第七章紫外-可見分光光度法2

1、分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材紫外吸收光譜的基本概念紫外吸收光譜的基本概念1紫外紫外-可見分光光度法的基本原理可見分光光度法的基本原理2紫外紫外-可見分光光度計可見分光光度計3分析條件的選擇分析條件的選擇456 定性定量分析方法定性定量分析方法UV在有機藥物分析中的應用在有機藥物分析中的應用21第七章紫外第七章紫外-可見分光光度法與檢測技術可見分光光度法與檢測技術分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)

2、生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第七章第七章 紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法學習目標學習目標 知識要求知識要求 能力要求能力要求 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材學習目標學習目標u 通過學習光譜分析法概論、紫外通過學習光譜分析法概論、紫外- -可見分光光度法可見分光光度法的基本原理、分光光度計的基本構造、降低測量誤的基本原理、分光光度計的基本構造、降低測量誤差的方法、常用的定性、定量方法等知識，了解光差的方法、常用的定性、定量方法等知識，了解光學分析法的知識體系，熟

3、悉紫外學分析法的知識體系，熟悉紫外- -可見分光光度法可見分光光度法的實際應用，會用紫外的實際應用，會用紫外- -可見分光光度計測定溶液可見分光光度計測定溶液的吸光度，并對有關物質(zhì)進行定性定量分析，為學的吸光度，并對有關物質(zhì)進行定性定量分析，為學習紅外分光光度法、熒光分光光度法、核磁共振波習紅外分光光度法、熒光分光光度法、核磁共振波譜法及藥物分析課中有關藥品的定性鑒別、雜質(zhì)檢譜法及藥物分析課中有關藥品的定性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測定方法奠定基礎。查和含量測定方法奠定基礎。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二

4、五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材知識要求知識要求1掌握光的吸收定律概念、表達式及條件，吸光系數(shù)和掌握光的吸收定律概念、表達式及條件，吸光系數(shù)和吸收光譜的意義，常用定量分析方法的原理和應用。吸收光譜的意義，常用定量分析方法的原理和應用。2熟悉紫外熟悉紫外- -可見分光光度計的基本結構、吸光度測量可見分光光度計的基本結構、吸光度測量條件的選擇、偏離光的吸收定律的主要因素。條件的選擇、偏離光的吸收定律的主要因素。3了解光譜分析法的分類、紫外了解光譜分析法的分類、紫外- -可見吸收光譜的產(chǎn)生可見吸收光譜的產(chǎn)生機制、定性分析的依據(jù)和方法。機制、定性分析的依據(jù)和方法。分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝

5、慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材能力要求能力要求1. .能夠用光的吸收定律解決定量計算問題能夠用光的吸收定律解決定量計算問題 。2. .能夠繪制吸收光譜曲線，找出被測組分的最能夠繪制吸收光譜曲線，找出被測組分的最 大吸收波長。大吸收波長。3. .能夠繪制標準曲線，并能應用標準曲線對樣品能夠繪制標準曲線，并能應用標準曲線對樣品進行定量分析。進行定量分析。4. .會使用常見的紫外會使用常見的紫外- -可見分光光度計測定溶液的可見分光光度計測定溶液的吸光度。吸光度。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維

6、斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材案例導入 在夏天參加戶外活動時，如果天氣晴朗，就應該在夏天參加戶外活動時，如果天氣晴朗，就應該注意保護皮膚，否則，暴露在火辣辣太陽之下的皮膚，注意保護皮膚，否則，暴露在火辣辣太陽之下的皮膚，數(shù)小時后就會出現(xiàn)紅腫、瘙癢、發(fā)熱、刺痛癥狀，數(shù)數(shù)小時后就會出現(xiàn)紅腫、瘙癢、發(fā)熱、刺痛癥狀，數(shù)日后出現(xiàn)蛻皮現(xiàn)象，這表明太陽光中有一種光線能傷日后出現(xiàn)蛻皮現(xiàn)象，這表明太陽光中有一種光線能傷害生物細胞?？茖W家研究證實，這種光線是紫外線。害生物細胞?？茖W家研究證實，這種光線是紫外線。 根據(jù)可見光、紫外光與物質(zhì)分子的相互作用建立

7、根據(jù)可見光、紫外光與物質(zhì)分子的相互作用建立了紫外了紫外- -可見分光光度法?？梢姺止夤舛确ā?分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第一節(jié)第一節(jié) 紫外吸收光譜的基本概念紫外吸收光譜的基本概念u根據(jù)待測物質(zhì)（原子或分子）發(fā)射或吸收的電磁輻根據(jù)待測物質(zhì)（原子或分子）發(fā)射或吸收的電磁輻射，以及待測物質(zhì)與電磁輻射的相互作用而建立起射，以及待測物質(zhì)與電磁輻射的相互作用而建立起來的定性、定量和結構分析方法，統(tǒng)稱為來的定性、定量和結構分析方法，統(tǒng)稱為光學分析光學分析法。法。 u利用光譜進行定性、定

8、量和結構分析的方法稱為光利用光譜進行定性、定量和結構分析的方法稱為光譜分析法，簡稱譜分析法，簡稱光譜法。光譜法。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第一節(jié)第一節(jié) 紫外吸收光譜的基本概念紫外吸收光譜的基本概念一、物質(zhì)對光的選擇性吸收一、物質(zhì)對光的選擇性吸收從本質(zhì)上講，光是一種電磁輻射，又稱電磁波，從本質(zhì)上講，光是一種電磁輻射，又稱電磁波，具有波動性和粒子性，即波粒二象性。具有波動性和粒子性，即波粒二象性。波動性：反射、折射、干涉、偏振波動性：反射、折射、干涉、偏振粒子性：吸收、發(fā)射

9、、光電效應粒子性：吸收、發(fā)射、光電效應分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材電磁波譜分區(qū)表電磁波譜分區(qū)表輻射區(qū)段輻射區(qū)段波長范圍波長范圍輻射區(qū)段輻射區(qū)段波長范圍波長范圍 射線射線10-30.1nm 射線射線遠紫外輻射遠紫外輻射紫外輻射紫外輻射可見光可見光0.110nm10200nm200400nm400760nm近紅外輻射近紅外輻射中紅外輻射中紅外輻射遠紅外輻射遠紅外輻射微波微波無線電波無線電波0.762.5 m2.550 m50300 m0.3mm1m11000m分析化學（第分析化

10、學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材 電磁輻射電磁輻射電磁輻射是一種以電磁輻射是一種以電磁波電磁波的的形式在空間高速傳播的形式在空間高速傳播的粒子流粒子流，具有具有波動性波動性和和微粒性微粒性。分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材磁場磁場電場電場傳播方向傳播方向電磁輻射的波動性電磁輻射與其它波，如聲波不同，電磁波不需傳播介質(zhì)，可在真空中傳輸。 c=v分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝

11、慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材電磁輻射的微粒性電磁輻射是由一顆顆不連續(xù)的電磁輻射是由一顆顆不連續(xù)的光光子子構成的構成的粒子流粒子流。當物質(zhì)吸收或發(fā)射。當物質(zhì)吸收或發(fā)射一定波長的電磁波時，是以吸收或發(fā)一定波長的電磁波時，是以吸收或發(fā)射一顆顆量子化的光子形式進行的。射一顆顆量子化的光子形式進行的。/hchE分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材一一 、 物質(zhì)對光的選擇性吸收物質(zhì)對光的選擇性吸收單色光單色光:

12、 : 單一波長的光束單一波長的光束復合光復合光: : 含有多種波長的光束含有多種波長的光束電磁波譜電磁波譜: : 以波長大小順序排列的電磁波譜圖以波長大小順序排列的電磁波譜圖互補光：互補光：兩種適當顏色單色光按一定比例混合，可以得兩種適當顏色單色光按一定比例混合，可以得 到白光，則這兩種單色光互稱補色光。到白光，則這兩種單色光互稱補色光。波長波長 10pm 300pm 200nm 400nm 800nm 500 m 1cm 1m光譜光譜 射線射線 X射線射線 紫外光紫外光 可見光可見光 紅外光紅外光 微波微波 無線電波無線電波方法方法 光譜法光譜法 分光光度法分光光度法 光譜法光譜法 核磁共振

13、核磁共振 可可 見見 光光分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材一、 物質(zhì)對光的選擇性吸收綠綠560560500500白光紫紫400400450450青藍青藍480480490490橙橙610610650650青青480480500500紅紅650650750750黃黃560560610610藍藍450450480480光的互補色示意圖光的互補色示意圖課堂互動1.硫酸銅能夠吸收白色光中的黃色光而呈現(xiàn)-色2.一束白光透過高錳酸鉀溶液后，何種顏色的光被吸收了？分析化學（第分析化學（第2版

14、）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材 光的三原色光的三原色 白光的色散白光的色散分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材二、透光率與吸光度二、透光率與吸光度當一束平行的單當一束平行的單色光照射溶液時色光照射溶液時 I0Ia + It 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材lgAT 二、透光率

15、與吸光度二、透光率與吸光度u 透射光透射光強度強度It與入射光強度與入射光強度I0的比值稱為透光率或透光的比值稱為透光率或透光度度T T= It I0u 透光率的負對數(shù)為吸光度透光率的負對數(shù)為吸光度A 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材三、吸收光譜曲線三、吸收光譜曲線 u概念：以波長概念：以波長為橫坐標，吸光度為橫坐標，吸光度A為縱坐標所描為縱坐標所描繪的曲線，稱為吸收光譜曲線，簡稱吸收光譜，繪的曲線，稱為吸收光譜曲線，簡稱吸收光譜，或或A-曲線曲線 。u特點：在相同條件下，同一

16、物質(zhì)的不同濃度的溶特點：在相同條件下，同一物質(zhì)的不同濃度的溶液，其吸收光譜曲線相似，且液，其吸收光譜曲線相似，且max相同。這是定相同。這是定性分析的基礎。性分析的基礎。分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材三、吸收曲線（吸收光譜）三、吸收曲線（吸收光譜）max525nm吸收光譜能準確地描述物質(zhì)對光的選擇性吸收的情況最大吸收波長定性依據(jù)：不同物質(zhì)因分子結構不同而具有不同的特征吸收曲線定量依據(jù)：同波長下吸光度隨濃度增大而增大一般情況下選擇最大吸收波長處測定動畫動畫分析化學（第分析化學（

17、第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材三、吸收光譜曲線三、吸收光譜曲線 吸收光譜曲線示意圖吸收光譜曲線示意圖 A480 520 560nm max=515分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材吸收曲線的討論1.同一種物質(zhì)對不同波長光的吸光度不同。同一種物質(zhì)對不同波長光的吸光度不同。 吸光度最大處對應的波長稱為吸光度最大處對應的波長稱為最大吸收波長最大吸收波長max2.不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收

18、曲線形狀相似不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似 max不變。而對于不同物質(zhì)，它們的吸收曲線形狀和不變。而對于不同物質(zhì)，它們的吸收曲線形狀和 max則不同。則不同。3.吸收曲線可以提供物質(zhì)的結構信息，并作為物吸收曲線可以提供物質(zhì)的結構信息，并作為物 質(zhì)定性分析的依據(jù)之一。質(zhì)定性分析的依據(jù)之一。4.不同濃度的同一種物質(zhì)，在某一定波長下吸光度不同濃度的同一種物質(zhì)，在某一定波長下吸光度 A 有差異，在有差異，在max處吸光度處吸光度A 的差異最大。此特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)的差異最大。此特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù) 5.在在max處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測定最靈敏。吸處吸光度隨濃度

19、變化的幅度最大，所以測定最靈敏。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長的重要依據(jù)。收曲線是定量分析中選擇入射光波長的重要依據(jù)。分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第一節(jié) 紫外吸收光譜的基本概念四、紫外四、紫外- -可見分光光度的特點可見分光光度的特點特點特點靈敏度高靈敏度高準確度高準確度高精密度好精密度好選擇性好選擇性好易于普及易于普及應用廣泛應用廣泛儀器簡單儀器簡單操作簡便操作簡便價格低廉價格低廉測定快速測定快速分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高

20、專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材點滴積累點滴積累1.光的本質(zhì)是電磁波，物質(zhì)對光的吸收具有選擇性2.吸光度是透光率倒數(shù)的對數(shù)，或是透光率的負對數(shù)3.吸收曲線是溶液在一定條件下的吸收度隨入射光波長變化而變化的曲線。他與溶液的性質(zhì)有關，因此A-曲線的形狀和最大吸收波長可以作為物質(zhì)定性的輔助依據(jù)。分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)

21、生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材1 1紫外紫外- -可見光的波長范圍是可見光的波長范圍是 A200400nm B400760nm C200760nm D360800nm2 2下列敘述錯誤的是下列敘述錯誤的是 A A光的能量與其波長成反比光的能量與其波長成反比 B B有色溶液越濃，對光的吸收也越強烈有色溶液越濃，對光的吸收也越強烈 C C物質(zhì)對光的吸收有選擇性物質(zhì)對光的吸收有選擇性 D D光的能量與其頻率成反比光的能量與其頻率成反比第一節(jié) 概述分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材

22、3 3紫外紫外- -可見分光光度法屬于可見分光光度法屬于 A A原子發(fā)射光譜法原子發(fā)射光譜法 B B原子吸收光譜法原子吸收光譜法 C C分子發(fā)射光譜法分子發(fā)射光譜法 D D分子吸收光譜法分子吸收光譜法4 4分子吸收可見分子吸收可見- -紫外光后，可發(fā)生哪種類型的紫外光后，可發(fā)生哪種類型的分子能級躍遷分子能級躍遷 A A轉(zhuǎn)動能級躍遷轉(zhuǎn)動能級躍遷 B B振動能級躍遷振動能級躍遷 C C電子能級躍遷電子能級躍遷 D D以上都能發(fā)生以上都能發(fā)生 第一節(jié) 概述分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教

23、材材第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理一、光的吸收定律一、光的吸收定律 u當一束平行的單色光通過均勻、無散射的含有吸光性當一束平行的單色光通過均勻、無散射的含有吸光性物質(zhì)的溶液時，在入射光的波長、強度及溶液的溫度物質(zhì)的溶液時，在入射光的波長、強度及溶液的溫度等條件不變的情況下，該溶液的吸光度等條件不變的情況下，該溶液的吸光度A與溶液的濃與溶液的濃度度c及液層厚度及液層厚度L的乘積成正比，即：的乘積成正比，即： AKL c 。 稱為光的吸收定律（朗伯稱為光的吸收定律（朗伯-比爾定律）。比爾定律）。u光的吸收定律是定量分析的理論依據(jù)。光的吸收定律是定量分析的理論依據(jù)。分析化學（第分析化學（第2

24、版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材u朗伯朗伯- -比爾定律不僅適用于可見光，而且也適用于紫比爾定律不僅適用于可見光，而且也適用于紫外光和紅外光；不僅適用于均勻、無散射的溶液，而外光和紅外光；不僅適用于均勻、無散射的溶液，而且也適用于均勻、無散射的固體和氣體且也適用于均勻、無散射的固體和氣體。u實驗證明：溶液對光的吸光度具有加和性。如果溶液實驗證明：溶液對光的吸光度具有加和性。如果溶液中同時存在兩種或兩種以上的吸光性物質(zhì)，則測得的中同時存在兩種或兩種以上的吸光性物質(zhì)，則測得的該溶液的吸光度等于溶液中各吸光性

25、物質(zhì)吸光度的總該溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物質(zhì)吸光度的總和，即：和，即：A（a+b+c）AaAbAc 第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材 第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理二、吸光系數(shù)二、吸光系數(shù) u摩爾吸光系數(shù)：在入射光波長一定時，溶液濃度摩爾吸光

26、系數(shù)：在入射光波長一定時，溶液濃度為為1 mol/L，液層厚度為，液層厚度為1cm時所測得的吸光度稱時所測得的吸光度稱為摩爾吸光系數(shù)，常用為摩爾吸光系數(shù)，常用表示表示 。 u光吸收系數(shù)光吸收系數(shù) 在入射光波長一定時，溶液濃度為在入射光波長一定時，溶液濃度為1g/L1g/L，液層厚度為，液層厚度為1cm1cm時的吸光度，稱為光吸收系時的吸光度，稱為光吸收系數(shù)，常用表示，其量綱為數(shù)，常用表示，其量綱為L/(gcm)L/(gcm)。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第二節(jié) 紫外-可見

27、分光光度法的基本原理u百分吸光系數(shù)：在入射光波長一定時，溶液濃度百分吸光系數(shù)：在入射光波長一定時，溶液濃度為為1 （W/V）、層厚度為）、層厚度為1cm時所測得的吸光度時所測得的吸光度稱為百分吸光系數(shù)，常用稱為百分吸光系數(shù)，常用 表示表示。 二者的關系：二者的關系：1%110cmME 1%1cmE分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材 第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)

28、衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材某有色溶液的物質(zhì)的量濃度濃度為某有色溶液的物質(zhì)的量濃度濃度為c c，在一定條件下用，在一定條件下用1 1cmcm比色杯測得吸光度為比色杯測得吸光度為A A，則摩爾吸光系數(shù)應為：，則摩爾吸光系數(shù)應為： A AcAcA B BcMcM C CA/C DA/C DC/A C/A 第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理三、偏離光的吸收定律的主要因素三、偏離光的吸收定律的主要因素u

29、化學因素化學因素:(1)溶液的濃度溶液的濃度 (2)物質(zhì)的化學變化物質(zhì)的化學變化 (3)溶劑的影響溶劑的影響 u光學因素光學因素:(1)非單色光非單色光 (2)雜散光雜散光 (3)非平行光非平行光 (4)反射現(xiàn)象反射現(xiàn)象 (5)散射現(xiàn)象散射現(xiàn)象分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理偏離光的吸收定律示意圖偏離光的吸收定律示意圖分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二

30、五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理點滴積累點滴積累1 1光的吸收定律表明了吸光度與液層厚度光的吸收定律表明了吸光度與液層厚度和濃度之間的關系，它是吸收光譜法定量分析和濃度之間的關系，它是吸收光譜法定量分析的依據(jù)。的依據(jù)。2 2吸光系數(shù)的表示方法有多種，隨待測溶吸光系數(shù)的表示方法有多種，隨待測溶液濃度的不同標度而不同。液濃度的不同標度而不同。3 3偏離光的吸收定律的因素主要有化學因偏離光的吸收定律的因素主要有化學因素和光學因素。素和光學因素。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二

31、五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第三節(jié) 紫外-可見分光光度計一、紫外一、紫外- -可見分光光度計的主要部件：可見分光光度計的主要部件：光源光源單色器單色器吸收池吸收池檢測器檢測器訊號處理與顯示器訊號處理與顯示器 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第三節(jié) 紫外-可見分光光度計 二、紫外二、紫外- -可見分光光度計的光學性能可見分光光度計的光學性能1測光方式 2波長范圍 3狹縫或光譜帶寬 4雜散光 5波長準確度 6吸光度范圍 7波長重復性 8測光準確度 9光度重復性 10分辨率 分析化學（

32、第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第三節(jié) 紫外-可見分光光度計 三、紫外三、紫外- -可見分光光度計的類型可見分光光度計的類型1.1.可見分光光度計可見分光光度計 721721型型 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第三節(jié) 紫外-可見分光光度計 三、紫外三、紫外- -可見分光光度計的類型可見分光光度計的類型1.1.可見分光光度計可見分光光度計 722722型型分析化學（第分析

33、化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第三節(jié) 紫外-可見分光光度計三、紫外三、紫外- -可見分光光度計的類型可見分光光度計的類型2.2.紫外紫外- -可見分光光度計可見分光光度計 （1 1）單波長分光光度計）單波長分光光度計 單光束分光光度計單光束分光光度計 雙光束分光光度計雙光束分光光度計 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第三節(jié) 紫外-可見分光光度計分析化學（第分析化學（第2版）版

34、） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材課堂活動課堂活動 1.1.試述紫外試述紫外- -可見分光光度計的主要部件可見分光光度計的主要部件及其作用？及其作用？ 2.2.紫外紫外- -可見分光光度計有哪些類型？可見分光光度計有哪些類型？第三節(jié) 紫外-可見分光光度計分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第三節(jié) 紫外-可見分光光度計點滴積累點滴積累u紫外紫外- -可見分光光度計的基本結構相同，都可見分光光度計的基本

35、結構相同，都由光源、單色器、吸收池、檢測器、訊號處由光源、單色器、吸收池、檢測器、訊號處理與顯示器等主要部件構成，但不同型號儀理與顯示器等主要部件構成，但不同型號儀器的外形差別很大，質(zhì)量和價格相差懸殊，器的外形差別很大，質(zhì)量和價格相差懸殊，操作方法迥異，使用之前應仔細閱讀儀器使操作方法迥異，使用之前應仔細閱讀儀器使用說明書。用說明書。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第四節(jié) 分析條件的選擇一、儀器測量條件的選擇一、儀器測量條件的選擇 1.1.應選擇最大吸收波長作為入射光。應選擇

36、最大吸收波長作為入射光。 2.2.應控制吸光度讀數(shù)范圍：應控制吸光度讀數(shù)范圍： 吸光度在吸光度在0.20.7之間；之間； 透光率在透光率在20%65%之間。之間。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第四節(jié) 分析條件的選擇二、顯色反應條件的選擇二、顯色反應條件的選擇1.1.對顯色劑及顯色反應的要求對顯色劑及顯色反應的要求 2.2.控制合適的顯色反應條件控制合適的顯色反應條件 三、參比溶液的選擇三、參比溶液的選擇1.溶劑參比溶液溶劑參比溶液 2.試樣參比溶液試樣參比溶液 3.試劑參比

37、溶液試劑參比溶液 4.平行操作參比溶液平行操作參比溶液 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第四節(jié) 分析條件的選擇分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第四節(jié) 分析條件的選擇點滴積累點滴積累 1 1選擇吸光性物質(zhì)的最大吸收波長作為測定波選擇吸光性物質(zhì)的最大吸收波長作為測定波長。長。 2 2使用紫外使用紫外- -可見分光光度計時，讀數(shù)范圍應可見分光光度計時，讀數(shù)范圍應控制在

38、吸光度為控制在吸光度為0.20.20.70.7，透光率為，透光率為65% 65% 20%20%之之間。間。 3 3待測物質(zhì)在紫外待測物質(zhì)在紫外- -可見光區(qū)無吸收時，應加可見光區(qū)無吸收時，應加顯色劑。顯色劑不得有干擾，反應必須完全。顯色劑。顯色劑不得有干擾，反應必須完全。 4 4一般用溶劑作參比溶液。必要時采用試樣參一般用溶劑作參比溶液。必要時采用試樣參比溶液、試劑參比溶液或平行操作參比溶液。比溶液、試劑參比溶液或平行操作參比溶液。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性

39、定量方法一、定性分析方法一、定性分析方法定性的基本依據(jù)：比較光譜的一致性。定性的基本依據(jù)：比較光譜的一致性。u未知物和標準品的吸收光譜曲線，對比二者是否一致。未知物和標準品的吸收光譜曲線，對比二者是否一致。 u比較吸收光譜的特征數(shù)據(jù)及比值的一致性。比較吸收光譜的特征數(shù)據(jù)及比值的一致性。二、雜質(zhì)檢查：二、雜質(zhì)檢查： 將藥品光譜與藥品標準光譜相對照，利用雜質(zhì)的特將藥品光譜與藥品標準光譜相對照，利用雜質(zhì)的特征吸收，可以檢測出微量雜質(zhì)及其含量。征吸收，可以檢測出微量雜質(zhì)及其含量。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十

40、二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材案例分析案例分析貝諾酯的定性鑒別貝諾酯的定性鑒別中國藥典中國藥典(20(201010年版年版) )規(guī)定：貝諾酯加無水乙醇制成規(guī)定：貝諾酯加無水乙醇制成每每1 1mlml約含約含7.57.5g的溶液，在的溶液，在240240nmnm處有最大吸收，相處有最大吸收，相應的百分吸光系數(shù)應的百分吸光系數(shù)( )( )應為應為730730760760。維生素維生素B B1212也有三個吸收峰，分別在也有三個吸收峰，分別在278278nmnm、361nm361nm、550nm550nm波長處，它們的吸光度比值應為：波長處，它們的吸光度比值應為：A A361nm361nm/ /A A

41、278nm278nm在在1.701.701.881.88之間，之間，A A361nm361nm/ /A A550nm550nm在在3.153.153.453.45之間。之間。 第五節(jié) 定性定量方法%11cmE分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材案例分析案例分析葡萄糖注射液是臨床上常用的藥品之一。制備時需葡萄糖注射液是臨床上常用的藥品之一。制備時需要高溫滅菌，葡萄糖會轉(zhuǎn)化為要高溫滅菌，葡萄糖會轉(zhuǎn)化為5-5-羥甲基糠醛而引入羥甲基糠醛而引入雜質(zhì)。雜質(zhì)。中國藥典中國藥典（20102010

42、年版）規(guī)定葡萄糖注射年版）規(guī)定葡萄糖注射液在液在284nm284nm波長處的吸收度不得過波長處的吸收度不得過0.320.32，以此控制其，以此控制其雜質(zhì)雜質(zhì)5-5-羥甲基糠醛的量。羥甲基糠醛的量。在在284nm284nm波長處，葡萄糖無吸收，而雜質(zhì)波長處，葡萄糖無吸收，而雜質(zhì)5-5-羥甲基糠羥甲基糠醛在此波長處有最大吸收，可以通過控制供試品溶醛在此波長處有最大吸收，可以通過控制供試品溶液在此波長處的吸收度來控制雜質(zhì)的含量。液在此波長處的吸收度來控制雜質(zhì)的含量。 第五節(jié) 定性定量方法分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)

43、生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法三、定量分析方法三、定量分析方法定量分析的依據(jù)定量分析的依據(jù): : AK c L（光的吸收定律）（光的吸收定律）（一）單組分溶液的定量方法（一）單組分溶液的定量方法 1. 標準曲線法：標準曲線法： 是紫外是紫外- -可見分光光度法中最可見分光光度法中最經(jīng)典的定量方法。經(jīng)典的定量方法。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法u標準曲線法標準曲線法的方法和步驟如下的方法和步驟如下:（1 1）配制一系列不同濃度的標

44、準溶液，選擇合適）配制一系列不同濃度的標準溶液，選擇合適的參比溶液，在相同條件下，以待測組分的最大的參比溶液，在相同條件下，以待測組分的最大吸收波長吸收波長 作為入射光，分別測定各標準溶液作為入射光，分別測定各標準溶液對應的吸光度。對應的吸光度。（2 2）以濃度）以濃度c c為橫坐標、吸光度為橫坐標、吸光度A A為縱坐標描繪標為縱坐標描繪標準曲線。準曲線。max分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法 （3 3）按照相同的實）按照相同的實驗條件和操作程序，驗條件和操

45、作程序，用待測溶液配制未知用待測溶液配制未知試樣溶液并測定其吸試樣溶液并測定其吸光度光度A A樣，在標準曲線，在標準曲線上找到與之對應的未上找到與之對應的未知試樣溶液的濃度知試樣溶液的濃度c c樣 。 如右圖。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法2.標準對比法標準對比法: 在相同的條件下，配制濃度為在相同的條件下，配制濃度為cs的標準溶液和的標準溶液和濃度為濃度為cx的試樣溶液，在最大吸收波長處，分別的試樣溶液，在最大吸收波長處，分別測定二者的吸光度值為測定二

46、者的吸光度值為As、Ax ，依據(jù)朗伯，依據(jù)朗伯- -比爾比爾定律得：定律得：As=csLAx=cxL 則則: :SSXxAcAc 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法3.吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法: 吸光系數(shù)法直接利用朗伯吸光系數(shù)法直接利用朗伯- -比爾定律的數(shù)比爾定律的數(shù)學表達式學表達式AKcL進行計算的定量分析方法。進行計算的定量分析方法。在手冊中查出待測物質(zhì)在最大吸收波長在手冊中查出待測物質(zhì)在最大吸收波長 處處的吸光系數(shù)的吸光系數(shù) 或或 , ,并在相同條件下測量

47、并在相同條件下測量樣品溶液的吸光度樣品溶液的吸光度A，則其濃度為：，則其濃度為： 或或%1cm1EAcLmaxLEA%1cm1分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法有時也可以將待測樣品溶液的吸光度換算成樣品有時也可以將待測樣品溶液的吸光度換算成樣品組分的吸光系數(shù)，計算與標準品的吸光系數(shù)的比組分的吸光系數(shù)，計算與標準品的吸光系數(shù)的比值，求出樣品中待測組分的質(zhì)量分數(shù)。值，求出樣品中待測組分的質(zhì)量分數(shù)。 或或樣標%1cm1%1cm1標樣EE分析化學（第分析化學（第2版）

48、版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法 實例實例：維生素：維生素B12水溶液在水溶液在 =361nm處的百分吸光系處的百分吸光系數(shù)數(shù) =207。取維生素。取維生素B12樣品樣品30.0mg，加純化水溶解，加純化水溶解，用用1L的容量瓶定容。將溶液盛于的容量瓶定容。將溶液盛于1cm的吸收池，測得的吸收池，測得361nm波長處的吸光度波長處的吸光度A=0.600，試求樣品中維生素，試求樣品中維生素B12的質(zhì)量分數(shù)。的質(zhì)量分數(shù)。 解：解：max%1cm1E330.0 10100%0.00300100

49、020000. 100300. 0600. 0%1cm1LAE樣966. 0207200%1cm1%1cm1標樣EE分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法 （二）二元組分溶液的定量方法（二）二元組分溶液的定量方法 1. 1. 解聯(lián)立方程組法解聯(lián)立方程組法 當試樣溶液中各待測組分相互干擾不太嚴重時，當試樣溶液中各待測組分相互干擾不太嚴重時，可根據(jù)吸光度具有加和性的特點，在同一試樣溶可根據(jù)吸光度具有加和性的特點，在同一試樣溶液中同時測定兩個或兩個以上的待測組分。假設液

50、中同時測定兩個或兩個以上的待測組分。假設要測定試樣中有兩個待測組分要測定試樣中有兩個待測組分a a和和b b，如果分別繪，如果分別繪制制a a、b b兩個純物質(zhì)的吸收光譜，則有三種情況。兩個純物質(zhì)的吸收光譜，則有三種情況。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法（）表明，兩個待測組分在各自的最大吸

51、收波長處，）表明，兩個待測組分在各自的最大吸收波長處，另一組分沒有吸收，可以用測定單組分溶液的方法，另一組分沒有吸收，可以用測定單組分溶液的方法，分別在分別在1 1和和2 2波長處測定組分波長處測定組分a a、b b的吸收度的吸收度, , 由光由光的吸收定律求得的吸收定律求得c ca a、c cb b。測定時兩組分互不干擾。測定時兩組分互不干擾。（）表明，在組分）表明，在組分a a的最大吸收波長的最大吸收波長1 1處，組分處，組分b b對對組分組分a a的測定無干擾，而在組分的測定無干擾，而在組分b b的最大吸收波長的最大吸收波長2 2處，處，組分組分a a對組分對組分b b的測定有干擾。這時

52、，先在的測定有干擾。這時，先在1 1波長處單波長處單獨測量組分獨測量組分a a；然后在；然后在2 2波長處測量組分波長處測量組分a a、b b的總吸的總吸光度，根據(jù)吸光度的加和性，從而可以求出光度，根據(jù)吸光度的加和性，從而可以求出c cb b。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法（）表明，兩個待測組分彼此相互干擾，此時，）表明，兩個待測組分彼此相互干擾，此時，在波長在波長1 1和和2 2處分別測定試樣溶液的總吸光度處分別測定試樣溶液的總吸光度 及及 ，同時測定

53、，同時測定a a、b b純物質(zhì)的吸光系數(shù)純物質(zhì)的吸光系數(shù) 、 和和 、 ，根據(jù)吸光度的加和性，則由聯(lián)立方程，根據(jù)吸光度的加和性，則由聯(lián)立方程組求得組求得c ca a、c cb b。 1a bA2a bA1a1b2a2b分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法2.2.等吸收波長消去法（雙波長分光光度法）等吸收波長消去法（雙波長分光光度法）當試樣中兩個待測組分的相互干擾比較嚴重時，用解聯(lián)立方當試樣中兩個待測組分的相互干擾比較嚴重時，用解聯(lián)立方程組的方法進行定量分析會產(chǎn)生

54、較大的誤差，這時可以用等程組的方法進行定量分析會產(chǎn)生較大的誤差，這時可以用等吸收波長消去法進行測定。吸收波長消去法進行測定。 在試樣中含有兩個待測組分在試樣中含有兩個待測組分a a和和b b時，若要測定組分時，若要測定組分b b，組分，組分a a有干擾，應設法消除組分有干擾，應設法消除組分a a的吸收干擾。首先選擇待測組分的吸收干擾。首先選擇待測組分b b的最大吸收波長的最大吸收波長2 2作為測量波長，然后用作圖的方法選擇作為測量波長，然后用作圖的方法選擇參比波長參比波長1 1，使組分，使組分a a在這兩個波長處的吸光度相等。在這兩個波長處的吸光度相等。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝

55、慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法試樣溶液在試樣溶液在2 2和和1 1兩個波長處的吸光度之差，兩個波長處的吸光度之差，只與待測組分只與待測組分b b（ a a）的濃度成正比，而與干擾）的濃度成正比，而與干擾組分的濃度無關。組分的濃度無關。 分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材3.3.差示分光光度法差示分光光度法當待測組分含量過高時，吸光度超出了準確測量當待測組分含量過高時，吸光度超出了

56、準確測量的讀數(shù)范圍，可以采用差示分光光度法。具體方的讀數(shù)范圍，可以采用差示分光光度法。具體方法是用一個比試樣溶液濃度稍低的標準溶液作為法是用一個比試樣溶液濃度稍低的標準溶液作為參比溶液，將分光光度計調(diào)零（透光率參比溶液，將分光光度計調(diào)零（透光率100%100%），），測得的吸光度就是被測試樣溶液試液與參比溶液測得的吸光度就是被測試樣溶液試液與參比溶液的吸光度差值（相對吸光度）。根據(jù)光的吸收定的吸光度差值（相對吸光度）。根據(jù)光的吸收定律得：律得： A AA Ax xA As sLL( (c cx xc cs s) ) 即：待測溶液與參比溶液的吸光度差值與兩溶即：待測溶液與參比溶液的吸光度差值與兩

57、溶液的濃度之差成正比。液的濃度之差成正比。 第五節(jié) 定性定量方法分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法課堂活動課堂活動1.在紫外在紫外-可見分光光度法中，影響吸光系數(shù)的因素是可見分光光度法中，影響吸光系數(shù)的因素是 A溶劑的種類和性質(zhì)溶劑的種類和性質(zhì) B溶液的物質(zhì)量濃度溶液的物質(zhì)量濃度 C物質(zhì)的本性和光的波長物質(zhì)的本性和光的波長 D吸收池大小吸收池大小 E待測物的分子結構待測物的分子結構2.紫外紫外-可見分光光度法常用的定量分析方法有可見分光光度法常用的定量分析方法

58、有 A間接滴定法間接滴定法 B標準對比法標準對比法 C標準曲線法標準曲線法 D直接電位法直接電位法 E吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法課堂互動課堂互動3 3在符合朗伯在符合朗伯- -比爾定律的條件下，有色物質(zhì)的濃度、比爾定律的條件下，有色物質(zhì)的濃度、最大吸收波長、吸光度三者的關系是最大吸收波長、吸光度三者的關系是 A A增加、增加、增加增加、增加、增加 B B增加、減小、不變增加、減小、不變 C C減小、增加、減小減小、增加、減小 D D

59、減小、不變、減小減小、不變、減小4 4維生素維生素D D2 2的摩爾吸收系數(shù)的摩爾吸收系數(shù) 264264nmnm=18200=18200。用。用2.02.0cmcm吸吸收池測定，如果要控制吸光度收池測定，如果要控制吸光度A A在在0.6990.6990.1870.187范范圍內(nèi)，應使維生素圍內(nèi)，應使維生素D D2 2溶液的濃度在什么范圍內(nèi)？溶液的濃度在什么范圍內(nèi)？分析化學（第分析化學（第2版）版） 謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教規(guī)劃教材材第五節(jié) 定性定量方法點滴積累（點滴積累（1 1）紫外紫外- -可見分光光度法的各種定

60、量方法的優(yōu)缺點：可見分光光度法的各種定量方法的優(yōu)缺點： 1 1標準曲線法的優(yōu)點：測定大批量樣品時，操作簡標準曲線法的優(yōu)點：測定大批量樣品時，操作簡單、準確、快速。缺點：不同人處理相同的測量數(shù)據(jù)，得單、準確、快速。缺點：不同人處理相同的測量數(shù)據(jù)，得到的結果不易完全相同。到的結果不易完全相同。 2 2標準對比法的優(yōu)點：測量數(shù)據(jù)相同，任何人都能標準對比法的優(yōu)點：測量數(shù)據(jù)相同，任何人都能得到完全一致的結果。缺點：隨機誤差較大。得到完全一致的結果。缺點：隨機誤差較大。 3 3吸光系數(shù)法的優(yōu)點：與標準對比法的優(yōu)點相同。吸光系數(shù)法的優(yōu)點：與標準對比法的優(yōu)點相同。 缺點：測定條件不易與文獻完全一致，從而引入誤