農(nóng)藥殘留與分析

1、教 材：農(nóng)藥殘留分析岳永德 主編參考教材：色譜分析樣品處理王立 主編 食品衛(wèi)生國家標(biāo)準(zhǔn)匯編第一章第一章 緒論緒論 第二章第二章 農(nóng)藥殘留樣品采集農(nóng)藥殘留樣品采集 第三章第三章 樣品制備樣品制備 第四章第四章 農(nóng)藥殘留分析的農(nóng)藥殘留分析的 質(zhì)量控制質(zhì)量控制 第五章第五章 農(nóng)藥殘留測(cè)定方法農(nóng)藥殘留測(cè)定方法 第六章第六章 農(nóng)藥殘留的酶抑制劑法與免疫測(cè)定方法農(nóng)藥殘留的酶抑制劑法與免疫測(cè)定方法 第七章第七章 農(nóng)藥多殘留分析農(nóng)藥多殘留分析 第八章第八章 殺蟲劑殘留分析殺蟲劑殘留分析 第九章第九章 殺菌劑殘留分析殺菌劑殘留分析 第十章第十章 除草劑殘留量測(cè)定除草劑殘留量測(cè)定 第十一章第十一章 農(nóng)藥殘留法規(guī)與

2、管理農(nóng)藥殘留法規(guī)與管理 一、農(nóng)藥殘留和殘一、農(nóng)藥殘留和殘留毒性留毒性1 1、農(nóng)藥殘留的定義、農(nóng)藥殘留的定義2 2、農(nóng)藥殘留的來源、農(nóng)藥殘留的來源3 3、農(nóng)藥殘留毒性、農(nóng)藥殘留毒性二、農(nóng)藥殘留分析二、農(nóng)藥殘留分析1 1、分析特點(diǎn)、分析特點(diǎn)2 2、分析方法和程序、分析方法和程序3 3、分析方法的選擇、分析方法的選擇 1 1、農(nóng)藥定義、農(nóng)藥定義 廣義：農(nóng)業(yè)上使用的化學(xué)品 狹義：用于防治農(nóng)、林有害生物有害生物的化學(xué)藥劑，以及為改善其理化性狀而用的輔助劑。 2 2、農(nóng)藥殘留的定義、農(nóng)藥殘留的定義 3 3、農(nóng)藥殘留的來源、農(nóng)藥殘留的來源 水 空氣 土壤 環(huán)境因子 人為 4 4、農(nóng)藥殘留毒性、農(nóng)藥殘留毒性

3、因攝入或長時(shí)間重復(fù)暴露農(nóng)藥殘留而對(duì)人、畜以及有益生物產(chǎn)生急性或亞急性及慢性中毒。5 5、農(nóng)藥殘留毒性的類型、農(nóng)藥殘留毒性的類型 化學(xué)穩(wěn)定性：六六六、DDT 三致性：致癌、致畸、致突變 環(huán)境激素化合物 遲發(fā)性神經(jīng)毒性 6 6、農(nóng)藥的降解（半衰期）、農(nóng)藥的降解（半衰期） 溶解性：地下水 環(huán)境因子：溫度、降水、陽光、風(fēng) 稀釋作用：植物的吸收1 1、分析特點(diǎn)、分析特點(diǎn) 殘留水平低（kg、g、mg） 分析過程的復(fù)雜性 技術(shù)要求提高 2 2、分析方法和程序、分析方法和程序分析方法： 單一成分殘留 多種成分殘留同一類農(nóng)藥多種農(nóng)藥2 2、分析方法和程序、分析方法和程序分析程序： 樣品采集 樣品預(yù)處理 樣品制備

4、 分析測(cè)定3 3、分析方法的選擇因素、分析方法的選擇因素 農(nóng)藥的理化特性、送檢樣人的要求； 單殘留或多殘留方法； 最大殘留限量、方法檢測(cè)限、最大殘留限量、方法檢測(cè)限、總誤差； 分析方法的有效性； 分析時(shí)間和費(fèi)用1、容許最大限量（容許最大限量（Permissible levelPermissible level） 在新鮮食品中允許的最大殘留限界。PL =PL = S S F F X X 50 50 X X：日攝取量（：日攝取量（ppmppm）S S：安全系數(shù)：安全系數(shù)F F：食品的消費(fèi)量：食品的消費(fèi)量2 2、可接受的日攝入量、可接受的日攝入量(ADI) (ADI) （Acceptable Dai

5、ly IntakeAcceptable Daily Intake） 指在一生中，對(duì)消費(fèi)者健康沒有可感知危險(xiǎn)的日攝入量。 單位為：mg/kg/day3、臨時(shí)可接受日攝入量（臨時(shí)可接受日攝入量（TADITADI） 指可以獲得足夠的以致額外的生化、毒性以及其它所需數(shù)據(jù)，而確定的有限時(shí)期內(nèi)可接受的日攝入量。TADITADI ADI ADI 4、最大殘留限制、最大殘留限制(MRL) (MRL) 指由食品營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)推薦的，食品或動(dòng)物飼料中允許的農(nóng)藥殘留物的最大濃度（毫克/公斤）。是根據(jù)在毒理學(xué)上認(rèn)為可以接受的食品農(nóng)藥殘留量制定的。 安全、環(huán)保、高效、經(jīng)濟(jì) 新技術(shù)（樣品處理技術(shù)） 檢測(cè)上采用多殘留分析方

6、法 酶聯(lián)免疫技術(shù) 分析方法的標(biāo)準(zhǔn)化 質(zhì)量和健康意識(shí) 一、樣品的種類一、樣品的種類二、取樣方法二、取樣方法三、樣品的包裝、記錄和貯存三、樣品的包裝、記錄和貯存四、樣品的預(yù)處理四、樣品的預(yù)處理 1 1、主觀樣品、主觀樣品 為研究研究農(nóng)藥殘留量與各種因素的關(guān)系，從設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)采集的樣品。 2 2、客觀樣品、客觀樣品 監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)樣品和執(zhí)法樣品，測(cè)定的農(nóng)藥殘留種類是未知的或施藥背景不清楚的樣品。1 1、實(shí)驗(yàn)室樣品、實(shí)驗(yàn)室樣品 從群體采集的送到殘留分析實(shí)驗(yàn)室的樣品。2 2、檢測(cè)樣品、檢測(cè)樣品 實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過縮分減量或經(jīng)過精制后的樣品。3 3、檢測(cè)樣份、檢測(cè)樣份 從檢測(cè)樣品中稱取的用于分析的樣品。4 4、檢測(cè)

7、溶液、檢測(cè)溶液 經(jīng)過提取、凈化后進(jìn)入待測(cè)狀態(tài)。1 1、取樣原則、取樣原則 代表性 方法與目的保持一致 精度要求 防止化學(xué)變化或丟失 防止污染2 2、取樣方法、取樣方法 靜態(tài)群體中取樣 動(dòng)態(tài)群體中取樣3 3、農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)及取樣、農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)及取樣 農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)的目的和要求 農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)的內(nèi)容 a、農(nóng)藥殘留動(dòng)態(tài)試驗(yàn) b、施藥因素與最終殘留量水平相關(guān)性 c、農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)樣品的采集4 4、商品取樣分類、商品取樣分類 監(jiān)測(cè)調(diào)查取樣：隨機(jī)、概率、分布水平 執(zhí)法取樣：強(qiáng)制性、超標(biāo)與否5 5、商品取樣量要求、商品取樣量要求 小的或輕的產(chǎn)品 1.01.5Kg 中等大小產(chǎn)品 2.02.5Kg

8、大的產(chǎn)品 4.05.0Kg 肉、禽、魚 1.01.5Kg 谷物和制品 0.51.0Kg 6 6、不同樣品的采集要求、不同樣品的采集要求 根莖類蔬菜 采集整個(gè)實(shí)體 葉類蔬菜 除去腐爛和枯萎部分 豆類 整個(gè)果實(shí) 果類蔬菜 去除莖部 谷物 整個(gè)籽粒 肉類 整體 標(biāo)簽（2個(gè)）編號(hào)：樣品名稱：采樣時(shí)間：地點(diǎn)：要求：要求： 溫度 濕度 光照 單獨(dú)存放 粉狀物 谷物 小體積水果和蔬菜 大體積水果和蔬菜 液體樣品 土壤 對(duì)含水量較高的樣品采樣方法對(duì)含水量較高的樣品采樣方法 肉：放人鉸肉機(jī)中鉸勻 水果蔬菜等，放入高速組織搗碎器攪勻 蛋類食品，去殼后用打蛋器打勻。 對(duì)于包裝食品，取出各種調(diào)味品后，再制備均勻。 樣

9、品前處理在色譜分析過程中是一個(gè)既耗時(shí)又極易引進(jìn)誤差的步驟，樣品處理的好壞直接影響色譜分析的最終結(jié)果，因此，為了提高分析測(cè)定效率，改善和優(yōu)化色譜分析樣品制備方法和技術(shù)是一個(gè)重要問題。 前處理方法:溶劑萃取、固相萃取、超臨界流體萃取、微波萃取以及衍生化技術(shù)等色譜分析樣品。 n技能要點(diǎn)技能要點(diǎn)溶劑萃取技術(shù)；蒸餾及精餾技術(shù)；相萃取技術(shù)；超臨界流體萃取技術(shù)；微波萃取技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 概論概論第二節(jié)第二節(jié) 溶劑萃取技術(shù)溶劑萃取技術(shù) 第三節(jié)第三節(jié) 固相萃取技術(shù)固相萃取技術(shù) 第四節(jié)第四節(jié) 蒸餾及濃縮技術(shù)蒸餾及濃縮技術(shù) 第五節(jié)第五節(jié) 微波；衍生化；超臨界萃取技術(shù)微波；衍生化；超臨界萃取技術(shù) 一、進(jìn)展和發(fā)展趨勢(shì)一

10、、進(jìn)展和發(fā)展趨勢(shì)二、樣品處理的原則二、樣品處理的原則三、樣品制備原理三、樣品制備原理四、樣品制備（提取）四、樣品制備（提?。┪濉⒊Ｓ脴悠分苽浼夹g(shù)五、常用樣品制備技術(shù)樣品前處理：分析前的采樣技術(shù)和樣品制備技術(shù)。采集采集樣品樣品適合分析的形態(tài)適合分析的形態(tài)過程耗時(shí)、繁瑣、誤差前處理不好 需要靈敏度高、測(cè)定范圍寬的檢測(cè)器和分離效率高的分離柱。制備過程中避免組分發(fā)生化學(xué)變化；要防止和避免測(cè)定組分的污染；盡可能減少雜質(zhì)引入制備過程；盡可能簡單易行 利用殘留農(nóng)藥與樣品基質(zhì)的物理化學(xué)差物理化學(xué)差異異，使其從檢測(cè)系統(tǒng)有干擾作用的樣品基質(zhì)中提取分離出來（相似相溶）。 極性極性-溶解度、分配系數(shù)；揮發(fā)性揮發(fā)性-蒸

11、汽壓。1 1、極性、極性 提取、凈化條件的依據(jù)相似相溶原理：使用與農(nóng)藥極性相近的溶劑為提取劑，使殘留農(nóng)藥在溶劑中達(dá)到最大溶解度。使殘留農(nóng)藥在溶劑中達(dá)到最大溶解度。極性判斷：電負(fù)性、雙鍵、對(duì)稱性表示：氧化鋁吸附劑上洗脫供試溶質(zhì)的能力2 2、水溶性、水溶性 農(nóng)藥的極性決定其在溶劑中的溶解性影響溶解性的其他因素影響溶解性的其他因素 溫度：高溶解性高 含鹽量：鹽會(huì)降低有機(jī)物的溶解度。 pH：影響可解離的農(nóng)藥的溶解度極 性溶劑強(qiáng)度溶 劑溶解度（20-25）溶劑在水中溶劑在水中（% %）水在溶劑中水在溶劑中（% %）非極性強(qiáng)反相弱正相正己烷0.000950.0111異辛烷微溶微溶四鹵化碳0.0770.01

12、0三鹵甲烷0.8150.072二鹵甲烷2-四氫呋喃任意混溶任意混溶乙乙 醚醚6.046.041.4681.468乙酸乙酯8.082.94丙丙 酮酮任意混溶任意混溶任意混溶任意混溶乙乙 腈腈任意混溶任意混溶任意混溶任意混溶異丙醇任意混溶任意混溶甲 醇任意混溶任意混溶水任意混溶任意混溶極 性弱反相強(qiáng)正相醋 酸任意混溶任意混溶分配定律：分配定律：在一對(duì)互不相溶的兩相溶劑系統(tǒng)中，由于物質(zhì)在非極性相和極性相非極性相和極性相中的溶解度不同，當(dāng)達(dá)到平衡時(shí)，物質(zhì)在該兩相中的濃度比在一定條件下為常數(shù)的定律。K KD D （分配系數(shù)） = A= A非極性相非極性相 / B/ B極性相極性相 揮發(fā)性：揮發(fā)性：液態(tài)或

13、固態(tài)物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)闅鈶B(tài)的物理性能。揮發(fā)性決定：物質(zhì)在氣-液或氣-固兩相中的分布。分為沸點(diǎn)和蒸汽壓。蒸汽壓：固態(tài)、液態(tài)氣態(tài) 提取提取是指通過溶解、吸附（吸著）或揮發(fā)等方式將樣品中的殘留農(nóng)藥分離出來的操作步驟，也叫萃取萃取。避免：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫、劇烈操作極性-溶解度、分配系數(shù)；揮發(fā)性-蒸汽壓。溶劑萃取溶劑萃取蒸餾技術(shù)蒸餾技術(shù)固相萃取固相萃取微波萃取微波萃取衍生化衍生化超臨界萃取超臨界萃取溶劑萃?。喝軇┹腿。喝芙庑圆町?，選用對(duì)殘留農(nóng)藥溶解度大的溶劑，將分析物從樣品基質(zhì)中提取出來的方法。關(guān)鍵：關(guān)鍵：選擇合適的提取溶劑液液- -液萃取液萃取液液- -固萃取固萃取液液- -氣萃?。ㄈ芤何眨廨腿。ㄈ芤何?/p>

14、）萃取對(duì)象萃取對(duì)象 兩種不相容兩種不相容的液體的液體水溶劑：親水化合物進(jìn)入水溶劑：親水化合物進(jìn)入到水相中。到水相中。有機(jī)溶劑：疏水性化合物將進(jìn)有機(jī)溶劑：疏水性化合物將進(jìn)入有機(jī)相中的程度就越大。入有機(jī)相中的程度就越大。利用樣品中不同組分分配在兩種不混溶的溶劑中溶解度溶解度或分配比分配比的不同來達(dá)到分離、提取或純化的目的。有機(jī)相有機(jī)相水相水相K KD D = c = co oc caqaq有機(jī)物質(zhì)在有機(jī)溶劑中的溶解度一般比有機(jī)物質(zhì)在有機(jī)溶劑中的溶解度一般比在水相中的溶解度大，分配系數(shù)越大，水在水相中的溶解度大，分配系數(shù)越大，水相中的有機(jī)物可被萃取。相中的有機(jī)物可被萃取。 式中，m m0 0是被萃取

15、溶液中溶質(zhì)（X）的總含量， m mn n是經(jīng)過n次萃取后，X在溶劑中的剩余量， V V是被萃取溶液的體積， V VB B是每次萃取所用溶劑B的體積（均為VB）， n n是等量萃取的次數(shù)。溶劑體積為樣品溶液的溶劑體積為樣品溶液的3030-35-35振蕩幾次振蕩幾次打開活塞打開活塞Gas蒸氣逸出（恒壓通氣）蒸氣逸出（恒壓通氣）乳化帶乳化帶有機(jī)相有機(jī)相水相水相水相和水相和乳化帶乳化帶靜置分層靜置分層激烈振搖激烈振搖2 4 min2 4 min有機(jī)相有機(jī)相35次次由于液-液萃取過程中劇烈振動(dòng)，經(jīng)常發(fā)生乳乳化現(xiàn)象化現(xiàn)象，特別是那些含脂肪脂肪的樣品。原因：原因：體系的性質(zhì)、離子濃度、有機(jī)相粘度、萃取溫度、

16、pH等。溫度越低，溫度越低，有機(jī)相粘度越大，離子濃度越高越易產(chǎn)生乳化。通過改變KD;改變?nèi)軇┗蚧瘜W(xué)平衡作用的添加劑;緩沖劑調(diào)節(jié)pH;鹽調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度等。 離心法破乳。2000rmin，2min； 無水硫酸鈉研磨法破乳； 蒸干法，蒸干后，再用有機(jī)溶劑萃取。不適用揮發(fā)性物質(zhì)的萃取。 電解質(zhì)破乳。加入無機(jī)鹽，通過提高體系中水相的比重使兩相分層； 破乳率與加入電解質(zhì)的量成正比。 lmolL 的鹽酸； 無水乙醇溶解兩相液滴； 無水硫酸鈉漏斗過濾。 玻璃棒攪動(dòng)，削弱吸附作用； 靜置一定的時(shí)間后，可自然分層。因?yàn)槿闈嵋菏且后w雜質(zhì)以微小珠滴散布在液體溶劑中的一種分散體系，是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系。固體萃取溶劑振蕩（加

17、熱）離心/過濾分離欲萃取組分進(jìn)入溶劑 溶解和擴(kuò)散的過程溶解和擴(kuò)散的過程 分子擴(kuò)散：分子擴(kuò)散：固體樣品表面/溶劑接解處影響因素：溫度、分子大小和液體介質(zhì)的黏度。對(duì)流擴(kuò)散：對(duì)流擴(kuò)散：遠(yuǎn)離固體樣品表面處的擴(kuò)散影響因素：流動(dòng)液體的速度和狀態(tài)，液體的黏度、樣品表面的性質(zhì)等。1 1、水樣、水樣2 2、氣體樣品、氣體樣品3 3、植物和動(dòng)物樣品、植物和動(dòng)物樣品4 4、土壤樣品、土壤樣品1、萃取劑的選擇性（極性） 2、穩(wěn)定性、毒性3、沸點(diǎn)：40-80者為宜 4、萃取劑回收的難易與經(jīng)濟(jì)性5、色譜檢測(cè)器的響應(yīng) 一、蒸餾和精餾一、蒸餾和精餾三、濃縮三、濃縮二、凈化二、凈化一種材料在不同溫度下的飽和蒸氣壓變化一種材料在

18、不同溫度下的飽和蒸氣壓變化是蒸餾分離的基礎(chǔ)。是蒸餾分離的基礎(chǔ)。蒸餾蒸餾1 1、（半）揮發(fā)性雜質(zhì)：不揮發(fā)、（半）揮發(fā)性雜質(zhì)：不揮發(fā)/ /難揮發(fā)難揮發(fā)主體留下主體留下2 2、（半）揮發(fā)主體蒸發(fā)、（半）揮發(fā)主體蒸發(fā)不揮發(fā)不揮發(fā)/ /難揮難揮發(fā)發(fā)雜質(zhì)留下。雜質(zhì)留下。液體樣品加熱冷凝回流回流液冷凝收集流出液 圓底燒瓶 沸點(diǎn)差別50。 加熱溫度：40150 加熱溫度不能比蒸餾物質(zhì)的沸點(diǎn)高出30組成：組成：蒸餾燒瓶、溫度計(jì)、冷凝器、收集器和加熱裝置等。備注：備注：液體裝入燒瓶后，加熱之前，加入沸石。 沸點(diǎn)：蒸氣壓 = 外界大氣壓時(shí)的溫度。沸點(diǎn)：隨外界壓力的降低而降低。減壓蒸餾：真空泵降低表面壓力（沸點(diǎn)）高沸

19、點(diǎn)：0.1326.7kPa條件下減壓蒸餾。1-電爐；2-克萊森瓶；3-毛細(xì)管；4-螺旋止水夾；5-溫度計(jì)；6-細(xì)銅絲；7-冷凝器；8-接受瓶；9-接收管；10-轉(zhuǎn)動(dòng)把；11-壓力計(jì)；12-安全瓶；13-三通管閥門；14-接抽氣機(jī)對(duì)象：對(duì)象：有機(jī)物具備條件：具備條件：幾乎不溶于水、不會(huì)發(fā)生化學(xué)變化、在100下蒸汽壓有大于1.3kPa。盛水量為75液體樣品1/3。燒瓶傾斜45o冷凝管：30o 。被蒸餾的材料根本不會(huì)加熱到比蒸汽的溫度還高。樣品經(jīng)萃取被測(cè)成分萃取液含有雜質(zhì)干擾測(cè)定。 萃取液適當(dāng)處理除去雜質(zhì)純化。1、脂類：脂肪酸、醇 溶于有機(jī)溶劑2、色素：溶于極性較強(qiáng)的溶劑3、其他：硫ECD、FPD

20、塑料管有機(jī)溶劑1、過濾2、柱層析法3、液-液分配法（又稱萃取法）4、吹掃共餾法5、沉淀凈化法6、化學(xué)凈化法過濾：樣品中除去顆粒物用0.45m 或 0.22m 濾膜去除干擾物有機(jī)濾膜：白色無機(jī)濾膜：綠色利用被測(cè)物質(zhì)與干擾物質(zhì)在固體吸附劑表面的吸附力不同而達(dá)到分離的目的。農(nóng)藥一般先被淋洗出來，達(dá)到與雜質(zhì)分離的目的。乙醚/石油醚乙醚/正己烷乙酸乙酯/石油醚乙腈/苯是利用物質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中極性不同，將有機(jī)污染物從抽提液轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中達(dá)到分離。 對(duì)被測(cè)藥物（農(nóng)藥、獸藥、真菌毒素等）有較大的溶解性； 對(duì)色素、脂肪、蠟質(zhì)等雜質(zhì)有較小的溶解性。極性較大的雜質(zhì)，用強(qiáng)極性溶劑溶解。如極性較大的氯仿、甲

21、醇等溶劑來萃取石油醚等極性較小的抽提液。低溫下，脂肪和蠟質(zhì)形成結(jié)晶，從溶解度較高的農(nóng)藥提取物中除去。步驟: 丙酮提取80 沉淀 凈化針對(duì)動(dòng)物樣品用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿將樣品基體消解掉。留下農(nóng)藥母體并凈化，應(yīng)用對(duì)象：有機(jī)氯農(nóng)藥目的：目的：使供測(cè)定的樣品達(dá)到儀器能夠檢測(cè)的 濃度，或進(jìn)行溶劑轉(zhuǎn)換。濃縮：濃縮：通過減少樣品溶液中的溶劑或水分而 使組分的濃度升高。富集：富集：利用液-固萃取的方法濃縮某種組分。（1）、農(nóng)藥損失（2）、樣品污染方方法法 （1）減壓蒸餾：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 （2）氣流吹蒸：空氣或氮?dú)?（3） K-D濃縮器濃縮 （4）真空離心濃縮法 包括旋轉(zhuǎn)燒瓶、冷凝器、溶劑接收瓶、真空設(shè)備、加熱源等。溶劑可以

22、回收。溶劑分子式常壓條件時(shí)沸點(diǎn)密度g/cm340下沸騰時(shí)壓力mbar）丙酮C3H6O560.790556苯C6H6800.877236甲苯C7H81110.86777氯仿CHCl3621.483474正己烷C6H14690.660335環(huán)己烷C6H12810.779235醋酸C2H4O21181.04944乙醇C2H6O790.789175乙酸乙酯C4H8O2770.900240甲醇CH4O650.791337乙醚C4H10O350.714-水H2O1001.00072利用空氣或氮?dú)饬鲗⑷軇С鰳悠?，一般在加熱條件下進(jìn)行。用于少量液體的濃縮，蒸汽壓較高的組分易損失。 不能用于燃點(diǎn)低于100 的

23、物質(zhì) 氮?dú)?、氧氣純度高?9% 不能用于酸、堿物質(zhì)的濃縮 酸性用碳酸氫鈉溶解中和 一天一換水浴的水一、超臨界萃取技術(shù)一、超臨界萃取技術(shù) 二、微波萃取技術(shù)二、微波萃取技術(shù) 三、超聲波輔助萃取三、超聲波輔助萃取本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章四、衍生化技術(shù)四、衍生化技術(shù) 五五 、生物大分子的細(xì)胞破碎與蛋白質(zhì)的去除、生物大分子的細(xì)胞破碎與蛋白質(zhì)的去除本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章臨界點(diǎn)：液、氣兩相呈平衡狀態(tài)的點(diǎn)。臨界溫度：在臨界點(diǎn)時(shí)的溫度。 臨界壓力：在臨界點(diǎn)時(shí)的壓力。 本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章物體處于其臨界溫度和臨界壓力以

24、上時(shí)的狀態(tài)。氣體：粘稠度、表面張力低，溶解能力強(qiáng)，萃取功能高。壓力，溶解能力。液體：體積小。流體名稱流體名稱分子式分子式臨界壓力臨界壓力(bar)(bar)臨界溫度臨界溫度()()臨界密度臨界密度(g/cm(g/cm3 3) )二氧化碳二氧化碳COCO2 272.972.931.231.20.4330.433水水H H2 2O O217.6217.6374.2374.20.3320.332氨氨NHNH3 3112.5112.5132.4132.40.2350.235乙烷乙烷C C2 2H H6 648.148.132.232.20.2030.203氧化二氮氧化二氮N N2 2O O71.771

25、.736.536.50.4500.450本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 在35-40下提取 干凈的提取方法 CO2是一種不活潑的氣體。 循環(huán)使用，降低成本。 參數(shù)可以調(diào)節(jié)流動(dòng)相流動(dòng)相本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章頻率：300300000MHz的電磁波。穿透：玻璃、塑料、陶瓷等絕緣體。當(dāng)微波作用于水和酸性物質(zhì)時(shí)，將被極性分子所吸收，因而物質(zhì)很快被加熱。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章吸收微波細(xì)胞內(nèi)部溫度細(xì)胞內(nèi)部壓力超過細(xì)胞壁膨脹承受能力細(xì)胞破裂有效成分自由流出。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 萃

26、取溫度的影響 萃取溶劑的影響 樣品杯：聚四氟乙烯本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章能量外部向內(nèi)部傳遞。超聲波使溶液形成氣泡（空化效應(yīng)）爆裂溫度和壓力，增強(qiáng)化學(xué)反應(yīng)能力。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章優(yōu)點(diǎn)：價(jià)廉快速，簡便安全，批量處理樣品。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章化學(xué)反應(yīng)定量生成適于分析。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 靈敏度與選擇性 改善色譜分離： 揮發(fā)性、降低與色譜材料的相互作用 理化穩(wěn)定性本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章柱柱前前衍生化：為了分離衍生化：為了分離柱柱后后衍生化：為了檢測(cè)衍生化：為了檢測(cè)本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（1 1）硅烷化衍生化方法）硅烷化衍生化方法（2

27、2）酯化衍生化方法）酯化衍生化方法（3 3）鹵化衍生化方法）鹵化衍生化方法（4 4）酚化衍生化方法）酚化衍生化方法方法方法本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章利用醇，酚，酸，胺等與硅烷化試劑反利用醇，酚，酸，胺等與硅烷化試劑反應(yīng)，形成揮發(fā)性的硅烷衍生物應(yīng)，形成揮發(fā)性的硅烷衍生物R R3 3SiX + SiX + HRHRR R3 3SiRSiR + HX + HX本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章大多數(shù)有機(jī)酸有機(jī)酸揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差。在GC分析之前衍生為相應(yīng)的酯。 甲醇法 重氮甲烷法 三氟乙酸配法 本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章甲醇法 有機(jī)酸與甲醇在催化劑的存在下加熱，可以發(fā)生酯化反應(yīng)，生成有機(jī)酸

28、的甲酯RCOOH + RCOOH + CHCH3 3OHOH催化劑催化劑RCOO CHRCOO CH3 3 + H + H2 2 O O本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章與有機(jī)酸反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯，重氮甲烷不穩(wěn)定，有爆炸性，有毒。 RCOOH + RCOOH + CHCH2 2N N2 2RCOO CHRCOO CH3 3 + N + N2 2本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章引入鹵原子ECD檢測(cè)器也改善揮發(fā)性和穩(wěn)定性。 鹵素的作用是加成加成或取代取代 本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章1. 1. 紫外衍生化反應(yīng)紫外衍生化反應(yīng)2 2熒光衍生化反應(yīng)熒光衍生化反應(yīng) 3 3電化學(xué)衍生化反應(yīng)電化學(xué)衍生化

29、反應(yīng)本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章苯甲酰氯 + 胺、醇、酚苯甲酸酯類衍生物（ ）本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章在目標(biāo)化合物上接上能發(fā)出熒光的生色基團(tuán)，如熒光素。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（一）、生物樣品（一）、生物樣品植物：植物：營養(yǎng)成分、農(nóng)藥殘留等動(dòng)物：動(dòng)物：體內(nèi)的藥物及代謝產(chǎn)物、 糖類、維生素、氨基酸等微生物：微生物：本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章體液或細(xì)胞外：體液或細(xì)胞外：采用萃取方法。也可將干擾組分（如蛋白質(zhì)、DNA、多糖等等）沉淀除去。生物細(xì)胞內(nèi)：生物細(xì)胞內(nèi)：首先將細(xì)胞破碎，再采用萃取或沉淀等方法。（二）、細(xì)胞的破碎（二）、細(xì)胞的破碎本節(jié)首

30、頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（二）、細(xì)胞的破碎（二）、細(xì)胞的破碎目的：目的：就是為了破壞細(xì)胞的外殼，使細(xì)胞內(nèi)含物有效地釋放出來，獲得有效的提取。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章1 1、細(xì)胞的破碎方法、細(xì)胞的破碎方法本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章1 1、細(xì)胞的破碎方法、細(xì)胞的破碎方法1、細(xì)胞的破碎方法、細(xì)胞的破碎方法本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章2 2、物理法（物理作用）、物理法（物理作用） 反復(fù)凍融法：反復(fù)凍融法： 15 - 15 - 2020。 冷熱交替法：冷熱交替法： 9090（數(shù)分鐘）（數(shù)分鐘）冷卻。冷卻。 超聲波處理法：用于微生物。超聲波處理法：用于微生物。 加壓破碎法：加壓破碎法：

31、 本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章3 3、化學(xué)及生物化學(xué)法、化學(xué)及生物化學(xué)法（化學(xué)試劑或酶）（化學(xué)試劑或酶） 自溶法： 在一定條件（pH、溫度）， 利用自身的酶系將細(xì)胞破壞。 溶菌酶處理： 具有專一地破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的功能。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章例：溶菌酶處理例：溶菌酶處理本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（三）、蛋白質(zhì)的去除（三）、蛋白質(zhì)的去除目的：目的：蛋白質(zhì)的存在，常常嚴(yán)重干擾分析1、加熱法 2、鹽析法3、膜分離法 4、高速離心5、有機(jī)溶劑沉淀法本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章1 1、 加熱法加熱法90離心或過濾除去熱變性蛋白。 本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章2 2、鹽析法、鹽析

32、法原理：原理：利用不同蛋白質(zhì)在高濃度的鹽溶液中溶解度不同程度的降低來沉淀除去蛋白質(zhì)。鹽濃度鹽濃度蛋白質(zhì)溶解度蛋白質(zhì)溶解度鹽溶作用鹽溶作用鹽析作用鹽析作用本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章3 3、膜分離法、膜分離法超濾：靠薄膜兩側(cè)壓力差分離小分子化合物大分子蛋白質(zhì)本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章4 4、高速離心、高速離心靠物質(zhì)沉降系數(shù)、質(zhì)量、浮力因子等不同進(jìn)行分離小小中中大大本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章樣品經(jīng)萃取被測(cè)成分萃取液含有雜質(zhì)干擾測(cè)定。 萃取液適當(dāng)處理除去雜質(zhì)純化。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章1、脂類：脂肪酸、醇 溶于有機(jī)溶劑2、色素：溶于極性較強(qiáng)的溶劑3、其他：硫ECD、FPD

33、塑料管有機(jī)溶劑本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章過濾：除去顆粒物用0.45或 0.22m 濾膜有機(jī)濾膜：白色、黃色無機(jī)濾膜：綠色、藍(lán)色本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章乙醚/石油醚乙醚/正己烷乙酸乙酯/石油醚乙腈/苯本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 對(duì)被測(cè)物（農(nóng)藥、獸藥、真菌毒素 等）有較大的溶解性； 對(duì)色素、脂肪、蠟質(zhì)等雜質(zhì)有較小的 溶解性。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章極性較大的雜質(zhì)，用強(qiáng)極性溶劑溶解。如極性較大的氯仿、甲醇等溶劑來萃取石油醚等極性較小的抽提液。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章低

34、溫下，脂肪和蠟質(zhì)形成結(jié)晶。步驟: 丙酮提取80 沉淀 凈化本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章針對(duì)動(dòng)物樣品用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿將樣品基體消解掉。留下農(nóng)藥母體并凈化，應(yīng)用對(duì)象：有機(jī)氯農(nóng)藥本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章目的：目的：使供測(cè)定的樣品達(dá)到儀器能夠檢測(cè)的 濃度，或進(jìn)行溶劑轉(zhuǎn)換。濃縮：濃縮：通過減少樣品溶液中的溶劑或水分而 使組分的濃度升高。富集：富集：利用液-固萃取的方法濃縮某種組分。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（1）、農(nóng)藥損失（2）、樣品污染本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章方方法法 （1）減壓蒸餾：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 （2）氣流吹蒸：空氣或氮?dú)?（3） K-D濃縮器濃縮 （4）真空離心濃縮法 本節(jié)首頁

35、本節(jié)首頁退出本章退出本章旋轉(zhuǎn)燒瓶冷凝器溶劑接收瓶真空設(shè)備加熱源本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章空氣、氮?dú)狻饪s、蒸汽壓空氣、氮?dú)?、濃縮、蒸汽壓農(nóng)藥殘留分析質(zhì)量控制的目的是使分析結(jié)果達(dá)到預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)和精確程度。為了達(dá)到這一預(yù)定目的應(yīng)采取的措施和工作步驟都是事先規(guī)劃好了的。 通過一系列的規(guī)約加以確定，并要求有關(guān)分析人員按照規(guī)約操作，由此使分析過程處于受檢狀態(tài)。技能要點(diǎn)技能要點(diǎn)各種規(guī)格的試劑的凈化處理本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 第一節(jié)第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)條件實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)條件第二節(jié)第二節(jié) 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)第三節(jié)第三節(jié) 殘留分析方法的可靠性的確認(rèn)殘留分析方法的可靠性的確認(rèn) 第四節(jié)第四節(jié) 農(nóng)殘

36、分析質(zhì)量控制農(nóng)殘分析質(zhì)量控制 第五節(jié)第五節(jié) 分析結(jié)果的表達(dá)和數(shù)據(jù)處理分析結(jié)果的表達(dá)和數(shù)據(jù)處理 本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章制備制備蒸餾水：水與雜質(zhì)的沸點(diǎn)不同，蒸餾水：水與雜質(zhì)的沸點(diǎn)不同，難免有痕量的金屬離子。難免有痕量的金屬離子。去離子水：交換樹脂獲得的純水去離子水：交換樹脂獲得的純水稱離子交換或。稱離子交換或。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章特純水特純水 1.8 x 107 99.99999水的種類水的種類 電阻率電阻率cm cm 用用 途途普通純水普通純水 5 x 105 x 105 5， 常量分析常量分析優(yōu)質(zhì)純水優(yōu)質(zhì)純水

37、 1 x 106 AA本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章特特 級(jí)級(jí) 光（色）譜純光（色）譜純 S.P 白白 色色級(jí)級(jí) 別別 名稱名稱 代號(hào)代號(hào) 標(biāo)標(biāo) 志志一一 級(jí)級(jí) 優(yōu)級(jí)純優(yōu)級(jí)純 Guarantte Reagent 綠綠 色色二二 級(jí)級(jí) 分析純分析純 Analysis Reagent 紅紅 色色三三 級(jí)級(jí) 化學(xué)純化學(xué)純 Chemical Reagent 藍(lán)藍(lán) 色色本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章時(shí)間(min or s)響應(yīng)信號(hào)(mv)要求：濃縮進(jìn)樣要求：濃縮進(jìn)樣5ul5ul，雜峰高度不應(yīng)超過，雜峰高度不應(yīng)超過1mm1mm。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本

38、節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章HClClClClClCl本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章準(zhǔn)確度和精密度1.1.準(zhǔn)確度和精密度準(zhǔn)確

39、度和精密度分析結(jié)果的衡量指標(biāo)。分析結(jié)果的衡量指標(biāo)。 ( ( 1) 1) 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度分析結(jié)果與真實(shí)值的接近程度分析結(jié)果與真實(shí)值的接近程度 準(zhǔn)確度的高低用誤差的大小來衡量；準(zhǔn)確度的高低用誤差的大小來衡量； 誤差一般用絕對(duì)誤差和相對(duì)誤差來表示。誤差一般用絕對(duì)誤差和相對(duì)誤差來表示。(2) (2) 精密度精密度幾次平衡測(cè)定結(jié)果相互接近程度幾次平衡測(cè)定結(jié)果相互接近程度 精密度的高低用偏差來衡量，精密度的高低用偏差來衡量， 偏差是指個(gè)別測(cè)定值與平均值之間的差值。偏差是指個(gè)別測(cè)定值與平均值之間的差值。 (3) (3) 兩者的關(guān)系兩者的關(guān)系 精密度是保證準(zhǔn)確度的先決條件；精密度是保證準(zhǔn)確度的先決條件； 精密度

40、高不一定準(zhǔn)確度高；精密度高不一定準(zhǔn)確度高； 兩者的差別主要是由于系統(tǒng)誤差的存在。兩者的差別主要是由于系統(tǒng)誤差的存在。 本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章顏

41、顏 色色耐高溫性耐高溫性使用次數(shù)使用次數(shù)灰色灰色 耐高溫，低流失耐高溫，低流失 400/250400/250次次白色白色 耐高溫，低流失耐高溫，低流失350/250350/250次次綠色綠色 耐高溫、耐用耐高溫、耐用 350 /150350 /150次次紅色紅色 耐高溫，易老化耐高溫，易老化400/150400/150次次注：以島津公司產(chǎn)品為例注：以島津公司產(chǎn)品為例色譜柱進(jìn)樣墊通用技術(shù)o使用輕觸點(diǎn) - 不能過緊。o保持清潔。o避免污染 - 指紋、油脂等。o檢查使用的密封墊是否有裂紋、碎片、或其它的損壞。應(yīng)在推薦溫度范圍內(nèi)避免：泄漏、降解、樣品丟失、出現(xiàn)鬼峰減少或者避免鬼峰的出現(xiàn)：進(jìn)樣口帶有隔墊

42、吹掃功能。應(yīng)使用耐高溫的相應(yīng)進(jìn)樣墊。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 防止樣品防止樣品歧視現(xiàn)象歧視現(xiàn)象 為了保證分流比的概念真實(shí)有效，樣品（溶劑+分析物）必須與載氣充分混合，形成一個(gè)均勻的混合物。這一混合物的一小部分將會(huì)從進(jìn)樣口的底部進(jìn)入色譜柱，而大部分的混合物則會(huì)從分流出口流出。如果進(jìn)樣量過大，溶劑會(huì)膨脹為很大的體積，致使進(jìn)樣口襯管過載。其結(jié)果必將導(dǎo)致樣品從吹掃出口流出而造成樣品損失，同時(shí)也會(huì)造成載氣輸入管路的污染。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁

43、退出本章退出本章柱流量柱流量樣品出口流量分流比本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 關(guān)閉分流閥使氣流不能從襯管外逃出。由于柱前壓并未改變，所以柱流量將會(huì)保持恒定。原來吹過襯管的氣流現(xiàn)在必為通過隔墊吹掃管路流出。 樣品會(huì)擴(kuò)展到進(jìn)樣口的底部。使用250uL的襯管以及柱流量，很容易使襯管過載，特別是當(dāng)進(jìn)樣體積大于1uL且使用非烴類溶劑時(shí)。 由于樣品組分與溶劑的擴(kuò)散率的不同（更小體積/低分子量），組分在襯管中分層。與載氣混合成為低臨界狀態(tài)，這是因?yàn)楸４鏁r(shí)間長且?guī)缀跛械臉悠范冀?jīng)過襯管而進(jìn)入到色譜柱中了。通過使用某一種“捕集”技術(shù)可將樣品聚集在柱頭。 到此被分析物轉(zhuǎn)移入柱已經(jīng)完成。仍有一些溶劑留在襯管之中。

44、如果依然保持分流閥關(guān)閉，則余下的所有溶劑都轉(zhuǎn)移入柱子中，那么溶劑色譜峰將會(huì)嚴(yán)重拖尾。 將分流閥從關(guān)閉位置轉(zhuǎn)為開啟狀態(tài)以將留在襯管中的剩余溶劑吹出襯管。這個(gè)過程將會(huì)有效地減小溶劑峰的拖尾，以保證先流出峰的定量更加真實(shí)可信。 襯管的體積太小以及通過襯管的流量太低可能會(huì)導(dǎo)致使用非烴類溶劑的樣品進(jìn)樣量過大。對(duì)于不分流進(jìn)樣來說，進(jìn)樣量過大會(huì)造成定量結(jié)果的準(zhǔn)確性與精確性雙方面的明顯誤差。 設(shè)定柱溫的初始溫度低于溶劑的沸點(diǎn)，致使溶劑在柱關(guān)上冷凝，相當(dāng)于膨脹了固定相并捕集分析物。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章n毛細(xì)管柱內(nèi)流動(dòng)相流速低，流量小，組分會(huì)因柱后死體積突然增加而發(fā)生嚴(yán)

45、重的縱向擴(kuò)散，從而導(dǎo)致峰形展寬，有可能使在柱中以分離的組分在柱后再次重疊，影響分離。n也可在使用FID時(shí)受阻于引入的H2壓力而出柱困難。n增加尾吹氣將改善這一狀況。此部件須非常清潔此部件須非常清潔1 1、在溶劑中超聲處理、在溶劑中超聲處理 - - 常用樣品或清洗劑常用樣品或清洗劑2 2、使用金屬紗布擦磨清潔、使用金屬紗布擦磨清潔 - - 高光潔度可提高高光潔度可提高其功效其功效- - 不要干擦不要干擦3 3、用溶劑清洗、用溶劑清洗 - - 避開氯化溶劑避開氯化溶劑 - - 先惰性洗滌先惰性洗滌 - - 甲苯甲苯 - - 再用醇類清洗再用醇類清洗 - - 甲醇甲醇 毛細(xì)管襯管結(jié)構(gòu)圖毛細(xì)管襯管結(jié)構(gòu)

46、圖 此部件須非常清潔本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（1 1）、恒溫操作）、恒溫操作本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（2 2）、程序升溫）、程序升溫本節(jié)

47、首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 程序升溫特點(diǎn)程序升溫特點(diǎn)本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 操作條件的選擇操作條件的選擇本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 程序升溫與恒溫操作的比較程序升溫與恒溫操作的比較正常運(yùn)行空白運(yùn)行柱補(bǔ)償運(yùn)行 柱補(bǔ)償柱補(bǔ)償本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章分流出口分流出口分流出口毛細(xì)管柱毛細(xì)管柱毛細(xì)管柱圖1 A圖1 B圖1 C不分流正確裝法不正確裝法分流/不分流裝法本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章1、噪 聲 2、漂 移3、靈 敏 度4、線 性 范 圍 與 動(dòng) 態(tài) 范 圍5、最 小 檢 測(cè) 量 本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章

48、退出本章1、噪 聲 (Noise；N) ：儀器、其他操作條件使基線在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生起伏的信號(hào) 2、漂 移 (Drift；d) ：使基線在一定時(shí)間內(nèi)對(duì)原點(diǎn)產(chǎn)生的偏離。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章量量變化時(shí)，該物質(zhì)變化時(shí)，該物質(zhì)響應(yīng)值響應(yīng)值的變化率。的變化率。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章被測(cè)物質(zhì)的被測(cè)物質(zhì)的量量與檢測(cè)器的與檢測(cè)器的信號(hào)信號(hào)成線形關(guān)系的范圍。成線形關(guān)系的范圍。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章( (二二) )、FIDFID（Flame Ionization Detector)Flame Ionization Detector)當(dāng)樣品和載氣進(jìn)入火焰（2100）時(shí)，發(fā)生化學(xué)電離（等碳

49、效應(yīng)）（等碳效應(yīng)）。C6H66CH （自由基）（自由基）2CH +O2吸熱吸熱2CHO+ e- （極化極）（極化極）1 1、工作原理、工作原理本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章檢測(cè)器關(guān)閉：檢測(cè)器關(guān)閉：火焰無法點(diǎn)燃；檢查是否凝聚檢測(cè)器短路：檢測(cè)器短路：檢查檢測(cè)器溫度火焰熄滅：火焰熄滅：檢查流量；關(guān)閉輔助；氣重新點(diǎn)火檢查流量；關(guān)閉輔助；氣重新點(diǎn)火檢測(cè)器臟：檢測(cè)器臟： 清洗收集極、噴嘴清洗收集極、噴嘴本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（三）、（三）、 NPD （Nitrogen-Phosphorus Detector）銣鹽珠。氫氣/空氣較低，碳?xì)浠衔餆o法電離，銣珠表面的堿鹽離子促進(jìn)有機(jī)氮或有機(jī)磷化合物

50、的電離。FIDNPD1 1、熱電離源：非揮、熱電離源：非揮 發(fā)性的硅酸銣。發(fā)性的硅酸銣。2 2、對(duì)噴嘴的極性對(duì)噴嘴的極性 是可變的。是可變的。3、氫氣：氫氣：“冷氫焰冷氫焰”， 幾幾mlmlminmin。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章工作原理：工作原理：富氫火焰富氫火焰中燃燒時(shí)，P，S被激發(fā)而發(fā)射特征波長的光譜。1、S化合物：藍(lán)紫色光（394nm）。 2、P化合物：綠色光（526nm）（四）、（四）、FPD（Flame Photometric Detector)濾濾光光片片光電倍增管光電倍增管火焰噴嘴火焰噴嘴 1 1、火焰光度檢測(cè)器、火焰光度檢測(cè)器本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章 2 2、氣

51、、氣 流流 比比本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（五）、（五）、ECD（Electron Capture Detector)放射源使載氣電離，一定的極化電壓加在兩極上，由陽極吸收電子，形成穩(wěn)定的基流。N2射線射線N2+ + e- 陽極（基流）本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章電負(fù)性電負(fù)性組分檢測(cè)器捕獲電子 釋放能量 E 電子數(shù)減小 基流下降 產(chǎn)生負(fù)信號(hào)。AB + e-AB- + E （俘獲電子）本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（八）氣相色譜儀使用中的問題A.色譜柱是否與進(jìn)樣口和檢測(cè)器正確地連接B.進(jìn)樣口是否漏更換進(jìn)樣墊檢查進(jìn)樣襯管是否損壞C.柱是否與進(jìn)樣口連接？?

52、D.FID點(diǎn)火了嗎？FID高壓靜電正常嗎？ E.柱中是否有載氣無峰或峰很小本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章五、使用中的問題（一）、基線不好的問題1.檢查氣源的純度 解決：更換氣源；加裝氣體凈化2.檢查氣路系統(tǒng)是否被污染 解決：清洗被污染處本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（二）、基線漂移o正確地使用高純度的載氣o色譜柱老化o進(jìn)樣口和色譜柱的最高使用溫度不能超過該柱所規(guī)定的最高溫度極限本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（三）、基線位置突然變化偏離o偏離或漂移是由于下列原因產(chǎn)生的 溫度；流速o檢查體系是否有漏 主要檢查進(jìn)樣口部分 o前次色譜過程中的殘余的低揮發(fā)性流出物拖尾因子拖尾因子ABExcelle

53、ntt = 1.0 - 1.05Acceptablet = 1.2Unacceptablet = 2Awfult = 4拖尾因子（拖尾因子（1 1）拖尾因子拖尾因子 1.21.2拖尾拖尾正常前伸前伸峰前伸峰拖尾因子拖尾因子 0.90.9拖尾因子（拖尾因子（2 2）本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（四）、峰型不好（拖尾）l進(jìn)樣口或柱溫太低試；程序升溫l柱過載：減少進(jìn)樣量或?qū)悠废♂?0倍l試一下較厚液膜的其他色譜柱前伸峰和拖尾峰均說明是非線形的分配即色譜柱與樣品不匹配本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（五）、峰型不好o減少進(jìn)樣量（柱過載）小體積進(jìn)樣 ；增加分流比o可能是幾個(gè)未分離的色譜峰將柱溫降低

54、20再進(jìn)樣本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（六）、峰型很差o合并的峰（未分離的峰）o將柱溫降低20-30o將進(jìn)樣口溫度增加20-30o檢查樣品與溶劑的選擇是否正確峰頂分叉（雙肩峰）峰頂分叉（雙肩峰）本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（七）、附加峰（1）進(jìn)樣墊流失進(jìn)樣口污染殘 留在進(jìn)樣口或襯管中的物質(zhì)載氣不純柱頭污染本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（七）、附加峰（2）1、樣品在進(jìn)樣口停留的時(shí)間太長2、樣品組分穩(wěn)定性差3、進(jìn)樣口溫度過熱，可以導(dǎo)致樣品組分的降解本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（八）、丟失色譜峰o進(jìn)樣口溫度太低高沸點(diǎn)的化合物不能很快地氣化o進(jìn)樣口溫度太高許多揮發(fā)性的組分在進(jìn)樣口降解 o

55、進(jìn)樣口被污染本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（九）、色譜柱安裝位置可能引起的問題o色譜柱到檢測(cè)器安裝位置不正確; 使其不能到達(dá)FID噴嘴（針頭到柱保留1-2厘米） o色譜柱到進(jìn)樣口安裝位置不正確. 使其不能到達(dá)進(jìn)樣口o色譜柱到進(jìn)樣口及檢測(cè)器的位置安裝正確淋洗液色譜柱檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章一、GC與HPLC的比較本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章二、流動(dòng)相的基本要求二、流動(dòng)相的基本要求n保持色譜柱的穩(wěn)定性，因而與固定相不互溶（延長柱壽命）n不發(fā)生不可逆吸附 n有合適的pH值n化學(xué)惰性不與樣品及固定相發(fā)生反應(yīng)。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章nUV：在紫外線區(qū)“透明” n示差

56、：折射率與溶劑有較大差異 n電化學(xué)檢測(cè)器：電惰性。n對(duì)樣品有很強(qiáng)的溶解力。n清洗與更換方便n低價(jià)、毒性小、純度高。1、適用于所選的檢測(cè)器本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章2. 2. 流動(dòng)相的選擇流動(dòng)相的選擇n有合適的理化性質(zhì)（沸點(diǎn)、粘度等，盡（沸點(diǎn)、粘度等，盡可能小一些）可能小一些）n合適的強(qiáng)度（分配系數(shù)要合適，簡單樣（分配系數(shù)要合適，簡單樣品可大，復(fù)雜樣品要小）品可大，復(fù)雜樣品要?。﹏混合溶劑（有等度和梯度之分）（有等度和梯度之分）n極性合適（需根據(jù)溶劑的性質(zhì)而定）（需根據(jù)溶劑的性質(zhì)而定）本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章3 3、 流動(dòng)相的物理參數(shù)流動(dòng)相的物理參數(shù)n溶解度參數(shù)（溶劑極性的量度）：

57、與樣品分配比有關(guān)，要適中。n沸點(diǎn)：要低些，便于回收分離樣品。n粘度：柱效與粘度成反比，要求早在0.40.5cP。n混合溶劑一般能降低粘度。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章4 4、 混合溶劑混合溶劑n可靠改變?nèi)軇┙M成來調(diào)節(jié)溶劑的強(qiáng)度等，以適合不容的樣品。n等度淋洗：淋洗過程中溶劑組成不變，強(qiáng)度恒定，k值在10以內(nèi)可得較好的分離。n梯度淋洗：淋洗過程中溶劑組成隨時(shí)間而變，一般使強(qiáng)度按程序增加，使組分在最合適的k值處洗出。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章5 5、梯度淋洗、梯度淋洗n使用于極性范圍寬的混合物的分離。n優(yōu)點(diǎn)：n提供限單位時(shí)間內(nèi)的最大分離度。n提高出峰的對(duì)稱性n減小峰寬n降低檢測(cè)本節(jié)首頁本

58、節(jié)首頁退出本章退出本章n問題：n要用高純?cè)噭ㄙF貴）。n可能在固定相上產(chǎn)生雜質(zhì)富集，需再生處理（尤其是極性柱），可用10 30倍柱體積的溶劑淋洗。5 5、梯度淋洗、梯度淋洗本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章三、液相色譜柱的保養(yǎng)三、液相色譜柱的保養(yǎng)柱的穩(wěn)定性與固定相類型及使用情況有關(guān)。為了保持柱效、柱容量及滲透性，必須進(jìn)行仔細(xì)地保養(yǎng)。是否會(huì)由于柱外效應(yīng)，使分析柱的柱效明顯下降？本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（一）、防止（一）、防止堵塞1、必須將流動(dòng)相仔細(xì)地蒸餾、過濾。在流動(dòng)相貯槽與柱之間，使用0.5m孔徑的過濾器。水往往是一個(gè)重要的污染源。在水溶液流動(dòng)相（如緩沖液）中，細(xì)菌容易生長，可能堵塞篩板

59、。防止細(xì)菌生長的辦法是加入抑制劑，如0.01%NaNO3。顯然，抑制劑不能干擾分離和測(cè)定。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章（一）、防止（一）、防止堵塞2、在恒定壓力下，發(fā)現(xiàn)流量減少，柱子可能部分堵塞。堵塞最容易發(fā)生在極窄的入口接頭處以及入口、出口篩板處。堵塞后需要仔細(xì)拆洗，清除堵塞物，但必須防止較強(qiáng)的機(jī)械震動(dòng)，防止用熱手接觸柱子，以擾動(dòng)柱內(nèi)的固定相層，使柱效發(fā)生變化。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章n5要防止反沖（流動(dòng)相逆向流動(dòng)），否則使固定相層位移，柱效下降。n6柱子兩端用金屬螺帽封閉，保存在純凈的有機(jī)溶劑中。應(yīng)該將柱子保存在以下pH范圍內(nèi)的水溶液流動(dòng)相中：2pH8.5。為了長期保存，最好用

60、純有機(jī)溶劑（如甲醇）清洗柱子。n7一定要防止柱子干涸，特別是硬膠柱。（一）、防止（一）、防止堵塞本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章二、液相色譜柱的保養(yǎng)二、液相色譜柱的保養(yǎng)n8使用衛(wèi)柱(Guard Column,亦稱預(yù)柱)。連續(xù)注射含有強(qiáng)滯留(不被洗脫)組分的樣品，將使柱效下降，保留值改變，選擇性變壞，柱壽命縮短。為了延長柱壽命，在進(jìn)樣閥和分析柱之間加上衛(wèi)柱。本節(jié)首頁本節(jié)首頁退出本章退出本章二、液相色譜柱的保養(yǎng)二、液相色譜柱的保養(yǎng)n衛(wèi)柱較短(510cm)，固定相與分析柱類似。其作用是吸著強(qiáng)滯留的組分，防止對(duì)分析柱的污染，保持分析柱性能穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)表明，只要衛(wèi)柱與高效、小粒度分析柱聯(lián)用，除了使k為零的