細胞實驗室簡介

1、細胞實驗室簡介細胞實驗室簡介作者 Vincent 細胞培養(yǎng)實驗室的設計是由工作的目的和規(guī)模決定的，細胞培養(yǎng)實驗室的設計是由工作的目的和規(guī)模決定的， 其基其基本要求是：便于隔離、便于操作、便于滅菌、便于觀察。本要求是：便于隔離、便于操作、便于滅菌、便于觀察。 細胞培養(yǎng)實驗室的設置必須滿足三個基本的需要，即：實驗細胞培養(yǎng)實驗室的設置必須滿足三個基本的需要，即：實驗準備準備（培養(yǎng)基配制，洗滌與滅菌等培養(yǎng)基配制，洗滌與滅菌等）、無菌操作、控制培養(yǎng)。、無菌操作、控制培養(yǎng)。 基本組成：基本組成： 基本實驗室基本實驗室 消毒準備室消毒準備室 制備室制備室 無菌操作室無菌操作室 輔助實驗室輔助實驗室 細胞學實

2、驗室細胞學實驗室 生化分析室生化分析室 攝影室及暗室攝影室及暗室n消毒準備室消毒準備室n制備室制備室n無菌操作室無菌操作室1.基本實驗室：基本實驗室：n消毒準備室消毒準備室 功能功能 一切與實驗有關的準備工作要求要求 設備的安裝和排列要合理 房間要寬敞明亮，通風條件好 地面要便于清潔、防滑配備配備 實驗臺，高壓滅菌鍋、排風滅火設備、 超聲波清洗器、洗瓶機等。n制備室制備室 功能功能 進行培養(yǎng)液及相關試劑的配制要求要求 在無菌操作臺內(nèi)過濾、除菌。配備配備 冰箱、天平、真空泵、PH計等。n無菌操作室無菌操作室地面、天花板及四壁盡可能光潔，無死角，易于清潔。大小適度，層高不高于2.5米。干爽、安靜、

3、清潔、明亮。紫外燈12盞，保持室內(nèi)無菌狀態(tài)。無菌操作室無菌操作室設置空氣過濾和恒溫恒濕裝置，恒溫溫度26度左右。相對濕度控制在30-65%。保持正壓，盡量減少與外界的空氣對流，減少塵埃與微生物侵入。通常由內(nèi)外間組成，外間為緩沖間，用于準備工作。研究人員進入操作間前要穿上消過毒的工作服和拖鞋。無菌操作（1）無菌操作室：無菌操作區(qū)只限于細胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域，最好能與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。理想的無菌操作室應劃為三部分：a) 更衣室供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。b) 緩沖間位于更衣間與操作間之間，目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境。c) 無菌操作間專用于無菌操作、細胞培養(yǎng)。其大小要適

4、當，且其頂部不宜過高（不超過2.5m）以保證紫外線的有效滅菌效果；墻壁光滑無死角以便清潔和消毒。工作臺安置不應靠墻壁，臺面要光滑壓塑作表面，漆成白色或灰色以利于酚紅顯示pH的觀察。無菌操作間的空氣消毒： 紫外線燈產(chǎn)生臭氧，并且室內(nèi)溫度及濕度均較高，不利于工作人員健康。空氣過濾的恒溫恒濕裝置最好無臭氧紫外線消毒器 電子消毒滅菌器在高壓電場作用下，電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強烈電子轟擊，使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強氧化劑，能同細菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進行氧化分解反應，從而靠臭氧氣體彌漫性擴散達到殺菌之目的，消毒時沒有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需3040min即能自行還原成氧氣，空氣

5、不留異味，消毒物體表面不留殘毒。n基本設備基本設備n滅菌設備滅菌設備n無菌操作設備無菌操作設備n細胞培養(yǎng)設備細胞培養(yǎng)設備n細胞學鑒定設備細胞學鑒定設備冰箱冰箱天平天平酸度計酸度計恒溫水浴鍋恒溫水浴鍋磁力攪拌器磁力攪拌器液氮液氮罐罐純水純水設備設備n1.基本設備基本設備 PH 7.07.4去離子水去離子水無菌無菌 高溫電子滅菌爐高溫電子滅菌爐 蒸汽式壓力滅菌鍋蒸汽式壓力滅菌鍋 過濾滅菌裝置過濾滅菌裝置 噴霧消毒器噴霧消毒器 紫外燈紫外燈n2.滅菌設備滅菌設備 0.45 m0.22 m生物安全柜生物安全柜n3.無菌操作設備無菌操作設備生物安全柜生物安全柜 根據(jù)主要幾項生物安全柜國際標準的規(guī)定，安全

6、柜可分為一級、二級一級、二級和三級三級三大類以滿足不同生物研究和防疫的要求。安全柜的分類級別與生物安全登記無關。l一級生物安全柜一級生物安全柜 保護工作人員和環(huán)境，而不保護樣品。排氣口安裝有HEPA過濾器。無自帶風機，依賴外接通風管中的風機帶 動氣流。l二級生物安全柜二級生物安全柜可提供對樣品，環(huán)境，工作人員的保護。排氣口安裝有HEPA過濾器，獨有特征是具有垂直層狀薄片（無定向的）HEPA過濾器。內(nèi)置風機，形成下沉氣流無自帶風機，依賴外接通風管中的風機帶 動氣流。l三級生物安全柜三級生物安全柜為34級實驗室生物安全等級而設計，柜體完全氣閉。通過手套進行操作，俗稱“手套箱”。實驗品通過雙門的傳遞

7、箱進出。適用于高風險的生物實驗。CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱離心機離心機n4.細胞培養(yǎng)設備細胞培養(yǎng)設備溫度：溫度：370.5CO2濃度：濃度：5%相對濕度：相對濕度：100%定期清洗、消毒定期清洗、消毒罐內(nèi)壓力指示罐內(nèi)壓力指示接培養(yǎng)箱的管子接培養(yǎng)箱的管子輸出壓力指示輸出壓力指示壓力調(diào)節(jié)旋鈕壓力調(diào)節(jié)旋鈕流量控制閥門流量控制閥門n5.細胞學鑒定設備細胞學鑒定設備 倒置顯微鏡倒置顯微鏡 熒光顯微鏡熒光顯微鏡 酶標檢測儀酶標檢測儀 流式細胞儀流式細胞儀四四.常用器皿、器械常用器皿、器械n培養(yǎng)器皿培養(yǎng)器皿n移液器移液器n特殊用具特殊用具n移液器移液器電動移液器電動移液器微量移液器微量移液器多通道微量移液器多通道微量移液器n特殊用具特殊用具 細胞篩網(wǎng)、細胞刮刀、細胞計數(shù)板做好實驗前準備，避免反復進出而增加污染機會做好實驗前準備，避免反復進出而增加污染機會進入細胞培養(yǎng)室前需更換工作服進入細胞培養(yǎng)室前需更換工作服,換鞋并洗凈、消換鞋并洗凈、消毒雙手。毒雙手。注意無菌室內(nèi)的紫外燈注意無菌室內(nèi)的紫外燈室內(nèi)常規(guī)用品不準隨意拿出室外，所有物品不得室內(nèi)常規(guī)用品不準隨意拿出室外，所有物品不得挪作它用挪作它用冰箱內(nèi)的培養(yǎng)液要注明姓名、配制日期，不冰箱內(nèi)的培養(yǎng)液要注明姓名、配制日期，不隨便使用他人的培養(yǎng)液，以免交叉污染隨便使用他人的培養(yǎng)液，