第二十章藥品微生物學(xué)質(zhì)量控制

1、第二十章藥品微生物學(xué)質(zhì)量控制學(xué)習(xí)要求n掌握一般滅菌制劑的無菌檢查方法、非滅菌藥物的微生物總數(shù)測定方法n熟悉藥品的控制菌檢查方法、藥品生產(chǎn)中防止微生物污染的主要措施n了解藥品中微生物的來源和微生物引起的藥物變質(zhì)第一節(jié)第一節(jié) 藥品生產(chǎn)中的微生物污染藥品生產(chǎn)中的微生物污染n藥品中微生物的來源空氣中的微生物（生產(chǎn)場所）水中的微生物（液體制劑）人體中的微生物（操作人員）土壤中的微生物（植物藥材）原料和包裝物廠房建筑和制藥設(shè)備n 微生物引起的藥物變質(zhì) 存在于藥物中的微生物如遇到適宜的條件就能生長繁殖，使藥物發(fā)生變化，造成藥物變質(zhì)失效（1）外在表現(xiàn)（味道、氣味、色素、沉淀、產(chǎn)氣等）（2）判斷（外在表現(xiàn)、微生

2、物及其代謝產(chǎn)物檢查）（3）藥物變質(zhì)的結(jié)果引起感染藥物失效微生物有毒代謝產(chǎn)物致病第二節(jié)第二節(jié) 藥品生產(chǎn)中防止微生物污染的措施藥品生產(chǎn)中防止微生物污染的措施n加強(qiáng)藥品生產(chǎn)管理l國家實施GMP管理規(guī)范，對廠房與設(shè)施、設(shè)備、物料與產(chǎn)品等有嚴(yán)格要求n藥品生產(chǎn)的GMP驗證l滅菌工藝的驗證n使用合格的防腐劑n進(jìn)行微生物學(xué)檢驗n藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范l藥物非臨床安全性評價研究機(jī)構(gòu)l動物、植物、微生物以及器官、組織、細(xì)胞、基因等 第三節(jié)第三節(jié) 藥品的微生物學(xué)檢查藥品的微生物學(xué)檢查一、無菌制劑的無菌檢查l各種注射劑、輸液、手術(shù)眼科制劑都必須保證無菌，符合藥典相關(guān)規(guī)定l無菌檢查必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污

3、染n薄膜過濾法（首選）直徑：50mm孔徑：小于0.45ml薄膜過濾法的驗證供試品過濾沖洗液過濾100cfu試驗菌試驗菌過濾濾膜接種于培養(yǎng)基培養(yǎng)基l驗證濾膜可截留試驗菌，并且試驗菌生長不受供試品被截留物的抑制對照1：試驗菌直接接種培養(yǎng)基l若供試品有抑菌作用l增加沖洗量l使用中和劑或滅活劑如-內(nèi)酰胺酶、對氨基苯甲酸（影響磺胺類抗生素）l更換濾膜品種l供試品的無菌檢查（薄膜過濾法）供試品過濾沖洗液過濾濾膜接種于培養(yǎng)基若出現(xiàn)隱約渾濁可染色鏡檢，或轉(zhuǎn)種新鮮培養(yǎng)基，或接種斜面培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基陽性對照：陽性對照菌陽性對照菌與濾膜共同接種培養(yǎng)基陰性對照：溶劑和稀釋液代替供試品n直接接種法n驗證試驗菌試驗菌培養(yǎng)

4、基培養(yǎng)基加入供試品l驗證試驗菌生長不受供試品抑制對照：不添加供試品l若供試品有抑菌作用l增加培養(yǎng)基的用量l使用中和劑或滅活劑如-內(nèi)酰胺酶、對氨基苯甲酸（影響磺胺類抗生素）l供試品的無菌檢查（直接接種法）供試品培養(yǎng)基若出現(xiàn)隱約渾濁可染色鏡檢，或轉(zhuǎn)種新鮮培養(yǎng)基，或接種斜面培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基陽性對照：陽性對照菌陽性對照菌與供試品共同接種培養(yǎng)基陰性對照：溶劑和稀釋液代替供試品二、非滅菌制劑的微生物限度檢查（一）細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)1.平皿法l平皿法的驗證l分組n試驗組：最低稀釋級最低稀釋級供試品+100cfu試驗菌試驗菌n菌液組：100cfu試驗菌n供試品對照組：最低稀釋級供試品n稀釋劑對照組：稀釋劑

5、+100cfu試驗菌l培養(yǎng)基培養(yǎng)基l結(jié)果判斷l(xiāng)稀釋劑對照組菌液組100%70%l（試驗組供試品對照組）菌液組100%70%l若供試品有抑菌作用l供試品溶液性狀允許的情況下，盡量選用薄膜過濾法l中和法中和法l培養(yǎng)基稀釋法：每1ml的供試品可等量分注多個平皿l離心沉淀法：500轉(zhuǎn)/分鐘，離心3分鐘，取上清檢查l供試品的微生物總數(shù)測定（平皿法）不同稀釋級供試品培養(yǎng)基陰性對照：溶劑和稀釋液代替供試品n薄膜過濾法l薄膜過濾法的驗證l分組n試驗組：最低稀釋級最低稀釋級供試品+100cfu試驗菌試驗菌n菌液組：100cfu試驗菌n供試品對照組：最低稀釋級供試品n稀釋劑對照組：稀釋劑+100cfu試驗菌l流程

6、l供試品過濾，沖洗，試驗菌過濾，接種培養(yǎng)基培養(yǎng)基l結(jié)果判斷l(xiāng)稀釋劑對照組菌液組100%70%l（試驗組供試品對照組）菌液組100%70%l若供試品有抑菌作用l中和法中和法l離心沉淀法：500轉(zhuǎn)/分鐘，離心3分鐘，取上清檢查l供試品的微生物總數(shù)測定（薄膜過濾法）不同稀釋級供試品過濾沖洗液過濾濾膜接種于培養(yǎng)基陰性對照：溶劑和稀釋液代替供試品（二）控制菌檢查（非滅菌制劑）（1）大腸埃希菌l分組n驗證組：供試液+100cfu試驗菌株n陽性對照：100cfu試驗菌株n陰性對照：稀釋液n檢查組：供試液l增菌培養(yǎng)基：膽鹽乳糖培養(yǎng)基l鑒定nMUGMUG試驗試驗（+）和靛基質(zhì)試驗靛基質(zhì)試驗（+）n單陽性則接種曙

7、紅亞甲藍(lán)瓊脂曙紅亞甲藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂麥康凱瓊脂，觀察菌落n分離、純化、鏡檢、其他鑒定試驗l若供試品有抑菌作用l薄膜過濾法l中和法l培養(yǎng)基稀釋法l離心沉淀法（2）大腸菌群（埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬）l分組n驗證組：供試液+100cfu試驗菌株n陽性對照：100cfu試驗菌株n陰性對照：稀釋液n檢查組：供試液（0.1ml、0.01ml、0.001ml）l接種乳糖膽鹽發(fā)酵管乳糖膽鹽發(fā)酵管（產(chǎn)酸產(chǎn)氣）l接種曙紅亞甲藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂l菌落特征相符且為革蘭陰性無芽孢桿菌，接種乳糖發(fā)酵管（產(chǎn)酸產(chǎn)氣）可能的大腸菌群數(shù)表可能的大腸菌群數(shù)表各供試品量的檢出結(jié)果各供試品量的檢出結(jié)果可能的大腸

8、菌群數(shù)可能的大腸菌群數(shù)N N（個（個/g/g或或mlml）0.1g0.1g或或0.1ml0.1ml0.01g0.01g或或0.01ml0.01ml0.001g0.001g或或0.001ml0.001ml10103 310102 2N N10103 31010N N10102 21010（3）沙門菌（4）銅綠假單胞菌（5）金黃色葡萄球菌（6）梭菌（7）白假絲酵母菌增菌培養(yǎng)基、鑒別方法各異（三）活螨的檢查l一旦檢出即判供試品不合格（四）微生物限度標(biāo)準(zhǔn)（總數(shù)、控制菌）l無菌制劑l口服制劑：不得檢出大腸埃希菌l含動物臟器：不得檢出沙門菌l局部給藥制劑：均不得檢出金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌l鼻及呼吸道

9、給藥制劑：不得檢出大腸埃希菌l陰道、尿道給藥制劑：不得檢出梭菌和白念珠菌謝謝！謝謝！無菌檢查試驗菌株無菌檢查試驗菌株n大腸埃希菌-CMCC（B）44102n金黃色葡萄球菌-CMCC（B）26003n枯草芽孢桿菌-CMCC（B）63501n生孢梭菌-CMCC（B）64941n白念珠菌-CMCC（F）98001n黑曲霉-CMCC（F）98003無菌檢查培養(yǎng)基無菌檢查培養(yǎng)基n硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：培養(yǎng)需氧菌、厭氧菌n改良馬丁培養(yǎng)基：培養(yǎng)真菌n對于非水溶性供試品，可在培養(yǎng)基中加入表面活性劑如聚山梨酯80斜面培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基無菌檢查陽性對照菌無菌檢查陽性對照菌l無抗菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品：金黃

10、色葡萄球菌l抗革蘭陰性菌為主的供試品：大腸埃希菌l抗厭氧菌的供試品：生孢梭菌l抗真菌的供試品：白念珠菌微生物總數(shù)測定試驗菌株微生物總數(shù)測定試驗菌株n大腸埃希菌-CMCC（B）44102n金黃色葡萄球菌-CMCC（B）26003n枯草芽孢桿菌-CMCC（B）63501n白念珠菌-CMCC（F）98001n黑曲霉-CMCC（F）98003微生物總數(shù)測定培養(yǎng)基微生物總數(shù)測定培養(yǎng)基n營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：細(xì)菌n玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基：霉菌及酵母菌n酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：酵母菌稀釋鋪板稀釋鋪板常見干擾物的中和劑或滅活方法常見干擾物的中和劑或滅活方法 干擾物 可選用的中和劑或滅活方法 戊二醛 亞硫酸氫鈉 酚類、乙醇、吸附物 稀釋法 醛類 稀釋法、甘氨酸、硫代硫酸鹽 季銨類化合物（QACs）、對羥基苯甲酸酯 卵磷脂、聚山梨酯 汞類制劑 亞硫酸氫鈉、巰基乙酸鹽、硫代硫酸鹽 雙胍類化合物 卵磷脂 碘酒、洗必泰類 聚山梨酯 鹵化物 硫代硫酸鹽 乙二胺四乙酸（EDTA ) 鎂或鈣離子 磺胺類 對氨基苯甲酸 -內(nèi)酰胺類抗生素 -內(nèi)酰胺酶 MUGMUG試