藥品生產清潔驗證

1、清潔分析方法驗證 蘇芳清潔驗證的背景：FDA歷來的檢查重點：v過去FDA 總是更注意檢查青霉素類與非青霉素類藥物之間的交叉污染、藥品與甾類物質或激素之間的交叉污染問題。在過去二十年間，因實際或潛在的青霉素交叉污染問題已從市場上撤回了大量的藥品。 v 有一位幼兒教師，懷抱著一名2小時前注射過青霉素鈉的嬰兒，孩子的一泡尿撒在了幼兒教師的手臂上，1分鐘后該名幼兒教師呼吸困難、面色蒼白、心慌氣短，不一會就呈現(xiàn)昏迷狀態(tài)，經(jīng)醫(yī)生診斷為青霉素過敏。歐盟GMP關于清潔的要求36.為確認清潔規(guī)程的效力，應進行清潔驗證。應根據(jù)所涉及的物料，合理的確認產品的殘留、清潔劑和微生物污染的限度標準。這個限度標準應該是可以

2、接受的，能夠被證實的。37.應該使用經(jīng)驗證、檢出靈敏度高的檢驗方法來檢測殘留或污染物。每種分析方法或儀器的檢測靈敏度應足以檢測出設定合格限度水平的殘留或污染物。歐盟GMP關于清潔的要求38.通常只有接觸產品的設備表面的清潔規(guī)程需要驗證。某些場合下，還應考慮不直接接觸產品的部分。應驗證設備使用與清潔的間隔時間,以及已清潔設備可保留的時間（即清潔有效期），并通過驗證確定清洗的間隔時間和清潔的方法。39.對于相似產品和相似工藝而言，可從相似產品及工藝中，選擇一個具有代表性的產品和工藝進行清潔驗證。可以采用“最差條件”的方法進行單獨的驗證試驗，在驗證中應考慮關鍵因素（取樣部位、取樣方法、清洗劑等）歐盟

3、GMP關于清潔的要求40.為證明方法是經(jīng)過驗證的，通常應在3個連續(xù)批上使用該清潔規(guī)程，并檢驗合格。42.如果實際產品是有毒物質或有害物質，在清潔驗證中，可以例外的采用物化性質相似的無毒無害物質來模擬。FDAFDA的要求：的要求：在FDA的cGMP 211.67章節(jié) 中規(guī)定了設備清洗驗證的要求。建立書面標準操作程序（SOP），其中必須詳細規(guī)定設備各部件的清洗過程。 必須建立書面的清洗方法驗證通則。 清洗方法驗證通則應規(guī)定執(zhí)行驗證的負責人、批準驗證工作的負責人、驗證標準（合格標準）、再驗證的時間。 對各生產系統(tǒng)或各設備部件進行清洗驗證之前，應制定專一特定的書面驗證計劃，其中應規(guī)定取樣規(guī)程、分析方法

4、（包括分析方法的靈敏度）。內容介紹v1.標記化合物的選擇及限度計算v2.清潔方法的開發(fā)和設計v3.清潔分析方法（HPLC）的驗證v4.HPLC法與TOC法比較一、標記化合物的選擇v一般藥品都由活性成分和輔料組成。對于接觸多個產品的共用設備，所有這些殘留物都是必須清潔干凈的，在清潔驗證中不必為所有殘留物都制定限度標準并一一檢測，因為這是不切實際且沒有必要的。在一定的意義上，清潔的過程是個溶解的過程，因此，通常的做法是從各組分中確定最難清潔(溶解)的物質，以此作為參照物質。通常，相對與輔料，人們最更關注活性成分的殘留，因為它可能直接影響下批產品的質量、療效和安全性。一、標記化合物的選擇（續(xù)）毒性在

5、清洗溶劑中的溶解度清洗問題如：對設備表面材質有一定的附著力 包含色料、芳香劑或矯味劑的產品 設備的使用率（生產頻率高的產品相應的清洗頻率也高）清洗過程中如果使用清洗劑，則其殘留物也應視為標記物一、標記化合物的選擇（續(xù)）目標化合物選擇：A D化學殘留限度計算：v 濃度限度：十萬分之一（10ppm） 在下一產品中的殘留物數(shù)量級別應不超過十萬分之一（10ppm） 設下批產品的生產批量為B(kg)，因殘留物濃度最高為10106，即10mgkg，則殘留物總量最大為B1010610B(mg)；單位面積殘留物的限度為殘留物總量除以測量的與產品接觸的內表面積，設設備總內表面積為SA(cm2)，則表面殘留物限度

6、L 為10BSA(mgcm2)?；瘜W殘留限度計算：（續(xù)） 千分之一殘留限度的計算MTDa = 清洗前產品最小每日給藥劑量中的活性成分含量；Nb = 清洗后產品的批量；MDDb = 清洗后產品的最大日給藥劑量的活性成分含量；Sb = 清洗后產品活性成分含量的百分比(%w/w)。數(shù)據(jù)1/1000來源：一般認為藥物的十分之一處方劑量是無效的。SbMDDbNMTDaLb10001000/1二、清潔方法的開發(fā)和設計：清潔方式選擇通常清潔方法分為:手工清潔（Manual Cleaning）在線清潔（Cleaning In Place）在線清潔的特點：1. 設備、容器、管道能夠自動進行清洗；2. 對容器采用

7、噴林法清潔，對管道采用壓力法清潔；3. 極少的手工操作，重復性高。二、二、清潔方法的開發(fā)和設計清潔方法的開發(fā)和設計:清潔劑的選擇清潔劑的選擇1. 清潔劑應能有效溶解殘留物，不腐蝕設備，且本身易被清除。2. 人用藥品注冊技術要求國際標準協(xié)調會(ICH)在“殘留溶劑指南”中將溶劑分為3個級別，對其使用和殘留限度有明確的要求。3. 隨著環(huán)境保護標準的提高，還應要求清潔劑對環(huán)境盡量無害或可被無害化處理。4. 滿足以上要求的前提下應盡量廉價。二、二、清潔方法的開發(fā)和設計清潔方法的開發(fā)和設計:清潔劑的選擇（續(xù)）清潔劑的選擇（續(xù)）v根據(jù)這些標準，對于水溶性殘留物，水是首選的清潔劑。不同批號的清潔劑應當有足夠

8、的質量穩(wěn)定性。因此不宜采用一般家用清潔劑，因其成分復雜、質量波動較大且供應商不公布詳細組份。v因此，應盡量選擇組份簡單、成分確切的清潔劑。根據(jù)殘留物和設備的性質，企業(yè)還可自行配制成分簡單效果確切的清潔劑，如一定濃度的酸、堿溶液等。企業(yè)應有足夠靈敏的方法檢測清潔劑的殘留情況，并有能力回收或對廢液進行無害化處理。取樣方法和取樣點的確認：通常設備的取樣清潔驗證中如何確定合適取樣方法和取樣點是驗證方案的關鍵內容之一，必須由合適的理由來確認取樣點，此取樣點應能夠代表設備的“最臟點”。（1） 取樣方法的選擇v 直接表面擦拭直接表面擦拭v 淋洗液沖洗淋洗液沖洗v 浸泡液取樣浸泡液取樣取樣方法和取樣點的確認：

9、 擦拭取樣優(yōu)點：是能對最難清潔部位直接取樣，通過選擇適當?shù)牟潦萌軇?、擦拭工具和擦拭方法，可將清洗過程中未溶解的，已“干結”在設備表面或溶解度很小的物質擦拭下來。檢驗的結果能直接反映出各取樣點的清潔狀況。 擦拭取樣缺點：是很多情況下須拆卸設備后方能接觸到取樣部位，對取樣工具、溶劑、取樣人員的操作等都有一定的要求。取樣方法和取樣點的確認： 淋洗取樣法優(yōu)點淋洗取樣法優(yōu)點：是取樣面大，對不便拆卸或不宜經(jīng)常拆卸的設備也能取樣。因此其適用于擦拭取樣不易接觸到的表面，尤其適用于設備表面平坦、管道多且長的的生產設備。 淋洗水取樣缺點：淋洗水取樣缺點：溶解與流體力學原理，當溶劑不能在設備表面形成湍流進而有效溶解

10、殘留物時，或者殘留物不溶于水或“干結”在設備表面時，淋洗水就難以反映真實的情況。 取樣方法和取樣點的確認：（2） 取樣點的確認 通常不可能擦拭設備的全部表面，因此應該選擇設備的最差區(qū)域作為取樣點。這些區(qū)域應在清潔難度和殘留水平方面代表著對清潔規(guī)程最大程度的挑戰(zhàn)，例如料斗的底部、槳拌槳槳葉底部和閥門的周圍。三、清洗分析方法驗證的內容：專屬性線性范圍準確度精密度（重復性、中間精密度、重現(xiàn)性）檢測限（LOD）和定量限（LOQ）藥品溶液的穩(wěn)定性專屬性： 通常在進行清潔分析時，即使活性成分的樣品（如：取樣棉簽、淋洗溶液）中的含量也很低，所以在進行專屬性驗證時無需考慮正常產品中的雜質，降解產物的影響，只需

11、考慮輔料及空白溶劑的影響。 專屬性的試驗方法：1.預先按處方比例配制足夠量的輔料混合物，研磨均勻。2.按照試驗方法配制一定濃度（濃度來自于：標記化合物的理論限度濃度）的標準溶液。3.精密稱量同標準溶液中所用標準品成比例的輔料混合物，按照標準品溶液的配制方法配制。過濾后使用。專屬性的接受標準：1.應當證明潛在的干擾成分不會對方法的性能產生副作用。對于色譜檢測方法，要求證實雜質之間、雜質與主峰之間的分離度1.0。2.空白空白對照應無干擾。線性與范圍：線性與范圍： 線性是定量測定的基礎，所以定量清洗分析方法需要進行線性驗證而定性清洗分析方法無法進行線性驗證。 可用一貯備液經(jīng)精密稀釋或分別精密稱樣，制

12、備一系列的供試品進行測定，至少制備5個濃度（通常選取50%、80%、100%、120%和150%），另外需要將定量限加入到線性中。精密度： 1.重復性 重復性系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內，由同一分析人員測定所得結果的接近程度。精密度：重復性的評價： 在方法規(guī)定的線性范圍內至少測定9次（如3個濃度級別80%，100%和120%，或者30%，50%和100%；每個濃度級別測定3次）或者在100%的試驗濃度，至少測定6次?？山邮軜藴剩憾壳逑捶治龇椒炞C時，活性成分的RSD10%。2.中間精密度：系指同一實驗室不同日期、不同儀器、不同分析人員對同一樣品、采用同一方法處理樣品所得結果之間的

13、接近程度。 驗證方法：同一樣品每位分析人員準備6份進樣測量，計算兩人之間的平均值的差異。 可接受限度：平行六份樣品的RSD10%，兩人之間的平均值之差的相對值10%。準確度試驗：v棉簽取樣回收率試驗v淋洗取樣回收率試驗v浸泡法取樣回收率試驗清洗回收率：棉簽取樣方法驗證 取樣棉簽種類、規(guī)格、品牌等；溶解用溶劑；取樣人員的操作；樣品的溶出。棉簽取樣方法清洗回收率準備一塊與設備表面材質相同的板材，如平整光潔的316L不銹鋼板；在鋼板上劃出100mm100mm的區(qū)域；將5倍限度量的的待檢測物溶液，定量裝入校驗的微量注射器；將其溶液盡量均勻的涂布100mm100mm的區(qū)域內；自然干燥或用電吹風溫和的吹干

14、不銹鋼板；棉簽取樣方法清洗回收率用選的的擦拭溶劑潤濕擦拭棉簽，按下圖所示進行擦拭取樣； 第一步 第二步棉簽取樣清洗回收率重復以上規(guī)程3次；將擦拭棉簽分別放入棉簽管中，加入預定的溶劑5ml，超聲；依法分析，計算回收率和回收率的RSD棉簽取樣方法清洗回收率總結： 取樣過程需經(jīng)過驗證，通過回收率試驗驗證取樣過程的回收率和檢驗方法回收率結合進行。接受標準： 總回收率一般（企業(yè)可以根據(jù)實際情況確定）不低于70%，多次取樣回收率的相對標準偏差應不大于20%淋洗法清洗回收率：淋洗溶劑選擇溶解度；同設備內表面的相容性；易清除性；毒性；環(huán)境的危害性；獲取的難易性。清洗回收率淋洗法淋洗溶劑或淋洗水的淋洗速度選擇：

15、淋洗法清洗回收率試驗方法： 選擇同生產設備材質相同的平板，劃出10cm*10cm區(qū)域，在該區(qū)域內均勻涂抹一定量（取決于分析方法的測量范圍的下限乘以清洗所有溶液的體積）的標記化合物，待干燥后，使用一定體積的淋洗溶劑，采用一定速度沖洗平板，收集全部淋洗液，如有必要可以重復清洗過程。待沖洗完成后，吸取一定體積的淋洗液進行測試，并計算回收率。清洗回收率淋洗法接受標準：回收率通常應不低于95%； 外觀檢查即清洗后的淋洗溶液樣品同淋洗前的淋洗液做視覺檢查，確定是否有顏色差異和異物存在；如果有上述現(xiàn)象發(fā)生，可直接判斷樣品不合格。注意：淋洗法樣品可對沖洗液直接檢測，也可對稀釋/濃縮后檢測。檢測限和定量限：檢測限檢測限系指在確定的試驗條件下，試樣中的被測物能被檢查的最小量；定量限定量限系指在確定的試驗條件下，試樣中被測物能被準確測定的最小量，其檢測結果應具有一定準確度和精密度。檢測限和定量限：1.信噪比法：該方法適用于出現(xiàn)噪音的分析方法。 性噪比的測定時通過比較含已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測試信號，確定被分析物可被確切的檢測的最小濃度，典型的性噪比為3:1；對于定量限典型的信噪比為10:1。檢測限和定量限：2.根據(jù)相應值的標準差和斜率檢測限：LOD=3.3/S+空白值