血小板 抗原抗體檢測

1、 血小板抗原抗體血小板抗原抗體廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院輸血科 目錄血小板相關(guān)疾病血小板抗原血小板抗體抗體檢測及交叉配血血小板抗原v 血小板抗原泛指存在于血小板膜的能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體血小板抗原泛指存在于血小板膜的能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體, ,并能與之結(jié)合的血小板膜蛋白質(zhì)和糖分子并能與之結(jié)合的血小板膜蛋白質(zhì)和糖分子. .v 血小板相關(guān)抗原血小板相關(guān)抗原: : 紅細(xì)胞血型抗原：紅細(xì)胞血型抗原：ABOABO、LewisLewis和和P P系統(tǒng)抗原系統(tǒng)抗原等等，無無RHRH抗原抗原 白細(xì)胞抗原：白細(xì)胞抗原：HLAHLA抗原抗原v 血小板特異性抗原（血小板特異性抗原（human platelet antig

2、enhuman platelet antigen，HPAHPA）血小板抗原血型抗原：血型抗原：ABOABO、LewisLewis和和P P系統(tǒng)抗原系統(tǒng)抗原等等，無無RHRH抗原抗原v 來源：血小板表面的A、B抗原來源主要有兩個：大部分是血小板本身所固有（從巨核細(xì)胞分化而來）；小部分是從血漿吸附而來。如體外將O型血小板和A或B型血清溫育，血小板就會帶上A或B抗原。v 不同個體間血小板膜ABH抗原量存在差異;v 同一個體的每一個血小板抗原量差別非常大，由此可以解釋有些人輸入ABH不相容血液后,一部分輸入的血小板迅速被破壞,而另外的血小板其生命力不受影響. 血小板抗原v白細(xì)胞抗原：白細(xì)胞抗原：HLA

3、HLA抗原抗原v血小板存具有HLA-類抗原類抗原，主要是HLA-A和HLA-B位點(diǎn)的抗原（少量表達(dá)的HLA-C抗原）。vHLA-類分子為血小板的固有蛋白，少量從血漿中吸附。血小板HLA抗原的免疫原性比白細(xì)胞弱。血小板抗原v血小板特異性抗原（血小板特異性抗原（human platelet antigenhuman platelet antigen，HPAHPA）v主要位于人血小板膜的一大類抗原,稱之為血小板特異性抗原v高頻率抗原以“a”表示，低頻率抗原以“b”表示v人血小板同種抗原（HPA）自1959年被發(fā)現(xiàn)以來，迄今已經(jīng)檢出24個抗原，其中HPA-1，-2，-3，-4，-5，-6,-15被血小

4、板命名委員會（PNC）列入抗原系統(tǒng)，包含14個對偶抗原，而HPA-7-14，-16,-17因為對偶抗原未檢出而未達(dá)到系統(tǒng)命名標(biāo)準(zhǔn)。 血小板抗原血小板抗原血小板抗原v 24個抗原主要分布在糖蛋白GPb，GPa，GPb，GPa以及CD109上 ；v GPa（CD61）攜帶9種HPA抗原，分別為HPA-1，HPA-4，HPA-6bw，HPA-7bw，HPA-8bw，HPA-10bw，HPA-11bw，HPA-14bw，HPA-16bw v GPb（CD41）是跨膜蛋白，細(xì)胞外116 kD的重鏈，通過二硫鍵與22 kD的輕鏈共價結(jié)合。GPb上攜帶 HPA-3和HPA-9bw；血小板抗體抗 體分 類疾

5、病HLA / HPA 抗 體其 它 抗 體同 種抗 體格蘭茨曼血小板功能不全病抗GPb/aPb/a抗體同 種 異體 抗 體新生兒同種異體免疫性血小板減少癥HPA1b(78%), HPA5b(19%)HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, Anti-CD36血小板輸注無效癥HLA-I抗體5080% 1725%(日本人為HPA-2b), HPA-15, anti-CD36極少數(shù)為ABO抗體血小板輸血后紫癜HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15, anti-CD36少數(shù)為抗GPIa/IIa抗體被動同種異體免疫性血小板減少癥HPA-1a,

6、HPA-5b移植相關(guān)同種異體免疫性血小板減少癥HPA-1a,HPA-3,HPA-5b自 身抗 體自發(fā)性血小板減少癥多數(shù)位于GPb/ab/aGPIb/IX/VIb/IX/V，少數(shù)位于GPIV/V IV/V 和 GPIa/IIaGPIa/IIa繼發(fā)于母體自發(fā)性血小板減少癥同上藥物依賴性抗體奎寧/奎尼丁抗體所致疾病抗原位于GPb/ab/a和GPIb/IXIb/IX抗體檢測及交叉配血采取預(yù)防和治療措施采取預(yù)防和治療措施避免流產(chǎn)、出血等避免流產(chǎn)、出血等血小板相容性檢測血小板相容性檢測抗原定型抗原定型抗體檢測抗體檢測建立血小板供者庫建立血小板供者庫篩選基因型相容的供者篩選基因型相容的供者避免血小板抗體的產(chǎn)

7、生避免血小板抗體的產(chǎn)生診斷血小板免疫性疾病診斷血小板免疫性疾病交叉配型交叉配型篩查血小板相容性供者篩查血小板相容性供者減少血小板輸注無效減少血小板輸注無效避免紫癜、出血和死亡避免紫癜、出血和死亡血小板抗原定型u 血清學(xué)定型 即用已知特異性抗體檢測血小板血型抗原 缺點(diǎn)：特異性抗體來源困難 -人血清中血小板抗體通常為多特異性 -單克隆抗體匱乏，目前國際上僅有HPA-1a單抗， 無其它HPA單抗。u 基因定型 限制性片段長度多態(tài)性分析（RFLP） 序列特異性寡核苷酸聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSO) 序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP)HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5

8、HPA-15 a b a b a b a b a b a b陽性對照條帶等位基因條帶 1bb 2ab 3bb 4aa 5aa 15aa血小板抗體檢測 血清學(xué)血小板譜細(xì)胞血小板譜細(xì)胞（三人份（三人份O型混合血小板）型混合血小板）反應(yīng)板反應(yīng)板（已包被血小板單抗）（已包被血小板單抗）血小板單層血小板單層陽性反應(yīng)陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)陰性反應(yīng)患者血清患者血清/血漿血漿抗人抗人IgG指示紅細(xì)胞指示紅細(xì)胞（人（人IgG致敏紅細(xì)胞）致敏紅細(xì)胞）50g,5min50g,5min離心離心洗滌洗滌3 3次次50l/孔孔洗滌洗滌5 5次次水浴水浴30min30min陽性陽性陰性陰性50l/孔孔各各50l/孔孔200g,5

9、min200g,5min離心離心200g,5min200g,5min離心離心單克隆抗體免疫固定血小板抗原方法（MAIPA）：該法先制備羊抗鼠IgG包被的多孔板，另外，將鼠抗人血小板糖蛋白單克隆抗體和帶有抗體的血小板共同孵育，再將孵育后的復(fù)合物加入多孔板，孵育，洗滌，最后加入酶聯(lián)羊抗人抗體和酶反應(yīng)底物后顯色，定量測定血小板抗體。血小板相關(guān)疾病 臨床上由于血小板血型抗原引起的血小板減少癥主要有5種：1. 血小板輸注無效（PTR）2. 輸血后紫癜（PTP）3. 新生兒同種免疫血小板減少癥（FMAIT/NAIT）4. 被動免疫血小板減少癥（PAT）5. 移植相關(guān)的同種免疫血小板減少癥（TAT) 血小板

10、相關(guān)疾病血小板免疫性疾病血小板免疫性疾病p血小板輸注無效癥p新生兒血小板減少癥p輸血后紫癜p自身免疫性血小板減少癥p藥物引起的血小板減少癥p移植相關(guān)的血小板減少癥血小板抗原血小板抗原p 同種異體抗原 HLA-I,HPA,ABHp 同種抗原 GPb/a,CD36p 自身抗原 GPb/a,GPb/p 藥物依賴性抗原 肝素、奎寧等p 非特異性抗原臨床病癥臨床病癥p 淤點(diǎn)p 淤斑p 流產(chǎn)p（顱內(nèi)）出血 p 死亡血小板相關(guān)疾病-血小板輸注無效(PTR）1.若輸注后1小時 CCI 7500/L 12小時 CCI 6000/L 24小時 CCI 4500/L 連續(xù)3次，可判斷為血小板無效輸注2.血小板恢復(fù)（

11、回收率）百分率（PR%）若輸注血小板24小時后，PR%20%，可判斷為血小板無效輸注由HLA抗體引起PTR約占80%，其次為HPA或ABO抗體?，F(xiàn)由于臨床廣泛輸注去白細(xì)胞的成分血治療血液病，發(fā)病率已經(jīng)大為下降血小板相關(guān)疾病-血小板輸注無效(PTR）非免疫學(xué)原因(67.3%)發(fā)熱脾功能亢進(jìn)感染藥物作用DIC血小板的質(zhì)量問題免疫學(xué)原因(17.5%)HLA抗體HPA抗體ABO血型不合血小板自身抗體藥物預(yù)防1.白細(xì)胞過濾2.輻照3. HLA和HPA配型輸注血小板相關(guān)疾病-血小板輸注無效(PTR）1.若輸注后1小時 CCI 7500/L 12小時 CCI 6000/L 24小時 CCI 4500/L 連

12、續(xù)3次，可判斷為血小板無效輸注2.血小板恢復(fù)（回收率）百分率（PR%）若輸注血小板24小時后，PR%20%，可判斷為血小板無效輸注由HLA抗體引起PTR約占80%，其次為HPA或ABO抗體。現(xiàn)由于臨床廣泛輸注去白細(xì)胞的成分血治療血液病，發(fā)病率已經(jīng)大為下降血小板相關(guān)疾病-v輸血后血小板減少性紫癜(post-transfusion thrombocytopenic purpura，PTTP)，又稱“輸血后紫癜”, Post-transfusion purpura, PTP: 由于血小板輸注后發(fā)生同種免疫反應(yīng)所致，一般發(fā)病率低。v患者被輸入不相容的血小板/全血或多次妊娠而產(chǎn)生血小板抗體，破壞輸入的和

13、自身血小板而導(dǎo)致急性和暫時性血小板減少?；颊叨嘁娪冢?5%)有多次妊娠或輸血史的老年女性。血小板相關(guān)疾病-v HPA-1a是引起該病的主要抗原。我國絕大部分人為HPA-1a抗原陽性。v 實驗室檢查：血小板計數(shù)降低、骨髓巨核細(xì)胞增生活躍、血清學(xué)檢查血小板抗體存在但效價和病情無關(guān)。v 本病輸血小板無效，甚至有加重病情的危險，腎上腺皮質(zhì)激素不能縮短病程，但是，有可能改善出血癥狀。v 主要治療措施為血漿置換或換血，換血漿優(yōu)于換全血。在輸血后血小板顯著減少和發(fā)生嚴(yán)重出血癥狀時，應(yīng)立刻做血漿置換，一次交換65%85%的血漿量，平均在15天后出血癥狀減退，血小板數(shù)目上升。v 盡可能避免或減少輸注血小板及含血

14、小板的血液制品。 血小板相關(guān)疾病-血小板相關(guān)疾病-v第一胎即可發(fā)??；v病死率約13%；v治療：輸入相合的血小板以提高患兒的血小板數(shù)，如找不到相合的血小板，可以輸注經(jīng)洗滌和輻射的母親血小板，也可給患兒做放血治療；v治療前交叉配血：以母親血清與供者血小板進(jìn)行交叉配合試驗；v預(yù)防：母親在孕期可進(jìn)行血漿置換 Passive alloimmune thrombocytopenia, PAT: 患者輸入含有血小板特異性抗體的血漿，在數(shù)個小時之內(nèi)出現(xiàn)血小板減少癥，約一周后緩解。v一旦發(fā)現(xiàn)獻(xiàn)血員血漿、血清中含有血小板特異性抗體應(yīng)立即停止獻(xiàn)血，這類獻(xiàn)血員多為有妊娠史。vTransplantation-assoc

15、iated alloimmune thrombocytopenia, TAT: 器官接受者的淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗外來移植物（血小板）的特異性抗體；或供體器官中殘留的淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗宿主血小板的抗體發(fā)病機(jī)制一、抗血小板抗體v 約75%ITP患者可測到血小板相關(guān)自身抗體（PAIg），后者多為IgG、IgA也可是IgM。抗體通過Fab片段與血小板膜糖蛋白（Gpb/a等）結(jié)合。帶有抗體的血小板接觸到單核-巨噬細(xì)胞表面的FC受體，易被吞噬破壞。另外，抗血小板 抗 體 對 巨 核 細(xì) 胞 分 化 也 有 抑 制 作 用 。二、 血小板生成時間縮短v ITP血小板生存可縮短至23天或更短，ITP患者血小板易在脾臟被

16、扣留。脾臟可產(chǎn)生抗血小板抗體，脾內(nèi)的巨噬細(xì)胞參與破壞血小板過程，切脾對相當(dāng)部分的患者有效。v急性型：兒童多見，初起有上感，主要為病毒細(xì)菌所致?？捎泻疅?，全身皮膚粘膜出血(瘢點(diǎn)，紫癜或血腫)、內(nèi)臟出血。1%患者顱內(nèi)出血，危及生命，但大多數(shù)呈自限性，一般46周可自行緩解。v慢性型：主要見于40歲以下女青年，癥狀多在偶然中發(fā)現(xiàn)，也有皮膚粘膜的出血，內(nèi)臟出血較少見，月經(jīng)過多者可引起貧血。v檢測LIFECODES PAKAUTO試劑盒一、糖皮質(zhì)激素二、脾切除三、免疫抑制劑四、高劑量免疫球蛋白和血漿置換 v絕大多數(shù)患者是由于vWF蛋白裂解酶（vWFCP）異常所致。vWFCP 是正常止血過程中必須成在高剪切力血流狀態(tài)時內(nèi)皮細(xì)胞表現(xiàn)、血小板表面受體和vWF多聚體三者