HIV初篩實驗室SOP

1、根陽縣人民醫(yī)院HIV抗體初篩實驗室SOP文件適用部門：檢驗科第一部分工作制度-2-實驗室工作制度-2-HIV標(biāo)本采集與接收登記制度-2-艾滋病實驗室保密制度-3-艾滋病篩查實驗室常規(guī)消毒清理工作制度-3-差錯事故處理制度-4-報告單簽發(fā)審核制度-5-設(shè)備管理制度-5-試劑管理制度-6-艾滋病篩查實驗室安全防護(hù)制度-6-艾滋病病毒職業(yè)暴露預(yù)防處理方案-7-第二部分標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程-9-第二章樣品采集與處理-9-第二章標(biāo)準(zhǔn)操作程序-10-一、北京金豪-10-二、上海科華生物-11-三、英科新創(chuàng)-12-第三章結(jié)果報告與注意事項-14-第三部分設(shè)備SOP文件-16-一、多功能自動酶標(biāo)儀RT-2100C-1

2、6-二、KHBST36W洗板機-18-三、電熱恒溫水箱-21-第四部分流程圖-22-一、HIV抗體篩查流程圖-22-二、暴露級別的評估-23-附件：血清加樣表-24-第一部分工作制度實驗室工作制度1. 室內(nèi)應(yīng)經(jīng)常保持整潔，各種儀器設(shè)備要安裝適當(dāng)，器皿試劑擺放整齊，標(biāo)志活晰，有良好的通風(fēng)設(shè)備。2. 實驗室工作人員工作時一律穿工作服，保持衣帽整潔，試驗過程中應(yīng)專心致志、認(rèn)真負(fù)責(zé)，堅守工作崗位，不得隨意申崗、閑談，保持實驗室安靜，下班離開實驗室前要檢查并關(guān)好水、電、門、窗等，注意實驗室安全。3. 認(rèn)真開展實驗室質(zhì)量控制工作，儀器設(shè)備應(yīng)定期保養(yǎng)，有溫度記錄，檢測標(biāo)本的保存要求符合規(guī)范要求。4. 實驗室

3、不得放置與測試無關(guān)的物品，水、溫、濕度、光照、防震、防塵、防噪聲等，環(huán)境必須符合實驗室的工作要求。5. 實驗和樓道內(nèi)必須配置足夠的安全防火措施，并定期檢查保養(yǎng)。6. 對不同屆性、品種和含量水平的試樣，應(yīng)有足夠的試驗區(qū)域，予以分離檢驗,尤其是已知具有生物危害的試樣必須分離檢驗。防止損害工作人員健康和污染環(huán)境。7. 與檢驗無關(guān)人員不得進(jìn)入實驗室，外單位人員聯(lián)系工作，一律在辦公室接待。8. 實驗結(jié)束后，應(yīng)及時活理實驗現(xiàn)場和用品，對染菌帶蠹的器具廢棄物應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行消蠹無菌處理。9. 實驗室內(nèi)禁止吸煙、用餐和進(jìn)食。HIV標(biāo)本采集與接收登記制度1、采樣前和接收標(biāo)本時應(yīng)核對病人身份，嚴(yán)格執(zhí)行查對制度。2、采血

4、時應(yīng)戴好手套、帽子、口罩。3、HIV標(biāo)本采集應(yīng)建立詳細(xì)的記錄本，記錄內(nèi)容包括：送檢單位、病人姓名、門診號、數(shù)量、種類（血活）、送樣者、接收者或采集者。4、采集后，應(yīng)將HIV樣本單獨分裝，勿與其它項目共用。艾滋病實驗室保密制度KT刃為確保艾滋病實驗室所有資料嚴(yán)格保密，應(yīng)遵守以下制度1、與HIV/AIDS相關(guān)檢測項目的所有資料均應(yīng)嚴(yán)格保密，包括采樣記錄與檢測記錄的保管，報告單的發(fā)放和送確認(rèn)實驗室檢測等。2、工作人員不得向無關(guān)人員提供檢驗結(jié)果，要妥善保存各種實驗記錄。3、對初篩疑似陽性感染者不能告訴受檢者本人，更不能到處亂講。4、實驗室的有關(guān)檢驗資料，檔案、結(jié)果記錄其他人不得翻錄查閱，修改和銷毀。5

5、、實驗室工作人員，不能在非正式場合對外提供任何結(jié)果、數(shù)據(jù)。艾滋病篩查實驗室常規(guī)消毒清理工作制度1、檢測可疑樣品時，充分準(zhǔn)備好廢棄物消蠹具及消蠹藥、液。如：次氯酸鈉含有效氯200卜5000mg/L,75%乙醇和2%戊二醛。2、實驗室用的吸頭及時打入消蠹器皿中。3、一次性手套，隔離服更換后，應(yīng)丟棄在一次性垃圾袋內(nèi)。4、常用消蠹方法4.1、物理消蠹方法4.1.1、高壓蒸汽消蠹，121C，保持15-20min；4.2、化學(xué)消蠹方法4.2.1、廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉4.2.2、工作臺面及儀器表面：75%乙醇4.2.3、溢出物：5000mg/L次氯酸鈉4.2.4、污染的臺面和器具：2000mg

6、/L次氯酸鈉5、實驗室中發(fā)生可疑樣品溢出時，應(yīng)及時用75%乙醇噴灑，然后用消蠹劑浸泡的吸水物質(zhì)覆蓋10-15分鐘，最后再用消蠹劑活洗該地方，擦十。6、全部實驗工作結(jié)束后，應(yīng)對實驗臺、儀器、設(shè)備(接觸部位)地面進(jìn)行徹底消蠹處理。7、廢棄物處理從HIV實驗室出來的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、包裝盒和其他物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物。差錯事故處理制度1. 艾滋病檢測工作人員必須要有高度的責(zé)任心和嚴(yán)肅的法制觀念，嚴(yán)防差錯事故的發(fā)生。2. 由于責(zé)任心不強、不認(rèn)真執(zhí)行規(guī)章制度，不遵守操作規(guī)程或技術(shù)因素而引發(fā)檢驗錯誤，對病人未造成嚴(yán)重后果的，稱為差錯。差錯按程度不同，分為一般差錯和嚴(yán)重差錯。一級差錯記差錯

7、一次，二級差錯扣款50元,三級差錯扣除當(dāng)月效益工資。一級差錯：違反操作規(guī)程，導(dǎo)致標(biāo)本損壞，需重新采集標(biāo)本或由于接收標(biāo)本未認(rèn)真查對，違反查對制度，影響檢驗者。(1) 工作環(huán)境不能做到5S管理、違反生物安全者。(2) 未按時記錄結(jié)果、繪制質(zhì)控圖、當(dāng)發(fā)現(xiàn)失控時隱瞞不報者。二級差錯：(1) 未按時間先后順序使用試劑，導(dǎo)致試劑過期或由于存放不當(dāng)造成試劑變質(zhì)者。(2) 項目漏查、做錯項目，且標(biāo)本已處理，需再次采取標(biāo)本檢驗者。(3) 因操作不當(dāng)，導(dǎo)致設(shè)備故障，影響較大者。三級差錯：漏做、錯做一般標(biāo)本的檢驗?zāi)康?，編錯試管號碼，標(biāo)錯標(biāo)本聯(lián)號、采錯病人標(biāo)本，寫錯檢驗結(jié)果并已發(fā)出報告者。(1) 粗心大意寫錯報告難以

8、挽回者。(2) 因責(zé)任心不強、管理不善導(dǎo)致陽性標(biāo)本丟失者。報告單簽發(fā)審核制度一、各崗位的工作由本崗位人員進(jìn)行操作檢驗，然后填寫檢驗報告單。工作完成后，再對本崗位所有的檢驗報告進(jìn)行核查一次，在你認(rèn)為可以發(fā)出時，蓋上檢驗者印章，填寫好報告日期。父給本實驗室負(fù)責(zé)人或有資質(zhì)的局年資檢驗人員核查簽名；但在危急情況下或單獨一人值班時（如夜班）除外。二、沒有上崗證人員不得單獨簽發(fā)檢驗結(jié)果報告單。三、專業(yè)責(zé)任主管技師對本專業(yè)的所有報告單進(jìn)行審核,審核的基本內(nèi)容有：1、臨床醫(yī)師所申請的檢驗項目是否已全部檢驗，有無漏項；2、檢驗結(jié)果的填寫是否活楚、正確；3、檢驗報告單上所有內(nèi)容是否全部填寫完整；4、有無非常異常的

9、、難以解釋的結(jié)果；5、有無書寫錯誤；6、是否有需要復(fù)查的結(jié)果當(dāng)發(fā)現(xiàn)檢驗結(jié)果有凝議時可指令本崗位人員對檢驗項目進(jìn)行復(fù)查。確認(rèn)報告無問題時蓋章后，方可發(fā)出報告。設(shè)備管理制度1. 由科主任或科室主管負(fù)責(zé)監(jiān)督和檢查儀器設(shè)備的使用狀況，定期校準(zhǔn)儀器的準(zhǔn)確度。2. 各科應(yīng)對本科室儀器設(shè)備建立臺賬明細(xì)。3. 每月應(yīng)向總庫遞交儀器設(shè)備使用狀況表，并存檔。4. 貴重儀器應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理。5. 儀器操作前必須培訓(xùn)、考核，仔細(xì)閱讀儀器操作說明書，熟練掌握該儀器的使用方法及維護(hù)辦法，考核合格后方可操作。6.當(dāng)班者在使用中應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，遇到問題應(yīng)作及時處理，并詳細(xì)記錄。問題嚴(yán)重者，應(yīng)及時上報科主任或主管加以解決。

10、7. 每次使用完畢，應(yīng)檢查儀器的電源、廢液傾倒情況，并詳細(xì)記錄該次使用情況。8. 對有溫度要求的儀器設(shè)備，如冰箱冷藏室、冷凍室及恒溫培養(yǎng)箱、水浴箱等,均應(yīng)建立登記本，每天監(jiān)測溫度。試劑管理制度1. 為了更好地管理檢驗科試劑，由主管對檢驗科試劑申購、品牌、質(zhì)量、價格、使用及管理情況進(jìn)行督查。2. 每周上報周計劃，各組人員根據(jù)各崗情況，認(rèn)真、詳細(xì)填寫計劃表，務(wù)必注明詳細(xì)的名稱、規(guī)格、數(shù)量及品牌。3. 檢驗科試劑必須由主管審核，并負(fù)責(zé)報物流中心采購，品牌不得隨意更改。杜絕浪費和積壓。4. 所用的試劑必須符合質(zhì)量要求，必須有三證。不得使用過期、劣質(zhì)試劑。5. 供應(yīng)商所送的試劑由總庫活點后才能接收，特殊

11、試劑由檢驗科主管活點后才能在貨單上簽字，有出入者必須向科主任或物流中心主任報告，再將貨單交物流中心統(tǒng)一結(jié)賬。6. 領(lǐng)用時應(yīng)檢查物品質(zhì)量和試劑品名、廠家、人份、批號、過期時間及外包裝有無滲漏等，若有問題，應(yīng)及時向總庫反映。7. 冰箱內(nèi)不能貯存乙酰、異戊烷或類似的易燃、可燃性液體。艾滋病篩查實驗室安全防護(hù)制度也劊為確保實驗室人員的工作安全,防止交義感染，請嚴(yán)格遵守安全防護(hù)制度1、工作人員要完成與工作有關(guān)的充足有效的技術(shù)培訓(xùn)，要了解HIV危害，提高全員安全意識，實驗室安全負(fù)責(zé)人要對工作和環(huán)境的安全負(fù)責(zé)，所有工作人員都有責(zé)任保護(hù)自己和他人的安全。3、對有放試劑、樣品血活的冰箱專人管理。4、實驗人員應(yīng)熟

12、練掌握操作知識和消蠹技術(shù)。5、進(jìn)入實驗室應(yīng)穿隔離衣，戴手套，傳染性危險大時應(yīng)戴雙層手套，戴防護(hù)鏡,口罩，如防護(hù)用具破損應(yīng)及時更換，不用戴手套的手觸摸暴露的皮膚等部位。6、實驗期間盡量避免使用利器，易碎器也，禁止采用口腔吸液管。7、送檢樣品應(yīng)視為有潛在傳染性，由專人接管，登記，存放，提取。9、實驗用吸頭、手套、隔離服、污染物、廢棄物均放在指定垃圾袋中統(tǒng)一進(jìn)行消蠹，焚燒到無害化處理。10、不得在實驗室中吃食物，化妝打扮等，不得在實驗室會客。11、實驗室用品（包括工作服）不得用于其他用途，不可將私人和無關(guān)的物品帶入實驗室。12、工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作服，用肥皂和流動水洗手，洗手后離開實

13、驗室。13、實驗結(jié)束后，要對工作平臺、儀器、地面進(jìn)行消蠹處理。14、遇有意外事故，應(yīng)立即口頭和書面報告上級部門，并進(jìn)行局部處理，如含氯消蠹劑浸泡傷口，洗眼，漱口等，如遇高危意外事故，除進(jìn)行局部處理外，同時應(yīng)立即采取預(yù)防措施，包括對其隨訪，HIV檢測，休息并暫離崗位二個月，按醫(yī)囑服用HIV藥物等。艾滋病病蠹職業(yè)暴露預(yù)防處理方案為維護(hù)醫(yī)務(wù)人員及其他部門有關(guān)人員的職業(yè)安全，有效預(yù)防在工作中發(fā)生職業(yè)暴露感染艾滋病病蠹,一旦發(fā)生職業(yè)暴露后最大限度的避免或減少艾滋病病蠹感染，特制定本方案。一、職業(yè)暴露（一）職業(yè)暴露是指醫(yī)務(wù)人員以及有關(guān)工作人員，在從事艾滋病防治工作及相關(guān)工作的過程中意外被艾滋病蠹感染者或者

14、艾滋病患者的血液、體液污染了皮膚或者粘膜，或者被含有艾滋病病蠹的血液、體液污染了的針頭及其他銳器刺破皮膚，有可能被艾滋病病蠹感染的情況。（二）數(shù)據(jù)分析表明，醫(yī)護(hù)和預(yù)防保健等人員對艾滋病病蠹和艾滋病患者從事醫(yī)療和實驗檢測活動是比較安全的。執(zhí)行嚴(yán)格的安全操作及防護(hù)措施，醫(yī)護(hù)及檢驗等人員的暴露事件是可以避免的。二、職業(yè)暴露的預(yù)防1、醫(yī)務(wù)人員對所有病人的血液、體液（包括羊水、心包液、胸腔液、腹腔液、腦脊液、滑液、陰道分泌物等人體物質(zhì)，下同）及被血液、體液污染的物品均視為具有傳染性的病原物質(zhì)，在接觸這些物質(zhì)時，必須采取防護(hù)措施。2、醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行有可能接觸血液、體液的診療和護(hù)理操作時必須戴手套，操作完畢，

15、脫去手套后立即洗手，必要時進(jìn)行手消蠹。3、在診療、護(hù)理操作過程中，有可能發(fā)生病人血液、體液飛濺到醫(yī)務(wù)人員的面部時，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)戴手套、具有防滲透性能的口罩、防護(hù)眼鏡；有可能發(fā)生血液、體液大面積飛濺或者有可能污染醫(yī)務(wù)人員的身體時，還應(yīng)當(dāng)穿戴具有防滲性能的隔離衣或者圍裙。4、醫(yī)務(wù)人員手部皮膚發(fā)生破損，在進(jìn)行有可能接觸病人血液、體液的診療和護(hù)理操作時必須戴雙層手套。5、醫(yī)務(wù)人員在進(jìn)行侵襲性診療、護(hù)理操作過程中，要保證充足的陽光，并特別注意防止被針頭、縫合針、刀片等銳器刺傷或劃傷。6、使用后的銳器應(yīng)當(dāng)直接放入耐刺、防滲漏的利器盒，或者利用針頭處理設(shè)備進(jìn)行安全處置，也可以使用具有安全性能的注射器、輸液器

16、等醫(yī)用銳器，以防刺傷。7、禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片等銳器。三、艾滋病病蠹暴露后的預(yù)防處理（一）緊急局部處理：1、用肥皂液和流動水活洗污染的皮膚，用生理鹽水沖洗粘膜。2、如有傷口，應(yīng)當(dāng)在傷口旁端輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，用再肥皂液和流動活水沖洗；禁止進(jìn)行傷口的局部擠壓。3、受傷部位的傷口沖洗后，應(yīng)當(dāng)用消蠹液，如70%乙醇或者0.5%碘伏進(jìn)行消蠹，并包扎傷口；被暴露的粘膜，應(yīng)當(dāng)反復(fù)用生理鹽水沖洗十凈。（二）暴露后的報告及處理程序1、醫(yī)護(hù)人員發(fā)生艾滋病病蠹職業(yè)暴露后，要立即上報醫(yī)院領(lǐng)導(dǎo)（具體由醫(yī)院確定院內(nèi)程序，注意給暴露者保密）。及時報告天山

17、區(qū)疾控中心，組織專家對暴露的級別和暴露源的病蠹載量水平進(jìn)行評估和確定。2、醫(yī)務(wù)人員發(fā)生艾滋病病蠹職業(yè)暴露后，區(qū)疾控中心應(yīng)當(dāng)會同相關(guān)醫(yī)療衛(wèi)生單位對其進(jìn)行隨訪和咨詢。隨訪和咨詢的內(nèi)容包括：在暴露后第4周、第8周、第12周及6個月時對艾滋病病蠹抗體進(jìn)行檢測，對服用藥物的蠹性進(jìn)行監(jiān)控處理，觀察和記錄艾滋病病蠹感染的早期癥狀等。不進(jìn)行暴露后預(yù)防用藥者，也要定期檢測艾滋病病蠹抗體，檢測時間同上。3、在對艾滋病病蠹職業(yè)暴露事件的整個處理過程中，必須始終做好保密工作。凡涉及暴露者個人的相關(guān)資料，不得向無關(guān)單位和人員泄露。四、暴露后預(yù)防性用藥對發(fā)生艾滋病病蠹職業(yè)暴露的醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)根據(jù)暴露源病蠹載量水平實施預(yù)防性

18、用藥方案。預(yù)防性用藥應(yīng)當(dāng)在發(fā)生艾滋病病蠹職業(yè)暴露后盡早開始，最好在4小時內(nèi)實施，最遲不得超過24小時；即使超過24小時，也應(yīng)當(dāng)實施預(yù)防性用藥。暴露后預(yù)防性用藥的推薦方案：1、基本用藥程序：兩種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，使用常規(guī)治療劑量，連續(xù)服用28天。如雙汰芝（AZT與3TC聯(lián)合制劑）300mg/次，每日2次，用藥時間為連續(xù)服用28天?；騾⒖伎共◇贾委熤笇?dǎo)方案。本程序適用于輕度低危暴露。2、強化用藥程序：基本用藥程序加一種蛋白酶抑制劑，如佳息患或利托那韋。均使用常規(guī)治療劑量，連續(xù)服用28天。本程序適用于嚴(yán)重暴露。鑒于醫(yī)務(wù)人員暴露后的感染率很低而用藥的蠹、副作用很大，所以應(yīng)嚴(yán)格掌握用藥的指征。第二部分標(biāo)準(zhǔn)

19、操作規(guī)程第二章樣品采集與處理一、樣本采集1、接患者申請單后，填寫血樣采集記錄，記錄包括患者日期、姓名、年齡、門診號、采集人簽名等。2、用帶分離膠的負(fù)壓管采集一定量的靜脈血，顛倒混勻56次，室溫下自然放置半小時，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min。二、標(biāo)本米集注意事項1、樣本采集嚴(yán)格按靜脈穿刺規(guī)范操作。2、采集樣本時應(yīng)注意安全，直接接觸HIV感染/艾滋病病人血液的操作，應(yīng)戴雙層手套，里層是PE手套，外層為乳膠手套。三、樣本保存在一周內(nèi)檢測的樣本，可存放于28C；在一周以后檢測的樣本，須存放于-20C0四、樣本運送1、樣本運送一般為血活或血漿，不運送全血。2、容器要求：血活

20、應(yīng)置于帶蓋的1.5ml離心管內(nèi)，管外應(yīng)有明顯的標(biāo)記，姓名與門診號要活晰；在離心周圍應(yīng)墊有可緩沖吸水材料，以免破碎；隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣本分開放置。外層容器要求耐受性好、防滲漏、容納并保護(hù)第一層容器。3、天氣過熱，需采用十冰或冰壺冷藏運輸。第二章標(biāo)準(zhǔn)操作程序一、北京金豪【方法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】本試劑盒采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反應(yīng)板，用gp36、gp41標(biāo)記辣根過氧化物酶、采用雙抗原夾心法捕獲人血活、血漿標(biāo)本中的HIV（1+2）抗體?！綡IV篩查試驗操作程序】（一）試驗前準(zhǔn)備：1、試驗開始前將試劑和樣品放置于室溫（1823C）半小時。2、換隔離衣，

21、戴好帽子、口罩、雙層手套。3、緩沖液配制：用蒸僻水1:25倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w內(nèi)有結(jié)晶，應(yīng)放置在37C直至溶解。（二）試驗操作：1、裝好所需使用數(shù)目的孔條。設(shè)空白對照孔2孔，2個陰性對照孔，2個HIV-1陽性對照孔。取陽性對照和陰性對照分別充分混勻各50ul加入對照孔中，空白對照孔只加樣品稀釋液。2、每檢測孔加入樣品稀釋液50ul,待檢樣品50ul,可振搖510S。3、覆蓋粘膠紙，37堤C孵育30min。4、置洗板機上洗滌5遍（用洗液將反映孔完全加滿，靜置30S,共洗滌5遍，洗完后孔上方及底部不應(yīng)殘存液體，禁止在濾紙上拍十）。5、每孔加酶結(jié)合物100ul,取新粘膠紙覆蓋反應(yīng)板，37坦C孵育

22、30min。6、同步驟4。7、每孔加入底物緩沖液50ul,TMB50ul，混勻，不必覆蓋粘膠紙，37坦C孵育10min。8、每孔加入50ul1M硫酸終止反應(yīng)，充分混勻。9、在2h內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm,或雙波長450/630nm測OD值。（三）試驗結(jié)果1、NCX0.022、Cutoff值=0.1+NC=0.123、標(biāo)本OD值小于Cutoff為陰性，大于或等于Cutoff為陽性（四）報告：對呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實施檢測的實驗室出具HIV抗體陰性報告；對呈陽性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽性報告。二、上?？迫A生物【方法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】本試劑盒采用HIV特異性抗原gp1

23、60和gp36等包被微孔反應(yīng)板，用gp36、gp41標(biāo)記辣根過氧化物酶、采用雙抗原夾心法捕獲人血活、血漿標(biāo)本中的HIV（1+2）抗體?！綡IV篩查試驗操作程序】(-一）試驗前準(zhǔn)備：1.試驗開始前將試劑和樣品放置于室溫（1823C）半小時。2.換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。3.緩沖液配制：用蒸僻水1:25倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。或液體內(nèi)有結(jié)晶，應(yīng)放置在37C直至溶解。(:二）試驗操作：1、裝好所需使用數(shù)目的孔條。設(shè)空白對照孔2孔，2個陰性對照孔，3個HIV-1陽性對照孔。2、每孔加入100ul待檢樣品及對照（對照要后加），可振搖15S。3、覆蓋粘膠紙，37堤C孵育60坦min。4、置洗板機上洗滌

24、5遍（用洗液將反映孔完全加滿，靜置30S,共洗滌5遍，洗完后孔上方及底部不應(yīng)殘存液體，禁止在濾紙上拍十）。5、每孔加酶結(jié)合物100ul,取新粘膠紙覆蓋反應(yīng)板，37坦C孵育30min。6、同步驟4。7、每孔加入底物緩沖液50ul,TMB50ul，混勻，不必覆蓋粘膠紙，37坦C孵育10min。8、每孔加入50ul1M硫酸終止反應(yīng)，充分混勻。9、在2h內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm,或雙波長450/630nm測OD值。（三）試驗結(jié)果1、NCX0.082、Cutoff值=陽性對照值X10%3、標(biāo)本OD值小于Cutoff為陰性，大于或等于Cutoff為陽性（四）報告：對呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實施檢測

25、的實驗室出具HIV抗體陰性報告；對呈陽性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽性報告。三、英科新創(chuàng)【方法】膠體金法【原理】本試劑盒采用膠體金免疫技術(shù)和層析原理，定性測定血活樣本中的HIV1/2型抗體。血活陽性樣本中HIV抗體與膠體金標(biāo)記抗原結(jié)合形成復(fù)合物，由于層析作用復(fù)合物沿紙條向前移動，經(jīng)過檢測線時與預(yù)包被的重組Au-HIV（1+2）Ag則在對照線處與抗HIV單克隆抗體結(jié)合而富集顯色。陰性標(biāo)本則僅在對照線處顯色，30分鐘內(nèi)觀察結(jié)果即可?！綡IV篩查試驗操作程序】（一）試驗前準(zhǔn)備：1、試驗開始前將試劑和樣品放置于室溫（1823C）半小時，編號。2、戴好帽子、口罩、雙層手套。3、將所需測試卡從包裝盒中

26、取出，置于臺面上。（二）試驗操作：1、用微量加樣器取60ul樣本血活，加到測試卡的加樣處。2、加樣后，陽性標(biāo)本可在130分鐘內(nèi)檢出。30分鐘后觀察結(jié)果將造成影響。（三）試驗結(jié)果陽性：測試卡在檢測區(qū)和對照區(qū)位置出現(xiàn)兩條紫紅色條帶。如果檢測的紫紅色條帶隱約可見，應(yīng)用酶免試劑重復(fù)檢測。陰性：測試卡只在對照區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。失效：對照區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶?！痉椒ā侩p抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】采用雙抗原夾心兩步法檢測人血活或血漿樣本中的HIV抗體。當(dāng)待檢樣本中存在HIV抗體時，在反應(yīng)過程中形成“固相HIV抗原HIV抗體一酶標(biāo)記HIV抗原”的免疫復(fù)合物，加入底物后形成顯色反應(yīng)?！綡IV篩查試驗操作程

27、序】（一）試驗前準(zhǔn)備：1. 試驗開始前將試劑和樣品放置于室溫（1825C）半小時，編號。2. 換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。3. 緩沖液配制：用蒸僻水1:19倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w內(nèi)有結(jié)晶，應(yīng)放置在37C直至溶解。1. （二）試驗操作按順序分別在相應(yīng)孔加入50ul待測樣品及陰、陽性對照血活。2. 覆上封板膜，置37C溫育30min.3. 用洗滌液充分洗滌5次（每次應(yīng)保持3060秒浸泡時間），扣十。4. 分別在每孔中加入酶標(biāo)抗原100ul。5. 覆上封板膜，置37C溫育30min。6. 用洗滌液充分洗滌5次（每次應(yīng)保持3060秒浸泡時間），扣十。7. 每孔加底物A、B各50ul，輕拍混勻

28、，覆上封板膜，置37C暗置20min。8. 每孔加入終止液50ul。9. 用酶標(biāo)儀測定。1. （三）試驗結(jié)果陽性對照值應(yīng)大于陰性對照值0.6以上且陰性對照值小于0.1方可認(rèn)為本實驗有效。2. Cutoffvalue=0.1+陰性對照均值（若陰性對照小于0.05以0.05計）樣品OD值大于或等于臨界值為初篩陽性，小于臨界值為陰性。第三章結(jié)果報告與注意事項【復(fù)檢試驗】對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實驗室進(jìn)行確認(rèn)。（具體詳見流程圖）【篩試驗結(jié)果的報告】對HIV

29、抗體篩查試驗，呈陰性反應(yīng)者可出具“HIM體陰性”報告。對初篩試驗呈陽性反應(yīng)者不能出陽性報告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告?！境鹾Y試驗呈陽性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送】如需送上級實驗室進(jìn)行復(fù)測或確認(rèn)，需要填寫“HIV抗體復(fù)測送檢單”，經(jīng)1名檢驗人員和1名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字，與血樣品一同送天山區(qū)疾控中心實驗室，再轉(zhuǎn)送市疾控中心艾滋病確認(rèn)實驗室，或在本實驗室復(fù)檢后直接送確認(rèn)實驗室?！静僮髋_消蠹處理】用35%84消蠹液擦拭臺面，如工作臺被溢出物污染，則用消蠹液浸泡30分鐘后，再行擦拭?！痉块g消蠹】每日用紫外線照射3060min【方法學(xué)特性及注意事項】a) 試劑盒430C十燥保存。有效期16個月。

30、b) 抗凝全血應(yīng)采用EDTA,樣品應(yīng)避免溶血。c) 樣品應(yīng)在收集后7天內(nèi)檢測，28C保存，如果大于7天，應(yīng)冷凍保存。d) 測試卡僅用于HIV抗體的現(xiàn)場初篩，檢測陽性必須用ELISA方法進(jìn)一步確認(rèn)。e) 樣本的加樣應(yīng)使用微量加樣器準(zhǔn)確加入。f) 實驗環(huán)境應(yīng)保持一定濕度、避風(fēng)，1825C進(jìn)行。g) 本試劑盒應(yīng)視為有感染源的物品，應(yīng)按生物危險樣品處理?！狙罴訕颖怼恳姼郊Ｃ看螜z測完畢需填寫血活加樣表，由審核者簽字復(fù)核，存檔，以備查。第三部分設(shè)備SOP文件、多功能自動酶標(biāo)儀RT-2100C儀器簡介RT-2100C是一臺網(wǎng)絡(luò)化的酶標(biāo)免疫測試分析儀器，可廣泛用于傳染病、腫瘤標(biāo)志物、血液病、艾滋病、內(nèi)分泌

31、障礙測定等診斷領(lǐng)域。儀器原理觸摸屏光學(xué)及比色系統(tǒng)信號放大A/D轉(zhuǎn)換LCD顯1. 打印機環(huán)境要求：1）避免陽光直曬2）溫度：10C40C,濕度20%85%3）電源必須接地良好4）電源穩(wěn)定，禁止與大功率用電器共用電源操作步驟4.1開機打開儀器背面的電源開關(guān)，等待約10秒鐘，開機初始化流程要完成以下工作:1）系統(tǒng)程序加載2）系統(tǒng)自檢3）讀取用戶數(shù)據(jù)4）前端初始化5）等待光源穩(wěn)定：儀器需要等待光源穩(wěn)定約1分鐘左右。6）光路自檢：期間濾光片輪會轉(zhuǎn)動，酶標(biāo)板將往返走板一次。開機結(jié)束后，進(jìn)行主菜單窗口。4.2項目設(shè)置在主菜單中按項目設(shè)置鍵，進(jìn)入項目列表窗口。2.1新建與更改項目100,將無法創(chuàng)建新項目。按按

32、新建或更改鍵，添加或更改項目，如果項目數(shù)已經(jīng)超過圖所示設(shè)置參數(shù)設(shè)置。1）項目名稱：該項必須輸入，注意不要與已經(jīng)存在的項目名重復(fù)。2）試劑名稱：根據(jù)所用試輸入，也可以不輸入。3）波長：從列表中選取，注意主波長和次波長不能重復(fù)。4）計算方法：從列表中選取5）雙樣本：若選擇雙樣本，則布板時每個樣本孔的相鄰孔自動設(shè)置為重復(fù)孔，計算時取兩者吸光度的平均值。6）空白上限：職由試劑要求空白必須不超過0.05，則空白應(yīng)設(shè)為0.05,測試時如果空白孔吸光度值超過設(shè)定的上限，系統(tǒng)會提示用戶“空白也吸光度值過高”。7）定量計算，根據(jù)試劑說明輸入：a）標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量：選擇28個標(biāo)準(zhǔn)品。b）濃度單位：從列表中選擇。c）雙標(biāo)

33、準(zhǔn)：若選擇雙標(biāo)準(zhǔn)：則布板時每個標(biāo)準(zhǔn)孔的相鄰孔被自動設(shè)置為重復(fù)孔，計算時取兩者吸光度的平均值。d）標(biāo)準(zhǔn)品吸光度：雙擊標(biāo)準(zhǔn)品濃度列表項，可以在彈出窗口中輸入濃度值，注意標(biāo)準(zhǔn)品濃度順序必須為由小到大。8）計算，按試劑說明在窗口中輸入：a）Cut-off公式系數(shù)：各鐘試劑的定性公式如有不同形式如S/N,（N-S）/N等均可轉(zhuǎn)換為S/（X*N+Y*P+Fac）的形式。b）陰性對照和陽性對照的吸光度范圍：對照的吸光度超出上限和下限進(jìn)分別按上限和下限計算。例如有試劑要求陰性對照小于0。05按0。05計，則陰性對照下限應(yīng)設(shè)為0。05。c）對照：可以任意設(shè)置對照，但對照的數(shù)量不超過5個，計算時取所有對照吸光度的

34、平均值。9）陰陽性判定設(shè)置窗口在此窗口中輸入判定陰性和陽性的臨界值，吸光度模式下，臨界值為吸光度值：Cut-off方式下，臨界值為樣本與Cut-off值的比值，定量計算方式下，臨界值為濃度值。定性方式分為3類：a）正向閾值模式：陰性v陰性臨界值，陽性A陽性臨界值，兩者之間為灰區(qū)，在此區(qū)間內(nèi)的樣本判定為可疑。b）反向閾值模式：陰性陰性臨界值，陽性v陽性臨界值。c）不需要判定陰陽性：在定性方式中選擇"無。所有參數(shù)設(shè)置完畢，按完成鍵。4.3樣品測試在主菜單中按樣品測試鍵，進(jìn)入如下窗口：a)布板方向:橫向或縱向b)進(jìn)板方式:選擇連續(xù)方式（V5秒）提局測量速度，選擇步進(jìn)方式（V15秒）狄得更局

35、的測量精度。c)振板參數(shù):振板速度分快速，中速和慢速3檔，振板時間160秒，也可以選擇不振板。設(shè)定完以上參數(shù)后，按確定鍵，進(jìn)入布板窗口。4.4布板4.4.1樣本任意點擊欲設(shè)置為樣本的孔位，樣本號從1起自動遞增并顯示在該孔位上。如果要修改樣本號，可再次點擊該孔位。4.4.2空白空白孔在項目測試中用以吸光度調(diào)零，即其它孔位的吸光度均要減去空白孔吸光度值。根據(jù)不同項目測試的要求，可以選擇是否設(shè)定空白。舊空白的保存和使用：空白孔的測試結(jié)果將自動保存，如果在同一項目的后續(xù)測試中不重新設(shè)定空白，則系統(tǒng)自動用舊空白進(jìn)行計算。第個項目只允許設(shè)置一個空白孔，如果在設(shè)置空白孔時多次點擊不同的孔位，那么只有最后一次

36、點擊的孔位被設(shè)定為空白孔，前面設(shè)置的空白孔被自動清除。4.4.3依次設(shè)置陰性對照和陽性對照。按開始鍵，系統(tǒng)確認(rèn)布板無誤后，開始走板測試。走板結(jié)束，系統(tǒng)自動進(jìn)入吸光度顯示。4.5關(guān)機在主菜單中按關(guān)機，系統(tǒng)顯示關(guān)機確認(rèn)窗口，按YES執(zhí)行關(guān)機程序，按NO返回主菜單。3. 儀器維護(hù)1）保持儀器工作環(huán)境的清潔。2）儀器表面的清潔，可以用中性清潔劑和濕布擦拭。3）液晶顯示器請用柔軟的布清潔4）勿讓任何溶劑，油脂類，腐蝕性物質(zhì)接觸儀器。二、KHBST36W洗板機1目的規(guī)范洗板機的操作程序，保證洗板機的正常狀態(tài)。2適用范圍本實驗室KHBST-36W洗板機的操作。3操作人員本實驗室實驗人員。4操作步驟4.1拔掉

37、廢液瓶口的塞子（接有與洗板機相連的廢液管），倒掉廢液瓶的廢液，再把塞子安緊在廢液瓶口上。注意不要讓廢液管擰緊，以保證廢液管的通暢。4.2擰開洗液瓶的蓋子（接有與洗板機相連的洗液管），倒掉前一天洗液瓶里剩的洗液，倒進(jìn)新配的洗液。擰緊蓋子，注意不要讓洗液管擰緊，以保證洗液管的通暢。4.3保證待洗反應(yīng)板所有的孔處于同一水平位置，以免孔邊緣過高碰到洗板機的吸液針。4.4開機插上電源，打開電源開關(guān)（按后面板【POWER】鍵），儀器顯示儀器復(fù)位中，請稍候”儀器初始化結(jié)束后。儀器顯示：就緒，當(dāng)前程序#X請選擇功能鍵”X處顯示的數(shù)字（范圍015之間）表示當(dāng)前準(zhǔn)備就緒的是第幾號程序。此時儀器正處于待機狀態(tài)，用戶

38、可進(jìn)行下一步操作。4.5預(yù)洗在待機狀態(tài)下，使預(yù)洗槽處于清洗頭下方，按下【預(yù)洗/返回】鍵，清洗頭抬起，電磁閥打開，洗液進(jìn)入預(yù)洗槽。清洗頭將對預(yù)洗槽洗滌3次，清洗容量為400UL,但清洗時沒有暫停和浸泡步驟。4.6編程按下【編程】鍵。進(jìn)入編程菜單界面。畫面最左邊有閃動的指示光標(biāo)按下【1鍵或【$】鍵移動所需要設(shè)定的參數(shù)前，按下【確定】鍵，即選中了該參數(shù)項，再按下【1或【a鍵設(shè)定該參數(shù)的參數(shù)值。4.7運行按下【運行】鍵，系統(tǒng)將立即按照用戶設(shè)定的程序執(zhí)行。4.8關(guān)機4.8.1日常關(guān)機最后一次洗板結(jié)束后，將電源開關(guān)置于【OFF】位；并將酶標(biāo)板托盤上的預(yù)洗槽用蒸儲水裝滿，使清洗頭浸入預(yù)洗槽。4.8.2長期關(guān)

39、機將長時間不使用洗板機時，先用蒸儲水沖洗一遍整個系統(tǒng)，再進(jìn)行日常關(guān)機；并且傾倒、清洗廢液瓶，保持液體干燥，以免清洗液中的緩沖鹽類結(jié)晶而堵塞清洗頭。5鍵盤功能5.1【編程】：進(jìn)入編程菜單。用來設(shè)定儀器的運行方式及各項參數(shù)。5.2【運行】：執(zhí)行先定的程序?！竟埽禾幱诖龣C狀態(tài)時，此鍵用來順次遞增程序號；處于編程狀態(tài)時，用來使光標(biāo)上移?！?】：處于待機狀態(tài)時，此鍵用來順次遞減程序號；處于編程狀態(tài)時，用來使光標(biāo)下移。5.3【復(fù)位】：終止當(dāng)前操作，使儀器恢復(fù)到開機狀態(tài)。5.4【預(yù)洗/返回】：處于待機狀態(tài)時，此鍵用來使儀器執(zhí)行預(yù)洗程序；處于編程狀態(tài)時，此鍵可使顯示面板界面回到待機狀態(tài)5.5【確定】：確認(rèn)光標(biāo)

40、所指示的參數(shù)項。6編制洗滌程序編程菜單中包括清洗方式、清洗頭數(shù)、清洗條數(shù)、清洗容量、加洗次數(shù)、清洗次數(shù)、暫停時間、浸泡時間8種參數(shù)項目。6.1清洗方式，條洗和板洗。6.2清洗頭數(shù)，可設(shè)定為12頭或8頭。6.3清洗條數(shù)，或設(shè)定在112范圍內(nèi)，該參數(shù)設(shè)置與清洗頭數(shù)有關(guān)，當(dāng)頭數(shù)為12時條數(shù)最大值為8。反之當(dāng)頭數(shù)為8時，條數(shù)最大值為12。6.4清洗容量，可在50UL、100UL、150UL、200UL、250UL、300UL、350UL、400UL、450UL中選擇設(shè)定。6.5加洗次數(shù)，加洗次數(shù)可在13范圍內(nèi)設(shè)定。6.6清洗次數(shù)，清洗次數(shù)可在110范圍內(nèi)設(shè)定。6.7暫停時間，當(dāng)清洗方式為知洗時，清洗頭

41、在注滿酶標(biāo)板每行后啟動暫停，時間可在010秒內(nèi)任意設(shè)定，增量為1秒；當(dāng)清洗方式為板洗時，清洗頭在每次過板注滿水后啟動暫停，時間可在060秒任意設(shè)定，增量為5秒。6.8浸泡時間，一般清洗過程中，清洗頭在酶標(biāo)板最后一行中注滿水后，即啟動浸泡功能。浸泡時間可在0300秒內(nèi)任意設(shè)定，增量為30秒，但在加洗程序中不能啟動浸泡功能。7維護(hù)保養(yǎng)程序7.1平常不用時，拔掉電源插頭。7.2每天洗板機工作結(jié)束時，要對內(nèi)外其進(jìn)行清潔，用濕抹布擦洗洗板機的外壁及載物臺，以保證其潔凈。用蒸儲水將所有的管道清洗一遍，防止洗液的結(jié)晶堵塞管道。7.3及時倒棄廢液，以免廢液瓶過滿致使廢液回流而造成洗板機的故障。7.4保證待洗的

42、反應(yīng)板的孔邊緣不要過高且水平，以免造成吸液針損傷。7.5定期將洗液及廢液管道拆卸下來進(jìn)行沖洗，以保證管道的通暢。8儀器消毒8.1消毒試劑：甲醛溶液10%;酒精70%;戊二醛溶液4%。8.2消毒步驟8.2.1準(zhǔn)備10%甲醛溶液200ml,4%戊二醛溶液200ml,70%酒精一瓶，若干醫(yī)用棉球。8.2.2清洗儀器8.2.2.1給儀器注入蒸儲水，抬起清洗頭，用戊二醛溶液注滿托盤預(yù)洗槽。8.2.2.2用清洗頭抽干托盤預(yù)洗槽，再用蒸儲水注滿托盤預(yù)洗槽，抽干。8.2.2.3移走酶標(biāo)板架和清洗頭，將它們浸泡在戊二醛溶液中24小時。8.2.2.4傾倒液體瓶。8.2.2.5切斷電源，撥掉電源線。8.2.3儀器消

43、毒8.2.3.1用浸透70%酒精的棉球為儀器外殼消毒。8.2.3.2拆離主機和液體瓶，并打開液體瓶瓶蓋，將儀器放入一個大的塑料袋中。8.2.3.3把在10%甲醛溶液中浸透的棉球放入塑料袋。8.2.3.4密封塑料袋24小時。8.3消毒后期處理8.3.1從袋中取出儀器。8.3.2用中性清洗液清潔儀器。8.3.3用70%酒精擦去污染物質(zhì)。8.3.4把清洗頭和酶標(biāo)板架從戊二醛溶液中取出并用蒸儲水漂洗，把它們重新安裝在儀器上。8.3.5在試劑瓶內(nèi)注入蒸儲水并執(zhí)行預(yù)洗程序，以沖洗系統(tǒng)的液體流動通路。8.3.6在儀器上貼上注有消毒日期的已消毒標(biāo)識。9注意事項9.1操作環(huán)境實驗室中經(jīng)常遇到傳染性標(biāo)本和腐蝕性液體，進(jìn)行實驗室操作時應(yīng)穿戴好防腐實驗服和手套。處理危險樣品時，參考實驗室操作手冊進(jìn)行