有胞內(nèi)第一信使之稱，F(xiàn)AK屬于看家基因，是Src癌基因底物，是一個(gè)高度磷酸化蛋白，參與細(xì)胞黏附、鋪展、增殖、遷移及凋亡。11.細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的基本概念、過(guò)程和特征 （1）.概念：把細(xì)胞外信息轉(zhuǎn)化為細(xì)胞內(nèi)信息并誘導(dǎo)基因表達(dá)改變和細(xì)胞代謝途徑改變，從而使細(xì)胞對(duì)外界環(huán)境做出改變的過(guò)程。 （2）. 特征：受體+受體后信號(hào)通路+作用終端 細(xì)胞信號(hào)通過(guò)受體或類似于受體的物質(zhì)激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，觸發(fā)離子通道開放、蛋白質(zhì)可逆磷酸化反應(yīng)等變化，進(jìn)而導(dǎo)致一系列生物效應(yīng)。不同的信號(hào)通路之間有相互聯(lián)系和作用，形

8、成復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。 （3）.過(guò)程：1）.G蛋白偶聯(lián)受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 受體+配體受體活化GTP取代GDP同G蛋白結(jié)合G蛋白分離（G-GTP、G）G蛋白與受體分離G-GTP結(jié)合并激活或抑制某種酶產(chǎn)生第二信使。 產(chǎn)生第二信使主要有兩條途徑： cAMP途徑：G蛋白作用于腺苷酸環(huán)化酶，調(diào)節(jié)cAMP產(chǎn)生。 IP3、DG和Ca2+途徑G蛋白作用于磷脂酶C(PLC)IP3和DG內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放Ca2+ 2）酶偶聯(lián)受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)12.磷脂酰肌醇衍生的主要第二信使及其在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的作用： （1）.DAG甘油二酯：PLC水解PIP2后生成DAG，激活PKC，把靶蛋白分子上絲氨酸和谷氨酸甲基化。參與細(xì)胞生長(zhǎng)與分化、細(xì)胞

9、代謝和轉(zhuǎn)錄激活等。 （2）.IP3肌醇-1，4，5三磷酸 細(xì)胞膜上的IP3分子擴(kuò)散入胞漿，與滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上IP3特異性受體（同時(shí)也是Ca2+通道）結(jié)合，Ca2+通道打開，Ca2+擴(kuò)散入胞漿，與各種靶分子結(jié)合，觸發(fā)特異性反應(yīng)發(fā)生。13末端分化細(xì)胞：細(xì)胞具有末端分化結(jié)構(gòu)，失去分裂能力，一旦分化形成即維持其分化狀態(tài)直至死亡。如神經(jīng)細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、紅細(xì)胞等。14.靜息細(xì)胞： 在正常情況下不分裂，但適宜刺激物可誘導(dǎo)其開始合成DNA并進(jìn)入細(xì)胞周期的細(xì)胞。如肝細(xì)胞、淋巴細(xì)胞。15.死亡受體：存在于細(xì)胞表面的一種特殊感受器，能識(shí)別外來(lái)信號(hào)，并迅速啟動(dòng)細(xì)胞凋亡機(jī)制。死亡信號(hào)：Fas配體+Fas抗體/可溶性胞外脫落

10、蛋白質(zhì)。Fas分子與Fas配體結(jié)合，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)死亡域，募集細(xì)胞中的Fas相關(guān)結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)（caspase-8前提），F(xiàn)ADD+Fas+caspase-8形成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體，引起細(xì)胞或核發(fā)生凋亡形態(tài)變化，如DNA梯狀降解，染色體凝集和凋亡小體形成等。16.TUNEL脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法定量測(cè)定凋亡細(xì)胞的方法。凋亡時(shí)，染色體雙鏈會(huì)出現(xiàn)許多不對(duì)稱的斷裂點(diǎn)，暴露出3-OH末端，在脫氧核糖核酸酶末端轉(zhuǎn)移酶TdT作用下，不需要模版就可以催化地高辛、生物素或熒光素標(biāo)記的dNTP結(jié)合到DNA的3-末端，再利用免疫組化方法檢測(cè)。靈敏、準(zhǔn)確、高速。17.細(xì)胞周期的驅(qū)動(dòng)機(jī)制 細(xì)胞周期是一

11、種周而復(fù)始的運(yùn)動(dòng)，其推動(dòng)力主要來(lái)自于周期依賴性蛋白激酶，這些酶磷酸化適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)，進(jìn)而使細(xì)胞周期時(shí)相轉(zhuǎn)換。Cyclin負(fù)責(zé)正調(diào)控，與CDK結(jié)合使CDK活化，CK2負(fù)責(zé)負(fù)調(diào)控，與CDK-cyclin結(jié)合，抑制其活性，這三者組成了負(fù)責(zé)細(xì)胞周期運(yùn)動(dòng)的驅(qū)動(dòng)裝置。18.細(xì)胞凋亡的誘發(fā)因素：（1）.物理性：射線（紫外線、射線）、溫度刺激（冷、熱）（2）.化學(xué)及生物誘導(dǎo)因子：活性氧基團(tuán)和分子、鈣離子載體、視黃酸、細(xì)胞毒素、DNA和蛋白質(zhì)合成的抑制劑，正常生理因子失調(diào)、腫瘤壞死因子。19.免疫編輯： 腫瘤細(xì)胞與免疫系統(tǒng)之間相互作用的動(dòng)態(tài)過(guò)程，是免疫系統(tǒng)的選擇機(jī)制，能夠選擇低免疫原性腫瘤細(xì)胞促進(jìn)其生長(zhǎng)。惡性腫瘤

12、的發(fā)生發(fā)展，受到免疫系統(tǒng)的編輯作用，主要包括三個(gè)階段：消除（淋巴細(xì)胞識(shí)別和消除新的惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞）、靜態(tài)平衡（腫瘤細(xì)胞在細(xì)胞因子和淋巴細(xì)胞作用下，進(jìn)入休眠狀態(tài)并維持相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間）和逃逸（免疫系統(tǒng)發(fā)生波動(dòng)和弱化時(shí)，潛伏的腫瘤細(xì)胞逃逸，進(jìn)入快速生長(zhǎng)，病情惡化）。20.免疫監(jiān)視： 在癌細(xì)胞出現(xiàn)早期，機(jī)體免疫系統(tǒng)可識(shí)別這些“非己”細(xì)胞，并通過(guò)細(xì)胞免疫機(jī)制特異地被清除。21.免疫調(diào)節(jié)性細(xì)胞的種類及其在腫瘤中的應(yīng)用：（一）.CD4+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）：腫瘤微環(huán)境中存在的CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞，可以顯著抑制針對(duì)腫瘤細(xì)胞的天然和過(guò)繼性免疫反應(yīng)。（二）.腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞：

13、（1）.經(jīng)典巨噬細(xì)胞M1：殺死微生物、攻擊腫瘤細(xì)胞，釋放多種炎性介質(zhì)。 （2）.TAM/M2細(xì)胞：調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)Th2反應(yīng)，啟動(dòng)血管新生和組織重建。（三）.髓性來(lái)源的抑制性細(xì)胞：MDSC。主要通過(guò)產(chǎn)生NO和高水平Aginase抑制T細(xì)胞功能。（四）.CD8調(diào)節(jié)性T細(xì)胞:CD8細(xì)胞亞群含有Treg細(xì)胞，功能上與CD4+CD25+Treg相似。（五）.NKT調(diào)節(jié)細(xì)胞 在抗腫瘤中起著十分重要的作用，具有免疫抑制作用。22.腫瘤轉(zhuǎn)移 腫瘤轉(zhuǎn)移是指惡性腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)腫瘤，通過(guò)各種轉(zhuǎn)移方式，到達(dá)繼發(fā)組織或器官后得以繼續(xù)增殖生長(zhǎng)，形成與原發(fā)腫瘤相同性質(zhì)的繼發(fā)腫瘤的全過(guò)程。是惡性腫瘤的基本生物學(xué)特征，臨

14、床上絕大多數(shù)腫瘤患者的致死因素。23.腫瘤轉(zhuǎn)移的基本過(guò)程：早期原發(fā)癌生長(zhǎng)腫瘤血管生成腫瘤細(xì)胞脫落并侵入基質(zhì)進(jìn)入脈管系統(tǒng)癌栓形成繼發(fā)組織器官定位生長(zhǎng)，形成新生血管轉(zhuǎn)移癌繼續(xù)擴(kuò)散。24.腫瘤微環(huán)境：腫瘤在生長(zhǎng)過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、免疫細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等相互作用形成的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的特殊環(huán)境。具有腫瘤組織血供不足、間質(zhì)壓力高、營(yíng)養(yǎng)相對(duì)缺乏等特點(diǎn)，最顯著特征是腫瘤微環(huán)境的異質(zhì)性。25.腫瘤相關(guān)的基質(zhì)細(xì)胞有哪些，簡(jiǎn)述其來(lái)源和形成及在腫瘤發(fā)展中的作用。(一).腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞：（1）.來(lái)源：腫瘤周圍間質(zhì)中的成纖維細(xì)胞；血管周圍細(xì)胞；骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞；經(jīng)過(guò)EMT（上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化）上

15、皮腫瘤細(xì)胞；經(jīng)過(guò)EMT（內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化）血管內(nèi)皮細(xì)胞。（2）.形成：組織損傷或腫瘤組織產(chǎn)生的不同刺激因子（包括生長(zhǎng)因子如TGF-、活性氧簇、補(bǔ)體因子和細(xì)胞外基質(zhì)成分）作用后形成。（3）.作用：TAFs誘導(dǎo)和促進(jìn)上皮細(xì)胞發(fā)生瘤性轉(zhuǎn)變；與腫瘤細(xì)胞相互作用促進(jìn)腫瘤血管生成，提高腫瘤惡性程度：分泌趨化因子SDF-1，受體CXCR4在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，招募造血干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞，刺激血管生成，修復(fù)損傷，上皮細(xì)胞層再生； 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)；（二）.腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細(xì)胞：不成熟和快速分裂狀態(tài)；（三）.腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞26.腫瘤干細(xì)胞 又稱癌干細(xì)胞，cancer stem cells，簡(jiǎn)稱CS

16、C，是惡性腫瘤中能夠自我更新及分化形成腫瘤中多種癌細(xì)胞類型的原始癌細(xì)胞。27.簡(jiǎn)述腫瘤干細(xì)胞的鑒定（一）.致瘤實(shí)驗(yàn)：癌細(xì)胞群中只有CSC具有無(wú)限增殖能力，而絕大多數(shù)分化的癌細(xì)胞增殖能力有限，因而將少量癌細(xì)胞植入NOD-SCID免疫缺陷小鼠后，只有CSC能夠形成腫瘤，而分化的癌細(xì)胞不能致瘤。評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：干細(xì)胞植入2000個(gè)或以下細(xì)胞能形成腫瘤，而非干細(xì)胞在相同的實(shí)驗(yàn)條件下需增加100倍或以上細(xì)胞數(shù)量。（二）.球體形成實(shí)驗(yàn)：成體干細(xì)胞的一個(gè)重要特性是可以在含細(xì)胞因子的無(wú)血清培養(yǎng)基中形成懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞團(tuán)，稱為球體。CSC也具有球體形成能力，不同來(lái)源的干細(xì)胞需要不同的生長(zhǎng)因子組合才能形成球體，如神經(jīng)球培

17、養(yǎng)需表皮生長(zhǎng)因子。（三）.標(biāo)記滯留實(shí)驗(yàn)：干細(xì)胞具有不對(duì)稱分裂特性。在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)加入核苷酸前體如溴脫氧尿嘧啶BrdU，使其滲入到分裂細(xì)胞的DNA中，然后去除標(biāo)記物繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間，用抗BrdU熒光抗體進(jìn)行染色，干細(xì)胞表現(xiàn)為高熒度強(qiáng)光，因而又稱為標(biāo)記滯留細(xì)胞（LRC）。（四）.集落形成實(shí)驗(yàn)：CSC具有無(wú)限增殖能力，因而在瓊脂糖凝膠或Matrigel生物膠上培養(yǎng)時(shí)具有顯著的集落形成率，而分化的癌細(xì)胞增殖能力有限，通常不能形成集落。（五）.侵襲實(shí)驗(yàn)：將Matrigel生物膠涂鋪在8um孔徑Transwell網(wǎng)上模擬基底膜，將待測(cè)細(xì)胞置于上層小室內(nèi)，下層孔內(nèi)放置10%血清的培養(yǎng)基及細(xì)胞因子，具有轉(zhuǎn)移潛能

18、的細(xì)胞在血清或細(xì)胞因子的刺激下穿越生物膠，可以進(jìn)行計(jì)數(shù)定量分析。（六）.耐藥實(shí)驗(yàn)：CSC具有耐藥性。一些CSC表達(dá)ABC膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，此類轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的底物MTT比色法、核素標(biāo)記的核苷酸摻入法、集落培養(yǎng)法等。28.腫瘤標(biāo)志物： 是腫瘤細(xì)胞本身存在或分泌的特異性物質(zhì)，用于輔助診斷和臨床監(jiān)測(cè)。必須由惡性腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生，可以在血液、組織液、分泌液或腫瘤組織中檢測(cè)出。不存在于正常組織和良性疾病中。在該腫瘤的大多數(shù)患者中都能檢測(cè)出。最尚無(wú)明確的臨床證據(jù)之前最好就能測(cè)出。能反應(yīng)腫瘤大小。在一定程度上能有助于估計(jì)治療效果、預(yù)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。29.腫瘤分子診斷中的新技術(shù)：（一）.比較基因組雜交技術(shù)CGH: 基本原理

19、：將待測(cè)樣品基因組DNA和正常對(duì)照基因組DNA分別用兩種不同顏色的熒光素標(biāo)記，與正常中期染色體進(jìn)行原位抑制雜交，通過(guò)檢測(cè)基因組各個(gè)位點(diǎn)兩種標(biāo)記熒光素的強(qiáng)度，進(jìn)行定量對(duì)比分析，即可探明待測(cè)樣本基因組DNA拷貝數(shù)的變化。（二）.mRNA差異展示技術(shù)： 原理：根據(jù)mRNA末端為polyA結(jié)構(gòu)，而與polyA相鄰的兩個(gè)堿基的組合只有12種。與此對(duì)應(yīng)合成12種引物，即在oligodT后面加上兩個(gè)相鄰堿基（又稱錨堿基），形成與polyA的3端結(jié)合的錨引物，每種可以錨定mRNA總數(shù)的1/12。每種引物可以覆蓋1/12的mRNA群體，用每種引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將獲得1/12的cDNA亞群體。然后用一個(gè)5端的任意引

20、物對(duì)每個(gè)cDNA亞群進(jìn)行PCR擴(kuò)增，來(lái)自不同mRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物大小是不同的，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離，可將500bp以內(nèi)的分子明顯分辨出來(lái)。在PCR反應(yīng)時(shí)加入熒光素、地高辛等標(biāo)記，電泳后進(jìn)行顯色反應(yīng)，就能發(fā)現(xiàn)有差異的DNA片段，即差異表達(dá)基因的cDNA。從電泳膠上切下這些片段，擴(kuò)增后進(jìn)行測(cè)序，并與GenBank中已知序列進(jìn)行同源性比較，即可獲得該片段的基因類型或發(fā)現(xiàn)新的全長(zhǎng)基因或EST。（三）.基因表達(dá)系列分析技術(shù)(SAGE):原理：（1）.從轉(zhuǎn)錄本3端特定位置分離出該轉(zhuǎn)錄本特異的標(biāo)簽包含有足夠的能代表該轉(zhuǎn)錄本所需的信息，能夠唯一確認(rèn)一種轉(zhuǎn)錄物；（2）.分離自不同轉(zhuǎn)錄本的標(biāo)簽可以被串聯(lián)成一定長(zhǎng)度

21、后克隆入載體，并以連續(xù)的數(shù)據(jù)形式輸入計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理，能對(duì)數(shù)以千計(jì)的轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行分析；（3）.同一標(biāo)簽的重復(fù)次數(shù)代表該轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)水平。（四）基因芯片技術(shù)： 將大量探針（基因或基因片段）有序低固定在固相支持物如玻璃片上，與待測(cè)樣本中的靶基因按堿基配對(duì)原理進(jìn)行雜交，再通過(guò)激光共聚焦熒光檢測(cè)、電子計(jì)算機(jī)系統(tǒng)分析。迅速得出待測(cè)樣本基因表達(dá)信息的分子生物學(xué)和遺傳學(xué)方法。一種對(duì)全基因組基因的表達(dá)水平進(jìn)行同步分析。（五）.蛋白質(zhì)芯片技術(shù):將純化的多肽、蛋白質(zhì)或其它分子作為探針高密度排列固定于固相支持介質(zhì)表面而構(gòu)成微陣列，根據(jù)探針物理、化學(xué)或生物學(xué)特性的不同，選擇性低從待測(cè)生物樣品中捕獲蛋白。經(jīng)原位清洗除去未與

22、探針結(jié)合的分子，再利用各種檢測(cè)技術(shù)定性、定量分析芯片上結(jié)合的蛋白。（六）.在常規(guī)PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記探針，通過(guò)熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能。30.基因診斷與基因治療： （1）.基因治療：依靠導(dǎo)入人體外源性遺傳物質(zhì)來(lái)治療疾病的治療手段。包括糾正人自身基因的結(jié)構(gòu)或功能上的錯(cuò)亂，或依靠外源遺傳物質(zhì)殺滅病變細(xì)胞，或抑制外源病原體遺傳物質(zhì)的復(fù)制。 （2）.基因診斷：分析DNA或RNA序列，從而發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的基因型、突變、修飾或微生物，并用于醫(yī)學(xué)中。31.Ex vivo：將攜帶外源基因的載體在體外導(dǎo)入自體或異體細(xì)胞，組成“基因工程化細(xì)胞”，經(jīng)體外細(xì)胞擴(kuò)增后，回輸患者體內(nèi)，使外源基因表達(dá)改善癥狀。32.In vivo： 不需細(xì)胞移植，而直接將外源遺傳物質(zhì)注射至體內(nèi)，如DNA通過(guò)載體和導(dǎo)入系統(tǒng)（如脂質(zhì)體）注射，使其在體內(nèi)轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮治療效果。33.病毒載體: 是一種整合了治療基因并經(jīng)過(guò)了改裝的特殊生物體，包括逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)載體、單純皰疹病